Smad3基因剔除导致小鼠发生骨质疏松

目的和方法为了研究Smad3基因的功能，用基因打靶的方法建立了Smad3基因剔除小鼠。通过分析小鼠的表型，发现Smad3基因剔除小鼠主要表现为骨关节炎和粘膜免疫缺陷，我们进一步分析了小鼠骨骼方面的表型。取出生后4d和4周的Smad3基因剔除和野生型小鼠的膝关节，脱钙，石蜡包埋，切片，进行H＆E染色观察它们的微观结构。发现在4d时，基因剔除小鼠和野生型小鼠相比，胫骨短小。在4周时可以观察到基因剔除小鼠骨小梁稀疏，骨小梁体积变小。另外，还发现在Smad3基因剔除小鼠胫骨的皮质骨宽度明显小于野生型小鼠。通过X射线和测量6周龄小鼠股骨的骨密度和骨矿含量。结果结果显示Smad3基因剔除小鼠的骨密度和骨矿含量均低于野生型小鼠。这些结果表明Smad3基因剔除导致小鼠发生骨质疏松。利用原位杂交检测成骨细胞的标志分子-骨钙素、碱性磷酸酶和骨桥素基因表达降低，提示成骨细胞减少。用RT-PCR检测到核结合因子2、骨涎蛋白、骨钙素、Ⅰ型胶原在基因剔除小鼠表达降低，而胸腺中的IFN-γ表达降低。用TRAP染色来检测出生后8d的Smad3基因剔除小鼠骨切片中破骨细胞，并且用Osteometrics公司的骨计量软件分析骨切片，结果表明基因剔除小鼠的NOc／TAr（破骨细胞数目，单位骨小梁面积）、OCs／Bs（破骨细胞表面积，骨表面积）和NOc／BPm（破骨细胞数目，单位骨面积）等指标均高于野生型小鼠。为了进一步验证基因剔除小鼠的破骨细胞的分化受到影响，分离Smad3和野生型小鼠的骨髓细胞，向破骨细胞的方向进行诱导分化，TRAP染色结果表明基因剔除小鼠的骨髓细胞分化成破骨细胞数目显著多于野生型小鼠。结论Smad3基因剔除引起成骨细胞数量减少，破骨细胞数目增多，从而导致小鼠骨小梁稀疏、骨密度降低，引起骨质疏松。     

连续应用特立帕肽对正常和去势小鼠骨代谢的影响

目的探讨连续泵入特立帕肽（TPTD）对去势和正常小鼠骨代谢的影响,为研究TPTD及其相关肽破骨作用的动物模型选 择提供实验依据。方法6周龄雌性C57BL小鼠24只,分别接受去势（OVX）或者假手术（SHAM）,1周后用微量泵泵入TPTD或 者等量的溶剂（VEH）,分成SHAM-VEH,SHAM-TPTD,OVX-VEH,OVX-TPTD四组。2周后,获取胫骨组织经显微CT测量胫 骨和皮质骨相关参数。并对胫骨组织行进行组织切片HE染色和TRAP染色,统计破骨细胞数目及生长板厚度。测量小鼠血清 中的钙离子浓度。取部分颅骨原代成骨细胞加雌二醇（E2）和TPTD刺激培养48 h后提取细胞总蛋白,分析β-catenin和RANKL 蛋白的表达。结果OVX小鼠的骨小梁骨量较SHAM小鼠的骨量显著减少（P<0.05）。TPTD泵入显著减低SHAM小鼠松质骨 骨量股骨中段皮质骨面积,与此相反,TPTD泵入增加OVX小鼠松质骨骨量,不改变皮质骨面积。TRAP染色结果发现,OVX较 SHAM小鼠胫骨骨松质破骨细胞明显增多,SHAM-TPTD较SHAM小鼠增多（P<0.05）。细胞学蛋白分析结果显示,E2 和 TPTD持续刺激48 h后,β-catenin表达量较TPTD单纯刺激降低,RANKL表达相对升高。结论TPTD的连续应用促进正常小鼠 的骨吸收,但对去势小鼠不具有明显的促骨吸收作用,去势小鼠不适用于研究TPTD及相关肽的促破骨作用。     

小鼠破骨细胞骨髓诱导培养体系的建立

目的：建立一个有效的破骨细胞培养体系，为研究和防治骨溶解和骨质疏松症提供实验基础。方法：在无菌条件下取小鼠股骨、肱骨，收集骨髓细胞，分为对照组和实验组。对照组不加入细胞因子；实验组加入巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）25ng／ml和骨保护素配体（RANKL）25ng／ml，进行破骨细胞骨髓诱导培养。观察比较两组抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色阳性细胞和骨吸收陷窝，并用扫描电镜观察骨吸收陷窝形态。结果：实验组破骨细胞数量多，功能活跃，与对照组比较，差异有非常显著性意义（P〈0．01）。结论：本实验成功建立了小鼠破骨细胞骨髓诱导培养体系。     

正常及去势大鼠骨组织形态的比较研究

目的：比较正常大鼠骨组织形态与去势大鼠的差别，探讨绝经后骨质疏松的发生机制。方法：切除成年雌性大鼠双侧卵巢成实验性骨质疏松动物模型，将股骨远端骨组织经甲基丙烯酸甲酯等包埋切片后观察骨组织形态，测量各项参数。结果：去势大鼠骨组织皮质及骨小梁变薄，骨矿化率增高，矿化缘长度增加，小梁表面破骨细胞数明显增多。结论：卵巢功能下降，骨吸收－形成失衡是早期骨丢失的主要机制。     

骨形态计量学观察何首乌对高脂大鼠骨骼的影响

目的用脂肪乳剂建立高脂血症骨丢失大鼠模型,通过骨形态计量学观察何首乌对大鼠胫骨和腰椎骨丢失的防治作用。方法选取3月龄SD大鼠30只,随机分为正常对照组(NS)、高脂乳剂组(HFE)、何首乌组(PM),每组10只。给药20周后处死大鼠,分离血清测胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c),并取胫骨上段、胫骨中段和第五腰椎,进行骨组织形态计量学参数检测。结果与正常对照组比较,高脂组大鼠TC升高和HDL-c下降(P<0.01),高脂大鼠胫骨上段松质骨的骨小梁面积百分数、骨小梁数量、成骨细胞贴壁长度百分率减少(P<0.05),而每毫米破骨细胞数、破骨细胞贴壁长度百分率均增加(P<0.01),反映骨形成及骨矿化的参数变化不明显;胫骨中段的皮质骨面积百分数减少(P<0.01),骨髓腔面积百分数增加(P<0.01),骨内外膜的形成和矿化均无明显变化;腰椎骨小梁面积百分数、骨小梁宽度减少(P<0.05),而骨小梁分离度增加(P<0.05),骨形成及骨吸收参数变化不明显。与高脂模型组相比,何首乌组大鼠TC水平下降和HDL-c升高(P<0.05),何首乌组的骨小梁面积百分数、骨小梁数量、成骨细胞贴壁长度百分率均增加(P<0.05),而骨小梁分离度、每毫米破骨细胞数、破骨细胞贴壁长度百分率均减少(P<0.01),反映骨形成及骨矿化的指标变化不明显;胫骨中段的皮质骨面积百分数增加(P<0.01),骨髓腔面积百分数减少(P<0.01),骨内外膜的形成和矿化均无明显变化;腰椎松质骨的骨小梁面积百分数、骨小梁宽度、骨小梁数量增加(P<0.05)、而骨小梁分离度减少(P<0.01)。结论长期高脂乳剂灌胃会导致大鼠骨量丢失,何首乌能有效对抗高脂大鼠胫骨上段、中段骨、第五腰椎的骨丢失。     

槲皮素通过抗骨相关细胞衰老作用治疗雌激素缺乏骨质疏松症的初步研究

目的 通过体内外实验探究槲皮素对骨相关细胞衰老的影响，验证槲皮素通过抗骨相关细胞衰老作用对绝经后骨质疏松症的治疗作用。方法 选取小鼠骨细胞样细胞MLO-Y4及成骨细胞样细胞MC3T3-E1，构建体外压力诱导的成熟前衰老（stress induced premature senescence, SIPS）模型，通过qRT-PCR法和细胞衰老相关β-半乳糖苷酶染色确定细胞衰老样变化，利用CCK-8法确定槲皮素体外工作浓度，验证槲皮素在骨相关细胞SIPS中的作用。建立去势小鼠骨质疏松模型，槲皮素灌胃给药，与经典雌激素疗法相比较，利用micro-CT扫描分析骨参数及骨微结构的变化，并通过qPCR检测小鼠皮质骨内衰老相关基因p21、p53，衰老相关分泌表型（senescence associated secretory phenotype, SASP）TNF-α、IL-6以及破骨相关基因TRAP、CTSK和成骨相关基因OCN、RUNX2的表达情况。结果 体外实验证明槲皮素能有效抑制骨相关细胞SIPS样改变（P<0.05）。体内实验发现，给药12周后，相较对照组小鼠，槲皮素组小鼠股骨骨表面积与骨体积比值（BS/BV）和骨小梁分离度（Tb.Sp）显著降低（P<0.05）,骨小梁数量（Tb.N）显著升高(P<0.05),骨质疏松程度减轻，较雌激素疗法差异无统计学意义，并伴骨内SIPS相关基因p21、p53及SASP水平下调（P<0.05），成骨水平不受明显抑制。结论 槲皮素可通过抑制细胞衰老挽救由雌激素缺乏导致的骨丢失；这可能成为绝经后骨质疏松症治疗的新手段。     

C-Mpl基因对骨骼代谢的影响及其机制

目的 观察C-Mpl对骨骼代谢平衡的影响,并对其机制进行初步研究.方法 以6月龄野生型(WT)小鼠和C-Mpl敲除小鼠(C-Mpl-/-)作为研究对象.采用Micro-CT扫描,进行股骨远端骨小梁参数分析,包括骨密度(BMD)、骨体积与组织体积比(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数目(Tb.N)、骨小梁分离度(Tb.Sp)和结构模型指数(SMI).通过三点弯曲试验记录股骨生物力学强度,Von Kossa及茜素红矿化染色观察骨矿化水平,微板法检测血清钙、磷水平变化.TRAP染色观察破骨细胞数量,体外流式细胞仪检测破骨细胞凋亡.流式细胞仪检测破骨细胞的ROS含量,qPCR和Western blot分析p38、p-p38、FoxO1和Nrf2表达变化.结果 Micro-CT扫描结果提示,与WT小鼠比较,C-Mpl-/-小鼠股骨干骺端松质骨明显增多,BMD、BV/TV、Tb.N显著升高,而Tb.Sp和SMI明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);Tb.Th两组差异无统计学意义.生物力学分析结果显示,C-Mpl-/-小鼠断裂负荷和刚度明显低于WT小鼠(P＜0.05).C-Mpl-/-小鼠股骨Von Kossa染色和成骨细胞茜素红染色均弱于WT小鼠,且血清中钙、磷含量亦明显低于WT小鼠(P＜0.05).TRAP染色结果显示,与WT小鼠相比较,C-Mpl-/-小鼠破骨细胞数量显著减少(8.667±1.202 vs 18.000±1.732,P ＜0.05).流式细胞仪检测发现,C-Mpl-/-小鼠破骨细胞凋亡率较WT小鼠明显增加[(14.54±1.17)％ vs (5.38 ±0.56)％,P＜0.05],且C-Mpl-/-小鼠破骨细胞的ROS水平明显低于WT小鼠破骨细胞(6 833.0±176.4 vs 12 933.0±202.8,P＜0.05).qPCR结果显示C-Mpl-/-小鼠破骨细胞中FoxO1和Nrf2表达水平较WT小鼠破骨细胞明显降低(P＜0.05),Westem blot结果也证实C-Mpl-/-小鼠破骨细胞中p-p38、FoxO1和Nrf2表达均显著下降(P＜0.05).结论 C-Mpl基因对骨骼代谢存在一定影响,C-Mpl敲除显著加速小鼠体内破骨细胞的凋亡,抑制破骨细胞生成,最终可能导致C-Mpl-/-小鼠的骨骼衰老速度和骨质疏松程度均明显减慢.     

拟黑多刺蚁活性成分对LPS诱导小鼠炎性骨丢失的作用

目的：研究拟黑多刺蚁活性成分（AFPR）对脂多糖（LPS）诱导小鼠炎性骨丢失的作用。方法：取24只雄性C57BL/6J小鼠，每组6只，随机分为假手术组、模型组（AFPR 0 g/kg）、AFPR给药组（4 g/kg、8 g/kg）；第1天和第4天分别给予腹腔注射LPS溶液（5 mg/kg），饲养7 d后建立小鼠炎性骨丢失模型；利用Micro-CT扫描及苏木精—伊红（HE）染色分析法分析胫骨骨组织形态学及相关参数变化情况，抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAcP）染色分析小鼠胫骨骨组织破骨细胞数量的变化情况，活化T细胞核因子（NFATc1）与组织蛋白酶K(CTSK)染色分析破骨细胞活性的变化情况，并进一步采用HE染色观察小鼠体内肝肾组织的变化情况；此外，体外实验通过TRAcP染色实验探究AFPR对破骨细胞分化的作用，利用碱性磷酸酶（ALP）染色和茜素红（ARD）染色探究AFPR对成骨细胞活性的影响。结果：与sham组相比，AFPR 0 g/kg组胫骨骨小梁明显受到破坏，破骨细胞数目明显增多（P<0.001），且破骨特异性因子NFATc1与CTSK的表达上调。与AFPR 0 g/kg组相比，不...     

正常及去势大鼠骨组织形态的比较研究

目的 :比较正常大鼠骨组织形态与去势大鼠的差别 ,探讨绝经后骨质疏松的发生机制。方法 :切除成年雌性大鼠双侧卵巢制成实验性骨质疏松动物模型 ,将股骨远端骨组织经甲基丙烯酸甲酯等包埋切片后观察骨组织形态、测量各项参数。结果 :去势大鼠骨组织皮质及骨小梁变薄 ,骨矿化率增高 ,矿化缘长度增加 ,小梁表面破骨细胞数明显增多。结论 :卵巢功能下降 ,骨吸收 形成失衡是早期骨丢失的主要机制。     

骨科学

９９７～１９９８年我国骨科临床和基础研究均取得了很大进展,现简述如下。一、骨病通过扫描及透射电镜对２１例老年人股骨头（１４例）及年轻人股骨颈部（７例）的观察发现老年人股骨上端有松质骨小梁的破骨细胞和骨细胞性骨吸收,以及皮质骨哈氏系统的破骨细胞性骨吸收...     

脊髓损伤对大鼠骨细胞凋亡的影响

目的：探讨脊髓损伤（SCI）对骨细胞凋亡的影响及其在SCI后骨质疏松发病中的可能机制,方法：20只3mo龄SD大鼠均分为SCI组与对照组,SCI组于T10 处完全横断脊髓,对照组仅行椎板切除术,3wk后对骨骨进行取材料,应用原位凋亡法计数股骨髁部松质骨骨细胞的凋亡指数,对股骨髁部行透射电镜观察,采用双能线骨密度仪对各组大鼠的股骨髁部骨密度（BMD）进行测定,结果：SCI组BMD较对照组明显降低（P＜0．05）,小梁骨中骨细胞凋亡比率显上升（P＜0．001）,透射电镜观察到SCI组骨细胞异梁色质凝聚,边集等典型的细胞凋亡征象,结论：骨细胞凋亡在SCI后骨质疏松发病中起着重要作用。     

新型β-链蛋白结合药物SAHPA1治疗去卵巢小鼠骨质疏松

目的 评估新型β-链蛋白(β-catenin)结合药物SAHPA1在绝经后骨质疏松小鼠模型中的治疗效果.方法 选取C57雌性小鼠作为实验对象.将实验动物分为3组,分别为假手术组、骨质疏松模型组(模型组)、骨质疏松模型治疗组(治疗组),每组5只小鼠.假手术组仅暴露卵巢后缝合切口;模型组和治疗组动物行双侧卵巢切除,建立去卵巢骨质疏松模型.治疗组在切除卵巢后即刻开始每日肌注β-catenin结合药物SAHPAl (10 mg/kg),假手术组和模型组每日注射同剂量的生理盐水.8周后,利用骨组织切片HE染色、micro-CT等方法观察小鼠股骨干骺端骨小梁形态并进行形态学计量分析,评估SAHPA1对去卵巢骨质疏松的治疗效果.结果 与假手术组比较,模型组小鼠骨密度、骨小梁数量、骨小梁厚度均降低,差异有统计学意义(P＜0.05).经SAHPA1治疗后,小鼠骨密度和骨小梁数量增高(P＜0.05),骨小梁厚度与模型组比较虽有一定提升但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 新型β-catenin结合药物SAHPA1对绝经后骨质疏松小鼠模型有一定治疗作用.     

Effects and Mechanisms of Depression on Bone Fracture Healing in Rats

Objective: To explore the effect of depression on fracture healingand forecast its agnostic mechanism. Methods: Rats (Sprague Dawley, female, 8-month-old, 242.6±11.2 g ) wererandomly divided into Control (group A), Sham Control (group B) and Depression (group C) groups. Upper 1/3 transverse tibia fracture model and intramedullaryfix were applied to Group A and C and sham operations (similar surgeries with no fracture and fix) were applied to Group B. The serum calcium (Ca), phosphorus (P) and alkaline phosphatase (ALP) were measured on day 7, 14, and 21after operation; the tibia image (DR) and pathology (HE stain) were examined onday14, 28, and 56 after operation; the Biomechanics (three-point bending test) were implemented on day 35 and 56 after operation; and the Micro-CT were performed on day 28and 56 after operation. Results: The tibia image (DR) showed no significant difference in callus volume between Groups A and C on Day 14 after operation（P>0.05,n=10）, but had significant difference on Day 28 and 56 after operation（P<0.05,n=10）.HE staining showed significantly worse recovery of the fracture zone in Group C than in Group A on Day 14, 28, and 56 after operation.The results from three point bending experiment revealed a significantly worse recovery of all bending indices (stiffness, strength, deflection, load, and movement) of Group C than the control Group A on Day 35 and 56 after operation (P<0.05,n=10). Micro-CTalsoshowed that the osteogenesis indicators such as bone volume fraction, thickness of trabecular bone, and number of trabecular bone were significantly lower in Group C than that in the control group A on Day 28 and 56 after operation (P < 0.05,n=10). The volume of interstitial bone trabecular space and area of trabecular bone of Group C was significantly greater than that of control Group A (P < 0.05,n=10).The serum P and ALP concentrations of Group C were significantly lower than those of group Bon Day 7 (P<0.05, P<0.01, n=10), 14 (P<0.05, P<0.01, n=10), and 21 (P<0.05, P<0.01, n=10) after operation, while the serum Ca concentrations did not show any significant changes (P>0.05, n=10). Conclusions: Depression may delay the primary callus and tibia fracture healing through an effect on the metabolism of phosphorus which caused a down-regulation of serum P and ALP concentrations in rats. These results provide a novel underlying mechanism and also a potential therapeutic strategy for depression caused delay of bone fracture healing.     

ApoE基因敲除鼠骨量改变及其可能机制的初步研究

目的 观察ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠骨量的变化,并探讨其骨量变化的可能机制.方法 28周龄雄性ApoE-/-鼠6只和野生型C57BL/6J(WT)鼠10只,颈脱臼法处死动物,应用显微CT测定小鼠右侧股骨远端松质骨和皮质骨的骨微结构参数,采用双能X线吸收仪测定左侧股骨骨密度.应用ELISA方法测定血清中的护骨素(OPG)和核因子kB受体活化因子配基(RANKL)的水平.分离鼠左侧胫骨,脱钙后置4%多聚甲醛固定,用免疫组织化学染色SP法检测胫骨中OPG和RANKL的表达情况.结果 28周龄ApoE-/-鼠股骨松质骨体积骨密度(294±38)mg/mm~3、组织骨密度(627±23)mg/mm~3、骨矿含量(0.57±0.08)mg、骨体积分数(20.38±4.74)%、骨小梁数量(6.67±0.78)mm~(-1)、骨小梁厚度(0.03±0.01)mm明显高于WT鼠,而骨面积分数(69±18)mm~(-1)、骨小梁间隔(0.12±0.01)和结构模型指数(1.73±0.24)明显减低.DXA测定显示ApoE-/-鼠的总体骨密度[(0.063±0.004)g/cm~2],比WT鼠[(0.056±0.004)g/cm~2,P=0.01]增加了12.6%.ELISA结果显示ApoE-/-鼠OPG水平[(4.98±0.97)ng/ml]明显高于WT鼠[(3.54±0.65)ng/ml],而RANKL水平在两组鼠中无显著变化[(575±83)pg/ml比(591±87)pg/ml,P＞0.05],差异无统计学意义.但OPG表达水平明显增高.结论 OPG/RANKL比率失衡使得骨动态平衡被打破,骨吸收功能减弱可能是造成ApoE-/-鼠骨量增加的机制之一.     

抑郁症对大鼠骨折愈合的影响的实验研究

目的：探讨抑郁症对大鼠骨折愈合的影响及预测潜在的机制。方法：实验SD 大鼠分为手术对照组（A组）和假手术对照组（B 组）和抑郁症组（C 组）。建立A 组和C 组大鼠胫骨中上1/3 骨折模型,髓内针固定,B组仅给予相同手术,不建立骨折模型。术后7 d、14 d、21 d 行血清钙、磷、碱性磷酸酶（Ca、P、ALP）检测;术后14 d、28 d、56 d 行胫骨影像（DR）、病理（HE 染色）检测;术后35 d、56 d 行生物力学（三点弯曲实验）检测;术后28 d、56 d 行显微CT（micro-CT）检测。结果：血清Ca、P、ALP 含量测定显示术后7 d、14 d、21 d C 组较A、B 组ALP、P 浓度明显下降（P<0.05,P<0.01,n=10）,Ca 浓度无明显差异（P>0.05,n=10）;DR 显示术后14 d A、C 组骨痂量无明显差异（P>0.05,n=10）,术后28 d、56 d C 组较A 组骨痂量少（P<0.05,n=10）;HE 染色结果显示术后14 d、28 d、56 d C 组较A 组骨折区恢复情况差;三点弯曲实验结果表明,术后35 d、56 d A 组在弯曲刚度、弯曲强度、弯曲挠度、弯曲载荷、弯矩及比挠度均优于C 组（P<0.05,n=10）;Micro-CT 成骨指标结果显示术后28 d、56 d C 组骨体积分数、骨小梁厚度、骨小梁数量均低于A 组（P<0.05,n=10）,C 组骨小梁间隙和骨小梁面积体积大于A 组（P<0.05,n=10）。结论：抑郁症可改变大鼠血清ALP、P 离子浓度进而延缓大鼠初始骨痂生成,影响大鼠胫骨骨折的愈合,这些结果的发现为抑郁症延迟骨折愈合提供了新的潜在机制和治疗策略。     

氯化锂激活的Wnt/β-catenin信号通路对激素型骨质疏松的防护作用

目的 研究氯化锂(LiCl)激活的Wnt/β-catenin信号通路对糖皮质激素引发的小鼠骨丢失的防护作用.方法 将C57BL6/J小鼠随机分为3组:对照组、骨质疏松模型组和LiCl组.骨质疏松模型组及LiCl组小鼠皮下注射地塞米松(50 mg/kg),对照组小鼠皮下注射同等剂量生理盐水.LiCl组小鼠在注射地塞米松同时通过饮用水给予LiCl(200mg/kg).处理5周后处死小鼠做骨组织切片,用免疫组化染色检测活性β-catenin蛋白的表达,鉴定体内Wnt/β-catenin通路激活情况;用H-E染色鉴定骨组织形态.同时取小鼠股骨进行microCT扫描,测定骨形态计量学参数.用钙黄绿素荧光标记实验鉴定新骨形成能力,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定骨吸收情况.结果 LiCl组小鼠体内活性β-catenin蛋白水平高于骨质疏松模型组,其骨量、骨小梁数量、骨小梁间隙及骨密度均得到改善(P＜0.05),但与对照组相比差异仍有统计学意义(P＜0.05).钙黄绿素荧光标记实验证实LiCl组小鼠新骨形成能力比骨质疏松模型组有所提高,但仍低于对照组.TRAP染色证实各组小鼠骨吸收活性未发生明显改变.结论 口服LiCl能有效激活体内Wnt/β-catenin信号通路,促进新骨形成,对糖皮质激素引发的骨丢失有一定的防护作用.     

骨形态发生蛋白2在小鼠模型中诱导破骨细胞活化的机制

目的探讨骨形态发生蛋白2（bone morphogenetic protein 2,BMP-2）在诱导小鼠破骨细胞活化的作用以及相关的机制。方法选取20只小鼠,按照随机数字法分为对照组和实验组,每组10只,均接受小鼠脊柱后外侧入路的横突间融合手术,实验组植入骨片和BMP-2,对照组仅植入骨片,评估术后骨骼变化情况。在小鼠胫骨内提取骨髓来源的巨噬细胞（bone marrow-derived macrophages,BMMs）,应用RANKL及M-CSF试剂诱导为破骨细胞,并在其中加入不同浓度的BMP-2,应用TRAP染色法检测破骨细胞情况,荧光定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）方法测定Smad1及p65基因,Western blotting法测定Smad1及p65蛋白表达情况。结果微型CT仪影像检查显示,实验组小鼠术后的脊柱融合情况强于对照组。2组小鼠术后1、2、4周骨小梁体积和骨小梁厚度均呈增高趋势,骨小梁间隙呈降低趋势,差异均具有统计学意义（P < 0.01）。实验组术后1、2、4周骨小梁体积高于对照组,实验组术后2、4周骨小梁间隙低于对照组（P < 0.01）。在BMP-2浓度为60、90及120 ng/mL时破骨细胞总数和总面积均高于BMP-2浓度为0、30 ng/mL时（P < 0.01）。Smad1及p65 mRNA表达在不同浓度BMP-2诱导破骨细胞比较差异均具有统计学意义（P < 0.01）,Smad1和p65 mRNA表达呈线性相关（P < 0.05）。结论BMP-2能够促进小鼠脊柱手术模型的融合,BMP-2参与了破骨细胞活化的过程,可能通过Smad1/p65信号通路介导破骨细胞活化。     

基于micro-CT的2型糖尿病大鼠骨骼特点的研究

目的 运用micro-CT及组织形态学方法研究糖尿病大鼠骨骼的特点。方法 实验对象选择8周龄雄性SD大鼠20只,分为两组:正常组10只,实验组10只。实验组通过饲喂高脂饲料同时辅以注射小剂量链脲佐菌素（STZ）（30 mg/kg）的方法建立2型糖尿病大鼠模型。通过血糖、血清胰岛素、胰腺组织切片染色评价建模效果,通过股骨micro-CT扫描及组织学方法比较实验组和正常组大鼠骨骼的特点。结果 正常组（n =10)体质量及血糖低于实验组（n =9)（P <0.05）,两组胰岛素水平基本相当（P >0.05）。胰腺组织切片染色结果显示:正常组胰岛形态规则,边缘界清,胰岛细胞排列紧密。糖尿病组大鼠胰岛形态不规则,边缘模糊不清,胰岛细胞稀疏,纤维结缔组织增多。Micro-CT扫描结果显示:实验组和正常组相比,其股骨的骨体积（单位:%,正常组:0.194 2±2.332,实验组:0.080 7±1.952）、骨小梁厚度（单位:mm,正常组:0.052 9±0.004 5,实验组:0.043 6±0.002 4）以及骨小梁数量（单位:mm-1,正常组:3.668 8±0.134 5,实验组:1.851 7±0.288 8）均减少（P <0.05）。骨小梁间隙（单位:mm,正常组:0.219 6±0.072 1,实验组:0.496 5±0.076 4）增加（P <0.05）。股骨组织形态计量学检测结果与micro-CT结果一致。结论 本实验建立的大鼠模型可以在一定程度上模拟临床2型糖尿病的骨骼特点,micro-CT下表现为骨体积、骨小梁密度以及骨小梁数量下降。     

长期使用罗格列酮对去势大鼠骨小梁的影响

目的研究长期使用罗格列酮对去势大鼠骨小梁的影响。方法20只Wistar犬鼠双侧卵巢切除,随机分成对照组、给药组,每组10只。给药组每只大鼠给予马来酸罗格列酮0．70mg以生理盐水溶解灌胃,对照组以相同体积生理盐水灌胃。每组分男4在给药4周、8周后随机抽取5只大鼠,使用micro—CT分别测定股骨、胫骨和椎骨骨小梁数目（Tb．N）、骨小梁厚度（Tb．Th）、骨小梁分离度（Tb．sp）。结果给药4周末,同对照组相比,给药组股骨、胫骨和椎骨骨小梁数目分别减少了26％（P=0．005）、30％（P=0．014）和23％（P=0．002）,骨小梁厚度分别减少了35％（P=0．018）、28％（P=0．002）和49％（P=0．000）,骨小梁分离度分剐增加了18％（P=0．018）、39％（P=0．003）和34％（P=0．002）;给药8周末,同对照组相比,给药组股骨、胫骨和椎骨骨小梁数目分别减少了21％（P=0．002）、28％（P=0．000）和22％（P=0．001）,骨小梁厚度分别减少了35％（P=0．009）、38％（P=0．027）和49％（P=0．000v）,骨小梁分离度分别增加了17％（P=0．003）、39％（P=0．000）和33％（P=0．021）。结论双侧卵巢切除大鼠给予罗格列酮后,骨小梁受损．但骨小梁受损没有随给药时间延长而进一步加重。