葡萄糖调节蛋白78在卵巢癌侵袭转移中的作用

目的探讨葡萄糖调节蛋白78（GRP78）在卵巢癌侵袭转移中的作用。方法免疫组织化学法检测60例卵巢浆液性癌和40例卵巢浆液性囊腺瘤组织中GRP78的表达情况,Western blotting法检测GRP78的表达水平,分析GRP78的表达与卵巢浆液性癌临床病理指标之间的关系。采用Transwell小室法检测HO-8910细胞和HO-8910PM细胞侵袭、迁移能力;分别使用shRNA-GRP78干扰和pcDNA-GRP78过表达GRP78检测HO-8910PM细胞和HO-8910细胞侵袭、迁移能力的变化。结果免疫组织化学结果显示,GRP78在卵巢浆液性癌组织中的阳性表达率为90%,明显高于卵巢浆液性囊腺瘤的25%（P＜0.01）。GRP78在卵巢浆液性癌组织中表达水平高于卵巢浆液性囊腺瘤组织。GRP78表达水平高的卵巢浆液性癌病人,临床病理分级、分期更高,糖类抗原125水平更高,且发生淋巴结转移、盆腔转移、盆腔外转移的病人比例更高（P＜0.01）。体外研究结果显示,GRP78在高转移潜能的HO-8910PM细胞中的表达明显高于低转移潜能的HO-8910细胞（P＜0.01）。在HO-8910细胞中过表达GRP78可明显促进细胞的侵袭、迁移能力,而在HO-8910PM细胞中干扰GRP78的表达可明显降低细胞的侵袭、迁移潜能（P＜0.01）。结论卵巢癌组织中GRP78可促进卵巢癌细胞的侵袭、迁移能力。     

熊果酸对卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭转移的影响

目的 探讨熊果酸对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭转移的影响及其可能的机制.方法 以不同浓度的熊果酸处理高转移卵巢癌细胞HO-8910PM后,采用MTT法检测其对细胞的生长抑制作用,应用Transwell小室进行人工重组基底膜侵袭和运动实验,观察熊果酸对HO-8910PM细胞侵袭和转移的影响,明胶酶谱法检测HO-8910PM细胞基质金属蛋白酶-2、-9(MMP-2、MMP-9)的活性变化,Westen blot方法检测细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达变化.结果 熊果酸处理后卵巢癌细胞生长受到抑制,且作用呈时效、量效依赖关系,熊果酸能抑制卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭和运动能力,各实验组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05);熊果酸能抑制卵巢癌细胞HO-8910PM明胶酶活性(P＜0.01),抑制卵巢癌HO-8910PM细胞MMP-2和MMP-9蛋白表达,各实验组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 熊果酸能抑制卵巢癌细胞侵袭和转移,其机制可能与抑制MMP-2和MMP-9酶活性和蛋白表达有关.     

荧光标记人卵巢癌细胞株的建立

目的 建立稳定高表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的人卵巢癌细胞株.方法 采用基因转染的方法,将EGFP基因导入人卵巢癌细胞HO8910PM中,通过G418筛选、亚克隆扩增获得稳定表达绿色荧光蛋白的EGFP-HO8910PM细胞株,并用流式细胞术检测所获细胞株的EGFP表达率,通过细胞生长曲线、黏附实验、侵袭迁移实验比较EGFP-HO8910PM细胞和HO8910PM细胞的生物学行为.结果 筛选出的EGFP-HO8910PM细胞经流式细胞仪检测EGFP阳性表达率达99％以上,EGFP-HO8910PM细胞和HO8910PM细胞生长、黏附及侵袭迁移能力无统计学差异.结论 成功建立了稳定表达EGFP且保持母株细胞特性的人卵巢癌细胞株EGFP-HO8910PM,为人卵巢癌整体活体应用中可视化研究打下基础.     

KLK11对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探究激肽释放酶相关肽11(KLK11)对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法:qRT-PCR及Western blot技术检测卵巢癌细胞中KLK11基因的表达水平。Western blot评估siRNA特异性抑制KLK11在A2780和HO8910细胞株中表达的抑制效率。CCK-8、划痕实验及Transwell实验检测KLK11对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。Western blot检测卵巢癌细胞中上皮-间质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、锌指转录因子(Snail)的表达水平。结果:与人正常卵巢上皮细胞相比,KLK11在卵巢癌细胞株中表达上调(P<0.01);与Control组相比,si-KLK11组卵巢癌细胞中KLK11蛋白表达降低(P<0.01),卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力被抑制(P<0.01);同时,si-KLK11组A2780和HO8910细胞中Vimentin、Snail蛋白表达水平均下调(P<0.01),而E-cadherin蛋白表达水平上调(P<0.01)。结...     

DPP Ⅳ基因影响卵巢癌生物学行为的机制探讨

目的 探讨DPP Ⅳ基因高表达对卵巢癌细胞系恶性行为的影响及其机制.方法 应用体外增殖能力、黏附和侵袭试验检验HO-8910PM、HOPcDNA和HODPP Ⅳ细胞恶性行为差异;利用流式细胞技术、吖啶橙染色、DNA ladder、透射电镜以及Western blot检测Fas/Bcl-2基因蛋白表达水平,探讨HO-8910PM、HOPcDNA和HODPP Ⅳ细胞中凋亡状况.结果 DPP Ⅳ基因高表达可显著抑制卵巢癌细胞的增殖、黏附和侵袭能力;同时HODPP Ⅳ细胞的凋亡率、Fas基因蛋白表达水平明显高于HOPcDNA和HO-8910PM细胞(P<0.05);HO-8910PM和HOPcDNA细胞的Bcl-2基因蛋白表达水平明显高于HODPP Ⅳ细胞(P<0.05).结论 DPP Ⅳ基因高表达可抑制卵巢癌细胞的恶性行为;凋亡可能是DPP Ⅳ基因发挥生物学作用机制之一.     

miRNA-200c在上皮性卵巢癌细胞株及肿瘤组织中的表达变化及意义

目的观察上皮性卵巢癌细胞株及肿瘤组织microRNA-200c(miR-200c)的表达水平,探讨其可能的临床价值。方法采用Real-time RT-PCR技术比较人卵巢癌母细胞系(HO-8910)、卵巢癌高转移能力变异细胞株(HO-8910PM)及HO-8910细胞团簇中miR-141、miR-200c的表达差异。同法测定上皮性卵巢癌(n=83)、交界性卵巢肿瘤(n=13)及正常卵巢组织(n=8)中miR-141、miR-200c的表达,并分析卵巢癌不同临床病理特征下二者的表达差异。结果与HO-8910、HO-8910PM相比,HO-8910细胞团簇中miR-200c表达下调(P<0.05);正常卵巢组织、卵巢交界性肿瘤、卵巢癌中miR-141、miR-200c表达依次上调(P<0.05)。转移性卵巢癌、低分化卵巢癌及透明细胞卵巢癌中miR-200c表达下调(P<0.05)。miR-200c高表达患者预后优于miR-200c低表达者(P<0.05)。结论 miR-200c表达下调与卵巢癌进展相关,可能提示卵巢癌预后不良。     

卵巢癌细胞中小分子G蛋白Rho的表达及其意义

目的：研究小分子G蛋白Rho家族中RhoA、RhoC及其效应分子ROCK—1在不同卵巢癌细胞中的表达水平，探讨它们与卵巢癌转移的相关性。方法：RT—PCR检测RhoA、RhoC及ROCK--1在卵巢癌细胞SW626、Skov-3、A2780和Caov—3中mRNA的表达水平；Western Blot检测RhoA和ROCK—1蛋白的表达情况；Boyden小室体外侵袭试验检测四株卵巢癌细胞的体外侵袭能力。结果：RhoA、RhoC和ROCK—1在不同的卵巢癌细胞中均有表达，但仅RhoC的表达水平与癌细胞侵袭力能力至正相关(r＝0．95，P＜0．01)。此外RhoA在转录水平和蛋白水平并不至同步变化。四株卵巢细胞的体外侵袭能力，其中SW626最强，Caiv—3最弱，Skov—3和A2780居中；结论:RhoC的表达与卵巢癌细胞的体外侵袭能力相关，可能作为一个癌基因在卵巢癌中起作用，有可能成为治疗卵巢癌转移的新靶点或筛选早期卵巢癌的标志物。     

Aurora-A激酶在人类卵巢癌细胞株中的表达研究

[目的]了解Aurora-A基因在卵巢癌细胞中的表达情况,寻找显示卵巢癌恶性程度的肿瘤标记物.[方法]采用半定量RT-PCR、Western blot检测卵巢上皮浆液性囊腺癌细胞（HO-8910）与其高转移亚株（HO-8910PM）细胞株Aurora-A 在mRNA和蛋白表达情况;借助流式细胞仪观察两种卵巢癌细胞DNA含量,并分析Aurora-A表达的相关性.[结果]两种细胞株HO-8910、HO-8910PM半定量RT-PCR结果发现,Aurora-A/β-actin比值分别为：0.95与0.98（P＜0.05）;Western blot结果显示Aurora-A/β-actin比值分别为： 1.24与1.58（P＜0.01）.细胞DNA含量的检测结果,细胞含有四倍体 （4N）的细胞比例分别为21.63%和30.15%,其多倍体（＞4N）细胞的比例分别为2.20%与7.16%（P＜0.01）.[结论]在两种卵巢癌细胞中,Aurora-A 基因mRNA与蛋白高表达;两种细胞株Aurora-A基因表达的高低与其细胞DNA含量有相关性,尤其与异倍体的形成有关;Aurora-A基因表达卵巢癌细胞的恶性程度有关.     

不同恶性行为卵巢癌细胞系DPP Ⅳ基因的表达

目的探讨二肽肽酶Ⅳ(DPP Ⅳ)基因在卵巢癌细胞系中的表达并分析其与卵巢癌细胞恶性行为的关系.方法利用细胞增殖、粘附、侵袭和迁移能力试验鉴定A2780、SKOV-3、HO-8910、HO-8910PM卵巢癌细胞系的恶性行为差异;应用酶活性测定、流式细胞和半定量RT-PCR技术检测DPP Ⅳ基因在A2780、SKOV-3、HO-8910和HO-8910PM细胞系中的表达并分析它与卵巢癌细胞恶性行为的关系.结果4种卵巢癌细胞的增殖、粘附、侵袭和迁移能力由高到低依次为:HO-8910PM、HO-8910、SKOV-3、A2780细胞系.DPP Ⅳ基因在A2780、SKOV-3、HO-8910和HO-8910PM细胞系中mRNA转录水平分别为0.7512±0.0012、0.5596±0.0015、0.3369±0.0009和0.2777±0.0006;酶活性分别为0.79±0.02、0.64±0.03、0.21±0.02和0.18±0.01;流式细胞术测定DPP Ⅳ基因蛋白表达水平分别为657.83±1.14、538.53±5.29、130.50±1.46和33.14±0.47.卵巢癌细胞的粘附、侵袭和迁移能力与DPP Ⅳ基因的mRNA转录水平相关系数分别为:-0.987、-0.983和-0.991;与蛋白表达水平相关系数分别为:-0.959、-0.988和-0.968;与酶活性相关系数分别为:-0.952、-0.868和-0.983.结论DPP Ⅳ基因的mRNA转录、蛋白表达水平以及酶活性与卵巢癌细胞系的粘附、迁移和侵袭能力呈负相关性.     

KIAA1456抑制人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的生长

目的：探讨KIAA1456对人卵巢癌细胞株HO-8910PM裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法：将15只裸鼠随机分成3组：空白组（PM组）,阴性对照组[PM（NC）组],实验组[PM（KIAA1456）组]。利用人卵巢癌细胞株HO8910PM及本课题组前期通过慢病毒介导建立的阴性对照组细胞株HO8910PM（NC）和过表达KIAA1456的细胞株HO8910PM（KIAA1456）分别在空白组、阴性对照组、实验组建立裸鼠皮下移植瘤,待成瘤成功后,分别用PBS缓冲液和携带针对随机无关序列（NC）的慢病毒液Lentivirus-NC（作为阴性对照,LV-NC）,携带KIAA1456病毒液Lentivirus-KIAA1456（LV-KIAA1456）每隔4 d进行一次瘤内定点注射治疗至28 d处死裸鼠,绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率;采用实时荧光定量PCR和Western blot检测移植瘤组织中KI－AA1456的表达情况;免疫组化检测移植瘤中ki-67和PCNA的表达情况。结果：HO8910PM（KIAA1456）移植瘤组KIAA1456表达量明显高于阴性对照组和空白对照组（P=0.000）;28 d后处死裸鼠,HO8910PM（KIAA1456）组皮下移植瘤的体积明显小于阴性对照组和空白对照组（P=0.000）,抑瘤效果明显;移植瘤组织中KIAA1456的表达上调,ki-67和PCNA表达明显下调。HO8910PM（KIAA1456）组移植瘤组织中ki-67和PCNA的表达明显低于阴性对照组和空白对照组,差异具有统计学意义（P=0.000）。结论：过表达KIAA1456基因对人上皮性卵巢癌细胞HO8910PM裸鼠皮下成瘤的生长具有抑制作用,有望成为卵巢癌基因治疗的新靶点。     

Gene expression profile differences in high and low metastatic human ovarian c ancer cell lines by gene chip

目的：用基因芯片技术研究高低转移人卵巢癌细胞系（HO-8910PM和HO-8910）基因表达谱差异,筛选与转移相关的基因。方法：按一步法分别抽提高低转移人卵巢癌细胞和对照正常卵巢组织的总RNA并纯化mRNA;分别将等量的高低转移人卵巢癌细胞及对照组织的mRNA逆转录合成以Cy5和Cy3标记的cDNA一链做探针,分别混合后在2张含有4096条双点人类全长基因的芯片上进行杂交。经洗片后用ScanArray3000扫描仪扫描芯片荧光信号图像,用ImaGene3.0软件对扫描图像进行数字化处理,计算机分析高低转移人卵巢癌细胞系之间及与正常卵巢上皮基因表达谱差异。结果：人卵巢癌细胞系HO-8910细胞与正常卵巢上皮比较差异3倍以上共有355个基因。高转移人卵巢癌细胞系HO-8910PM细胞与正常卵巢上皮比较差异3倍以上共有323个基因。高转移人卵巢癌细胞系HO-8910PM与母系HO-8910比较差异2倍以上共有165个基因,其中两株细胞系比较差异3倍以上共有21个基因。结论：两株人卵巢癌细胞系与正常卵巢上皮细胞基因表达谱存在差异,提示这些基因与卵巢癌的发生和发展及高转移特性有关。本实验说明利用基因芯片对基因表达谱的检测可以为人体卵巢癌的基因诊断、治疗和预防提供新的方向。     

乙酰肝素酶基因表达对人卵巢癌细胞系侵袭转移能力的影响

目的:探讨乙酰肝素酶的基因表达,对卵巢癌细胞转移侵袭能力的影响。方法:用Boyden小室体外侵袭实验比较两株卵巢癌细胞HO-8910和HO8910-PM的体外侵袭能力强弱;采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和原位杂交检测细胞乙酰肝素酶mRNA的表达情况;用MTT观察细胞生长能力的变化。结果:MTT检测结果显示卵巢癌细胞HO8910-PM细胞生长速度较快,而HO-8910细胞生长速度较慢。RP-PCR提示及原位杂交结果提示乙酰肝素酶在高转移性HO8910-PM细胞中表达强于转移性HO-8910细胞。Boyden小室体外侵袭实验表明,卵巢癌细胞HO8910-PM体外侵袭力较强,其穿膜细胞数为20.1±0.312,而HO-8910细胞体外侵袭力较弱,其穿膜细胞数为11.3±0.024。两者差异具有显著性意义(P<0.05)。结论:乙酰肝素酶基因的表达,能促进瘤细胞的生长和转移能力。     

转移抑制基因BRMS1对卵巢癌细胞侵袭能力的影响

目的研究转移抑制基因BRMS1对高转移性人卵巢上皮癌细胞(HO-8910PM)侵袭能力的影响。方法脂质体介导将重组真核表达质粒pcDNA3.0-BRMS1转染HO-8910PM细胞;RT-PCR检测转染前后细胞中BRMS1mRNA的表达;Boyden小室法检测细胞侵袭能力。结果与未转染细胞(HO-8910PM)和pcDNA30空质粒转染细胞(HO-8910PM-vect)相比,BRMS1基因转染细胞(BRMS1.c2)侵袭穿透Matrigel基质膜的细胞数降低70.6%(P<0.001)。结论BRMS1基因能抑制卵巢癌细胞HO-8910PM的侵袭能力,为进行卵巢癌基因治疗提供了实验依据。     

RNA干扰survivin对卵巢癌HO-8910PM细胞周期的影响

目的 探讨RNA干扰survivin基因对卵巢癌HO-8910PM细胞周期的影响.方法 实验分3个组：siR-NA组,采用脂质体法将靶向survivin siRNA荧光真核表达质粒载体pGPU6-GFP-survivin-shRNA转染卵巢癌HO-8910PM细胞;空白对照组,单纯细胞培养;阴性对照组,用表达与survivin序列无同源性的siRNA片段质粒pGPU6-GFP-NC转染细胞.于转染后48 h和72 h,用PI单染法流式细胞术检测各组HO-8910PM细胞周期的变化以及Western blot检测survivin蛋白的表达情况.结果 PI单染流式细胞仪检测细胞周期结果表明,与空白对照组和阴性对照组相比较,2个时间点siRNA组转染后的G0/G1期细胞比例明显增加,而G2/M期细胞比例均下降（P＜ 0.05）;Western blot结果证实,siRNA组的HO-8910PM细胞survivin蛋白的表达量明显下调.结论 导入survivin基因特异性的siRNA可导致卵巢癌HO-8910PM细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞增殖受阻,且细胞sur-vivin蛋白表达量下降.     

应用SELDI—TOF—MS技术筛选不同分型卵巢上皮性癌血清标志物

目的：应用表面增强激光解析离子化一飞行时间一质谱（SEI。DI-TOF-MS）技术筛选不同分型的卵巢上皮性癌患者血清标志物。方法：选择卵巢上皮性癌68例,健康妇女87例,卵巢良性肿瘤组20例血清,以及体外培养的卵巢恶性肿瘤细胞系SKOV3、A2780、H08910、H08910PM为材料,采用WCX2蛋白质芯片分析血清和体外培养的恶性肿瘤细胞系蛋白质表达差异蛋白,选择卵巢上皮性癌血清与细胞均存在表达的差异蛋白建立卵巢上皮性癌诊断模型进行验证。结果：WCX2芯片捕获的M／Z为5343和5640蛋白质,在卵巢浆液性上皮癌和浆液性上皮癌细胞系H08910、H08910PM中均上调表达。以上述2个蛋白质建立诊断模型判别浆液性卵巢癌的敏感性为97．8％,特异性为82．7％,优于CA125的检测结果。结论：M／Z为5343和5640蛋白质在卵巢浆液性上皮癌发生和发展的过程中的变化可以反映到血清中,而且可以验证血清标志蛋白的组织特异性,为其作为卵巢癌的肿瘤标志物提供强有力的支持。     

hS100A6抑制卵巢癌细胞HO8910和HO8910 PM增殖、促进凋亡并上调其Wnt/β-catenin活性

目的研究hS100A6(human S100A6)对人卵巢癌细胞系(低转移系HO8910和高转移系HO8910 PM)增殖、凋亡和Wnt/β-catenin信号途径的影响。方法通过MTT以及台盼蓝染色检测细胞增殖的变化;Hoechst检测细胞凋亡的变化;提取细胞总蛋白及核蛋白Western blot检测hS100A6对β-catenin的影响。结果 MTT及台盼蓝染色结果显示hS100A6抑制HO8910细胞和HO8910 PM细胞的增殖(P<0.05),Hoechst染色结果显示hS100A6同时促进这两系细胞的凋亡(P<0.05);Western blot显示hS100A6增加β-catenin的水平并促进其发生核转位。结论 hS100A6能抑制人卵巢癌细胞系HO8910和HO8910 PM增殖,促进其凋亡,同时激活Wnt/β-catenin信号途径。     

lncRNA SOX2OT在卵巢癌细胞系中的表达及其对卵巢癌生物学行为的影响

目的 探讨lncRNA SOX2OT在卵巢癌细胞系中相对表达情况,评估其对卵巢癌生物学行为的影响。 方法 将2017年4月—2019年4月宁波市鄞州人民医院治疗的112例卵巢癌患者纳入研究,分析卵巢癌及卵巢癌旁组织、卵巢癌细胞系lncRNA SOX2OT表达情况,并测试其影响增殖及周期、迁移状况。 结果 卵巢癌组织内SOX2OT mRNA表达(3.50±0.13)高于癌旁组织(1.59±0.21,t=81.045,P<0.01);HO-8910PM细胞株内lncRNA SOX2OT表达(5.78±0.04)高于HO-8910细胞株(1.05±0.11,t=405.918,P<0.05)。空白对照组克隆细胞数、迁移细胞数、侵袭细胞数高于siSOX2OT-1组、siSOX2OT-2组;阴性对照组克隆细胞数、迁移细胞数、侵袭细胞数高于siSOX2OT-1、siSOX2OT-2组(均P<0.01)。子宫内膜样癌、浆液性卵巢癌、黏液性卵巢癌lncRNA SOX2OT表达分别为4.12±0.25、3.68±0.42、3.44±0.31,组间差异无统计学意义(均P>0.05)。 结论 lncRNA SOX2OT在卵巢癌细胞系中呈异常高表达,敲低lncRNA SOX2OT表达可对卵巢癌细胞的增殖及迁移、侵袭进行抑制,加快卵巢癌细胞凋亡。      

蛋白质精氨酸甲基转移酶5促进人卵巢癌HO8910细胞迁移

目的: 探讨蛋白质精氨酸甲基转移酶5(protein arginine methyltransferase 5,PRMT5)对人卵巢癌HO8910细胞上皮间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)和迁移能力的影响。方法: 利用瞬时转染方法建立PRMT5过表达的HO8910细胞株,设空白对照组(野生型HO8910细胞株)、阴性对照组(转染pCMV-myc质粒)、实验组(转染pCMV-Myc-PRMT5质粒);同时采用shRNA干扰方法建立诱导型稳定敲低PRMT5基因的HO8910细胞株,设pLKO对照组(感染空载体慢病毒)、pKLO+ Dox(100 ng/mL)组、shPRMT5组(感染PRMT5 shRNA 慢病毒)和shPRMT5+ Dox(100 ng/mL)组;通过免疫印迹和qRT-PCR实验检测PRMT5 mRNA表达和干扰效率。实验分为shPRMT5组、shPRMT5+Dox组、pCMV-Myc组、pCMV-Myc-PRMT5组;Transwell实验检测细胞迁移能力;免疫印迹法检测EMT相关蛋白表达。结果： 免疫印迹和qRT-PCR验证成功建立过表达PRMT5和稳定诱导型敲低PRMT5的卵巢癌HO8910细胞株。PRMT5敲低后,卵巢癌HO8910细胞迁移能力显著下降(P均<0.01),间质标志相关分子包括基质金属蛋白酶2,波形蛋白,N-钙黏蛋白表达下调,上皮标志分子E-钙黏蛋白表达上调。此外,在卵巢癌细胞中外源表达PRMT5可显著促进HO8910细胞迁移(P均<0.05)。结论： PRMT5能够促进卵巢癌HO8910细胞EMT进程,促进细胞迁移。