重组pIRES-AD7c-NTP质粒的构建表达及其对PC12细胞凋亡的影响

目的构建重组pIRES-AD7c-NTP质粒,探究其对PC12细胞凋亡的影响。方法构建pIRESAD7c-NTP重组质粒,通过脂质体体外转染至PC12细胞内,RT-PCR检测凋亡相关蛋白bcl-2和bax的mRNA表达变化含量变化。结果成功构建pIRES-AD7c-NTP重组质粒并转染至PC12细胞内;重组质粒转染组出现了明显的细胞凋亡,流式细胞仪检测出典型凋亡峰;重组质粒转染组中bcl-2表达低于对照组,bax表达高于对照组。结论 AD7c-NTP重组质粒转染组PC12细胞内bcl-2/bax表达异常,说明AD7c-NTP增加凋亡促进蛋白的表达、同时减少凋亡抑制蛋白的表达,可见AD7c-NTP可导致神经细胞发生凋亡,为后续研究提供实验基础。     

PSI诱导PC12细胞胞浆内胞核旁嗜酸性包涵体的形成及其演变过程

目的研究蛋白酶体抑制剂PSI诱导PC12细胞胞浆内嗜酸性包涵体的形成及演变过程。方法取进入对数生长期的PC12细胞，孵育24h后，加入PSI（终浓度10μmol／L），分别于给药后3、6、9、12、24、48、72、96、120h取出细胞并甩片固定，行HE染色及α—synuclein免疫组织化学染色，光镜下观察形态变化。结果HE染色：PSI作用6h后，PC12细胞胞浆呈现嗜伊红染色，胞体变大；至12h可见明显的嗜伊红聚集的核心；24h后，几乎所有的细胞都形成了核旁嗜伊红球状包涵体；其后，胞核及胞浆逐渐缺失，于120h仅余聚集的嗜伊红球状包涵体。免疫组化染色：PSI作用3h后，可见到散在于整个胞浆的α—synuclein免疫反应阳性颗粒；6h后，细胞明显增大，胞浆中颗粒增多；12h后，颗粒聚集更加明显，形成明显的聚集中心；24h后，几乎所有的细胞都形成了α—synuclein免疫反应阳性的球状包涵体；随时间延长，胞核及胞浆逐渐缺失，至120h仅见固缩的α—synuclein免疫反应阳性球状包涵体。结论PSI作用于PC12细胞，早期出现散在于胞浆中的嗜酸性和α—synuclein免疫反应阳性的点状颗粒，然后这些颗粒进一步在核旁聚集，形成聚集中心，最后形成固缩的包涵体．细胞外包涵体可独立存在。这种包涵体形成和演变过程与以人类PD为代表的神经变性疾病中的包涵体非常相似，可以作为研究包涵体相关问题的有力工具。     

PC12细胞基础状态氧化蛋白质表达谱

目的绘制基础状态下PC12细胞氧化蛋白质的表达谱,期望为以PC12细胞为模型的实验研究提供基本理论依据。方法采用2D凝胶电泳和westernblot技术相结合的方法获得氧化修饰的蛋白点,运用MALDI-TOF质谱鉴定出被氧化的蛋白质。结果PC12细胞总蛋白中共有91个蛋白点发生氧化修饰,运用MALDI-TOF质谱鉴定出19个氧化蛋白质。结论处于基础状态的PC12细胞存在蛋白质的氧化修饰,可以为病理条件下的氧化损伤研究提供可靠的参照系统。     

实验性有机磷中毒迟发性神经病的肌肉病理特点及地塞米松、三磷酸胞苷二钠对其治疗的效果

目的 探讨实验性有机磷中毒迟发性神经病(OPIDN)的肌肉病理变化特点及地塞米松、三磷酸胞苷二钠(CTP)对其治疗的效果.方法 给Leghorn产卵母鸡灌甲胺磷制作OPIDN模型,在染毒后分别用地塞米松(A组)、CTP(B组)及生理盐水(C组)肌肉注射.观察各组死亡数和行为表现;分别于染毒后1周、2周、3周、4周、8周末,取鸡小腿腓肠肌光镜和电镜下观察病理变化.结果 甲胺磷染毒后A组、B组、C组死亡数分别为4、4、2只,组间的差异无统计学意义(P＞0.05).染毒后经过1周的潜伏期,出现周围神经病的症状,A组、B组、C组步态异常数分别为3、4、4只,组间的差异无统计学意义.肌肉病变主要表现为散在分布的节段性肌纤维坏死,坏死区及肌间质大量吞噬细胞浸润.A组腓肠肌坏死面积百分比在第3周、4周、8周与C组相比差异有统计学意义(均P﹤0.05),第3周Ⅰ型纤维和Ⅱ型纤维等效直径与C组比较差异有统计学意义(均P﹤0.05).B组第3周腓肠肌坏死面积百分比及Ⅰ型纤维等效直径与C组比较差异有统计学意义(均P﹤0.05).结论 OPIDN可导致肌肉坏死,地塞米松和CTP有减轻肌肉损害、缩短恢复时间的作用,但二者都不能阻止肌肉病变发生.     

变异型毛细胞白血病并多发性肌炎

毛细胞白血病 (hair cell leukaem ia,HCL )是一种罕见的慢性 B淋巴细胞增生性疾病。进展较慢 ,存活期较长。合并多发性肌炎的更为少见 ,现将我们收治的 1例报道如下。1　临床资料患者 ,女 ,5 6岁 ,医生。 1997年因上呼吸道感染发现白细胞增加 ,伴有脾肿大 ,白细胞分类以淋巴细胞增多为著 ,骨髓中更为明显 ,淋巴细胞周边有毛状突起 (见图 1)。血片 ,骨髓片中均可见到。透射电镜可见毛状细胞 ,细胞表面有很多突起 ,粗约 0 .1～ 0 .5μm,长者达 1.5～ 2μm ,核卵圆形 ,有切迹 ,异染色质浓染、趋边 ,线粒体多分布在核周围 ,偶见高尔基复合体 …     

鸡甲胺磷中毒性神经肌病电生理测定及地塞米松干预研究

目的了解甲胺磷中毒迟发性神经病的电生理变化特点，探讨地塞米松对有机磷中毒迟发性神经病（OPIDN）的保护作用。方法莱亨母鸡随机分为3组，A组：不染毒；B组：染毒，盐水；C组：染毒，地塞米松治疗。甲胺磷经消化道染毒，从染毒后第2天开始B、C组分别每天给盐水和地塞米松1周（2ml／kg），染毒后1、2、3、4、周取鸡坐骨神经进行电生理检测。结果甲胺磷致迟发性神经病早期以轴索损害,为主（波幅降低），8继之出现脱髓鞘改变（运动神经传导速度减慢），但各组间比较差异无显著性，P〉0．05。结论（1）利用甲胺磷染毒莱亨鸡可成功构建迟发性神经病模型。（2）电生理检测阳性率高，且早于临床体征的出现，是诊断迟发性神经病的客观指标之一。（3）地塞米松不能防止OPIDN的发生。     

鱼藤酮对PC12细胞毒性作用的机制

目的：探讨鱼藤酮诱导PC12细胞毒性作用的可能机制，为神经防护药物的研发提供理论基础。方法：将培养的PC12细胞分为正常对照组和0.5μmol•L^-1鱼藤酮实验组，持续作用72 h，MTT法检测细胞存活率；Hoechst 33342检测细胞凋亡；提取实验组和对照组细胞的总蛋白，应用荧光差异凝胶电泳系统（DIGE）获得差异蛋白点的表达信息；通过MALDI-TOF 质谱鉴定差异蛋白点。结果：MTT法显示鱼藤酮实验组较正常对照组细胞存活率明显降低（P<0.01）；Hoechst 33342荧光染色显示鱼藤酮实验组可见较多凋亡细胞，表现为核边集、核固缩、核碎裂等特征性凋亡改变，其凋亡率明显高于对照组（P<0.01）。DIGE分析软件提示实验组点298的表达量高于对照组（P=0.004），点447的表达量低于对照组（P=0.009 5）。通过质谱分析和数据库检索，鉴定为纽蛋白和线粒体顺乌头酸酶。结论：纽蛋白和线粒体顺乌头酸酶参与细胞损伤，可能成为神经防护药物作用的靶点。     

PC12细胞人工合成蛋白酶体抑制剂的诱导性包含体：6个26S蛋白酶体亚基可能具有蛋白质组学特征

细胞质内被称为路易(小)体(Lewy bodies, LBs）的蛋白质性包含体是帕金森病的主要病理特征,26S蛋白酶体内存于LBs内,但是其存在形式可能是单个亚基或是完整复合体,为了广泛地揭示10 µmol/L人工合成蛋白酶体抑制剂（proteasomal inhibitor,PSI）作用大鼠嗜铬细胞瘤细胞（PC12细胞）48小时后富集在PSI诱导性包含体中的26S蛋白酶体亚基,通过生物化学分级分离（biochemical fractionation）,双向电泳（two-dimensional electrophoresis）和肽质量指纹鉴定（identification via peptide mass fingerprints,PMF)的蛋白质组学方法,我们从PSI诱导性包含体中鉴定了蛋白酶体β5、26S蛋白酶体ATP酶2,26S蛋白酶体ATP酶5、26S蛋白酶体ATP酶6、26S蛋白酶体非ATP酶11和26S蛋白酶体非ATP酶13等6个26S蛋白酶体亚基.这一结果提示当PC12细胞发生蛋白酶体抑制时至少6个26S蛋白酶亚基可能被富集到PSI诱导性包含体中.     

鸡甲胺磷中毒迟发性神经病的病理特点及神经电生理变化

目的：了解鸡甲胺磷中毒迟发性神经病的周围神经与肌肉不同时间病理变化特点及其与神经电生理检查结果的关系。方法：50只Leghorn鸡,甲胺磷经消化道染毒,阿托品保持度过急性期,染毒后分别在第1、2、3、4、8周末取腓总神经、腓肠肌、坐骨神经检测。结果：腓总神经第2周末出现髓鞘轻微改变,第3、4周末出现部分神经纤维变性﹑髓鞘深染、轴索肿胀,第8周明显好转;腓肠肌坏死在第3、4周最为明显;电生理检测坐骨神经波幅在染毒后1周有明显降低,第8周恢复正常。结论：电生理检查可早期发现病变,肌肉及神经的病理改变可作为判定预后的指标。     

朊蛋白与分子伴侣

朊蛋白病又称传染性海绵状脑病(transmissiblespongiform encephalopathies,TSEs),是一类人畜共患的致死性神经退行性疾病,包括人类的克雅氏病(Creutzfeldt-Jacob disease,CJD)、格斯特曼氏综合征(Gerst mann-Straussler-Scheinker disease,GSS)、致死性家族型失眠症(fatal familialinsomnia,FFI)等疾病,牛的海绵状脑病(bovine spongiformencephalopathies,BSE)、羊的瘙痒病(scrapie)等〔1〕。朊蛋白是引起该病的原因,是一种目前为止尚未完全明确生理功能的感染因子〔2〕。细胞内存在的朊蛋白是由大约250个氨基酸组成的蛋白质,N末…