上皮性卵巢癌细胞RhoA蛋白表达水平及意义

目的探讨小分子G蛋白RhoA在上皮性卵巢癌细胞及正常卵巢细胞中的表达水平及RhoA与上皮性卵巢癌侵袭力的相关性。方法上皮性卵巢癌细胞HO8910PM、HO8910及正常卵巢上皮细胞HOSEA中RhoA蛋白表达水平采用免疫细胞化学法检测;Transwell小室体外侵袭试验测定3种细胞的体外侵袭能力。结果HO8910PM细胞中RhoA蛋白表达水平最高,HO8910次之,HOSEA最低（F=35.73,p〈0.01）;3种细胞的侵袭能力以HO8910PM最强,HO8910较弱,HOSEA无侵袭能力（F=105.80,p〈0.01）。RhoA蛋白表达水平与细胞侵袭能力呈正相关（r=0.89、0.84,p〈0.05）。结论RhoA蛋白的表达与上皮性卵巢癌细胞的体外侵袭能力密切相关。RhoA蛋白可能作为重要因子参与上皮性卵巢癌的侵袭转移过程。     

转移抑制基因BRMS1对卵巢癌细胞侵袭能力的影响

目的研究转移抑制基因BRMS1对高转移性人卵巢上皮癌细胞(HO-8910PM)侵袭能力的影响。方法脂质体介导将重组真核表达质粒pcDNA3.0-BRMS1转染HO-8910PM细胞;RT-PCR检测转染前后细胞中BRMS1mRNA的表达;Boyden小室法检测细胞侵袭能力。结果与未转染细胞(HO-8910PM)和pcDNA30空质粒转染细胞(HO-8910PM-vect)相比,BRMS1基因转染细胞(BRMS1.c2)侵袭穿透Matrigel基质膜的细胞数降低70.6%(P<0.001)。结论BRMS1基因能抑制卵巢癌细胞HO-8910PM的侵袭能力,为进行卵巢癌基因治疗提供了实验依据。     

lncRNA MALAT1通过海绵吸附miRNA-141-3p 调控Wnt/β-catenin促进卵巢癌的生长及转移

目的 研究长链非编码RNA MALAT1(lncRNA MALAT1)在卵巢癌中的作用及调控机制。方法 实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)检测MALAT1在人正常卵巢上皮细胞系IOSE80及人卵巢癌细胞系SKOV3、OVCA429和HO-8910PM中的表达,选取SKOV3及HO-8910PM细胞进行后续研究。利用siRNA干扰SKOV3和HO-8910PM细胞中MALAT1表达,CCK-8法检测细胞增殖,划痕及Transwell小室检测细胞迁移及侵袭能力,并通过Western blot法检测上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transformation, EMT)相关指标E-cadherin、N-cadherin的表达。利用生物信息学分析MALAT1与miRNA-141-3p的靶向关系,并利用双荧光素报告基因验证。MALAT1敲低及miRNA-141-3p抑制剂共同作用细胞,检测其对SKOV3及HO-8910PM细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并通过W...     

转移抑制基因BRMS1对卵巢癌细胞侵袭能力的影响

目的研究转移抑制基因BRMS1对高转移性人卵巢上皮癌细胞(HO-8910PM)侵袭能力的影响.方法脂质体介导将重组真核表达质粒pcDNA3.0-BRMS1转染HO-8910PM细胞;RT-PCR检测转染前后细胞中BRMS1mRNA的表达;Boyden小室法检测细胞侵袭能力.结果与未转染细胞(HO-8910PM)和pcDNA3.0空质粒转染细胞(HO-8910PM-vect)相比,BRMS1基因转染细胞(BRMS1.c2)侵袭穿透Matrigel基质膜的细胞数降低70.6%(P<0.001).结论BRMS1基因能抑制卵巢癌细胞HO-8910PM的侵袭能力,为进行卵巢癌基因治疗提供了实验依据.     

不同时间和浓度大蒜素对卵巢癌细胞的影响及机制探究

目的 探讨大蒜素(allicin)对人卵巢癌普通型HO-8910和高侵袭型HO-8910PM细胞株增殖的影响及诱导细胞凋亡机制、作用效果比较。方法 不同浓度的大蒜素作用于人卵巢癌HO-8910和HO-8910PM细胞株不同时间,采用MTT法观察细胞活力;集落形成实验计算克隆形成率;PI/Hochest 33342荧光染色,检测caspase-3活性;Western blot法检测caspase-3和PARP蛋白表达。结果 大蒜素能显著抑制HO-8910和HO-8910PM细胞的增殖和集落形成,影响caspase-3的活性和PARP蛋白裂解(P＜0.05),呈时间和剂量依赖性;HO-8910PM细胞对大蒜素的敏感度均强于HO-8910细胞。结论 大蒜素可显著抑制卵巢癌细胞增殖,可能通过调节caspase-3和PARP诱导细胞凋亡,且高侵袭性卵巢癌细胞更敏感。     

熊果酸对卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭转移的影响

目的 探讨熊果酸对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭转移的影响及其可能的机制.方法 以不同浓度的熊果酸处理高转移卵巢癌细胞HO-8910PM后,采用MTT法检测其对细胞的生长抑制作用,应用Transwell小室进行人工重组基底膜侵袭和运动实验,观察熊果酸对HO-8910PM细胞侵袭和转移的影响,明胶酶谱法检测HO-8910PM细胞基质金属蛋白酶-2、-9(MMP-2、MMP-9)的活性变化,Westen blot方法检测细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达变化.结果 熊果酸处理后卵巢癌细胞生长受到抑制,且作用呈时效、量效依赖关系,熊果酸能抑制卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭和运动能力,各实验组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05);熊果酸能抑制卵巢癌细胞HO-8910PM明胶酶活性(P＜0.01),抑制卵巢癌HO-8910PM细胞MMP-2和MMP-9蛋白表达,各实验组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 熊果酸能抑制卵巢癌细胞侵袭和转移,其机制可能与抑制MMP-2和MMP-9酶活性和蛋白表达有关.     

葡萄糖调节蛋白78在卵巢癌侵袭转移中的作用

目的探讨葡萄糖调节蛋白78（GRP78）在卵巢癌侵袭转移中的作用。方法免疫组织化学法检测60例卵巢浆液性癌和40例卵巢浆液性囊腺瘤组织中GRP78的表达情况,Western blotting法检测GRP78的表达水平,分析GRP78的表达与卵巢浆液性癌临床病理指标之间的关系。采用Transwell小室法检测HO-8910细胞和HO-8910PM细胞侵袭、迁移能力;分别使用shRNA-GRP78干扰和pcDNA-GRP78过表达GRP78检测HO-8910PM细胞和HO-8910细胞侵袭、迁移能力的变化。结果免疫组织化学结果显示,GRP78在卵巢浆液性癌组织中的阳性表达率为90%,明显高于卵巢浆液性囊腺瘤的25%（P＜0.01）。GRP78在卵巢浆液性癌组织中表达水平高于卵巢浆液性囊腺瘤组织。GRP78表达水平高的卵巢浆液性癌病人,临床病理分级、分期更高,糖类抗原125水平更高,且发生淋巴结转移、盆腔转移、盆腔外转移的病人比例更高（P＜0.01）。体外研究结果显示,GRP78在高转移潜能的HO-8910PM细胞中的表达明显高于低转移潜能的HO-8910细胞（P＜0.01）。在HO-8910细胞中过表达GRP78可明显促进细胞的侵袭、迁移能力,而在HO-8910PM细胞中干扰GRP78的表达可明显降低细胞的侵袭、迁移潜能（P＜0.01）。结论卵巢癌组织中GRP78可促进卵巢癌细胞的侵袭、迁移能力。     

半边旗提取物5F对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞增殖的影响及作用机制的实验研究

目的:探讨半边旗提取物5F(简称5F)对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞增殖的影响及其作用机制.方法:以MTT法检测5F对HO-8910PM细胞增殖的影响;流式细胞术分析5F对HO-8910PM细胞周期的影响;Western blot分析NF-κB(P65)、焦点粘附激酶(focal adhesionkinase,FAK)的表达及FAK酪氨酸磷酸化水平.结果:不同浓度的5F分别处理细胞24 h后,对HO-8910PM细胞增殖有明显的抑制作用;使G0/G1期的细胞减少,阻断细胞于G2/M期;5F可使NF-κB(P65)的表达下调,上调FAK的表达,并下调FAK酪氨酸磷酸化水平.结论:5F通过影响HO-8910PM细胞周期、下调NF-κB(P65)表达及促进FAK的表达来抑制细胞生长.     

lncRNA SOX2OT在卵巢癌细胞系中的表达及其对卵巢癌生物学行为的影响

目的 探讨lncRNA SOX2OT在卵巢癌细胞系中相对表达情况,评估其对卵巢癌生物学行为的影响。 方法 将2017年4月—2019年4月宁波市鄞州人民医院治疗的112例卵巢癌患者纳入研究,分析卵巢癌及卵巢癌旁组织、卵巢癌细胞系lncRNA SOX2OT表达情况,并测试其影响增殖及周期、迁移状况。 结果 卵巢癌组织内SOX2OT mRNA表达(3.50±0.13)高于癌旁组织(1.59±0.21,t=81.045,P<0.01);HO-8910PM细胞株内lncRNA SOX2OT表达(5.78±0.04)高于HO-8910细胞株(1.05±0.11,t=405.918,P<0.05)。空白对照组克隆细胞数、迁移细胞数、侵袭细胞数高于siSOX2OT-1组、siSOX2OT-2组;阴性对照组克隆细胞数、迁移细胞数、侵袭细胞数高于siSOX2OT-1、siSOX2OT-2组(均P<0.01)。子宫内膜样癌、浆液性卵巢癌、黏液性卵巢癌lncRNA SOX2OT表达分别为4.12±0.25、3.68±0.42、3.44±0.31,组间差异无统计学意义(均P>0.05)。 结论 lncRNA SOX2OT在卵巢癌细胞系中呈异常高表达,敲低lncRNA SOX2OT表达可对卵巢癌细胞的增殖及迁移、侵袭进行抑制,加快卵巢癌细胞凋亡。      

miR-132在上皮性卵巢癌中的表达及作用机制研究

目的分析微小RNA-132(miR-132)在上皮性卵巢癌组织和细胞中的表达及其对上皮性卵巢癌细胞迁移与侵袭的作用机制。方法收集2018年10月—2020年2月蚌埠医学院第一附属医院妇瘤科手术切除的卵巢癌及癌旁非肿瘤组织标本36份,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测卵巢癌组织、癌旁组织中miR-132相对表达水平;体外培养人正常卵巢上皮细胞(IOSE80,正常对照组)和卵巢癌SKOV3细胞,对卵巢癌SKOV3细胞进行转染并分为空白对照组、LV-NC(阴性对照)组和LV-miR-132 mimic(模拟物)组,qRT-PCR检测各组细胞中miR-132、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)mRNA相对表达水平,Transwell法检测各组细胞侵袭率,细胞划痕实验检测各组细胞迁移率,双荧光素酶报告基因检测miR-132与MAPK1靶向关系,蛋白免疫印迹法检测各组细胞MAPK1、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9蛋白相对表达水平。结果与癌旁组织比较,卵巢癌组织中miR-132相对表达水平显著降低(t/P=19.166/0.000)。与正常对照组比较,卵巢癌SKOV3细胞中miR-132相对表达水平显著降低(P<0.05),MAPK1 mRNA相对表达水平显著升高(P<0.05);与空白对照组、LV-NC组比较,LV-miR-132 mimic组细胞miR-132相对表达水平显著升高(P<0.05);与空白对照组、LV-NC组比较,LV-miR-132 mimic组细胞侵袭率、各时间点迁移率、MAPK1 mRNA和蛋白、MMP-2、MMP-9蛋白相对表达水平均显著降低(F/P=19.166/0.000,42.795/0.000,64.543/0.000,40.513/0.000,41.805/0.000,32.021/0.000,81.672/0.000,88.132/0.000)。miR-132 mimic+MAPK1-Wt 3′-UTR组的荧光素酶相对活性低于miR-132 NC+MAPK1-Wt 3′-UTR组,miR-132 mimic+MAPK1-Mut 3′-UTR组的荧光素酶相对活性高于miR-132 mimic+MAPK1-Wt 3′-UTR组(F/P=17.369/0.000)。结论miR-132在上皮性卵巢癌组织及细胞中均低表达,上调miR-132可能通过靶向下调MAPK1来抑制卵巢癌细胞迁移、侵袭。     

miR-17~92基因簇在宫颈癌、子宫内膜癌与卵巢癌多种细胞系中的表达及意义

 目的检测宫颈癌、子宫内膜癌与卵巢癌多种细胞系中miR-17~92基因簇的表达,初步探讨miR-17~92基因簇与妇科肿瘤发生的关系。方法利用实时定量PCR方法配对检测Hela/Siha、Ishikawa/HEC-1A、HO-8910/HO-8910PM、SKOV3/SKOV3-TR30/SKOV3-DDP、COC1/COC1-DDP和CAOV3、OVCAR3中miR-17~92基因簇的表达水平;应用miRWalk数据库、miR2Subpath数据库和KEGGpathway功能聚类分析miR-17~92基因簇调控的靶基因及参与的与肿瘤相关的信号通路。结果与人脐静脉血管内皮细胞系ECV-304相比,miR-17~92基因簇在宫颈癌细胞系Hela与Siha中均呈下调表达（F=9.86,P<0.001）;在子宫内膜癌细胞系Ishikawa与HEC-1A中均呈上调表达（F=10.35,P<0.005）;与人正常卵巢细胞系IOSE386相比,miR-17~92基因簇在卵巢癌细胞系HO-8910、HO-8910PM、COC1、COC1/DDP、CAOV3、OVCAR3、SKOV3、SKOV3-TR30、SKOV3/DDP均呈上调表达（F=12.64,P<0.001）。预测得出miR-17~92基因簇的靶基因为ABCA1、ARHGAP21、BAP1、C10orf46、CCND1、CD4等共30个;通过miR2Subpath数据库富集分析得出miR-17~92基因簇参与的生物学过程共8个,KEGGpathway分析得出miR-17~92基因簇参与的信号通路共11条。结论miR-17~92基因簇在宫颈癌、子宫内膜癌与卵巢癌多种细胞系中表达,且在生物学行为不同的同一肿瘤细胞系中存在差异表达。miR-17~92基因簇可能通过相关的靶基因和信号通路参与宫颈癌、子宫内膜癌与卵巢癌的发生、发展并影响其生物学行为。     

姜黄素对人卵巢癌细胞株HO-8910增殖和凋亡的影响

目的:探讨姜黄素对体外培养人卵巢癌HO-8910细胞增殖和凋亡的影响。方法:选用人卵巢癌细胞株HO-8910进行体外培养至对数生长期,以0~80μmol/L姜黄素(5μmol/L,10μmol/L,20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L)分别处理HO-8910细胞24、48、72h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验测定细胞的生长抑制率;流式细胞仪检测不同浓度药物对细胞凋亡率的影响;免疫组化法检测PCNA在细胞中的表达,评价细胞的增殖状态。结果:姜黄素对HO-8910细胞增殖抑制率随药物浓度增加及作用时间延长有升高趋势,呈时间剂量依赖性。姜黄素作用24h随浓度的升高PCNA阳性表达逐渐降低。流式细胞仪分析证实随着浓度的升高细胞凋亡率和膜受损率均提高。结论:姜黄素对人卵巢癌细胞株HO-8910的生长有显著的抑制作用,并能诱导其凋亡。     

RNA干扰OPN对人卵巢癌细胞HO-8910PM体外增殖的影响

目的观察骨桥蛋白(OPN)基因沉默对卵巢癌细胞系HO-8910PM细胞的影响,为探索卵巢癌基因治疗提供理论依据。方法以脂质体法将已构建的骨桥蛋白特异性小干扰RNA真核表达载体(pSilencer3.1/OPN-shRNA)转染卵巢癌细胞HO-8910PM,48h后用Western blotting技术检测重组质粒组、空质粒组和空白对照组中卵巢癌细胞内骨桥蛋白的表达情况;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法连续5天测定转染后细胞的增殖情况并绘制曲线图。结果 pSilencer3.1/OPN-shRNA转染卵巢癌细胞株HO-8910PM后48h骨桥蛋白表达下降,差异有统计学意义(同空质粒组、空白对照组相比P<0.05);空质粒组与空白对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。重组质粒组同空质粒组、空白对照组比较其增殖于第1天差异无统计学意义(P>0.05),第2～5天差异有统计学意义(P<0.05);空质粒组与空白对照组比较,第1～5天其增殖差异均无统计学意义(P>0.05)。结论构建的骨桥蛋白特异性小干扰RNA真核表达载体可以抑制卵巢癌细胞HO-8910PM中骨桥蛋白的表达。骨桥蛋白可能与卵巢癌细胞HO-8910P...     

三苯氧胺联合顺铂抑制人卵巢癌细胞HO-8910增殖的实验研究

目的:研究三苯氧胺(TAM)和顺铂(DDP)对人卵巢癌细胞生长的影响,验证两种药物联合应用治疗人卵巢癌的有效性。方法:以体外培养的人卵巢癌HO-8910为研究对象,不同剂量的TAM和DDP联合作用于人卵巢癌细胞HO-8910,用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测细胞生长抑制率,用免疫组化SABC法检测增殖细胞核抗原(PCNA)在细胞中的表达。结果:TAM和DDP联合用药组与单用DDP组相比,大剂量TAM5.0μmol/L合用DDP及中剂量TAM1.0μmol/L合用大剂量DDP3.3μmol/L细胞生长抑制率有显著性差异(P<0.05);TAM浓度(≥1.0μmol/L)合用DDP时PCNA阳性率有显著差异(P<0.05)。结论:TAM和DDP联合用可有效抑制HO-8910细胞生长及增殖。     

Gene expression profile differences in high and low metastatic human ovarian c ancer cell lines by gene chip

目的：用基因芯片技术研究高低转移人卵巢癌细胞系（HO-8910PM和HO-8910）基因表达谱差异,筛选与转移相关的基因。方法：按一步法分别抽提高低转移人卵巢癌细胞和对照正常卵巢组织的总RNA并纯化mRNA;分别将等量的高低转移人卵巢癌细胞及对照组织的mRNA逆转录合成以Cy5和Cy3标记的cDNA一链做探针,分别混合后在2张含有4096条双点人类全长基因的芯片上进行杂交。经洗片后用ScanArray3000扫描仪扫描芯片荧光信号图像,用ImaGene3.0软件对扫描图像进行数字化处理,计算机分析高低转移人卵巢癌细胞系之间及与正常卵巢上皮基因表达谱差异。结果：人卵巢癌细胞系HO-8910细胞与正常卵巢上皮比较差异3倍以上共有355个基因。高转移人卵巢癌细胞系HO-8910PM细胞与正常卵巢上皮比较差异3倍以上共有323个基因。高转移人卵巢癌细胞系HO-8910PM与母系HO-8910比较差异2倍以上共有165个基因,其中两株细胞系比较差异3倍以上共有21个基因。结论：两株人卵巢癌细胞系与正常卵巢上皮细胞基因表达谱存在差异,提示这些基因与卵巢癌的发生和发展及高转移特性有关。本实验说明利用基因芯片对基因表达谱的检测可以为人体卵巢癌的基因诊断、治疗和预防提供新的方向。     

转FasL基因卵巢癌HO-8910细胞系的建立

目的建立表达转FasL基因卵巢癌细胞系,为以FasL为靶点治疗卵巢癌提供理想细胞模型。方法应用分子克隆技术,将人FasL cDNA片段正向插入逆转录病毒载体pLXSN构建重组质粒pL(hFasL)SN,转染包装细胞PA317收获假病毒上清,磷酸钙法转染卵巢癌HO-8910细胞筛选建系,酶切PCR鉴定、流式细胞仪(FCM)法检测。结果酶切鉴定证实重组质粒pL(hFasL)SN中存在FasL,PCR方法从转染细胞HO-8910-FasL基因组中扩增出0．86kb片段,FCM检测显示FasL表达增加40．32％,HL-60细胞与HO-8910-FasL细胞共培养HL-60细胞凋亡增加25．65％。结论应用逆转录病毒法建立了稳定高表达FasL并具功能的HO-8910-FasL细胞系。     

乙酰肝素酶基因表达对人卵巢癌细胞系侵袭转移能力的影响

目的:探讨乙酰肝素酶的基因表达,对卵巢癌细胞转移侵袭能力的影响。方法:用Boyden小室体外侵袭实验比较两株卵巢癌细胞HO-8910和HO8910-PM的体外侵袭能力强弱;采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和原位杂交检测细胞乙酰肝素酶mRNA的表达情况;用MTT观察细胞生长能力的变化。结果:MTT检测结果显示卵巢癌细胞HO8910-PM细胞生长速度较快,而HO-8910细胞生长速度较慢。RP-PCR提示及原位杂交结果提示乙酰肝素酶在高转移性HO8910-PM细胞中表达强于转移性HO-8910细胞。Boyden小室体外侵袭实验表明,卵巢癌细胞HO8910-PM体外侵袭力较强,其穿膜细胞数为20.1±0.312,而HO-8910细胞体外侵袭力较弱,其穿膜细胞数为11.3±0.024。两者差异具有显著性意义(P<0.05)。结论:乙酰肝素酶基因的表达,能促进瘤细胞的生长和转移能力。     

CXCL12/CXCR-4对卵巢癌高低转移细胞的作用机制探讨

目的探讨趋化因子CXCL12及其受体CXCR-4对人卵巢浆液性囊腺癌高低转移细胞株HO-8910PM及HO-8910增殖、迁移作用的差异。方法采用流式细胞术分析HO-8910PM及HO-8910细胞中CD44、CD49e、E-cad-herin的表达差异;RT-PCR检测CXCR-4在HO-8910PM及HO-8910细胞中的转录水平差异;比较不同浓度CXCL12对HO-8910PM及HO-8910细胞增殖、迁移能力及对其表面相关黏附分子表达水平的影响。结果流式细胞术检测显示HO-8910PM及HO-8910细胞均表达CD44（97.6%vs 96.2%）,E-cadherin在前者不表达（6.5%）,后者高表达（92.5%）;CXCR-4在HO-8910PM中高表达（93.3%）,在HO-8910中不表达（5.7%）;CXCL12上调HO-8910PM中CD49e的表达（27.6%vs 83.2%,P〈0.05）,并且可促进细胞的增殖和移行。结论趋化因子CXCL12及其受体CX-CR-4在卵巢癌的增殖及侵袭转移中具有重要作用。