冬凌草甲素诱导结直肠癌细胞SW-1116凋亡与衰老的体内外实验研究

目的探讨冬凌草甲素（Ori）在体内外抑制结直肠癌细胞的作用及机制。方法应用不同浓度Ori（0、6.25、12.5、25、50和100μmol/L）处理结直肠癌细胞SW-1116及其建立的裸鼠移植瘤模型,CCK-8法检测Ori对SW-1116细胞的抗增殖效应;流式细胞仪检测Ori处理SW-1116后细胞周期的改变及细胞的凋亡;β-半乳糖苷酶染色检测Ori诱导SW-1116细胞衰老;软琼脂细胞克隆形成实验检测Ori对SW-1116细胞克隆形成的影响;观察Ori对SW-1116细胞裸鼠移植瘤生长的影响及其机制。结果 Ori可诱导结直肠癌细胞SW-1116生长抑制、细胞周期阻滞、凋亡、衰老和克隆形成能力。Ori还显著抑制SW-1116裸鼠移植瘤的生长,随着Ori剂量的增加裸鼠移植瘤中的细胞凋亡与衰老增加。结论体内外实验研究表明,Ori具有抗结直肠癌的活性,可能成为治疗结直肠癌的一个新的候选化合物。     

蒿甲醚对胰腺肿瘤细胞的抑制作用

目的 观察蒿甲醚(ART)在体外对人胰腺癌SW-1990细胞的杀伤作用和对细胞增殖和凋亡的影响,以及在体内对荷瘤裸鼠移植瘤的抑制作用.方法 采用MTT法检测ART对SW-1990细胞的杀伤作用;采用流式细胞仪检测ART对SW-1990细胞周期和凋亡的影响.建立人胰腺癌裸鼠移植瘤模型,通过测量裸鼠体质量、移植瘤瘤径和瘤质量,计算肿瘤体积和抑瘤率,观察ART在体内的抗肿瘤活性.结果 MTT结果显示,ART对SW-1990细胞的杀伤作用与时间-剂量呈正相关 (P《0.05);流式细胞仪检测显示,ART使SW-1990细胞阻滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡;荷瘤裸鼠体内实验显示,中、高剂量的ART(4、8 mg)对裸鼠移植瘤的生长抑制效果显著(P《0.05),抑瘤率分别为48.10%和53.51%.结论 ART在体外及荷瘤裸鼠体内对SW-1990细胞有明显的抑制作用;其抑制作用与阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡有关.     

蒿甲醚对胰腺肿瘤细胞的抑制作用

目的观察蒿甲醚(ART)在体外对人胰腺癌SW-1990细胞的杀伤作用和对细胞增殖和凋亡的影响,以及在体内对荷瘤裸鼠移植瘤的抑制作用。方法采用MTT法检测ART对SW-1990细胞的杀伤作用;采用流式细胞仪检测ART对SW-1990细胞周期和凋亡的影响。建立人胰腺癌裸鼠移植瘤模型,通过测量裸鼠体质量、移植瘤瘤径和瘤质量,计算肿瘤体积和抑瘤率,观察ART在体内的抗肿瘤活性。结果MTT结果显示,ART对SW-1990细胞的杀伤作用与时间-剂量呈正相关(P<0.05);流式细胞仪检测显示,ART使SW-1990细胞阻滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡;荷瘤裸鼠体内实验显示,中、高剂量的ART(4、8 mg)对裸鼠移植瘤的生长抑制效果显著(P<0.05),抑瘤率分别为48.10%和53.51%。结论ART在体外及荷瘤裸鼠体内对SW-1990细胞有明显的抑制作用;其抑制作用与阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡有关。     

鬼臼毒素抗胃癌细胞株SGC 7901作用的实验研究

目的:研究鬼臼毒素抗胃癌SGC 7901细胞株的作用,为鬼臼毒素用于临床治疗胃癌提供依据.方法:不同浓度的鬼臼毒素(0,5,10,20和50mg/L)处理SGC 7901细胞后,采用MTT比色法和平板克隆形成实验检测细胞的增殖;采用流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡;裸鼠成瘤实验检测鬼臼毒素对SGC 7901细胞体内致瘤能力的影响.结果:鬼臼毒素呈时间与剂量依赖性抑制SGC 7901细胞生长,明显降低SGC 7901细胞平板克隆,显著诱导SGC 7901细胞凋亡,并使SGC 7901细胞阻滞于G2/M期,还能显著降低SGC 7901细胞裸鼠移植瘤的体积及质量.结论:鬼臼毒素能抑制胃癌SGC 7901细胞的生长,诱导SGC 7901细胞凋亡,并能抑制GC7901细胞的体内致瘤能力,此为鬼臼毒素临床治疗胃癌提供了科学依据.     

microRNA-133b抑制人结直肠癌裸鼠皮下种植瘤生长

目的 探讨microRNA-133b(miR-133b)对人结直肠癌裸鼠皮下种植瘤生长的抑制作用,体内实验进一步验证miR-133b是一种新的抑癌基因.方法 30只裸鼠按随机数字表法分为接种人结直肠癌细胞SW-620细胞组、接种SW-620-HK细胞组及接种SW-620-133b细胞组,每组10只,建立裸鼠皮下种植瘤模型,记录并比较各组种植瘤生长情况,TUNEL法检测种植瘤细胞凋亡,荧光实时定量PCR检测各组种植瘤中miR-133b表达,Western blot检测c-met表达.结果 各组裸鼠皮下接种肿瘤细胞5 d后均成功致瘤,成瘤率100%;SW-620-133b组种植瘤生长速度显著低于SW-620与SW-620-HK组(P<0.05);终点时间第30天时,SW-620组裸鼠皮下种植瘤的体积为(3.56±0.79)cm3,SW-620-HK组为(3.24±0.68)cm3,显著大于SW-620-133b组肿瘤体积(0.85±0.14)cm3(P<0.05);SW-620-133b组种植瘤质量为(1.15±0.16)g,明显低于SW-620组(4.02±0.64)g及SW-620-HK组(3.81±0.61)g(P<0.05);SW-620-133b组肿瘤细胞凋亡率(30.28±3.47)%显著高于对照组SW-620-HK(7.26±0.84)%及空白组SW-620(7.96±0.92)%(P<0.05);SW-620-133b组种植瘤中c-met表达量(0.19±0.02)较SW-620组(0.52±0.04)及SW-620-HK组(O.51±0.04)显著下降(P<0.05).结论 外源性高表达miR-133b可显著抑制人结直肠癌裸鼠皮下种植瘤的生长.     

E74样因子5过表达抑制结肠癌细胞生物学行为的体内外实验研究

  目的  探讨E74样因子5（ELF5）过表达对结直肠癌细胞的生长和侵袭能力以及裸鼠成瘤的影响。  方法  人结直肠癌SW480和 HT-29细胞分为5组:LV-GFP组,转染空载体LV-GFP慢病毒;LV-ELF5组,转染重组LV-ELF5慢病毒;shRNA-NC组,转染空载体shRNA-NC慢病毒;shRNA-ELF5组,转染重组shRNA-ELF5慢病毒;对照组,未转染任何载体。转染72 h后,取含有慢病毒的细胞上清液,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测各组细胞中ELF5 的mRNA表达水平;Western blot检测ELF5、凋亡相关的cleaved Caspase-3/Caspase-3和cleaved Caspase-9/Caspase-9、侵袭相关的E-cadherin和N-cadherin的蛋白表达水平;CCK-8检测细胞活力;克隆形成实验检测克隆形成率;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞侵袭;TUNEL实验检测组织中细胞凋亡; 免疫组化检测组织中E-cadherin、N-cadherin的表达。 将20只BALB/c裸鼠分为4组,每组5只:LV-GFP组、shRNA-NC组、LV-ELF5组、shRNA-ELF5组,于裸鼠皮下注射含重组慢病毒的SW480细胞上清液,构建裸鼠成瘤模型,监测移植瘤体积变化。第30天取裸鼠移植瘤组织,测量肿瘤质量,Western blot检测移植瘤ELF5蛋白的表达,TUNEL染色检测移植瘤凋亡,免疫组化检测移植瘤中N-cadherin阳性表达。  结果  与对照组细胞比较,两个细胞系LV-GFP组和shRNA-NC组细胞的各指标差异无统计学意义。Western blot结果与RT-qPCR结果表明,两个细胞系LV-ELF5组的ELF5 mRNA和蛋白水平均上调（P<0.05,与LV-GFP组比较）,shRNA-ELF5组的ELF5 mRNA和蛋白水平均下调（P<0.05,与shRNA-NC组比较）,ELF5过表达体系和干扰体系构建成功。与LV-GFP组比较,LV-ELF5组降低了细胞活力和克隆形成率（P<0.05）,促进SW480细胞凋亡,并上调cleaved Caspase-3/Caspase-3和cleaved Caspase-9/Caspase-9蛋白表达（P<0.05）,抑制细胞侵袭,并上调E-cadherin蛋白表达,下调N-cadherin蛋白表达（P<0.05）;ELF5干扰后,细胞的上述表现呈相反趋势（P<0.05,shRNA-ELF5组与shRNA-NC组比较）。体内实验结果表明,ELF5过表达缩小裸鼠肿瘤体积和降低肿瘤质量（P<0.05）,促进组织中细胞凋亡（P<0.05）,ELF5蛋白表达增加,抑制N-cadherin蛋白表达（P< 0.05）。当EFL5表达抑制,上述实验结果呈相反趋势。  结论  体内外实验表明ELF5过表达可促进结直肠癌细胞凋亡,抑制结直肠癌细胞的生长和侵袭。     

甘草甜素对结肠癌细胞株SW-1116凋亡影响的研究

目的:研究甘草甜素抗肿瘤的机制,为甘草甜素在抗肿瘤方面的应用提供理论依据。方法:采用流程式细胞仪检测结肠癌细胞株SW-1116凋亡。结果:50、100、200μmol/L的甘草甜素能够诱导结肠癌细胞SW-1116凋亡,凋亡率与剂量呈正相关,SW-1116的凋亡随药物浓度及作用时间变化,细胞周期分布呈现G1期细胞比例逐渐增高,并出现典型的凋亡峰。结论:甘草甜素能诱导结肠癌细胞凋亡,并明显抑制癌细胞增殖,具有抗肿瘤作用。     

天花粉蛋白对结肠癌细胞株SW-1116凋亡的影响

目的探讨天花粉蛋白抗肿瘤的机制,为天花粉蛋白在抗肿瘤方面的应用提供理论依据。方法采用流程式细胞仪检测结肠癌细胞株SW-1116凋亡。结果50!mol/L、100"mol/L、200#mol/L天花粉蛋白能够诱导结肠癌细胞株SW-1116凋亡,凋亡率与剂量呈正相关,SW-1116的凋亡随药物浓度及作用时间变化,细胞周期分布呈现G1期细胞比例逐渐增高,并出现典型的凋亡峰。结论天花粉蛋白能诱导结肠癌细胞凋亡,并明显抑制癌细胞增殖,具有抗肿瘤作用。     

天花粉蛋白对结肠癌细胞株SW-1116凋亡的影响

目的探讨天花粉蛋白抗肿瘤的机制，为天花粉蛋白在抗肿瘤方面的应用提供理论依据。方法采用流程式细胞仪检测结肠癌细胞株SW-1116凋亡。结果501μmol／L、1001μmol／L、2001μmol／L天花粉蛋白能够诱导结肠癌细胞株SW-1116凋亡，凋亡率与剂量呈正相关，SW-1116的凋亡随药物浓度及作用时间变化，细胞周期分布呈现G1期细胞比例逐渐增高，并出现典型的凋亡峰。结论天花粉蛋白能诱导结肠癌细胞凋亡，并明显抑制癌细胞增殖，具有抗肿瘤作用。     

YH-16对宫颈癌细胞及其裸鼠移植瘤抑制作用研究

目的探讨YH-16（重组内皮抑素）对宫颈癌Hela细胞及其荷瘤鼠生长抑制作用。方法用MTT法检测细胞生长;用透射电镜观察细胞凋亡、流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期;将Hela细胞移植至裸鼠皮下,观察不同浓度YH-16（0、0.4、0.75和1.5mg/kg）对荷瘤鼠皮下移植瘤生长的影响;TUNEL法观察肿瘤细胞的凋亡;免疫组化方法检测裸鼠移植瘤组织中肿瘤微血管密度（MVD）。结果YH-16抑制Hela细胞增殖（P〈0.01）;能诱导Hela细胞凋亡。YH-16能抑制裸鼠皮下移植瘤的生长（P〈0.05）;YH-1615mg/kg组的肿瘤MVD计数较对照组和其他治疗组明显降低（P〈0.05）。结论YH-16具有抑制宫颈癌Hela细胞及其皮下移植瘤生长的作用。     

苹果多糖对SW-1116结肠癌细胞凋亡的影响及机制研究

目的观察苹果多糖（apple polysaccharides,AP）对人结肠癌SW-1116细胞凋亡的影响及其机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法观察AP对SW-1116细胞增殖的影响;以DNA ladder法和流式细胞手段研究AP对SW-1116细胞凋亡的作用;给予SW-1116细胞AP后,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-8、caspase-9、Bax和Bcl-2的表达变化。结果 AP可明显抑制SW-1116细胞增殖,并诱导其凋亡;AP可促进SW-1116细胞caspase-3,caspase-8,caspase-9及Bax的表达,降低其Bc1-2的表达,且均表现为剂量依赖性。结论 AP可以通过线粒体和死亡受体途径诱导SW-1116细胞凋亡。     

野生型p53基因抑制人结肠癌细胞的体内抑瘤效应观察

目的研究人野生型p53基因对人结肠癌SW1116细胞生长的影响。方法采用电穿孔法将正向携带有野生型p53基因cDNA的重组反转录病毒质粒导入有p53基因突变的人结肠腺癌SW1116细胞,筛选带外源p53基因的G418抗药性SW1116细胞克隆,对其进行生长速度、软琼脂集落形成及裸鼠成瘤等方面的检测,分析其生物学特性变化。结果导入人野生型p53基因使人结肠腺癌SW1116细胞的生长速度明显减慢(P<0.05或0.01)、软琼脂集落数量明显较对照组减少(P<0.05或0.01),移植瘤体积较对照组明显小(P<0.05)。结论人野生型p53基因对人结肠腺癌SW1116细胞有明确的抑瘤效应。     

长链非编码RNA LINC01106通过STAT3通路调控结直肠癌细胞增殖及凋亡

目的 探讨LINC01106在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞增殖及凋亡能力的影响。方法 分析公共数据库结直肠癌患者的肿瘤组织及正常组织LINC01106表达水平及其对患者预后的影响;构建LINC01106敲减及过表达结直肠癌细胞株;采用CCK-8实验检测LINC01106敲减及过表达对结直肠癌细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测LINC01106敲减对结直肠癌细胞凋亡水平的影响;免疫印迹检测LINC01106敲减对结直肠癌细胞p-STAT3、STAT3、Bcl-2蛋白表达的影响;建立裸鼠移植 瘤模型观察LINC01106表达水平对结直肠肿瘤体内生长的影响,随机分为2组,9只/组。对照组：接种SW480细胞,敲减组：接种LINC01106敲减的SW480细胞。结果 TCGA数据库分析结果显示结直肠癌肿瘤组织LINC01106的表达水平明显高于正常组织,且LINC01106的表达水平与结直肠癌患者预后相关,差异具有统计学意义（P<0.05）;敲减LINC01106可以明显抑制SW480结直肠癌细胞增殖,促进凋亡（P<0.05）,过表达LINC01106可以明显促进SW480结直肠癌细胞增殖;敲减LINC01106可以抑制p-STAT3和Bcl-2蛋白表达水平;下调LINC01106可以抑制裸鼠移植瘤体内生长。结论 LINC01106在结直肠癌患者肿瘤组织中表达显著上调,且与患者预后相关。INC01106可以通过STAT3/Bcl-2信号调控SW480结直肠癌细胞增殖及凋亡;LINC01106有望成为结直肠癌诊断及预后评估的潜在标志物。     

反义c-myc重组腺病毒对人肝细胞癌细胞的实验性治疗

目的：研究携带反义c-myc的重组腺毒（Ad-Asmyc)对人肝细胞癌细胞体外,体内的治疗作用及其机制,方法：用Ad-Asmyc感染人肝细胞癌细胞系BEL－7402和QSG－7701,绘制细胞生长曲线,进行克隆形成实验,研究Ad-Asmyc在体外的抗瘤作用,在瘤内注射Ad-Asmyc,观察裸鼠皮下移植的生长情况,应用逆转聚合酶链反应（RT－PCR）及Western blot检测相关基因表达,应用流式细胞术,梯形DNA,DNA原位末端标记研究细胞周期及细胞凋亡情况,结果：感染Ad-Asmyc后,BEL－7402及PSG－7701细胞内c-myc基因表达降低,肿瘤细胞的生长受到明显抑制,而且出现了G1期阻滞及凋亡,体内注射Ad-Asmyc基因表达降低,肿瘤细胞的和长受到明显抑制,而且出现了G1期阻滞及凋亡,体内注射Ad-Asmyc后裸鼠皮下移植的生长也得到明显掏,结论：Ad-Asmyc在体外及体内可使肝细胞癌出现的细胞生长抑制,发生凋亡,具有明显的抗癌作用,是有应用前景的抗癌药物。     

吡罗昔康对人γδT细胞和消化系统肿瘤细胞的作用比较

目的:探讨吡罗昔康对人γδT细胞杀伤消化系统肿瘤细胞株的影响。方法:用异戊烯焦磷酸法体外扩增人外周血γδT细胞。用不同浓度的吡罗昔康诱导γδT细胞和消化系统肿瘤SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116、LOVO细胞株,用MTT法检测吡罗昔康对这些细胞的抑制率和用乳酸脱氢酶法测定γδT细胞的杀伤活性,用流式细胞术检测诱导前后的γδT细胞和SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞凋亡百分率。结果:γδT细胞培养10d时从扩增前4.21%增加到70.35%。吡罗昔康各种浓度对SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞株抑制率明显高于γδT细胞。0.01~0.04mmol/L吡罗昔康诱导24h后的γδT细胞对5种肿瘤细胞的杀伤活性最高,浓度超过0.04mmol/L时杀伤活性呈下降趋势;SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞经不同浓度的吡罗昔康诱导24h后γδT细胞对其的杀伤活性与对照组比较无明显变化。0.16mmol/L吡罗昔康诱导24h对SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞株的凋亡率分别为12.26%、13.46%、14.59%、25.64%和39.36%,显著高于γδT细胞(8.16%)。结论:吡罗昔康在临床常规使用的药物浓度时可增强γδT细胞杀伤肿瘤细胞作用,超过这一浓度可明显抑制γδT细胞和肿瘤细胞的增殖能力和杀伤活性及增加细胞的凋亡率;吡罗昔康对肿瘤细胞株的抑制率明显高于γδT细胞。这一结果为临床吡罗昔康预防消化道肿瘤的用量提供了实验依据。     

HP-10对结肠癌LoVo细胞体内外增殖的影响

目的通过体内外实验检测六肽分子HP-10的细胞内转导能力和抗LoVo细胞增殖活性。方法MTT法观察75、37.5、18.75μmol/LHP-10对人结肠癌LoVo细胞增殖的影响,运用激光共聚焦显微术和流式细胞仪分别检测HP-10的LoVo细胞内转导能力以及对LoVo细胞周期和凋亡的影响;建立LoVo细胞裸鼠皮下移植瘤模型,验证750、375、75μmol/LHP-10在体内的抗结肠癌生长作用。结果75、37.5、18.75μmol/LHP-10对LoVo细胞体外增殖有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性抑制(P<0.05);HP-10能直接跨膜进入LoVo细胞并促进LoVo细胞凋亡发生,但对其周期无明显影响;在结肠癌模型上HP-10能显著地抑制肿瘤生长(P<0.05)。结论HP-10是一种无需穿膜肽引导可直接进入细胞的寡肽,在体内外对LoVo细胞具有明显的抑制生长作用,这种作用是通过诱导细胞凋亡产生的。