内侧半月板部分切除联合前交叉韧带切断的大鼠膝关节炎模型研究

目的:采用内侧半月板部分切除加前交叉韧带切断的方法建立大鼠骨关节炎(OA)模型,观察模型大鼠膝关节病理变化进程.方法:选取SD雌性大鼠20只,采用手术切除内侧部分半月板和切断右膝关节前交叉韧带,左侧对照,术后第1、2、4、6、8周处死大鼠,取全膝,观察膝关节软骨外形、软骨结构、关节滑膜ED1阳性细胞数和影像学改变.结果:术后第1周开始出现软骨细胞肿胀,表层带软骨细胞死亡,数量减少,软骨基质减少,表层带纤维化等软骨损害;滑膜单克隆抗体ED1阳性渗出性细胞明显增多;4周后肉眼观察可见全膝软骨外形明显改变,软骨下骨密度增高及滑膜增生纤维化等变化.结论:采用切除SD大鼠膝关节内侧部分半月板加切断前交叉韧带能早期诱导产生OA的病理变化,是较理想的研究早期OA的动物模型.     

鹿角壮骨胶囊对膝骨关节炎家兔模型关节软骨病理改变及骨形态发生蛋白-7表达的影响

目的 观察鹿角壮骨胶囊对膝骨关节炎家兔模型膝骨关节炎软骨的保护作用及其对软骨细胞骨形态发生蛋白-7表达的影响.方法 将60只新西兰兔按照数字随机分为3组,每组20只,模型对照组和鹿角壮骨胶囊组采用单侧改良Hulth术制作膝骨关节炎模型.正常对照组仅打开关节腔,不损伤韧带和半月板作对照,连续42 d.正常对照组和模型对照组给予等量生理盐水灌胃(0.1 mL/kg),鹿角壮骨胶囊组给予鹿角壮骨胶囊(0.1g/kg)灌胃,3组连续28 d.观察兔膝关节大体情况,并进行软骨退行性变评分和组织学观察,免疫组化检测膝关节软骨中骨形态发生蛋白-7表达情况.结果 鹿角壮骨胶囊组兔膝关节软骨病理退变程度较模型对照组轻,膝关节软骨细胞骨形态发生蛋白-7的表达量较模型对照组高,差异有统计学意义(P<0.05).结论鹿角壮骨胶囊能延缓骨关节炎关节软骨病理损伤,增强膝关节软骨细胞骨形态发生蛋白-7表达,从而达到延缓骨关节炎病程进展的作用.     

兔膝骨关节炎关节软骨细胞凋亡的实验研究——超微结构观察

目的 为探讨骨关节炎关节软骨退变的发生机理。方法 按照Hulth法建立兔膝关节炎模型实验组，12只实验兔随机分为2组，每组6只，自身健侧做实验对照组，分别为建模后2周组和4周组后取材，分别制作光镜电镜标本进行系统观察研究。结果 不同时期的骨关节炎关节软骨有程度不一的软骨细胞凋亡，以4周组最为显著，特别是在电镜下软骨细胞凋亡的形态学改变更具特征、更为典型。结论 (1)膝骨关节炎的关节软骨细胞退变时，软骨细胞数目的减少有软骨细胞凋亡的参与。(2)关节软骨退变的程度与软骨细胞数目的减少即与软骨细胞凋亡的程度有关。(3)形态学的特征性表现可作为判断软骨细胞是否发生凋亡的“金指标”。     

关节内注射透明质酸钠对兔膝关节退变软骨的影响

目的：观察关节内注射透明质酸钠对兔膝关节炎模型中退变软骨的影响。方法：以２４只成年新西兰兔为实验对象,建立Ｈｕｌｔｈ膝关节骨关节炎模型。实验组（１２只）于术后第８周开始,每周关节内注射１％透明质酸钠１ｍｌ,连续注射５次,对照组（１２只）不作任何治疗。注射后６周处死动物,在手术显微镜下观察膝关节表面,取股骨内髁软骨标本进行透射电镜观察;取内侧胫骨髁软骨作氨基己糖测定。结果：实验组动物软骨细胞退变程度     

IL-15在兔膝创伤性关节炎模型中的表达研究

目的观察兔膝创伤性关节炎早期白介素15(IL-15)炎性因子的表达及其变化,以进一步探讨创伤性关节炎的发生机制。方法将48只健康新西兰大白兔随机分为实验组和对照组,每组24只。实验组行左后膝关节前后交叉韧带切断和内侧半月板切除术;对照组行单侧膝关节切开术作为假手术对照。2组分别在术后6、12、24h,1、2、3、4周7个时间点抽取关节液,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定关节液中IL-15含量表达。组织学观察其关节软骨和滑膜的变化。结果48只大白兔中进入结果分析29只。2组术后6h兔膝关节液中IL-15含量较其他时间点明显增高(P<0.05);术后1周IL-15表达较术后24h明显降低(P<0.05);术后1、2、3、4周4个时间点的IL-15表达成升高趋势;实验组术后各时间点IL-15含量均高于对照组(均P<0.05)。实验组术后4周,关节软骨失去原有的光泽,呈灰黄色,有裂纹,HE染色见表层略不平整,有小裂隙,纤维组织增生,玻璃样变性,局灶性软骨基质异染性减弱,软骨细胞减少,软骨基质纤维化。结论创伤后兔膝创伤性关节炎早期IL-15高表达,关节软骨及滑膜退变,创伤性关节炎早期与IL-15关系密切。     

兔膝关节内侧副韧带重度损伤后重建手术对关节软骨保护作用的研究

目的 通过动物实验研究自体肌腱移植重建膝关节内侧副韧带对膝关节软骨退变的影响,为临床使用肌腱重建手术治疗严重膝内侧副韧带损伤,进而减少骨性关节炎的发生提供实验依据.方法 取24只成年新西兰大白兔,两侧膝关节内侧副韧带(MCL)于中段完全切断做成自身对照模型.随机选取实验组,模拟人半腱肌腱重建内侧副韧带进行手术,对照组未行重建手术.术后4、12、162L 24周分别安乐死处死6只兔子,通过组织学切片、免疫组织化学和电镜观察膝关节软骨细胞的凋亡及其凋亡调控基因BCL-2的表达情况.结果 组织学观察:实验组软骨的表面情况及软骨细胞的排列、形态均好于对照组,而且24周时对照组出现了大量的软骨陷窝内细胞消失.免疫组织化学:实验组和对照组均可见BCL-2阳性表达细胞,实验组中的BCL-2阳性表达细胞所占百分比与对照组比较,差异有显著性(P＜0.05).透射电镜:实验组各组仅出现退变的软骨细胞,未见凋亡的软骨细胞,对照组各组均出现了退变的软骨细胞和凋亡的软骨细胞,在24周组尤其严重.结论 MCL重度损伤后用半腱肌腱重建MCL,能够使软骨细胞的排列和形态较好的维持.MCL重度损伤后用半腱肌腱重建MCL能够减缓软骨的退变,减少软骨细胞的凋亡.     

大鼠实验性骨关节炎模型的建立及病理特征

目的 通过前交叉韧带切断建立大鼠骨关节炎模型并观察其病理特征,为骨关节炎的研究提供经济有效的动物模型.方法 体重200～250 g的3月龄Wistar大鼠雌雄各20只,随机选取30只作为实验对象,每只随机选取一侧膝关节作手术侧.苯巴比妥钠麻醉后常规备皮消毒膝关节,取髌旁内侧切口显露膝关节髌骨后,将髌骨向外侧脱位,尽量屈曲膝关节显露前交义韧带,在直视下切断前交叉韧带,将髌骨复位,闭合关节腔,对侧不手术作为空白对照组,大鼠不作任何固定措施,分笼饲养.另10只作为假手术对照.术后3 d每天每只大鼠肌肉注射青霉素20万单位预防感染.分别于术后2、4及8周,随机处死10只大鼠,对软骨退变情况行大体观察及光镜观察.结果 实验组2周时,关节软骨失去正常光泽,软骨面不规则;4周时,10例中有4例出现关节积液,并可见滑膜增生,软骨面粗糙糜烂,色泽灰暗;8周时,10例中有8例出现关节积液和滑膜增生,软骨面不规则,出现溃疡甚至软骨缺损,软骨下骨质裸露.光镜下改变:2周后,可见软骨表面原纤维形成,表层软骨细胞肿胀变圆,扁平的软骨细胞减少,软骨细胞簇集,基质番红花红O-固绿染色开始出现减退.4周后,软骨表面原纤维形成明显,表层及中层细胞收缩,细胞数量弥漫性增多,出现大量簇集细胞团,潮线紊乱,基质番红花红O-固绿染色明显减退.滑膜出现增生.8周后病变进一步加重,大部分软骨的表层细胞消失,软骨表面出现溃烂缺损,软骨细胞数量减少,可见坏死崩解细胞,潮线紊乱甚至消失,番红花红O-固绿染色重度减退甚至消失.滑膜亦见明显增生肥厚,出现单核淋巴细胞浸润.结论 前交叉韧带切断能诱发大鼠骨关节炎的发生,其病理改变随时间增加而加重.     

睾酮对雄兔膝骨关节炎预防作用的实验研究

目的：探讨睾酮对雄兔膝骨关节炎（Osteoarthritis,OA）预防的作用。方法：将18只雄性家兔随机分为去势组、未去势组和睾酮补充组,每组6只,未去势组切除右膝关节前交叉韧带和内侧半月板,去势组和睾酮补充组在切除右膝关节前交叉韧带和内侧半月板同时切除双侧睾丸,睾酮补充组于术后第3周开始肌注十一酸睾酮,6 mg/kg,每2周1次,共3次,正常喂养8周后处死所有家兔取右股骨内侧髁行大体评估、切片用免疫组织化学法分析测定软骨细胞类胰岛素1号增长因子（Insulin-like growth factors,IGF-1）表达和关节软骨 Mankin评分,测定不同时期血清总睾酮。结果：未去势组和睾酮补充组软骨细胞中IGF-1的表达高于去势组（P<0.05）、Mankin评分明显低于去势组（P<0.05）,未去势组和睾酮补充组4周和8周时血清总睾酮明显高于去势组（P<0.05）,差异有统计学意义。结论：睾酮对雄兔膝OA有预防作用。     

徐长卿丹皮酚对兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响

探讨徐长卿丹皮酚对兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡及相关调控蛋白Bcl-2,Bax表达的影响。采用兔膝关节内侧半月板前1/3切除及前交叉韧带切断制备骨关节炎(OA)模型。于OA模型建立后的第1周开始对右膝关节内分别注射徐长卿丹皮酚0.2 mg、曲安奈德0.2 mg、0.9%生理盐水0.3 mg,每周2次,连续给药5周。用药结束1周后取关节软骨标本制作切片,透射电镜观察软骨细胞凋亡的结构变化;TUNEL法检测软骨细胞凋亡,计算软骨细胞凋亡指数;免疫荧光法检测软骨细胞Bcl-2和Bax的表达。结果显示徐长卿组和曲安奈德组的凋亡率与对照组相比均显著降低(P<0.05,P<0.01),徐长卿丹皮酚和曲安奈德均能上调Bcl-2蛋白的表达,下调Bax蛋白的表达,从而升高Bcl-2/Bax的比值,进而抑制细胞凋亡,其中徐长卿丹皮酚与模型组比较,升高Bcl-2/Bax的比值更为显著(P<0.01)。     

uPA/uPAR在骨关节中的表达及与软骨细胞凋亡的关系

目的探讨uPA/uPAR在骨关节炎软骨中的表达及与软骨细胞凋亡的关系。方法成年新西兰大白兔24只,根据文献采用石膏固定方法制作骨关节炎动物模型,用免疫组化、原位末端标记技术(TUNEL)等方法检测uPA/uPAR在兔膝关节软骨中的表达和软骨细胞凋亡情况。结果在软骨中uPA/uPAR的表达实验组阳性率高于对照组(P<0.05);实验组软骨细胞凋亡程度与uPA/uPAR的表达均呈正相关(P<0.05)。结论uPA/uPAR与骨关节炎发生发展有密切关系。     

兔膝关节骨性关节炎动物模型的复制与评价

目的制作家兔膝关节骨性关节炎的模型,并通过观察软骨组织及软骨细胞退变情况进行检测。方法取健康雄性家兔12只,体质量2.0~3.0kg,随机分为2组,假手术组、模型组,每组6只,取右膝关节内侧纵切口切断前后交叉韧带和内侧副韧带并切除内侧半月板,逐层缝合伤口。术后每日肌肉注射青霉素2×105 U,连续7d,预防感染。每日强迫家兔活动60min。12周后,处死全部动物,取完整膝关节作为实验标本。进行形态学分析,对2组分别进行细胞培养,观察兔软骨细胞的形态学特性。结果组织形态学分析显示:假手术组藏红固绿染色显示正常组关节软骨表层光滑、平整,软骨细胞分布均匀,排序整齐,各层次清晰。模型组显示关节面软骨表层裂隙,有些出现局部缺损,软骨细胞数量明显减少,软骨层面染色不均匀,局部甚至出现失染。假手术组培养的软骨细胞大多呈梭形或短梭形,少部分呈多角形,细胞核为圆形或椭圆形,Ⅱ型胶原的表达明显;模型组培养的软骨细胞大多呈出现许多指状突起,呈多角形变化,核仁多染,细胞增殖速度明显减慢,Ⅱ型胶原的表达明显降低。结论成功制作了兔膝关节骨性关节炎动物模型,并首次运用现代技术手段进行了分析,此模型操作简单,可重复性强,为进一步研究中医药防治膝关节骨性关节炎奠定了基础。     

大鼠内侧半月板切除后髌骨的组织学变化及疼痛发生的机制

【目的】 分析大鼠内侧半月板切除后髌骨的组织学改变,并探讨髌骨疼痛产生的机制。【方法】 大鼠分为实验(MMx)组(n = 30),假手术(Sham)组(n = 30)和对照(Control)组(n = 30)。实验组切除右膝内侧半月板及内侧副韧带,Sham组仅暴露半月板,Control组未予手术。术前1 d及术后第1、2、4、7、14、21 及 28天测量各组大鼠右后肢机械刺激撤足阈值。术后第1、2和4周各组分别杀死10只大鼠,取右侧髌骨,分析其大体改变以及软骨和软骨下骨的组织病理学变化,并测量软骨下骨增生的血管。同时,应用免疫组化技术检测髌骨中血管内皮生长因子(VEGF)、神经生长因子(NGF)、P物质和肿瘤坏死因子α(TNF)的表达和分布。【结果】 ①术后MMx组右后肢的机械刺激疼痛阈值显著下降并维持在较低水平至实验结束,且显著低于Sham组和Control组。术后1周内Sham组右后肢痛阈下降但2周左右恢复到术前水平;实验过程中Control组痛阈无变化。②术后第1周开始MMx组髌软骨发生退变,且随时间而不断加重,Mankin's评分也逐渐增加。术后第2周MMx组软骨下骨出现重塑,第4周更加显著:软骨下骨增生的血管突破潮线侵蚀深层软骨,呈多重潮线和潮线中断,软骨下骨平均厚度显著下降。Sham组与Control组各时间点髌软骨及软骨下骨无显著退变,Mankin's评分无明显变化改变。③免疫组化显示MMx组术后髌软骨中VEDF和NGF的表达较Sham组和Control组显著增强,且随时间逐渐增强。MMx组术后髌骨中TNF-α和P物质的表达显著增强,且主要分布于增生的血管壁周围基质和软骨细胞中。Sham组和Control组上述各因子表达微弱。【结论】 ①内侧半月板及内侧副韧带切除后髌骨有逐渐加重的骨关节炎改变,患肢有骨关节炎疼痛反应;②软骨内上调的VEDF和NGF与软骨退变、软骨下骨重塑及血管增生相关;③软骨下骨增生的血管及其周围上调的疼痛相关分子可能导致膝关节痛阈下降。髌骨软骨下骨也应作为骨关节炎疼痛的治疗靶点。     

盐酸氨基葡萄糖胶囊对膝骨关节炎形态学影响的实验研究

[目的]探讨盐酸氨基葡萄糖胶囊对兔膝关节软骨细胞的影响。[方法]将24只新西兰雌兔随机分为药物组、对照组各12只,建立膝骨关节炎模型。造模2周后,药物组予盐酸氨基葡萄糖胶囊(每只0.628 g/d)研制粉末,生理盐水配成30 ml液体灌胃。对照组予生理盐水(每只30 ml/d)液体灌胃。两组均连续用药8周,造模10周末处死所有动物,取右膝关节内侧胫骨平台、股骨内侧软骨组织,观察兔膝关节大体形态和光镜下观察软骨细胞形态变化。[结果]光镜观察结果:药物组关节面光滑,软骨透明,未见明显缺损、骨赘形成。四层结构基本清晰。部分膝关节软骨表层和中层增厚,细胞排列轻度紊乱,潮线清晰完整。对照组软骨表面粗糙,可见缺损表面糜烂、缺损及骨赘形成。切面见软骨明显变薄软骨细胞减少,大小不等,簇集现象明显。四层正常结构消失。软骨层明显变薄,潮线模糊、紊乱。[结论]盐酸氨基葡萄糖胶囊可促进兔膝关节软骨细胞的修复和重建,延缓兔膝关节软骨组织的退行性改变。     

壮骨颗粒对骨关节炎兔去分化软骨细胞影响的实验研究

目的:探讨壮骨颗粒对膝骨性关节炎兔软骨细胞增殖、凋亡的影响。方法:60只新西兰大白兔用Hulth法造骨关节炎动物模型.随机分成空白对照组、实验组:实验组用壮骨颗粒灌胃,空白对照组用生理盐水.治疗第4、8、12、24周后每绢各取6只动物.用亚硝酸盐还原酶法测定关节滑液NO水平.关节软片组织HE染色,光镜观察形态学变化、电镜观察软骨细胞内结构变化及原位末端标记(TLNEL)法观察软骨细胞凋亡病理改变,进行组织病理学评估。结果:空白对照组NO活性在不同时期均高于实验组(8周.P<0.05;12、24周,P<0.01),两组问比较有显著性差异P<0.05,0.01):实验组的关节软骨病理改变总积分、软骨细胞病理改变积分和软片表层病理改变积分均明显低于空白对照组(P<0.05);实验组的软骨细胞凋亡指数与对照组的软骨细胞凋亡有显著性差异(P<0.05)。与关节液中NO含量显著相关。结论:壮骨颗粒对兔膝关节实验性骨关节炎软骨退变具有保护作用。通过NO诱导途径减少软骨细胞的凋亡。可能是其作用机制之一。     

关节镜下半月板部分切除制备骨关节炎动物模型

目的 探讨经关节镜建立猪双膝骨关节炎动物模型及用磁共振成像(magnetic resonance imaging, MRI)监测骨关节炎骨软骨损害的有效性和可行性.方法 4只小型猪经关节镜切除双膝外侧部分半月板,术后12周,行大体、组织学和MRI观察与切除半月板相对股骨髁的骨软骨变化.结果 大体观察结果显示,局限性软骨表面纤维化,股骨髁间切迹骨赘形成;组织学检测结果显示,软骨细胞数量和蛋白多糖含量减少、成簇排列细胞数量增加;MRI检查结果显示,软骨厚度变薄和骨软骨信号强度改变.结论 经关节镜半月板部分切除能有效建立猪双膝关节骨关节炎动物模型,MRI能灵敏地监测到骨关节炎动物模型的骨软骨变化.     

关节镜诊治膝关节骨关节炎50例临床总结

目的：总结关节镜诊断膝关节骨关节炎和镜下清理术治疗膝骨关节炎的经验。方法：50例（55膝）膝关节骨关节炎病人，均行关节镜检查和镜下清理术。镜下所见为：软骨退变、滑膜炎性增生、半月板退变、交叉韧带磨抓游离体及骨赘形成、关节积液。结果：随访1－3年，近期优良率76．4％。结论：关节镜检查可以早期诊断膝关节骨关节炎，镜下清理术具有创伤小、并发症少、患者恢复快等优点，是诊治膝关节骨关节炎的有效方法。     

关于镜诊治膝关节骨关节炎50例临床总结

目的：总结关节镜诊断膝关节骨关节炎和镜下清理术治疗膝骨关节炎的经验。方法：５０例（５５膝）膝关节骨关节炎病人，均行关节镜检查和镜下清理术，镜下所见为：软骨退变，滑膜炎性增生，半月板退变，交叉韧带磨损，游离体及骨赘形成，关节积液，结果：随访１－３年，近期优良率７６．４％，结论：关节镜检查可以早期诊断膝关节炎，镜下清理术具有创伤小，并发症少，患者恢复快等优点，是诊治诊关节骨关节炎的有效方法。     

实验性骨关节炎超微结构研究

在32只成年家兔中,经手术切断前交叉韧带及内侧副韧带,造成膝关节骨关节炎,透射电镜观察发现在骨关节炎发展过程中,关节软骨的基质及软骨细胞发生变化。基质变化包括胶原纤丝的直径及排列方面的改变以及蛋白聚糖的改变,软骨细胞改变包括细胞增殖、退变以及形态方面的改变。所有上述变化随关节软骨的不同部位及发病的不同时期而异。     

实验性关节力学改变引起关节软骨变性的超微结构研究

作者用60只家兔为实验材料,手术切断兔膝关节前交叉韧带及内侧副韧带,同时切除内侧半月板,造成关节力学改变的实验模型。然后在不同时间阶段,通过透射电镜和扫描电镜观察病理模型中关节软骨的超微结构改变。发现软骨在变性过程中     

疏肝祛瘀方对兔膝早期骨关节炎软骨组织形态学影响的研究

目的:探讨疏肝祛瘀方对兔膝早期骨关节炎软骨组织形态学的影响.方法:成年健康日本大耳白兔18只,体重2.5～3.0Kg,随机分为正常组、对照组、治疗组各6只,对照组、治疗组通过结扎股静脉造成兔膝骨关节炎早期模型,分笼饲养;8周后,正常组和对照组以生理盐水灌胃4周,治疗组以疏肝祛瘀方(“膝舒汤”)汤药灌胃4周,然后同时处死各组兔子,取材,观察正常组、对照组和治疗组各层软骨细胞排列及细胞形态、细胞核、细胞质等情况并进行软骨各层厚度测定.结果:正常组与对照组之间,对照组与治疗组之间软骨各层厚度比较P＜0.01,说明两者之间有显著性差异.正常组与治疗组之间软骨各层厚度比较P＞0.05,说明两者之间无显著性差异.结论:疏肝祛瘀方汤药对兔膝早期骨关节炎软骨的厚度改变影响明显,能改善软骨基质,促进软骨细胞的增殖,从而使损伤的软骨面得以修复.