中药封包外治法对雌兔膝关节软骨细胞的DNA氧化损伤及凋亡的影响

目的观察中药封包外治法(温阳通络外治法)对雌兔膝关节骨关节炎模型软骨细胞的DNA氧化损伤及凋亡的影响,进而探讨其治疗的可能作用机制。方法 28只新西兰雌性兔随机等分为空白组、模型组、中药封包外治法组、玻璃酸钠组。除空白组外,其余雌兔均作卵巢去势处理。造模1周后,空白组和模型组不作任何处理;中药封包外治法组2次/d熨烫兔膝处,连用5周;玻璃酸钠组于右膝关节内注射玻璃酸钠注射液0.15 ml/kg,1次/周,连用5周;造模6周后分别进行雌二醇(E_2)含量测定、DNA提取、8-羟基脱氧鸟甙检测、苏木精-伊红染色观察胫骨软骨形态,检测胫骨软骨细胞凋亡率,并做统计学处理。结果雌兔E_2水平测定空白组术前1周与术后1周、6周比较差异均无统计学意义(P0.05),模型组、中药封包外治法组、玻璃酸钠组术前1周与术后1周、6周分别作比较差异均有统计学意义(P0.05);造模12周后8-羟基脱氧鸟苷含量测定空白组与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05),模型组与中药封包外治法组比较,差异有统计学意义(P0.05),模型组与玻璃酸钠组比较,差异有统计学意义(P0.05),中药封包外治法组与玻璃酸钠组比较,差异无统计学意义(P0.05),同时两组中8-羟基脱氧鸟苷含量比空白组、模型组明显降低;造模6周后取雌兔右膝关节内侧胫骨平台软骨组织,光镜下见空白组、模型组检测软骨组织有明显退行性变,而中药封包外治法组、玻璃酸钠组稍有退变;免疫组化观察胫骨平台软骨细胞凋亡率空白组与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05),模型组与中药封包外治法组比较,差异有统计学意义(P0.05),模型组与玻璃酸钠组比较,差异有统计学意义(P0.05),中药封包外治法组与玻璃酸钠组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论 (1)本实验雌兔卵巢去势造模很成功。(2)中药封包外治法组与玻璃酸钠注射组对膝关节骨性关节炎都有效,且两者治疗效果无明显差异,可能对减轻氧自由基软骨细胞DNA损伤有一定的作用。(3)中药封包外治法组与玻璃酸钠注射组对软骨细胞凋亡有抑制作用,并且两者的治疗作用相当。     

硫酸氨基葡萄糖胶囊对兔膝关节软骨细胞凋亡的影响观察

目的观察硫酸氨基葡萄糖胶囊对兔膝关节软骨细胞凋亡的影响,为临床应用其治疗膝关节骨关节炎提供参考。方法采用30只新西兰兔,随机分为药物组、对照组和正常组各10只。药物组、对照组通过手术造成右膝关节失稳型动物模型,造模1周始躯赶全部兔子行走,连续4周,药物组并连续给药8周。造模后12周末处死所有动物,取右膝关节内侧胫骨平台软骨组织,采用原位末端标记法检测软骨细胞凋亡率,数据经统计学处理。结果对照组软骨组织退变明显,细胞凋亡率（30.50±4.72）%;药物组软骨组织退变较轻,细胞凋亡率（16.61±2.14）%;正常组软骨组织正常。细胞凋亡率（4.67±1.85）%。各组间细胞凋亡率比较差异有高度统计学意义（P〈0.01）。结论硫酸氨基葡萄糖胶囊可降低兔膝关节软骨细胞凋亡率,延缓软骨组织的退行性改变。     

手法治疗对兔膝关节软骨缺损的修复效果

目的：评价手法治疗对兔膝关节软骨浅层和深层缺损修复的效果。 方法：将24只新西兰兔随机分成手法组和对照组。分别在24只兔双侧膝关节的股骨内侧髁造成直径2mm的浅层软骨缺损,在股骨髌面造成直径3mm的深层软骨缺损。造模4周后,手法组采取手法治疗,对照组不采取任何治疗措施。分别于治疗后4、8、12周取材,对缺损区域的修复组织进行外观形态、苏木精和伊红（hematoxylin and eosin,HE）染色、番红O染色以及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色观察,并采用O’Driscoll软骨组织形态学评分评价软骨缺损的修复质量。 结果：治疗后,手法组软骨浅层缺损和软骨深层缺损渐渐修复。修复组织质地稍软,表面光滑,外观与正常软骨类似,大部分区域与周围正常软骨界限模糊,与周围软骨整合良好。对照组浅层缺损虽然有部分被修复,但所修复组织与周围软骨界限清晰;深层缺损只是缺损面积略减小．未见到缺损修复,或以纤维样组织填充。HE染色显示手法组修复组织内有大量的透明软骨细胞,番红O染色显示手法组修复组织基质染色接近周围正常关节软骨,对照组无染色。Ⅱ型胶原免疫组织化学染色显示,手法组浅层缺损和深层缺损的修复组织Ⅱ型胶原染色与正常软骨相比染色正常甚至较深;对照组浅层和深层缺损的修复组织无染色,修复组织与正常组织界限清晰。O’Driscoll评分结果显示,手法组的浅层缺损和深层缺损的评分均高于同一时间段对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）;治疗后,手法组无论浅层缺损还是深层缺损,各时间点O’Driscoll评分比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。 结论：手法治疗能有效地修复兔膝关节的浅层软骨缺损和深层软骨缺损,修复物质与透明软骨相似。     

温针灸对兔膝关节退变模型血清MMP-1和MMP-13水平的影响

目的观察温针灸治疗兔膝关节退变模型前后血清基质金属蛋白酶1、13（MMP-1,MMP-13）及软骨形态的变化,探讨温针灸治疗膝骨性关节炎的作用机理。方法 30只雄性兔随机分为模型组、温针灸组和西药组,每组10只,采用右后肢伸直位固定制作兔膝关节退变模型。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测造模前、治疗前和治疗后兔血清中MMP-1,MMP-13水平,参考彭太平法观察膝关节组织形态学变化。结果治疗2周后,大体和光镜观察模型组膝关节软骨变薄,出现明显的关节软骨损伤,温针灸组可明显改善关节软骨组织学结构。各组治疗前较造模前血清MMP-1、MMP-13的浓度均显著升高（P〈0.05）;治疗两周后,与模型组比较,温针灸组MMP-1、MMP-13水平降低（P〈0.05）,但与西药组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论温针灸能治疗KOA的软骨损伤,可能与降低MMP-1和MMP-13表达有关。     

补肾活血方对兔膝骨关节炎病变软骨BMP-2/gremlin表达的影响

目的观察家兔膝骨关节炎模型关节软骨BMP-2/gremlin的表达情况及补肾活血方的调节作用。方法 48只实验用家兔随机分为治疗组、阳性对照组和阴性对照组,每组16只。治疗组和阳性对照组行右膝关节前交叉韧带横断手术(ACLT)造模,阴性对照组行右膝模拟造模手术。治疗组造模后给予补肾活血方灌胃治疗,阳性对照组造模后给予制动干预,阴性对照组行模拟手术后给予生理盐水灌胃。在术后第4、8周各组各处死8只家兔,观察膝关节损伤软骨肉眼改变,取组织标本经石蜡包埋切片后行常规苏木精-伊红染色观察软骨组织的病理变化,Real time PCR法及免疫组化法检测BMP-2、gremlin的表达。结果补肾活血方可减轻兔膝骨关节炎模型关节软骨形态学损害。治疗组和阳性对照组第4、8周软骨中BMP-2及gremlin表达量明显高于阴性对照组(P<0.05),且阳性对照组较治疗组gremlin同期表达增多(P<0.05);第8周阳性对照组标本中BMP-2表达持续稳定,但gremlin表达水平较第4周明显上升(P<0.05)。结论补肾活血方对兔ACLT模型关节软骨中修复保护性细胞因子BMP-2的表达有上调作用,同时抑制BMP-2拮抗因子gremlin过度表达,对骨关节炎修复有良好的调节作用。     

火器伤后膝关节软骨的病理学退变?

目的：观察火器伤后膝关节软骨退变的病理学表现。方法将35只新西兰大白兔随机分为7组,每组各5只。对照组仅行兔右后肢膝关节关节囊切开并获取软骨标本;对兔右后肢膝关节建立火器伤关节软骨损伤模型后,6h组、3d组、7d组、14d组、28d组、56d组分别于造模后6h、3d、7d、14d、28d、56d时处死兔子,获取软骨标本。对各组软骨组织进行大体观察、HE染色、番红O/固绿染色及TUNEL标记。结果对照组、6 h组、3 d组、7 d组的大体评分依次减少( P<0．05),7 d组、14 d组、28 d组的大体评分差异均无统计学意义( P>0．05)。对照组、6 h组、3 d组、7 d组、14 d组、28 d组的Mankin评分依次增加(P<0．05),而28 d组与56 d组的Mankin评分差异无统计学意义(P>0．05)。对照组、6 h组、3 d组、7 d组、14 d组、28 d组、56 d组软骨细胞凋亡率依次升高(P<0．05)。结果火器伤造成软骨细胞合成分泌蛋白多糖障碍及胶原纤维网网架的断裂,而残存的正常软骨细胞不能修复这一损伤,由此产生的软骨慢性损伤是导致造模后软骨发生退变的原因之一。     

海桐皮汤熏蒸对兔实验性膝骨关节炎氧自由基代谢的影响

目的:观察海桐皮汤熏蒸对实验性兔膝关节骨性关节炎氧自由基代谢的影响。方法:新西兰大白兔45只,随机取10只作为正常对照组,其余35只采用Hulth方法造模,1周后取30只无膝关节感染实验兔,随机分为模型组、水蒸气组和海桐皮汤组,每组10只,分别给予相应的处理,4周后处死取血。检测比较实验前后各组兔血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果:与治疗前比较,模型组治疗后SOD活性降低(P<0.05),MDA含量升高(P<0.05);水蒸气熏蒸组、海桐皮汤熏蒸组SOD活性升高,MDA含量降低,与治疗前比较,差异有统计学意义(P均<0.05);海桐皮汤熏蒸组SOD活性升高、MDA含量降低改善更明显,与水蒸气熏蒸组和模型组比较,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论:海桐皮汤熏蒸可显著提高实验性膝骨关节炎模型兔血清SOD活性,降低MDA含量,从而延缓关节软骨的退变,促进软骨修复。     

滑膜间充质干细胞-小肠黏膜下层复合体修复兔膝半月板损伤研究

目的探讨滑膜间充质干细胞-小肠黏膜下层软骨诱导化复合体(SMSCs-SIS)修复兔膝关节半月板损伤的潜能及可行性。方法选取58只健康体质新西兰大白兔为研究对象,作膝关节半月板损伤造模后将其随机分为实验组(n=29)和对照组(n=29);实验组同时于半月板损伤处植入软骨诱导化SMSCs-SIS复合体;对照组仅植入小肠黏膜下层支架。后分别单笼饲养,两组大白兔均于术后第4周处死并取材,采用大体形态学观察、生物力学及阿尔新蓝比色法检测糖胺多糖(GAG)含量作为评估指标评价半月板损伤修复情况。结果大体及形态学观察结果显示实验组所有半月板裂口均愈合良好;对照组半月板损伤处裂口较前稍增宽,仅见少许再生组织填充,裂口周围组织萎缩。生物力学结果显示实验组半月板组织弹性模量为(42.71±2.02)Mpa,对照组为(10.01±1.52)Mpa,两组间损伤修复半月板组织弹性模量差异比较有统计学意义(P0.05)。阿尔新蓝比色法GAG含量测定结果显示实验组为(4.14±1.02) ug/mL,对照组为(1.31±1.02)ug/mL,两组间差异有统计学意义(P0.05)。结论滑膜间充质干细胞-小肠黏膜下层软骨诱导化复合体材料(SMSCs-SIS)移植可有效促进兔膝半月板局部损伤的修复,是修复兔膝半月板损伤的有效方法之一。     

关节腔内注射医用臭氧对兔膝骨性关节炎的影响

目的观察膝关节腔内注射医用臭氧对兔膝骨性关节炎的影响,研究不同浓度医用臭氧对骨性关节炎的治疗效果。方法将健康家兔32只随机分为A组（空气组）、B组（25μg/ml医用臭氧组）、C组（40μg/ml医用臭氧组）、D组（80μg/ml医用臭氧组）,每组兔右膝关节均使用Hulth法复制出膝骨性关节炎（OA）模型,造模成功后,每组每周1次给予膝关节腔内注射医用臭氧,每次2ml,共4周。末次注射后3d处死实验兔,取股骨内侧髁附近软骨组织行病理学观察及Mankin评分;取关节液行NO检测;分别在造模前、造模成功时和处死前测定兔膝关节活动度。结果各组造模成功时右膝关节活动度较造模前降低,处死前B、组C组和D组右膝关节活动度较造模成功时升高,B组处死前即刻右膝关节活动度较C组和D组明显升高（P〈0.05）;各组右膝关节软骨病理检查均出现关节软骨损害改变,B组关节软骨退变程度轻,Mankin评分较左膝差异无统计学意义（P〉0.05）,C组和D组关节软骨退变明显,Mankin评分较左膝差异有统计学意义（P〈0.05）;各组右膝关节关节液中NO含量升高,B组关节液中NO含量相对于C组和D组降低程度最大。结论三种浓度的医用臭氧均能够减轻骨性关节炎的炎症反应,而40μg/ml和80μg/ml的医用臭氧会导致关节软骨组织结构破坏,臭氧浓度越高损害越重。     

传统中药补肾固筋方兔膝骨性关节炎IL-1、TNF-α

目的 观察自拟中药补肾固筋方对膝骨性关节炎（knee osteoarthritis，KOA）模型兔血清及关节液IL-1、TNF-α表达的影响。方法 选取8月龄左右健康雄性新西兰大白兔72只，随机分为正常组、模型组、西药组、中药组，每组18只，除正常组外均采用改良Hulth造模法造模连续给药8周，取血清及膝关节前方部分滑膜组织、股骨内髁关节软骨及软骨下骨，ELISA法检测血清及关节液IL-1、TNF-α含量。结果 西药组关节间隙狭窄，介于模型组和中药组之间，关节面粗糙，骨赘明显；中药组关节间隙稍窄，关节面稍粗糙伴轻微骨赘。与正常组比较，模型组血清及关节液IL-1、TNF-?含量升高 (P<0.01)。与模型组比较，两个给药组血清及关节液IL-1、TNF-?含量降低 (P<0.01)，两给药组之间比较，差异无统计学意义。结论 研究补肾固筋方对IL-1、TNF-?作用和调节机制，指导临床应用提供实验依据。     

消瘀接骨散对兔膝骨关节炎模型关节液中MMP-1、MMP-3表达的影响

目的 观察消瘀接骨散对兔膝骨关节炎模型中关节软骨病理改变及关节液中基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）-1、MMP-3表达的影响。 方法 将24只新西兰大耳白兔分为正常组、模型组、用药组,每组8只。采用膝关节石膏制动方法复制膝骨关节炎模型,模型复制成功后,正常饲养并驱赶1周,给予用药组家兔消瘀接骨散外敷,给予模型组和正常组家兔相同大小药棉、绷带、胶布固定。光镜下观察膝关节软骨退变情况,采用酶联免疫吸附法测定关节液中MMP-1、MMP-3表达水平。 结果 用药组家兔膝关节软骨损伤较模型组明显减轻,关节软骨表面较正常组粗糙,滑膜增厚、稍有肿胀,镜下可见细胞排列规律尚可,偶见少量细胞簇集现象,关节软骨细胞有轻度变性,潮线尚完整。用药组家兔膝关节软骨的Mankin评分及关节液中MMP-1、MMP-3表达水平明显低于模型组（P<0.05）。 结论 消瘀接骨散外敷治疗兔膝骨关节炎的机制与其降低关节液中MMP-1、MMP-3的表达水平有关。     

关节内注射透明质酸钠对兔膝关节退变软骨的影响

目的：观察关节内注射透明质酸钠对兔膝关节炎模型中退变软骨的影响。方法：以２４只成年新西兰兔为实验对象,建立Ｈｕｌｔｈ膝关节骨关节炎模型。实验组（１２只）于术后第８周开始,每周关节内注射１％透明质酸钠１ｍｌ,连续注射５次,对照组（１２只）不作任何治疗。注射后６周处死动物,在手术显微镜下观察膝关节表面,取股骨内髁软骨标本进行透射电镜观察;取内侧胫骨髁软骨作氨基己糖测定。结果：实验组动物软骨细胞退变程度     

强力霉素对制动兔骨关节炎模型对侧膝关节早期退变的影响

目的：研究口服强力霉素对制动兔骨关节炎模型对侧膝关节早期退变的影响及作用机制。方法：36只新西兰大白兔随机分为空白对照组,模型对照4、8、12周组,给药8、12周组。模型组与给药组均给予石膏固定左下肢。石膏固定4周后,给药组给予强力霉素。分别在8周、12周处死动物,观察指标包括：软骨大体形态、软骨man—kin评分、软骨Ⅱ型胶原、uPA、MMP-13。结果：与模型对照组比较,给药组软骨面光滑,mankin评分较低,Ⅱ型胶原含量较高,uPA、MMP-13活性较低（P〈0．01）。结论：强力霉素对制动兔骨关节炎模型对侧膝关节软骨早期退变有缓解作用,作用机制与抑制MMP-13、uPA的表达有关。     

丹紫康膝冲剂对大鼠膝骨陛关节炎软骨细胞凋亡的影响

目的探讨丹紫康膝冲剂对大鼠膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响。方法将健康Wistar大鼠80只随机分为4组,分别为丹紫康膝组,西药组,模型组,正常组。除正常组外,其他组予以改良Hultll造模法造成大鼠膝骨性关节炎模型,于造模6周后对各组进行干预,干预4周后肉眼观察大鼠膝关节大体形态,抽取关节液检测一氧化氮（NO）含量,TUNEL法检测关节软骨细胞凋亡率。结果肉眼观察下见模型组造模膝关节软骨明显退变,局部溃疡,关节边缘增生,正常组膝关节软骨光滑润泽,丹紫康膝组和西药组可见造模膝关节有新生软骨生成;膝关节滑膜液NO含量正常组较其余3组低（P〈0．05）,丹紫康膝组和西药组NO含量较模型组低（火0．05）;丹紫康膝组和西药组细胞凋亡率明显低于模型组（P〈0．05）,丹紫康膝组、西药组、模型组细胞凋亡率均较正常组高（P〈0．05）。结论丹紫康膝冲剂能降低大鼠膝关节关节液NO含量．从而抑制由N0介导的关节软骨细胞凋亡。     

刺五加关节腔注射治疗兔膝关节骨性关节炎的病理学观察

目的：观察关节软骨和滑膜的病理改变,探讨刺五加治疗原发性膝关节骨性关节炎的疗效及其作用机制。方法：将64只新西兰白兔随机分为4组：正常组、刺五加组、透明质酸钠组、模型组。正常组既不造模也不给药,其余用内侧半月板部分切除的方法造模。刺五加组关节腔注射刺五加注射液,透明质酸钠组关节腔注射透明质酸钠注射液。术后2周开始用药干预,直到处死前1周。分6周和10周两个时相点处死动物取材,制备软骨及滑膜石蜡切片后进行HE及AB-PAS染色,分别在光镜下进行病理评分。结果：滑膜Mankins评分,在两个时相点刺五加组均比模型组低（均P〈0.05）;与6周相比,刺五加组10周时评分较高（P〈0.05）。关节软骨OARSI评分,在两个时相点,刺五加组均比模型组低（均P〈0.05）;与6周相比,刺五加组10周评分无显著差异（P〉0.05）。结论：刺五加注射液可以减缓甚至阻断实验性兔膝关节骨性关节炎的病变进展。     

灵仙通络方对C518大鼠膝关节退变软骨细胞增殖、Ⅱ型胶原及基质金属蛋白酶-13表达的影响

目的：探讨灵仙通络方对C518大鼠膝关节退变软骨细胞增殖、Ⅱ型胶原（COL-Ⅱ）及基质金属蛋白酶-13（MMP-13）的影响。方法选取C518大鼠膝关节软骨细胞株,随机分为中药组（灵仙通络方）、西药组（氨糖美辛）和对照组（氯化钠溶液）,进行培养、诱导退变等处理,于给药后第1、2、3 d,分别检测中药组、西药组和对照组不同浓度下对软骨细胞增殖、COL-Ⅱ及MMP-13表达的影响。结果同一时间点的中药组、西药组不同浓度之间噻唑蓝（MTT）值差异有统计学意义（P＜0.01）。对照组不同浓度氯化钠溶液的MTT值差异不具有统计学意义（P＞0.05）。在COL-Ⅱ免疫组化染色中,中药组与西药组和对照组相比差异有统计学意义（P＜0.01）,且中药组优于西药组（染色指数χ2=16.26,df=2,P＜0.01）。在 MMP-13免疫组化染色中,对照组较中药组、西药组差异有统计学意义（P＜0.01）,且中药组优于西药组（染色指数χ2=54.31,df=2,P＜0.01）。结论 C518大鼠膝关节退变软骨细胞经灵仙通络方干预后能够促进其增殖,调节COL-Ⅱ、MMP-13的表达,延缓膝关节骨性关节炎疾病的发展进程。     

青藤碱对膝骨性关节炎兔关节液及血清白细胞介素1β含量的影响

目的：探讨关节腔内注射青藤碱对膝骨关节炎兔关节液及血清中白细胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）含量的影响。方法：除正常对照组（n=4）外，36只免采用左后肢膝关节伸直位石膏管型制动法建立兔骨关节炎模型。造模6周后青藤碱组兔关节腔内注射青藤碱，1次／N，连续5周，透明质酸组关节腔内注射透明质酸，模型组关节腔内注射生理盐水，正常组不治疗。分别于治疗前及治疗后采用酶联免疫吸附测定法检测关节液及血清IL-1β含量，并对软骨组织进行Mankin评分。结果：与模型组比较，青藤碱组骨性关节炎兔血清及关节液中IL-1β含量下降（P〈0．01），且青藤碱组低于透明质酸组（P〈0．05）。青藤碱组的软骨Mankin评分明显低于透明质酸组（P〈0．05）。结论：青藤碱可能通过抑制关节液及血清中IL—1β表达降低兔骨性关节炎模型的关节退变程度。     

超微肿痛贴对兔膝骨关节炎模型的软骨中JNK/p38 MAPK信号通路的影响

目的 观察超微肿痛贴对兔膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型的JNK/p38 MAPK信号通路的mRNA及蛋白表达的影响.方法 将50只3月龄新西兰兔随机分为空白组、模型组、氟比洛芬凝胶贴膏组、超微肿痛贴组,每组各12只,除空白组外,其他3组均采用木瓜蛋白酶膝关节腔注射方式造模.造模成功后,...