剔除小鼠神经微管运动蛋白Kif1b基因导致类似Charcot-Marie-Tooth病动物模型

目的研究杂合子小鼠Kiflb基因剔除后导致的表现型,探讨其作为类似Charcot-Marie-Tooth （CMT）病动物模型的可行性。方法用Southern blotting和PCR检测同源重组和基因型,Western blotting测定杂合子KIF1B蛋白表达量,行为学实验观察其表现型。结果杂合子Kif1b基因剔除小鼠的KIF1B蛋白表达量减少了一半以上,行为学实验结果表明,杂合子基因剔除小鼠在运动和感觉方面均有异常。Rota-rod实验,Rod walking实验和Wire hanging实验中,野生型小鼠的停留时间均明显长于Kif1b基因剔除小鼠。同时,杂合子Kif1b基因剔除小鼠在热板实验和福尔马林实验中,表现出对温度觉和痛觉反应的迟钝,其反应时间与野生型小鼠相比明显延长,反应强度降低。结论杂合子Kif1b基因剔除小鼠的表现型与人类腓骨肌萎缩症相似,作为疾病模型具备可行性。     

NAAG肽酶基因剔除小鼠模型的建立及鉴定

目的 建立N-乙酰天冬氨酰谷氨酸(NAAG)肽酶基因剔除小鼠模型,为在体研究NAAG肽酶基因的生物学功能并揭示其在脑损伤后继发性脑损害进程中的所起的作用创造条件.方法 根据小鼠NAAG肽酶基因组的序列,设计基因剔除策略,构建基因剔除载体NAAG-KO-pBR322,以电穿孔方法将基因剔除载体导入胚胎干细胞(ES),应用G418和更昔洛韦进行正负筛选,获得双抗性克隆,聚合酶链式反应(PCR)鉴定并测序获得正确同源重组的ES细胞克隆.结果 同源重组的ES细胞注入小鼠囊胚后获得11只嵌合率＞50％嵌合体雄性小鼠,嵌合体小鼠与C57 BL/6J雌鼠交配后获得11只杂合子小鼠,其中雄性7只,雌性4只.在雌、雄杂合子小鼠交配的后代中获得7只纯合子小鼠,PCR鉴定其基因型,逆转录PCR (RT-PCR)提示该基因鼠未表达NAAG肽酶.结论 我们成功建立了NAAG肽酶基因剔除小鼠模型,其中纯合子小鼠未出现胚胎致死现象;初步的表型观察未发现NAAG肽酶基因剔除小鼠出现异常改变.     

小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的病理变化

目的用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽(MOG35-55)诱发实验性自身免疫性脑脊髓炎(experi-m ental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠模型。方法应用MOG35-55抗原加完全弗氏佐剂免疫C57BL/6小鼠,利用光镜、电镜观察小鼠组织学改变。结果光镜下可见小血管周围炎细胞浸润,呈袖套状改变、血管周围明显脱髓鞘及神经元变性,B ieschowsky银染显示大量轴索肿胀和轴索卵形体的形成,电镜下可见髓鞘结构松散、断裂或融合,包括不同程度的髓鞘重建,脊髓病变广泛,程度重于脑部。结论EAE的病理改变为血管周围炎性细胞浸润、白质脱髓鞘及髓鞘重建。     

MOG35-55诱发C57BL/6小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型轴索损害可能并非继发于炎性脱髓鞘

采用MOG35-55加完全弗氏佐剂诱发实验性自身免疫性脑脊髓炎C57BL/6小鼠模型,其发病潜伏期约12 d,发病率100%,呈慢性非复发性病程经过。其神经组织病理改变表现为：光镜下见小血管周围炎细胞浸润,呈袖套状改变;Luxol-fast-blue染色可见髓鞘脱失;TUNEL染色和Bielshowsky银染法发现神经元变性和轴索损害;电镜下可见线粒体肿胀,细胞器消失,髓鞘结构松散、断裂或融合, 并可见不同程度的髓鞘重建。且轴索损害与髓鞘脱失的分布并不一致,轴索损伤的程度与髓鞘脱失亦不成比例,部分甚至与脱髓鞘无关。提示实验性自身免疫性脑脊髓炎的轴索损害并非继发于炎性脱髓鞘。     

大鼠脑弥漫性轴索损伤不同轴索损伤类型的形态学观察

目的 观察脑弥漫性轴索损伤(DAI)急性期轴索损伤的类型和形态学改变,并探讨其相关机制. 方法 SD大鼠24只随机数字表法分为实验组(n=16)和对照组(n=8).实验组又按损伤后不同时间(6、24 h)分为2组,每组8只,运用自制联合损伤装置致实验组大鼠DAI模型,于损伤后急性期不同时间点行HE染色,免疫荧光染色检测脑组织轴浆运输障碍标志物β-淀粉样前体蛋白(β-APP)和神经微丝结构破坏标志物(NF-68)的表达,并在电镜下观察损伤轴索的超微结构变化.结果与对照组[(6.5±1.0)min]相比,实验组[(11.9±2.7)min]大鼠伤后出现昏迷时间延长,差异有统计学意义(P<0.05).β-APP免疫组化染色显示轴索肿胀扭曲、膨胀断裂及轴索球形成;NF-68免疫荧光染色显示轴索缩窄变细呈分割状.电镜下肿胀类型的轴索骨架溶解絮乱、细胞器聚集,而另一类损伤轴索骨架排列仍较清晰,但轴索内有较多空泡形成及神经微丝汇聚. 结论 DAI急性期损伤轴索存在着轴浆运输障碍和神经微丝结构破坏等病理生理过程,相应损伤轴索的形态不同.多种检测方法的使用能更全面地评估轴索损伤的严重程度及轴索对损伤的复杂反应.     

大鼠坐骨神经切断后腰脊髓腹角内胶质细胞和神经元的可塑性变化

目的:探讨大鼠单侧坐骨神经切断后腰脊髓腹角胶质细胞和运动神经元的反应及其相互关系.方法:用免疫组织化学技术、HE染色和Tunnel法,观察坐骨神经切断后1,6,12,24 h及3,7和14 d腰脊髓腹角胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)标记的星形胶质细胞、OX-42标记的小胶质细胞及运动神经元的变化.结果:坐骨神经切断侧腰脊髓腹角可见星形胶质细胞和小胶质细胞活化,星形胶质细胞的活化早于小胶质细胞;后期运动神经元发生凋亡,HE染色显示凋亡细胞周围为反应性OX-42阳性小胶质细胞和GFAP阳性星形胶质细胞包绕.结论:研究结果提示,坐骨神经切断后切断侧腰脊髓腹角活化的胶质细胞与凋亡的运动神经元之间关系密切.     

鸡甲胺磷中毒性神经肌病的神经病理及药物干预治疗

目的　研究甲胺磷中毒迟发性神经病的周围神经病理特点 ,并探讨三磷酸胞苷二钠 (CTP)、地塞米松对有机磷中毒迟发性神经病 (OPIDN)是否有保护作用。方法　通过甲胺磷染毒制备鸡 OPIDN模型 ,观察小、大剂量 CTP[1.5 mg/ (kg· d) ,3mg/ (kg· d) ]和地塞米松 [1mg/ (kg· d) ]不同作用时间 (1、2、3、4、8周 )的神经病理改变。结果　甲胺磷染毒后光镜下甲苯胺兰染色第 2周末即出现髓鞘轻微改变 ,第 3周末出现部分神经纤维变性 ,髓鞘深染、形状不规则 ,神经轴索肿胀 ,第 4周末达高峰 ,第 8周末病变明显好转。电镜下第 3周末髓鞘增厚、板层松解、轴索肿胀。大剂量 CTP组和地塞米松组神经病理改变相对减轻 ,但有髓神经纤维横切面积与正常组相比具有显著性差异 (P<0 .0 5 )。大剂量 CTP组郎飞结间的距离与其余各组相比均具有显著性差异 (P<0 .0 5 )。结论　甲胺磷染毒后周围神经的病理改变为髓鞘脱失和轴索肿胀 ,大径神经纤维更易感。应用大剂量 CTP、地塞米松可减轻病损 ,促进恢复 ,但不能防止 OPIDN的发生。     

实验性糖尿病大鼠坐骨神经病理形态学的动态变化

目的通过HE染色在光镜及电镜下观察不同时期实验性糖尿病大鼠(DM大鼠)坐骨神经内膜毛细血管及坐骨神经的形态学改变,来揭示实验性糖尿病大鼠坐骨神经病理学的动态变化。方法采用大鼠腹腔内注射链脲菌素(STZ)溶液,制备实验性糖尿病大鼠模型。将80只Wistar大鼠随机分为正常对照组(NC组),成模即刻(0w)组、成模后4w组、8w组、12w组。应用HE染色在光镜和电镜下观察大鼠下肢坐骨神经病理形态学改变。结果造模前DM组和NC组大鼠病理形态学无显著差异;HE染色显示DM组大鼠从4w开始出现神经内膜毛细血管管壁逐渐增厚,管腔不规则,内皮细胞肿胀、变形,随病程延长而逐渐加重;同时也从4w开始出现坐骨神经有髓及无髓神经纤维排列松散,且随病程进展逐渐出现髓鞘变薄、分离、空泡形成,并伴有轴索萎缩。电镜观察结果显示DM组大鼠从4w开始出现毛细血管内皮增厚,基底膜不清楚,周围有炎细胞浸润;同时有髓神经纤维髓鞘板层薄厚不一、分离或脱落,无髓神经纤维轴索内神经丝减少,线粒体肿胀,粗面内质网扩张,可见髓样小体,且随病程延长而逐渐加重。结论DM大鼠早期4w时周围神经即可出现明显的病理形态学改变,且其损伤程度随病程的延长而加重。     

α-synuclein在阿尔茨海默病脊髓内的表达

目的 观察阿尔茨海默病和正常老龄脊髓组织标本α-synuclein相关病理改变特点.方法 采集3例阿尔茨海默病(2例经典阿尔茨海默病、1例伴路易小体阿尔茨海默病)和7例老龄非痴呆性尸体的脊髓组织标本,常规HE染色和免疫组织化学染色观察α-synuclein在脊髓组织中的表达情况.结果 在伴路易小体阿尔茨海默病患者的延髓迷走神经背核、中脑红核以及脊髓组织中同时发现α-synuclein相关病理改变,胸髓侧角中间外侧柱和骶髓灰质腹侧前外侧部组织中可见少至中量Lewy小体和散在分布的Lewy轴索样结构.结论 伴路易小体阿尔茨海默病患者脊髓内有α-synuclein表达阳性的Lewy小体或Lewy轴索样结构存在,且与脑组织α-synuclein相关病理改变存在明显相关性.     

特殊染色鉴定小剂量豚鼠脊髓匀浆诱导Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的价值

目的特殊染色鉴定小剂量豚鼠脊髓匀浆诱导Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的价值,并观察其病理的改变。方法按脊髓重量与冰盐水体积之比为1:5的比例制备豚鼠脊髓匀浆抗原,免疫Wistar大鼠,建立EAE模型;组织切片进行HE染色,三色染色,髓鞘碱性蛋白(MBP)及神经微丝(NF)免疫组化,光镜下观察病理改变。结果Wistar大鼠免疫后第16.07±4.25天发病,发病形式多样,除表现EAE经典症状外,尚出现痉挛状态、斜颈等特殊症状。HE染色发现神经组织内炎细胞浸润,血管"袖套"样病灶形成;三色染色可见轴突肿胀,呈串珠状,且不连续,着色不均匀;髓鞘结构层次紊乱,疏松,崩解;MBP及NF免疫组化研究发现病变组织内白质脱髓鞘及轴突损伤。结论三色染色结合MBP、NF免疫组化检测,较常规HE染色更能直接地、准确地显示EAE大鼠的病理变化,可推广应用。