脑缺血后处理对大鼠大脑海马区Notch1、Cyclin D1和CDK4蛋白表达的影响

目的：探讨基于Notch1信号通路观察缺血后处理（CIP）对全脑缺血再灌注（I/R）大鼠海马区神经元中Cyclin D1和CDK4蛋白表达的影响,阐明其机制。方法：128只健康的雄性SD大鼠随机分为假手术组、I/R组（改良的Pulsinelli四血管阻断法制作）、CIP组（在彻底再灌注之前进行反复3次的再通/阻断血管）和DAPT组（实施CIP之前3 h按10mg·kg^-1·d^-1腹腔注射DAPT）,每组32只。分别在缺血后6、24、48和72 h采用HE染色观察各组大鼠海马区神经元表现并计算存活率,免疫组织化学染色观察CyclinD1、CDK4和Notch1表达的细胞,Western blotting法观察各时间点大鼠海马区中Cyclin D1、CDK4和Notch1蛋白的表达水平。结果：HE染色,与假手术组比较,I/R组大鼠海马区神经元结构损伤,各时间点海马区神经元存活率明显降低（P<0.05）;与I/R组比较,CIP组相应时间点大鼠海马区神经元存活率明显升高（P<0.05）;与CIP组比较,DAPT组相应时间点大鼠海马区神经元存活率明显降低（P<0.05）。免疫组织化学染色,与假手术组比较,I/R组大鼠海马区Notch1、Cyclin D1和CDK4阳性细胞数增加（P<0.05）;与I/R组比较,CIP组大鼠海马区Cyclin D1和CDK4阳性细胞数增加（P<0.05）,Notch1阳性细胞数明显增加（P<0.05）;与CIP组比较,DAPT组大鼠海马区Cyclin D1和CDK4阳性细胞数增加（P<0.05）,Notch1阳性细胞数明显减少（P<0.05）。Western blotting法,与假手术组比较,I/R组大鼠海马区Notch1、Cyclin D1和CDK4蛋白表达水平升高（P<0.05）;与I/R组比较,CIP组大鼠海马区Cyclin D1和CDK4蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,Notch1蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;与CIP组比较,DAPT组的Cyclin D1和CDK4蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,Notch1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论：CIP对神经元的保护作用可能是通过提高Notch1蛋白活性和抑制Cyclin D1和CDK4蛋白实现的。     

HT22细胞系铁死亡敏感性研究

目的 检测HT22细胞系可否作为研究神经元铁死亡的良好细胞模型,在细胞水平上为研究神经元铁死亡的机制提供基础。方法 用经典铁死亡诱导剂Erastin和RSL3处理HT22细胞系,显微镜下观察细胞存活情况;使用CCK-8法检测细胞存活率;使用丙二醛法或菲罗嗪法分别检测细胞内脂质活性氧（reactive oxygen species,ROS）、Fe²⁺浓度;实时定量聚合酶链反应（quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR）法检测细胞铁死亡关键基因SLC7A11（solute carrier family 7 member 11）、PTGS2（prostaglandin-endoperoxide synthase 2）的mRNA水平。结果 Erastin或RSL3处理HT22后,显微镜下发现细胞发生明显死亡,加入铁死亡抑制剂Ferrostatin-1后,细胞死亡显著减少。Erastin或RSL3诱导后HT22细胞内的Fe²⁺浓度无明显变化（P>0.05）,脂质过氧化水平明显增加（P<0.05）;Erastin或RSL3导致细胞SLC7A11、PTGS2的mRNA表达水平增加（P<0.05）,进一步验证了处理后细胞发生铁死亡。结论 HT22细胞系是一种铁死亡敏感细胞系,Erastin或RSL3诱导HT22铁死亡,HT22细胞系可用于研究神经元中铁死亡的发生及胞内脂质过氧化物蓄积机制。     

小檗碱通过激活 Nrf2-HO-1/GPX4 通路抑制小鼠海马神经元HT22细胞的铁死亡

目的 探讨小檗碱对于Erastin诱导小鼠海马神经元HT22细胞的铁死亡的保护作用及其可能机制。方法 以HT22小鼠海马神经元细胞为研究对象,分为对照组、Erastin模型组、Erastin+30 μmol/L BBR组、Erastin+60 μmol/L BBR组。采用CCK-8法、特异性 Fe2+ 荧光探针、荧光染料（DAPI）检测和荧光探针（H2DCFH-DA）检测各实验组细胞的增殖情况、活性铁水平、细胞凋亡和活性氧（ROS）变化。 RT-qPCR和Western blot分别检测各实验组细胞的Nrf2、HO-1、GPX4 mRNA和蛋白表达情况。以60 μmol BBR的最适浓度来进一步探究其作用机制,分为对照组、Erastin模型组、Erastin+60 μmol/L BBR组、Erastin+60 μmol/LBBR+2 μmol Nrf2抑制剂 ML385组。通过使用荧光探针和Western blot检测Nrf2抑制剂（ML385）作用后的活性铁的水平、活性氧含量以及Nrf2、HO-1、GPX4蛋白的表达来验证小檗碱调节的Nrf2-HO-1/GPX4通路对Erastin处理的HT22细胞的保护作用。结果 0.5 μmol/L Erastin作用于HT22细胞8 h,细胞存活率与对照组相比显著被抑制（P<0.05）;同时细胞凋亡、ROS以及活性铁含量增加（P<0.05）。与Erastin组比较,Erastin+30 μmol/L BBR组和Erastin+60 μmol/L BBR组的细胞存活率明显升高（P<0.05）,同时显著降低细胞凋亡、ROS以及活性铁含量（P<0.05）。小檗碱增加 HT22细胞中Nrf2、HO-1、GPX4基因及蛋白的 表达量（P<0.05）。加入Nrf2抑制剂ML385后,Nrf2-HO-1/GPX4通路被抑制,并且ROS以及活性铁含量升高（P<0.05）。结论 Erastin诱导HT22细胞发生铁死亡,小檗碱抑制Erastin诱导的铁死亡,可能机制是激活了Nrf2-HO-1/GPX4通路。     

丁苯酞对缺血性脑卒中大鼠海马神经元凋亡的抑制作用及其对p38 MAPK信号通路的影响

目的：探讨丁苯酞对缺血性脑卒中大鼠海马神经元凋亡和p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）信号通路的影响,阐明丁苯酞对缺血性脑卒中的作用机制。方法： 102只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和丁苯酞组,每组34只。模型组和丁苯酞组大鼠采用改良Zea-Longa法制备局灶性脑缺血大鼠模型,丁苯酞组大鼠建模后给予丁苯酞（4.5 mg·kg^-1）治疗,假手术组大鼠每天相同时间点腹腔注射等量生理盐水。采用HE染色观察大鼠海马神经元细胞形态表现,原位末端转移酶标记（TUNEL）染色观察大鼠海马神经元凋亡情况,Western blotting法测定大鼠海马组织中激活型caspase-3（cleaved caspase-3）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、p38、磷酸化p38（p-p38）和分裂原激活的蛋白激酶（MAPK）蛋白表达水平,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定大鼠海马组织中cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2、p38和MAPK mRNA表达水平。结果：假手术组大鼠海马CA1区神经元排列整齐,细胞核和细胞膜正常;模型组大鼠海马CA1区神经元排列紊乱,细胞肿胀破裂,细胞核固缩;丁苯酞组大鼠海马CA1区部分神经细胞结构恢复正常。与假手术组比较,模型组大鼠海马CA1区神经元数量明显降低（P<0.01）,神经元凋亡指数明显增加（P<0.01）;与模型组比较,丁苯酞组大鼠海马CA1区神经元数量明显增加（P<0.01）,神经元凋亡指数明显降低（P<0.01）。与假手术组比较,模型组大鼠海马组织中cleaved caspase-3、Bax、p-p38和MAPK蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,Bcl-2蛋白表达水平明显降低（P<0.01）;与模型组比较,丁苯酞组大鼠海马组织中cleaved caspase-3、Bax、p-p38和MAPK蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,Bcl-2蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。与假手术组比较,模型组大鼠海马组织中cleaved caspase-3、Bax和MAPK mRNA表达水平明显升高（P<0.01）,Bcl-2 mRNA表达水平明显降低（P<0.01）;与模型组比较,丁苯酞组大鼠海马组织中cleaved caspase-3、Bax和MAPK mRNA表达水平明显降低（P<0.01）,Bcl-2 mRNA表达水平明显升高（P<0.01）。结论：丁苯酞可通过抑制海马组织p38 MAPK信号通路抑制缺血性脑卒中大鼠海马神经元凋亡。     

MyD88抑制肽对LPS诱导BV2小胶质细胞极化状态的抑制作用及其机制

目的：观察髓样分化因子88（MyD88）抑制肽（MIP）对脂多糖（LPS）激活BV2小胶质细胞极化的影响,阐明其作用机制。方法：将对数生长期的BV2小胶质细胞分为对照组（不进行处理）、LPS组（给予1 mg·L^-1 LPS处理）和不同剂量MIP+LPS组（分别给予25、50和100μmol·L^-1 MIP预处理1 h后,再加入1 mg·L^-1 LPS）。采用MTT法检测各组细胞存活率,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组BV2小胶质细胞中白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素4（IL-4）、白细胞介素10（IL-10）和白细胞介素18（IL-18）mRNA表达水平,Western blotting法检测各组BV小胶质细胞中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和精氨酸酶1（Arg-1）蛋白表达水平。结果：LPS组BV2小胶质细胞体积变大,突起增多,呈阿米巴状;不同剂量MIP+LPS组小胶质BV2细胞活化率较LPS组明显减少（P<0.05或P<0.01）。MTT法检测,与对照组比较,LPS组细胞存活率明显降低（P<0.01）;与LPS组比较,不同剂量MIP+LPS组BV2小胶质细胞存活率明显提高（P<0.05或P<0.01）。RT-qPCR法和Western blotting法检测,与LPS组比较,不同剂量MIP+LPS组BV2小胶质细胞中IL-1β和IL-18 mRNA表达水平及iNOS蛋白表达水平均明显降低（P<0.05或P<0.01）,而IL-4和IL-10 mRNA表达水平及Arg-1蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,且呈剂量依赖性。结论：MIP能够抑制活化的BV2小胶质细胞向M1型极化,促进其向M2型转化,抑制炎症的过度激活。     

miRNA-21对乳腺癌细胞放射敏感性的影响及其机制

目的：观察miRNA-21对乳腺癌细胞放射敏感性的影响,并初步探讨其作用机制。方法：乳腺癌T47D和MDA-MB-361细胞分别给予0.0、2.5和5.0 Gy γ射线照射,CCK8法检测细胞存活率,流式细胞术分析细胞周期进程,实时定量PCR法检测72 h内细胞中miRNA-21表达水平。T47D和MDA-MB-361细胞分别转染anti-miRNA-21序列（anti-miRNA-21组）和阴性对照序列（阴性对照组）,并设置未转染细胞为空白对照组,实时定量PCR法检测各组细胞中miRNA-21表达水平;经0.0和5.0 Gy γ射线照射后,CCK8法检测细胞存活率,流式细胞术分析细胞周期进程。结果：经5.0 Gy γ射线照射后,T47D细胞存活率明显高于MDA-MB-361细胞（P<0.05）;与0.0 Gy照射组比较,5.0 Gy照射组T47D和MDA-MB-361细胞G₂/M期细胞百分率均明显升高（P<0.05）,miRNA-21表达水平均明显升高（P<0.05）。与空白对照组比较,anti-miRNA-21组T47D和MDA-MB-361细胞中miRNA-21表达水平均明显降低（P<0.05或P<0.01）;给予5.0 Gy γ射线照射后,anti-miRNA-21组T47D和MDA-MB-361细胞存活率均明显降低（P<0.05或P<0.01）,T47D细胞G₂/M期细胞百分率明显降低（P<0.05）,而subG₁期细胞百分率明显升高（P<0.05）。结论：miRNA-21表达下调能够增强乳腺癌细胞的放射敏感性,其机制可能与抑制细胞周期G₂/M期阻滞有关。     

刺五加果水提物和醇提物对小鼠的镇静催眠作用及其机制

目的：探讨刺五加果水提物（ASF-WE）和醇提物（ASF-AE）对小鼠的镇静催眠作用,并阐明其可能作用机制,为刺五加果的开发提供依据。方法：分别制备ASF-WE和ASF-AE。120只雄性ICR小鼠随机分为空白对照组、地西泮（DZP）阳性对照组（DZP组）、不同剂量（4、8、16、32和64 mg·kg^-1） ASF-WE组和不同剂量（4、8、16、32和64 mg·kg^-1） ASF-AE组,每组10只,连续给药5 d,记录各组小鼠自主活动次数,利用阈下催眠剂量戊巴比妥钠诱导睡眠实验记录小鼠入睡率,利用催眠剂量戊巴比妥钠诱导睡眠实验记录小鼠睡眠潜伏期和睡眠时间,筛选出ASF-WE和ASF-AE的催眠剂量和亚催眠剂量。根据模型药的不同[模型药分别为5-羟色氨酸（5-HTP）、对氯苯丙氨酸（pCPA）和氟马西尼（FLU）],分别将雄性ICR小鼠40只随机分为空白对照组、模型对照组（5-HTP组和pCPA组）、ASF-WE＋模型药组和ASF-AE＋模型药组,每组10只;80只雄性ICR小鼠随机分为空白对照组、FLU组、DZP组、ASF-WE组、ASF-AE组、DZP+FLU组、ASF-WE＋FLU组和ASF-AE＋FLU组,每组10只;连续给药5 d,采用戊巴比妥钠诱导睡眠实验记录各组小鼠的睡眠潜伏期和睡眠时间,采用ELISA法检测小鼠海马组织中5-羟色胺（5-HT）和γ-氨基丁酸（GABA）水平。结果：与空白对照组比较,32和64 mg·kg^-1 ASF-WE组小鼠自主活动次数明显减少（P<0.05或P<0.01）,16、32和64 mg·kg^-1ASF-AE组小鼠自主活动次数明显减少（P<0.05或P<0.01）,16、32和64 mg·kg^-1ASF-WE组和ASF-AE组小鼠入睡潜伏期明显缩短（P<0.05或P<0.01）,睡眠时间明显延长（P<0.05或P<0.01）。与5-HTP组比较,ASF-WE＋5-HTP组和ASF-AE＋5-HTP组小鼠睡眠潜伏期明显缩短（P<0.01）,睡眠时间明显延长（P<0.01）,小鼠海马组织中5-HT水平明显升高（P<0.05）。与空白对照组比较,pCPA组小鼠睡眠潜伏期明显延长（P<0.01）,小鼠睡眠时间明显缩短（P<0.01）,表明失眠模型成功建立;与pCPA组比较,ASF-WE＋pCPA组和ASF-AE＋pCPA组小鼠睡眠潜伏期明显缩短（P<0.05）,睡眠时间明显延长（P<0.01）,小鼠海马组织中GABA水平明显升高（P<0.05或P<0.01）。与ASF-WE组比较,ASF-WE+FLU组小鼠睡眠潜伏期明显延长（P<0.05）,睡眠时间明显缩短（P<0.01）,小鼠海马组织中GABA水平明显降低（P<0.05）;与ASF-AE组比较,ASF-AE+FLU组小鼠睡眠潜伏期差异无统计学意义（P>0.05）,睡眠时间明显缩短（P<0.01）,小鼠海马组织中GABA水平明显降低（P<0.05）。结论：ASF-WE和ASF-AE均具有较好的镇静催眠作用,其作用机制可能与5-HT能和GABA能中枢神经系统有关。     

氯化钴对人卵巢癌SKOV3细胞顺铂敏感性的影响

目的：观察氯化钴（CoCl₂）作用于人卵巢癌SKOV3细胞株后对SKOV3细胞顺铂敏感性的影响,并阐述其可能机制。方法：体外培养SKOV3细胞株,随机分为对照组、CoCl₂组、顺铂（DDP）组和CoCl₂联用DDP （联合）组,CoCl₂组细胞以200 μmol·L^-1 CoCl₂作用4 h后换普通细胞培养基培养20 h,DDP组细胞以含10 mg·L^-1 DDP的细胞培养基培养24 h,联合组细胞以200 μmol·L^-1 CoCl₂作用4 h后更换含10 mg·L^-1 DDP的细胞培养基继续培养20 h。MTT法检测各组细胞存活率,免疫荧光法检测各组细胞中低氧诱导因子1α（HIF-1α）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）阳性表达强度,Rhod 2-AM荧光探针检测各组细胞线粒体钙离子（Ca²⁺）水平,免疫蛋白印迹（Western blotting）法观察凋亡相关蛋白细胞色素C （cyto C）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase3）和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（cleaved caspase3）蛋白表达水平,Muse^®凋亡试剂盒检测各组细胞凋亡率。结果：与对照组比较,CoCl₂组细胞存活率无明显变化（P>0.05）,其余2组细胞存活率明显下降（P<0.05）;且联合组高于DDP组（P<0.05）。与对照组比较,CoCl₂组和联合组细胞中HIF-1α阳性表达强度明显增强（P<0.05）;DDP组和联合组细胞中iNOS阳性表达强度明显增强（P<0.05）。与对照组比较,DDP组和联合组细胞Ca²⁺水平升高（P<0.05）;且DDP组高于联合组（P<0.05）。与对照组比较,CoCl₂组细胞中cyto C、caspase3和cleaved caspase3蛋白表达水平无明显变化（P>0.05）,DDP组细胞中cyto C、caspase3和cleaved caspase3蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;且联合组低于DDP组（P<0.05）。与对照组比较,DDP组细胞凋亡率明显升高（P<0.05）;联合组细胞凋亡率较DDP组降低（P<0.05）。结论：CoCl₂可以通过抑制DDP诱导的人卵巢癌SKOV3细胞株iNOS表达增强来减少线粒体途径凋亡的发生,降低其顺铂敏感性。     

癫痫持续状态后小鼠海马组织神经元中微管蛋白和内体-溶酶体系统表达的变化及其意义

目的：探讨癫痫持续状态（SE）后小鼠海马组织神经元中微管蛋白β-tubulin和内体-溶酶体系统表达的变化，阐明神经元迟发性死亡过程中微管和内体-溶酶体系统的变化规律。方法：40只雄性ICR小鼠分为对照组（n=7，给予生理盐水）和实验组（n=33，给予匹鲁卡品），实验组中达到SE标准的SE小鼠根据SE后时间分为SE1d、SE2d、SE3d和SE7d组（n=5）。Nissl和Fluoro-Jade B （F-JB）染色检测各组小鼠海马组织神经元损伤情况，免疫荧光法检测各组小鼠海马组织神经元中微管蛋白β-tubulin、内体蛋白Rab5和溶酶体结构蛋白LAMP1表达强度及β-tubulin、Rab5和LAMP1阳性面积百分比；双重荧光法检测各组小鼠海马组织CA1区β-tubulin与Rab5和LAMP1表达的关系。结果：与对照组比较，SE1d组小鼠海马CA1和CA3区神经元数减少（P<0.01），F-JB阳性细胞数增加（P<0.01）；SE2d、SE3d和SE7d组小鼠海马组织中Nissl阳性神经元数明显减少（P<0.01）。与对照组比较，SE2d、SE3d和SE7d组小鼠海马组织中F-JB阳性神经元数增加（P<0.01）。与对照组比较，SE2d、SE3d和SE7d组小鼠海马CA1和CA3区神经元树突中β-tubulin阳性面积百分比明显降低（P<0.05），其变化趋势与神经元损伤相似。与对照组比较，SE1d、SE 2d、SE 3d和SE 7d组小鼠海马组织神经元中Rab5和LAMP1表达强度随着时间延长呈下降趋势；Rab5阳性面积百分比明显降低（P<0.05或P<0.01）；LAMP1阳性面积百分比在SE后第1天出现一过性增多，之后逐渐减少（P<0.05或P<0.01）。双重荧光染色检测，SE后1 d是早期内体减少和溶酶体一过性增多的关键点，并与神经元微管损伤的出现时间极为一致。结论：SE引起神经元迟发性死亡的同时神经元微管骨架受损，内体-溶酶体系统的定位和功能也发生异常改变。     

L-苏糖酸镁增强恩替卡韦对HBV感染小鼠的抗病毒作用及其机制

目的：观察L-苏糖酸镁（MLT）是否可增强恩替卡韦（ETV）对乙型肝炎病毒（HBV）感染小鼠的抗病毒作用,并初步探讨其机制。方法：采用高压水动力法经尾静脉注射携带1.3拷贝HBV基因组（ayw亚型）的重组8型腺相关病毒建立HBV持续感染的C57BL/6小鼠模型。成模后分为模型组、MLT组（1.2 g·kg^-1 L-苏糖酸镁胶囊）、ETV组（75 μg·kg^-1恩替卡韦片）、联合处理组（1.2 g·kg^-1 L-苏糖酸镁胶囊+75 μg·kg^-1恩替卡韦片）,每组8只;另选取8只未经病毒感染的正常小鼠作为对照组,连续给药4周。采用ELISA法检测小鼠血清HBsAg和HBeAg水平;采用荧光定量PCR法检测小鼠肝脏组织及血清中HBV DNA拷贝数;分离小鼠外周血CD8+T细胞,检测小鼠血清及CD8+T细胞中Mg²⁺含量,并采用流式细胞仪检测小鼠外周血CD8+T细胞中表面分子程序性死亡受体1（PD-1）、自然杀伤细胞活化受体（NKG2D）、CD95和CD38表达水平。结果：与对照组比较,模型组小鼠血清和CD8+T细胞中Mg²⁺含量及CD8+T细胞中表面活化性分子NKG2D和CD38表达水平明显降低（P<0.05）,而抑制性分子PD-1和CD95表达水平明显升高（P<0.05）;与模型组比较,各给药组小鼠血清HBsAg、HBeAg水平及肝脏组织和血清中HBV DNA拷贝数均明显降低（P<0.05）,且联合处理组小鼠各指标改善效果最好;与模型组比较,MLT组和联合处理组小鼠血清及CD8+T细胞中Mg²⁺含量及CD8+T细胞表面活化性分子NKG2D和CD38表达水平明显升高（P<0.05）,而抑制性分子PD-1和CD95表达水平明显降低（P<0.05）,但ETV组小鼠各指标差异无统计学意义（P>0.05）。结论：MLT可增强ETV对HBV感染小鼠的抗病毒作用,其机制可能是MLT可引起CD8+T细胞内Mg²⁺含量增加,提高CD8+T细胞活性,进而更加有效地清除HBV。     

七氟烷后处理对氧自由基介导减轻兔脊髓缺血再灌注损伤的作用

目的 观察七氟烷后处理足否可以减轻兔脊髓缺血再灌注损伤以及氧自由基在其中的作用.方法 (1)雄性新西兰大白兔48只,随机分为6组(n=8):假手术组,仅行单纯手术操作但不阻闭腹主动脉;对照组,行单纯缺血再灌注,即阻闭腹主动脉20 min后进行再灌注;纯氧后处理组,在再灌注前5 min给予100%O2,持续13 min.七氟烷后处理组(Sevo0.5组/Sevo1.0组/Sevo1.5组),分别冉灌注前5 min给予0.5、1.0及1.5 MAC(肺泡气最低有效浓度)七氟烷处理,持续10 min,然后100%O2洗脱3 min.(2)雄性新西兰大白兔36只,随机分为4组(n=9).纯氧组及七氟烷组,分别接受纯氧和1.0MAC七氟烷后处理并于后处理前1h静脉注射生理盐水5 ml/kg,DMTU+七氟烷及DMTU+纯氧组,分别接受纯氧和1.OMAC七氟烷后处理并于后处理前1 h静脉注射10%二甲基硫脲(DMTU)5 ml/kg.再灌注48 h对所有动物的后肢运动功能进行评分并取脊髓行HE染色对行脊髓前角正常神经元计数.结果 (1)再灌注48 h,七氟烷后处理组后肢运动功能评分和脊髓前角正常神经元计数均显著高于对照组(P＜0.05),脊髓前角正常神经元计数Sevo1.0组明显多于Sevo0.5组和Sevo1.5组(P＜0.05).(2)再灌注48 h,七氟烷组、DMTU+七氟烷及DMTU+纯氧组的后肢运动功能评分和脊髓前角正常神经元计数均明显高于纯氧组(P＜0.05);脊髓前角正常神经元计数七氟烷组明显高于DMTU+七氟烷及DMTU+纯氧组(P＜0.05).结论 七氟烷后处理通过氧自由基介导减轻兔脊髓缺血再灌注损伤.     

Sestrin2通过Nrf2/xCT途径减轻七氟醚诱导的HT22细胞铁死亡研究

  目的  探讨Sestrin 2(SESN2)在七氟醚(SEV)诱导神经元损伤的作用及其分子调控机制。  方法  将HT22小鼠海马神经元细胞用0%、1%、2%、4%七氟醚混合气体和/或铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(FER-1)处理6 h。将SESN2过表达载体(SESN2-OE)和相应的对照(NC)转染至HT22细胞中。检测细胞活力及铁离子、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)和总谷胱甘肽(GSH)水平。实时定量PCR(qPCR)和Western blotting测定mRNA和蛋白水平。  结果  SEV明显抑制SESN2 mRNA和蛋白的表达(t值分别为22.904、37.432,均P < 0.05),转染SESN2-OE后SESN2 mRNA和蛋白表达明显增加(t值分别为12.703、11.687,均P < 0.01)。SEV处理使HT22细胞中铁离子、ROS和MDA的水平明显增加(t值分别为29.031、18.819、28.054, 均P < 0.05),而GSH、Nrf2和胱氨酸/谷氨酸逆向转运体(xCT)的水平明显降低(t值分别为14.617、34.513、13.836,均P < 0.05)。转染SESN2-OE使SEV处理的HT22细胞中铁离子、ROS和MDA的水平明显降低(t值分别为8.342、9.373、7.381,均P < 0.05),而GSH、核因子E2相关因子(Nrf2)和xCT的水平明显增加(t值分别为12.718、10.102、9.814,均P < 0.05)。  结论  Sestrin 2通过激活Nrf2/xCT途径抑制七氟醚诱导的HT22神经元铁死亡。      

RG108对HT22细胞系增殖和基因表达的影响

目的 探讨DNA甲基转移酶抑制剂RG108对体外培养的小鼠海马神经元细胞系HT22细胞的影响。方法 DNA甲基转移酶抑制剂RG108浓度设置为0.5、5、50 μmol/L,对体外培养的HT22海马神经元细胞进行干预,CCK-8检测细胞活力;利用RT-qPCR检测细胞中下游基因的表达情况。结果 CCK-8实验表明,50 μmol/L RG108处理HT22细胞48、72 h后可以促进细胞增殖,差异有统计学意义(P<0.05)。RT-qPCR结果证明,50 μmol/L RG108处理HT22细胞后突触可塑性相关基因nr1、reln表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DNA甲基转移酶抑制剂RG108能促进小鼠海马神经元细胞系HT22细胞增殖并调控神经可塑性相关基因表达。且RG108可能会影响突触可塑性,对突触可塑性相关行为(如记忆)的形成造成影响。     

黄芩苷对脂多糖诱导的大鼠滑膜RSC-364细胞自噬的抑制作用

目的：探讨黄芩苷通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素（PI3k/Akt/mTOR）信号通路对脂多糖（LPS）诱导的大鼠滑膜RSC-364细胞自噬的影响,并阐明其作用机制。方法：将对数生长期大鼠滑膜RSC-364细胞分为对照组、模型组、地塞米松（DXMS）组、10 μmol·L^-1黄芩苷组、20 μmol·L^-1黄芩苷组和40 μmol·L^-1黄芩苷组。对照组RSC-364细胞只加入培养基,其他各组RSC-364细胞均采用1 mg·L^-1LPS体外刺激12 h制作炎症细胞模型。采用MTT法检测各组RSC-364细胞存活率,RT-PCR法检测各组RSC-364细胞中PI3k、Akt、mTOR、Beclin1和微管相关蛋白-轻链3-Ⅱ（LC3-Ⅱ） mRNA表达水平,Western blotting法检测各组RSC-364细胞中Beclin1、Atg5、Atg7、Atg12、LC3-Ⅱ和P62蛋白表达水平。结果：与对照组比较,模型组RSC-364细胞存活率明显升高（P<0.01）,模型组RSC-364细胞中PI3k、Akt、mTOR mRNA和P62蛋白表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,Atg5、Atg7、Atg12、LC3-Ⅱ、Beclin1 mRNA及蛋白表达水平明显升高（P<0.01）;与模型组比较,不同浓度黄芩苷组RSC-364细胞存活率明显降低（P<0.05或P<0.01）,RSC-364细胞中PI3k、Akt、mTOR mRNA和P62蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,Atg5、Atg7、Atg12、LC3-Ⅱ、Beclin1 mRNA和蛋白表达水平降低（P<0.05或P<0.01）。结论：黄芩苷可能通过激活PI3k/Akt/mTOR信号通路抑制LPS诱导的RSC-364细胞自噬。     

软坚消瘿颗粒对肝郁脾虚型桥本甲状腺炎模型大鼠Treg和 Th17细胞因子表达的影响

目的：观察软坚消瘿颗粒对肝郁脾虚型桥本甲状腺炎（HT）大鼠Treg和Th17特异性转录因子及细胞因子表达的影响,探讨软坚消瘿颗粒对HT的治疗作用及其免疫学作用机制。方法：采用随机数字法将48只SD大鼠分为正常组（12只）和造模组（36只）。采用高碘饮水联合甲状腺球蛋白皮下注射方法建立HT大鼠模型,再结合慢性束缚应激、过度疲劳、饮食失节等复合方法制备肝郁脾虚模型。造模后,造模组大鼠随机分为模型组、雷公藤组和软坚消瘿组,每组12只,连续给药8周。去除实验期间死亡大鼠和不合格标本,每组留取10只检测结果,观察各组大鼠一般情况;末次给药后采集大鼠腹主动脉血和甲状腺组织,采用ELISA法检测大鼠血清甲状腺球蛋白抗体（TGAb）、甲状腺过氧化酶抗体（TPOAb）、血清游离三碘甲腺原氨酸（FT3）、游离甲状腺素（FT4）、促甲状腺激素释放激素（TRH）和超敏促甲状腺激素（TSH）水平及血清白细胞介素10（IL-10）、IL-17和IL-23水平;HE染色法检测各组大鼠甲状腺组织病理形态表现;Western blotting法检测各组大鼠甲状腺组织中Foxp3和RORγt蛋白表达水平。结果：与正常组比较,模型组、雷公藤组和软坚消瘿组大鼠血清TGAb和TPOAb水平升高（P<0.05）;血清FT3、FT4和TRH水平降低（P<0.05）,TSH水平升高（P<0.05）;甲状腺组织中Foxp3蛋白表达水平降低（P<0.05）,RORγt蛋白表达水平升高（P<0.05）;血清IL-10水平降低（P<0.05）,IL-17和IL-23水平升高（P<0.05）。与模型组比较,雷公藤组和软坚消瘿组大鼠血清TGAb和TPOAb水平降低（P<0.05）;大鼠血清FT3、FT4和TRH水平升高（P<0.05）,TSH水平降低（P<0.05）;甲状腺组织中Foxp3蛋白表达水平升高（P<0.05）,RORγt蛋白表达水平降低（P<0.05）;血清IL-10水平升高（P<0.05）,IL-17和IL-23水平降低（P<0.05）。与雷公藤组比较,软坚消瘿组大鼠血清TGAb和TPOAb水平降低（P<0.05）;血清FT3、FT4和TRH水平升高（P<0.05）,TSH水平降低（P<0.05）;甲状腺组织中Foxp3蛋白表达水平升高,RORγt蛋白表达水平降低,但差异无统计学意义（P>0.05）;血清IL-10水平升高（P<0.05）,IL-17和IL-23水平降低（P<0.05）。正常组大鼠甲状腺滤泡形态规则,结构完整,无淋巴细胞浸润;模型组大鼠甲状腺滤泡腔扩大,滤泡结构大量破坏,滤泡腔内及周围可见大量淋巴细胞浸润;雷公藤组甲状腺滤泡腔扩大,部分滤泡结构破坏,滤泡腔内及周围有少量淋巴细胞浸润,浸润程度轻于模型组;软坚消瘿组甲状腺病理形态学改变与雷公藤组类似,滤泡腔内及周围亦有少量淋巴细胞浸润。结论：软坚消瘿颗粒可以通过调节Treg和Th17特异性转录因子Foxp3和RORγt蛋白及其相关细胞因子的表达,对肝郁脾虚型HT大鼠起治疗作用。     

杨梅黄酮对小鼠脑胶质瘤GL261细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察杨梅黄酮对小鼠脑胶质瘤GL261细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响,为杨梅黄酮应用于胶质瘤的治疗提供理论依据。方法：体外培养小鼠脑胶质瘤GL261细胞,实验分为对照组和不同浓度杨梅黄酮组,应用CCK-8法检测细胞的存活率,流式细胞术检测各组GL261细胞的细胞周期,Hoechst 33342染色及流式细胞术检测各组GL261细胞的细胞凋亡情况,应用Transwell小室检测各组GL261细胞迁移数目和进入小室下部的细胞数量,应用RT-PCR法检测杨梅黄酮处理前后GL261细胞中基质金属蛋白酶（MMPs）mRNA的表达水平。结果：CCK8法检测,与对照组比较,20 μmol·L^-1杨梅黄酮组细胞存活率明显下降（P<0.01）。细胞周期检测,与对照组比较,40 μmol·L^-1杨梅黄酮处理组GL261细胞G₁期比例升高（P<0.05）,S期比例降低（P<0.05）。Hoechst 33342染色,杨梅黄酮组GL261细胞出现凋亡小体。流式细胞术AnnexinⅤ/PI荧光双染检测,与对照组比较,杨梅黄酮组细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均增加（P<0.05）。Transwell小室迁移和侵袭实验,与对照组比较,5、10和20 μmol·L^-1杨梅黄酮组发生迁移的细胞数目明显减少（P<0.05）。Transwell小室检测,与对照组比较,杨梅黄酮组进入下室的细胞数目明显减少（P<0.05）,且随着杨梅黄酮浓度的增加,穿过Matrigel的细胞数目逐渐减少。与对照组比较,5和10 μmol·L^-1杨梅黄酮组GL261细胞中MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平均降低（P<0.05）。结论：杨梅黄酮可抑制胶质瘤细胞的增殖,诱导其凋亡,并抑制其迁移及侵袭。     

人参糖肽的结构及其对Aβ25-35处理PC12细胞的抗凋亡作用

目的：研究人参糖肽的结构,探讨其对β淀粉样蛋白_25-35（Aβ_25-35）处理PC12细胞凋亡的保护作用,为开发人参抗阿尔茨海默病（AD）药物奠定理论基础。方法：采用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）与Q ExactiveOrbitrap质谱联用分析人参糖肽结构。将鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞分为6组,加入含不同浓度（0、6.25、12.50、25.00、50.00和100.00 μmol·L^-1） Aβ_25-35的培养基,采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法测定PC12细胞的存活率。将PC12细胞分为空白对照组、模型组和给药组,模型组加入含有50.00 μmol·L^-1Aβ_25-35的培养基,给药组加入不同浓度（0.03、0.10、0.30和1.00 g·L^-1）人参糖肽和含有50.00 μmol·L^-1Aβ_25-35的培养基。采用CCK-8法测定PC12细胞的存活率,采用Annexin Ⅴ-FITC/PI法测定人参糖肽和Aβ_25-35处理后PC12细胞的凋亡率。将PC12细胞分为空白对照组、模型组和人参糖肽给药组,模型组加入含有50.00 μmol·L^-1Aβ_25-35的培养基,给药组加入不同浓度（0.10和0.30 g·L^-1）人参糖肽和含有50.00 μmol·L^-1Aβ_25-35的培养基,采用流式细胞术测定不同细胞周期PC12细胞的百分比。结果：人参糖肽结构分析得到肽链为NLSHYHSGSS、糖基为N1-HexNAc,肽链为SGSSSSSSSEDDGMGR、糖基为S6-HexNAc等20多个人参糖肽结构。当Aβ_25-35浓度为50 μmol·L^-1时,PC12细胞存活率为（55.45±2.34）%;与空白对照组比较,不同浓度Aβ_25-35处理组PC12细胞存活率明显降低（P<0.01）。与空白对照组比较,模型组PC12细胞存活率明显降低（P<0.01）;与模型组比较,给药组细胞存活率明显升高（P<0.05）。与空白对照组比较,模型组PC12细胞凋亡率升高（P<0.01）;与模型组比较,给药组细胞凋亡率降低（P<0.05）。与空白对照组比较,模型组S期PC12细胞百分比升高（P<0.05）;与模型组比较,给药组S期PC12细胞百分比降低（P<0.05）。结论：利用质谱法分析得到人参糖肽结构。人参糖肽可有效抑制Aβ_25-35处理PC12细胞的凋亡,具有神经细胞保护作用,其抗凋亡活性作用可能与抑制细胞S期阻滞有关。     

不同入路腰方肌阻滞对胃癌根治患者术后恢复的影响

目的 比较超声引导不同入路腰方肌阻滞对腹腔镜胃癌根治患者的术后镇痛效果、免疫功能及早期恢复的影响。 方法 择期行腹腔镜胃癌根治术患者120例,随机分为Q1组(QLB1)、Q2组(QLB2)、Q3组(QLB3)、C组,每组30例。四组均采用相同全麻方案复合不同入路的超声引导双侧腰方肌阻滞。记录术后0、6、12、24、48 h时刻静息和动态视觉模拟(VAS)评分,术后48 h内补救性镇痛药物使用量,围术期舒芬太尼使用总量;检测T0(术前即刻)、T1(术后24 h)、T2(术后48 h)时刻T细胞亚群水平;记录术后首次下床时间,首次排气时间,术后住院天数及术后不良反应发生率。 结果 除术后48 h外,四组其余时刻VAS评分比较,静息:Q2组P<0.05),Q3组P<0.05);动态:Q2组P<0.05)。术后48 h内补救性镇痛药物使用量比较:Q2组<其余三组(P<0.05)。围术期舒芬太尼使用总量比较:C组>其余三组(P<0.05)。四组各组内不同时刻T细胞亚群水平比较:T1P<0.05),T2P<0.05)。T1时刻各组CD3⁺、CD4⁺和CD4⁺/CD8⁺水平比较:C组P<0.05);T2时刻各组CD3⁺、CD4⁺和CD4⁺/CD8⁺水平比较:Q1组P<0.05),C组P<0.05)。术后首次下床时间和首次排气时间比较:Q2组P<0.05)。术后住院天数比较:C组>其余三组(P<0.05)。术后不良反应发生率Q2组P<0.05)。 结论 超声引导腰方肌阻滞可为腹腔镜胃癌根治患者提供满意的术后镇痛,降低手术对T细胞亚群的影响减轻机体细胞免疫抑制,加速患者术后康复,利于其转归。其中,QLB2在减轻动态疼痛和免疫抑制方面效果优于QLB1和QLB3。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对巨噬细胞中铁死亡相关因子表达水平的影响

目的 探讨牙龈卟啉单胞菌脂多糖（P.g-LPS）对巨噬细胞中铁死亡相关因子表达水平的影响,阐明铁死亡相关因子在牙周炎发病机制中的作用。 方法 培养小鼠单核/巨噬细胞系RAW264.7细胞,分为实验组和对照组,实验组加入10 mg·L^－1P.g-LPS 分别处理6 、12 和24 h,对照组不做任何处理。采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测2组RAW264.7细胞中长链酯酰辅酶A合成酶4（ACSL4）、谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）和转铁蛋白受体1（TfR1）mRNA表达水平,2',7'-二氯荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）荧光探针法检测2组RAW264.7细胞中活性氧（ROS）水平,硫代巴比妥酸（TBA）法检测2组RAW264.7细胞中丙二醛（MDA）水平,亚铁离子荧光探针（FeRhonox-1）法检测2组RAW264.7细胞中亚铁离子（Fe²⁺）水平,Western blotting法检测2组RAW264.7细胞中ACSL4、GPX4和TfR1蛋白表达水平。 结果 与对照组比较,处理6、12和24 h后,实验组RAW264.7细胞中GPX4 mRNA表达水平降低（P<0.05）,处理12和24 h后ACSL4和TfR1 mRNA表达水平升高（P<0.05）;处理12和24 h后,实验组RAW264.7细胞中ACSL4和TfR1蛋白表达水平升高（P<0.05）,GPX4蛋白表达水平降低（P<0.05）。与对照组比较,实验组RAW264.7细胞中ROS、MDA和Fe²⁺水平升高（P<0.05）,且随时间增加呈上升趋势。 结论 P.g-LPS诱导下RAW264.7细胞中铁死亡相关因子ACSL4和TfR1表达水平升高,而GPX4表达水平降低,并且呈时间依赖性,提示上述铁死亡相关因子的变化可能与牙周炎发病机制有关。