丁苯酞对缺血性脑卒中大鼠海马神经元凋亡的抑制作用及其对p38 MAPK信号通路的影响

目的：探讨丁苯酞对缺血性脑卒中大鼠海马神经元凋亡和p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）信号通路的影响,阐明丁苯酞对缺血性脑卒中的作用机制。方法： 102只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和丁苯酞组,每组34只。模型组和丁苯酞组大鼠采用改良Zea-Longa法制备局灶性脑缺血大鼠模型,丁苯酞组大鼠建模后给予丁苯酞（4.5 mg·kg^-1）治疗,假手术组大鼠每天相同时间点腹腔注射等量生理盐水。采用HE染色观察大鼠海马神经元细胞形态表现,原位末端转移酶标记（TUNEL）染色观察大鼠海马神经元凋亡情况,Western blotting法测定大鼠海马组织中激活型caspase-3（cleaved caspase-3）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、p38、磷酸化p38（p-p38）和分裂原激活的蛋白激酶（MAPK）蛋白表达水平,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定大鼠海马组织中cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2、p38和MAPK mRNA表达水平。结果：假手术组大鼠海马CA1区神经元排列整齐,细胞核和细胞膜正常;模型组大鼠海马CA1区神经元排列紊乱,细胞肿胀破裂,细胞核固缩;丁苯酞组大鼠海马CA1区部分神经细胞结构恢复正常。与假手术组比较,模型组大鼠海马CA1区神经元数量明显降低（P<0.01）,神经元凋亡指数明显增加（P<0.01）;与模型组比较,丁苯酞组大鼠海马CA1区神经元数量明显增加（P<0.01）,神经元凋亡指数明显降低（P<0.01）。与假手术组比较,模型组大鼠海马组织中cleaved caspase-3、Bax、p-p38和MAPK蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,Bcl-2蛋白表达水平明显降低（P<0.01）;与模型组比较,丁苯酞组大鼠海马组织中cleaved caspase-3、Bax、p-p38和MAPK蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,Bcl-2蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。与假手术组比较,模型组大鼠海马组织中cleaved caspase-3、Bax和MAPK mRNA表达水平明显升高（P<0.01）,Bcl-2 mRNA表达水平明显降低（P<0.01）;与模型组比较,丁苯酞组大鼠海马组织中cleaved caspase-3、Bax和MAPK mRNA表达水平明显降低（P<0.01）,Bcl-2 mRNA表达水平明显升高（P<0.01）。结论：丁苯酞可通过抑制海马组织p38 MAPK信号通路抑制缺血性脑卒中大鼠海马神经元凋亡。     

甘草次酸对雄黄致小鼠海马突触超微结构损伤的改善作用

目的：探讨甘草次酸（GA）对雄黄致小鼠海马突触超微结构损伤的改善作用,并阐明其相关机制。方法：60只ICR小鼠随机分为对照组[灌胃给予0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）水溶液]、雄黄组（灌胃给予雄黄混悬液1.35 g·kg^-1）和GA干预组（灌胃给予GA48 mg·kg^-1+雄黄1.35 g·kg^-1）（n=20）,每日1次,连续灌胃8周。采用新事物识别实验检测各组小鼠记忆能力和认知功能,测定各组小鼠海马组织中谷胱甘肽（GSH）水平,利用透射电镜观察海马CA1区突触超微结构、突触间隙宽度、突触活性带长度、突触后致密物（PSD）厚度和突触界面曲率等结构参数的变化。结果：与对照组比较,雄黄组小鼠新物体优先指数（PI）和海马组织中GSH水平明显降低（P<0.05）;与雄黄组比较,GA干预组小鼠新物体PI虽有所增大,但差异无统计学意义（P>0.05）,小鼠海马组织中GSH水平升高（P<0.01）。与对照组比较,雄黄组小鼠海马CA1区突触结构模糊,突触间隙宽度明显增加（P<0.01）,突触活性带长度变短（P<0.01）,PSD厚度明显变薄（P<0.01）,突触界面曲率减小（P<0.01）;与雄黄组比较,GA干预组小鼠海马CA1区突触结构较清晰、完整,突触间隙宽度变窄（P<0.05）,突触活性带长度变大（P<0.05）,PSD厚度增加（P<0.05）;突触界面曲率虽有所增大,但差异无统计学意义（P>0.05）。结论：雄黄可致小鼠海马突触结构参数改变,导致记忆能力和认知功能降低,GA可部分改善小鼠海马突触超微结构的异常变化。     

北五味子酸性多糖对阿尔茨海默病模型小鼠学习记忆能力的改善作用

目的：观察北五味子酸性多糖（SCP-A）对Aβ_25-35致阿尔茨海默病（AD）模型小鼠学习记忆能力的改善作用,并阐明其相关机制。方法：75只雄性C57BL小鼠随机分为空白组（侧脑室注射生理盐水,灌胃蒸馏水）,模型组（侧脑室注射Aβ_25-35,灌胃蒸馏水）,5、10和20 mg·kg^-1 SCP-A组（侧脑室注射Aβ_25-35,灌胃SCP-A）,每组15只。灌胃药物每日1次,连续14 d,于第8天给予Aβ_25-35进行侧脑室注射。给药完毕后,第15天依次进行避暗实验及Morris水迷宫实验观察小鼠的潜伏期、错误次数、找到平台时间、穿越平台次数和目标象限停留时间,Western blotting法检测小鼠海马组织中Tau蛋白、糖原合成酶激酶3（GSK-3β）及其磷酸化蛋白的表达水平。结果：避暗实验,与空白组比较,模型组小鼠潜伏期明显缩短,错误次数明显升高（P<0.01）;与模型组比较,10和20 mg·kg^-1 SCP-A组小鼠潜伏期明显延长（P<0.01）,错误次数明显减少（P<0.05或P<0.01）。Morris水迷宫,与空白组比较,模型组小鼠找到平台时间明显延长（P<0.01）,穿越平台次数及目标象限停留时间明显缩短（P<0.01）;与模型组比较,10和20 mg·kg^-1 SCP-A组小鼠找到平台时间明显缩短（P<0.01）,穿过平台次数及平台区域停留时间明显增加（P<0.01）。Western blotting法检测,与模型组比较,20 mg·kg^-1SCP-A组小鼠海马组织中磷酸化蛋白Tau Ser199、Tau Ser396及Tau Ser404表达水平明显降低（P<0.05）,GSK-3β表达水平明显降低（P<0.01）,磷酸化蛋白GSK-3β Tyr216相对表达水平明显降低（P<0.05）,磷酸化蛋白GSK-3β Ser9相对表达水平明显升高（P<0.05）。结论：SCP-A具有抗AD作用,该作用与其调节GSK-3β活性进而降低海马组织中Tau蛋白磷酸化水平有关。     

刺五加果水提物和醇提物对小鼠的镇静催眠作用及其机制

目的：探讨刺五加果水提物（ASF-WE）和醇提物（ASF-AE）对小鼠的镇静催眠作用,并阐明其可能作用机制,为刺五加果的开发提供依据。方法：分别制备ASF-WE和ASF-AE。120只雄性ICR小鼠随机分为空白对照组、地西泮（DZP）阳性对照组（DZP组）、不同剂量（4、8、16、32和64 mg·kg^-1） ASF-WE组和不同剂量（4、8、16、32和64 mg·kg^-1） ASF-AE组,每组10只,连续给药5 d,记录各组小鼠自主活动次数,利用阈下催眠剂量戊巴比妥钠诱导睡眠实验记录小鼠入睡率,利用催眠剂量戊巴比妥钠诱导睡眠实验记录小鼠睡眠潜伏期和睡眠时间,筛选出ASF-WE和ASF-AE的催眠剂量和亚催眠剂量。根据模型药的不同[模型药分别为5-羟色氨酸（5-HTP）、对氯苯丙氨酸（pCPA）和氟马西尼（FLU）],分别将雄性ICR小鼠40只随机分为空白对照组、模型对照组（5-HTP组和pCPA组）、ASF-WE＋模型药组和ASF-AE＋模型药组,每组10只;80只雄性ICR小鼠随机分为空白对照组、FLU组、DZP组、ASF-WE组、ASF-AE组、DZP+FLU组、ASF-WE＋FLU组和ASF-AE＋FLU组,每组10只;连续给药5 d,采用戊巴比妥钠诱导睡眠实验记录各组小鼠的睡眠潜伏期和睡眠时间,采用ELISA法检测小鼠海马组织中5-羟色胺（5-HT）和γ-氨基丁酸（GABA）水平。结果：与空白对照组比较,32和64 mg·kg^-1 ASF-WE组小鼠自主活动次数明显减少（P<0.05或P<0.01）,16、32和64 mg·kg^-1ASF-AE组小鼠自主活动次数明显减少（P<0.05或P<0.01）,16、32和64 mg·kg^-1ASF-WE组和ASF-AE组小鼠入睡潜伏期明显缩短（P<0.05或P<0.01）,睡眠时间明显延长（P<0.05或P<0.01）。与5-HTP组比较,ASF-WE＋5-HTP组和ASF-AE＋5-HTP组小鼠睡眠潜伏期明显缩短（P<0.01）,睡眠时间明显延长（P<0.01）,小鼠海马组织中5-HT水平明显升高（P<0.05）。与空白对照组比较,pCPA组小鼠睡眠潜伏期明显延长（P<0.01）,小鼠睡眠时间明显缩短（P<0.01）,表明失眠模型成功建立;与pCPA组比较,ASF-WE＋pCPA组和ASF-AE＋pCPA组小鼠睡眠潜伏期明显缩短（P<0.05）,睡眠时间明显延长（P<0.01）,小鼠海马组织中GABA水平明显升高（P<0.05或P<0.01）。与ASF-WE组比较,ASF-WE+FLU组小鼠睡眠潜伏期明显延长（P<0.05）,睡眠时间明显缩短（P<0.01）,小鼠海马组织中GABA水平明显降低（P<0.05）;与ASF-AE组比较,ASF-AE+FLU组小鼠睡眠潜伏期差异无统计学意义（P>0.05）,睡眠时间明显缩短（P<0.01）,小鼠海马组织中GABA水平明显降低（P<0.05）。结论：ASF-WE和ASF-AE均具有较好的镇静催眠作用,其作用机制可能与5-HT能和GABA能中枢神经系统有关。     

肌肽对血管性认知障碍大鼠氧化应激及NF-κB信号途径的影响

目的：探讨肌肽对大鼠血管性认知功能障碍（VCI）的保护作用,并阐明其作用机制。方法：50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组（双侧颈总动脉夹闭10 min→再灌注10 min→夹闭10 min）和不同剂量肌肽组（双侧颈总动脉夹闭10 min→再灌注10 min→夹闭10 min+100、300和900 mg·kg^-1·d^-1肌肽）,每组10只。肌肽于造模前21d至造模后12d灌胃给药,每日1次。于术后第7天开始进行水迷宫实验测定各组大鼠学习记忆能力;术后第12天取大鼠海马,高效液相色谱（HPLC）法测定各组大鼠海马组织中肌肽和还原性谷胱甘肽（GSH）水平。免疫组织化学法观察各组大鼠海马CA1区中胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达情况,Western blotting法检测各组大鼠海马组织中磷酸化核因子κB p65（p-NF-κB p65）蛋白表达水平,ELISA法检测各组大鼠海马组织中白细胞介素1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。结果：与假手术组比较,模型组大鼠海马CA1区锥体细胞部分缺失,逃避潜伏期明显延长（P<0.01）,在平台象限停留时间明显缩短（P<0.01）;大鼠海马组织中肌肽和GSH水平降低（P<0.01）,GFAP阳性细胞数增加,p-NF-κB p65蛋白表达水平升高（P<0.01）,IL-1β和TNF-α水平升高（P<0.01）。与模型组比较,不同剂量肌肽组大鼠海马CA1区锥体细胞排列整齐,逃避潜伏期明显缩短（P<0.01）,平台象限停留时间明显增加（P<0.01）;大鼠海马组织中肌肽和GSH水平升高（P<0.05或P<0.01）,GFAP阳性细胞数减少,p-NF-κB p65蛋白表达水平降低（P<0.01）,IL-1β和TNF-α水平降低（P<0.01）。结论：肌肽对大鼠VCI具有保护作用,其作用机制可能与提高大鼠抗氧化能力、抑制NF-κB途径激活、进而抑制星形胶质细胞的异常激活并减少炎症有关。     

七氟醚对HT22小鼠海马神经元细胞DNA的损伤及其机制

目的：观察吸入麻醉药七氟醚对HT22小鼠海马神经元细胞DNA的损伤,阐明七氟醚诱导脑神经毒性的可能机制。方法：HT22小鼠海马神经元细胞随机分为空白对照组、2%七氟醚组（2%Sevo 6 h组、2%Sevo 12 h组和2%Sevo 24 h组）、4%七氟醚组（4%Sevo 6 h组、4%Sevo 12 h组和4%Sevo 24 h组）和8%七氟醚组（8%Sevo 6 h组、8%Sevo 12 h组和8%Sevo 24 h组）,应用四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法和乳酸脱氢酶（LDH）法分别检测各组HT22小鼠海马神经元细胞存活率和死亡率。根据实验结果将细胞分为生理盐水组、生理盐水+4%Sevo 12 h组、生理盐水+8%Sevo 12 h组、N-乙酰半胱氨酸组（NAC组）、NAC+4%Sevo 12 h组和NAC+8%Sevo 12 h组。采用MTT法和LDH法分别检测NAC预处理后各组HT22小鼠海马神经元细胞存活率和死亡率;应用单细胞凝胶电泳检测各组HT22小鼠海马神经元细胞DNA双链断裂情况;Western blotting法检测各组HT22小鼠海马神经元细胞中DNA损伤相关蛋白8-OHdG、ATM、p-ATM和γ-H2AX表达量;DCFH-DA法检测各组HT22小鼠海马神经元细胞中活性氧（ROS）水平。结果：与空白对照组比较,2%Sevo组HT22小鼠海马神经元细胞存活率和死亡率差异无统计学意义（P>0.05）;4%Sevo组和8%Sevo组HT22小鼠海马神经元细胞存活率降低（P<0.01）,死亡率升高（P<0.01）。与4%Sevo组比较,同一时间8%Sevo组HT22小鼠海马神经元细胞存活率降低（P<0.05）,死亡率升高（P<0.05）。与4%Sevo 6 h组比较,4%Sevo 12 h组和4%Sevo 24 h组HT22小鼠海马神经元细胞存活率降低（P<0.05）,死亡率升高（P<0.05）;与4%Sevo 12 h组比较,4%Sevo 24 h组HT22小鼠海马神经元细胞存活率降低（P<0.05）,死亡率升高（P<0.05）。与8%Sevo 6 h组比较,8%Sevo 12 h组和8%Sevo 24 h组HT22小鼠海马神经元细胞存活率降低（P<0.05）,死亡率升高（P<0.05）;与8%Sevo 12 h组比较,8%Sevo 24 h组HT22小鼠海马神经元细胞存活率降低（P<0.05）,死亡率升高（P<0.05）。与生理盐水组比较,生理盐水+4%Sevo 12 h组和生理盐水+8%Sevo 12 h组HT22小鼠海马神经元细胞内DNA双链断裂增多,DNA损伤相关蛋白8-OHdG、ATM、p-ATM和γ-H2AX表达量增加、ROS水平升高（P<0.05）。与生理盐水+4%Sevo 12 h组比较,NAC+4%Sevo 12 h组HT22小鼠海马神经元细胞存活率升高（P<0.01）,死亡率降低（P<0.01）,细胞中DNA双链断裂减少,DNA损伤相关蛋白8-OHdG、ATM、p-ATM和γ-H2AX表达量减少,海马神经元细胞中ROS水平明显降低（P<0.05）;与生理盐水+8%Sevo 12 h组比较,NAC+8%Sevo 12 h组HT22小鼠海马神经元细胞存活率升高（P<0.01）,死亡率降低（P<0.01）,细胞中DNA双链断裂减少,DNA损伤相关蛋白8-OHdG、ATM、p-ATM和γ-H2AX表达量减少,海马神经元细胞中ROS水平明显降低（P<0.05）。结论：七氟醚能够通过诱导DNA损伤导致HT22小鼠海马神经元细胞死亡,其机制可能与诱导海马神经元细胞中ROS积聚有关。     

磷酸化胞外信号调节激酶在小鼠海马发育过程中的表达及其意义

目的：观察磷酸化胞外信号调节激酶（pERK）在胚龄（E）18 d以及生后不同日龄（P）小鼠海马不同阶段的表达,探讨其在海马发育中的可能作用。方法：分别取E18 d和P 1、3、7、14、21和28 d小鼠的海马组织,每个时间点均作为观察组,采用免疫组织化学和免疫印迹法、结合图像分析技术检测各时间点海马组织中pERK蛋白表达水平。结果：免疫组织化学检测,pERK蛋白主要在海马齿状回（DG）颗粒细胞层和阿蒙角（CA）锥体细胞层神经元的细胞核中表达。E 18 d,海马DG和CA区pERK表达染色浅,排列稀疏,表达水平很低;E 18 d~P 7 d,pERK染色逐渐加深、密集,pERK表达水平逐渐升高,与其他6个时间点比较,P 7 d时pERK表达水平最高（F=34.537,P<0.01）。P 14~21 d,pERK染色逐渐变浅,密集程度逐渐降低,pERK表达水平逐渐下降（F=28.754,P<0.01）;P 28 d时pERK表达水平处于稳定的较低水平（F=6.075,P>0.05）。免疫印迹检测,各时间点均有pERK表达,E 18 d~P 7 d,pERK表达水平逐渐升高,与其他6个时间点比较,P 7 d时pERK表达水平最高（F=33.856,P<0.01）;P 14~21 d时pERK表达水平逐渐降低（F=22.627,P<0.01）;P 28 d时pERK表达处于稳定的较低水平（F=7.421,P>0.05）。结论：小鼠生后早期阶段,即E 18 d~P 7 d,海马发育明显增速,pERK表达水平也随之逐渐升高,P 7 d达高峰,随后逐渐下降直至稳定,pERK参与小鼠海马发育过程中的细胞增殖。     

姜黄素对睡眠剥夺小鼠认知功能的改善作用及其机制

目的：研究姜黄素对睡眠剥夺小鼠认知功能和海马组织中Toll样受体4/核转录因子κB （TLR4/NF-κB）通路的影响,探讨姜黄素治疗睡眠剥夺的机制。方法：将100只小鼠随机分为对照组,模型组,低、中和高剂量姜黄素组,每组20只。除对照组外,其他各组小鼠采用改良多平台水环境睡眠剥夺法建立睡眠剥夺模型;建模后,低、中和高剂量姜黄素组小鼠分别腹腔注射5、10及20 mg·kg^-1姜黄素,每天1次,共3 d。Morris水迷宫实验测定各组小鼠学习记忆能力,旷场实验测定小鼠垂直得分和水平得分,ELISA法检测各组小鼠海马组织中白细胞介素1β（IL-1β）和白细胞介素6（IL-6）水平,Western blotting法检测各组小鼠海马组织中TLR4和NF-κB p65蛋白表达水平,RT-PCR法检测各组小鼠海马组织中IL-1β、IL-6、TLR4和NF-κB mRNA表达水平。结果：与模型组比较,各剂量姜黄素组小鼠逃避潜伏期缩短（P<0.05）,停留原平台象限时间延长（P<0.05）,穿越原平台次数增加（P<0.05）,旷场实验垂直得分和水平得分降低（P<0.05）,小鼠海马组织中IL-1β、IL-6、TLR4和NF-κB P65蛋白表达水平均降低（P<0.05）,小鼠海马组织中IL-1β、IL-6、TLR4和NF-κB mRNA表达水平降低（P<0.05）,且呈剂量依赖性。结论：姜黄素可能通过抑制TLR4/NF-κB通路改善睡眠剥夺小鼠的认知功能。     

大黄素对大鼠局灶性脑缺血的保护作用及其机制

目的：探讨大黄素对大鼠局灶性脑缺血的保护作用,阐明其作用机制。方法：将60只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组（给予生理盐水）,模型组（给予生理盐水,建模）,阳性对照组（给予5mg·kg^-1地塞米松,建模）,低、中和高剂量大黄素组（给予10、20和40 mg·kg^-1大黄素,建模）（n=10）。采用大脑中动脉阻断法（MCAO）建立局灶性脑缺血大鼠模型。检测各组大鼠行为学评分,采用TTC染色法检测各组大鼠脑梗死体积百分比,ELISA法检测各组大鼠缺血侧海马组织中肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）和白细胞介素6（IL-6）水平,Western blotting法检测各组大鼠缺血侧海马组织中核转录因子κB （NF-κB） p65和核转录因子κB抑制蛋白α（IκBα）蛋白表达水平。结果：假手术组大鼠未发现神经功能缺损症状和脑梗死;与假手术组比较,模型组大鼠缺血侧海马组织中IL-6、IL-1β和TNF-α水平明显升高（P<0.05）,NF-κB p65蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,IκBα蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。与模型组比较,阳性对照组,中和高剂量大黄素组大鼠行为学评分降低（P<0.05）,脑梗死体积百分比明显减小（P<0.05）,缺血侧海马组织中IL-6、IL-1β和TNF-α水平明显降低（P<0.05）,NF-κB p65蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,IκBα蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。与低剂量大黄素组比较,中和高剂量大黄素组大鼠行为学评分降低（P<0.05）、脑梗死体积百分比明显减小（P<0.05）,缺血侧海马组织中IL-6、IL-1β和TNF-α水平明显降低（P<0.05）,NF-κB p65蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,IκBα蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：大黄素对大鼠局灶性脑缺血损伤有一定的保护作用,其机制可能与抑制NF-κB信号通路和降低炎症因子分泌有关。     

β-tubulin Ⅲ在结肠腺癌组织中的表达及其临床意义

目的：检测结肠腺癌患者癌组织中β-tubulin Ⅲ的表达,探讨其临床意义。方法：收集结肠腺癌组织标本111例,根据β-tubulin Ⅲ的阳性细胞分布部位分为浸润前沿组（n=72例）和非浸润前沿组（n=39例）,采用免疫组织化学法检测结肠腺癌患者癌组织中β-tubulin Ⅲ的阳性表达率,分析β-tubulin Ⅲ的表达与患者性别、年龄、肿瘤分化、临床分期、淋巴结转移、复发和死亡等临床病理特征之间的关系。结果：不同性别、淋巴结转移、临床分期、死亡和复发结肠腺癌患者间β-tubulin Ⅲ的阳性表达率比较差异无统计学意义（P>0.05）。浸润前沿组和非浸润前沿组患者癌组织中β-tubulin Ⅲ阳性表达率比较差异有统计学意义（χ²=8.76,P=0.01）。低中分化病例多见于浸润前沿组,而高分化病例多见于非浸润前沿组（χ²=6.88,P=0.03）。不同分化程度癌组织中β-tubulin Ⅲ的阳性表达率比较差异有统计学意义（χ²=5.74,P=0.04）。非前沿组中有无淋巴结转移的患者癌组织中β-tubulin Ⅲ阳性表达率比较差异有统计学意义（χ²=6.02,P=0.05）。免疫组织化学法染色,β-tubulin Ⅲ阳性表达细胞胞质呈黄色颗粒;与低分化组比较,高分化癌组织中β-tubulin Ⅲ阳性表达细胞明显增多。结论：结肠腺癌组织中β-tubulin Ⅲ表达与肿瘤的分化程度有关,高分化结肠腺癌组织多见于非浸润前沿组。非浸润前沿组患者β-tubulin Ⅲ表达与淋巴结转移有关。     

海马参与雌激素加重咬合干扰致去卵巢大鼠慢性咬肌痛敏

目的: 探究海马参与雌激素(主要为17β-雌二醇,17β-estradiol,E2)和实验性咬合干扰(experimental occlusal interference,EOI)对双侧卵巢摘除(ovariectomy,OVX)大鼠慢性咬肌痛敏影响的分子机制。方法: 将32只OVX大鼠随机分为4组(8只/组),对照组: OVX组,于OVX术后7 d开始0 μg/d E2(即用溶剂vehicle替代),不施加EOI;实验组:(1)OVX+E2组,于OVX术后7 d开始80 μg/d E2替代,不施加EOI;(2)OVX+EOI组,于OVX术后7 d开始0 μg/d E2替代,术后17 d施加EOI;(3)OVX+E2+EOI组,于OVX术后7 d开始80 μg/d E2替代,术后17 d施加EOI。于OVX术前、术后7 d(E2替代开始)、术后17 d(E2替代10 d,即EOI开始)、术后24 d(EOI 7 d)分别测试机械刺激反应阈值,建模完成后取大鼠双侧海马进行免疫荧光染色,观察海马CA3区神经元磷酸化细胞外信号调节激酶(phospho-extracellular signal regulated kinase 1/2,p-ERK1/2)表达情况,以及取大鼠双侧海马进行Western Blot定量检测p-ERK1/2表达量。结果: 与对照组[左侧:(135.3±8.5) g,右侧:(135.4±10.8) g]相比,OVX+E2组[左侧:(113.3±5.6) g,右侧:(112.5±5.6) g]和OVX+EOI组[左侧:(93.3±5.4) g,右侧:90.8±5.5) g]大鼠双侧咬肌机械刺激反应阈值显著降低(P<0.01);OVX+E2+EOI组[左侧:(81.2±6.2) g,右侧:79.8±7.7) g]阈值降低较对照组、OVX+E2组和OVX+EOI组显著(P<0.05);对照组、OVX+E2组、OVX+EOI组和OVX+E2+EOI组大鼠双侧海马CA3区p-ERK1/2阳性神经元比例依次增高,且组间差异有统计学意义(P<0.05);p-ERK1/2蛋白表达量在对照组、OVX+E2组、OVX+EOI组依次增高,组间差异无统计学意义(P > 0.05),OVX+E2+EOI组p-ERK1/2表达量显著高于其他3组(P<0.05)。结论: 高浓度E2可加重EOI导致的OVX大鼠慢性咬肌痛敏,其中枢机制可能与海马内ERK1/2信号通路有关。     

远志汤对慢性脑低灌注大鼠认知功能及海马凋亡蛋白的影响

目的 观察远志汤对慢性脑低灌注大鼠空间学习记忆能力及海马凋亡蛋白的影响。方法 采用永久结扎大鼠双侧颈总动脉法造模。将42只SD大鼠采用数字表法随机分为正常对照组,模型组,假手术组,远志汤高、中、低剂量组[20、10、5 g/（kg·d）]及阳性药物对照组[盐酸多奈哌齐0.52 mg/（kg·d）],每组各6只,分别灌胃给药,1次/d,给药4周。通过Morris水迷宫定位航行实验及空间探索实验,观察远志汤对慢性脑低灌注大鼠空间学习记忆能力的影响;通过免疫荧光染色法检测远志汤对慢性脑低灌注大鼠海马凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白抗体（Bcl-2 associated X protein,Bax）及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3（cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3）表达的影响。结果 模型组大鼠较对照组和假手术组的逃避潜伏期和搜索距离明显延长（P<0.01）,在原平台所在象限的搜索时间明显缩短（P<0.01）。而远志汤各剂量干预均可明显缩短大鼠的逃避潜伏期和搜索距离（P<0.01）,并延长在原平台所在象限的搜索时间（P<0.01）。模型组大鼠海马Bax和Caspase-3的表达较对照组和假手术组增加,差异有统计学意义（P<0.05）,Bcl-2则显著下降,差异有统计学意义（P<0.01）。而远志汤高、中剂量组干预均可明显减少Bax和Caspase-3的表达（P<0.05）,增加Bcl-2的表达（P<0.05）。结论 远志汤可能通过调节海马凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达以改善慢性脑低灌注大鼠的认知功能。     

人参皂苷Rg1对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑皮层内泛素修饰蛋白聚集的影响

目的：探讨人参皂苷Rg1在大鼠脑缺血再灌注（I/R）损伤后皮层内泛素修饰蛋白聚集过程中的作用,进一步阐明人参皂苷Rg1对脑I/R损伤的治疗机制。方法：将大鼠采用线栓法栓塞1.5 h制作大脑中动脉缺血（MCAO）模型。72只健康雄性SD大鼠分为假手术组,I/R模型组,阳性药物对照（尼莫地平）组,低、中和高剂量（10、20和40 mg·kg^-1）人参皂苷Rg1组,每组12只大鼠,均采用腹腔注射给药。在建模24h后采用TTC染色法和Longa法测量各组大鼠脑梗死面积和神经功能缺损评分,HE染色观察各组大鼠脑缺血后皮层和海马内的神经元死亡情况,免疫组织化学和Western blotting法检测各组大鼠皮层内泛素修饰蛋白聚集物的表达情况。结果：与I/R模型组比较,尼莫地平和剂量人参皂苷Rg1组大鼠脑梗死面积百分比明显减小（P<0.05）,神经功能缺损评分明显降低（P<0.05）。HE染色,与假手术组比较,I/R模型组大鼠神经元稀疏,出现碎裂、溶解现象;与I/R模型组比较,尼莫地平组和各剂量人参皂苷Rg1大鼠神经元核碎裂、溶解、粉染等现象均有不同程度改善。免疫组织化学检测,与假手术组比较,I/R模型组大鼠泛素修饰蛋白表达水平明显增多（P<0.05）;与I/R模型组比较,尼莫地平和各剂量人参皂苷Rg1组大鼠泛素修饰蛋白阳性表达水平均明显降低（P<0.05）,以高剂量人参皂苷Rg1组效果最明显。Western blotting法检测,与假手术组比较,I/R模型组大鼠泛素修饰蛋白聚集物水平明显升高（P<0.05）;与I/R模型组比较,尼莫地平和各剂量人参皂苷Rg1组大鼠泛素修饰蛋白聚集物水平明显降低（P<0.05）,且以高剂量人参皂苷Rg1组效果最为明显。结论：人参皂苷Rg1可抑制大鼠脑皮层内I/R损伤所诱导的泛素修饰蛋白聚集物形成,进而减轻大鼠脑I/R损伤。