miR-221通过作用DVL2影响前列腺癌细胞系的侵袭功能

目的 评价miR-221在前列腺癌细胞系中表达的变化对其神经内分泌样转化及其侵袭功能的影响.方法 以Northern blot检测LNCaP和LNCaP-AI两种前列腺癌细胞系中7种microRNA的表达变化;细胞转染法检测在雄激素剥夺环境中LNCaP和LNCaP-AI细胞系中miR-221的作用;CCK-8法检测细胞在不同阶段的生长增殖水平;Transwell法检测转染细胞的侵袭能力;qRT-PCR和Western blot检测转染的细胞中神经元特异性烯醇化酶(NSE)及dishevelled-2(DVL2)表达的变化.结果 与雄激素依赖性前列腺癌(AD-PC)的细胞系LNCaP相比,miR-221在雄激素非依赖性前列腺癌(AIPC)的细胞系LNCaP-AI中明显高表达.通过转染使miR-221在LNCaP细胞系中高表达可促进细胞的NSE表达,加速其神经内分泌样分化.而在LNCaP-AI细胞系中下调miR-221水平则会升高靶基因DVL2的表达水平,并增强LNCaP-AI细胞的迁移和侵袭能力.结论 该实验证实在AIPC和ADPC细胞系中miR-221存在表达差异.miR-221可促进前列腺癌细胞的神经内分泌样转化,这可能是导致前列腺癌雄激素非依赖转化的重要原因.MiR-221可通过作用DVL2调节晚期前列腺癌细胞的转移和侵袭.     

微小RNA-221作用蓬乱蛋白2影响前列腺癌细胞系的侵袭功能研究

目的:探讨微小RNA-221(microRNA-221,miR-221)在前列腺癌细胞系中的表达,对神经内分泌样(NE)转化及其侵袭功能的影响.方法:以Northern blot检测雄激素依赖性前列腺癌(LNCaP) 细胞系,雄激素非依赖性前列腺癌(LNCaP-AI) 细胞系中miRNA的表达;细胞转染法检测在雄激素剥夺环境中LNCaP和LNCaP-AI细胞系中miR-221的作用;细胞增殖检测法检测细胞在不同阶段的生长增殖水平;Transwell法检测转染细胞的侵袭能力;定量逆转录聚合酶链反应和Western blot检测转染细胞中神经元特异性烯醇化酶及蓬乱蛋白2 (DVL2)表达的变化.结果:与LNCaP相比,miR-221在 LNCaP-AI中明显高表达.通过转染使miR-221在LNCaP中高表达可促进细胞的神经元特异性烯醇酶的表达,加速NE转化.而在LNCaP-AI中下调miR-221水平可增强靶基因DVL2的表达,并增强LNCaP-AI的迁移和侵袭能力(P<0.01).结论:LNCaP和LNCaP-AI中miR-221表达有差异.miR-221可促进前列腺癌细胞的NE转化,可能是导致前列腺癌雄激素非依赖转化的重要原因.MiR-221可通过作用DVL2调节前列腺癌细胞的转移和侵袭.     

雄激素受体在前列腺癌细胞激素非依赖转化中的表达及调控

目的：研究雄激素受体(androgen receptor, AR)在激素依赖性前列腺癌（androgen dependent prostate can cer, ADPC）细胞系LNCaP转化成激素非依赖性前列腺癌(androgen independent prostate cancer, AIPC)过程中的表达变化,以及其受Wnt信号通路和蛋白酶体降解通路调控的机制。方法：应用活性炭滤过的低激素胎牛血清培养LNCaP细胞,得到雄激素非依赖的LNCaP亚系LNCaP-AI（androgen independent）细胞。应用细胞增殖试验检测LNCaP-AI的细胞生长曲线。应用Western blot、RT-PCR分析激素依赖性转化过程中的AR、前列腺特异抗原（prostate specific antigen,PSA）的表达变化。在AIPC细胞中,应用Wnt信号通路阻滞剂IWR-1及蛋白酶体通路抑制剂乳胞素（lactacystin）处理细胞,观察Wnt信号通路和蛋白酶体信号通路对AR mRNA及蛋白表达的影响。结果：在体外低激素环境中生长6个月后,LNCaP细胞变成雄激素非依赖性的LNCaP亚系LNCaP-AI。表现为对雄激素依赖性减弱,细胞增殖加快,PSA的表达增高。在转化为LNCaP-AI的过程中,AR mRNA水平短期上调,后恢复到原始水平,但蛋白水平一直处于下调趋势。 IWR-1处理的LNCaP-AI,AR mRNA及蛋白的表达下调。乳胞素处理的LNCaP-AI,AR mRNA无变化而蛋白表达上调。结论：在体外前列腺癌细胞由激素依赖性向非依赖性转化的过程中, AR mRNA表达仅有一过性增高,而蛋白表达呈现明显的下降趋势。进一步研究发现,Wnt信号通路和蛋白酶体通路可能对AR的蛋白表达有调控作用。Wnt信号通路的抑制或蛋白酶体信号通路的增强可能是AR蛋白表达下调的原因。     

雄激素非依赖性前列腺癌LNCaP-AI细胞亚系模型的建立

目的利用雄激素递减法建立雄激素非依赖性前列腺癌(AIPC)细胞亚系模型LNCaP-AI。方法利用活性炭/葡聚糖处理的血清模拟去雄激素环境培养LNCaP细胞,逐渐递减培养基中雄激素10 d,然后在无雄激素环境中继续培养6个月,培养出能够在无雄激素环境中生长的LNCaP-AI细胞亚系。采用MTT和ELISA法检测LNCaP-AI细胞在去雄激素环境下的增殖能力和前列腺特异性抗原(PSA)的水平。结果 LNCaP细胞在去雄激素环境培养初期生长缓慢,细胞形态呈神经内分泌样改变,经过6个月的连续无雄激素培养,细胞恢复以前的形态和生长。MTT检测表明LNCaP-AI细胞能够在去雄激素环境中生长,通过ELISA检测PSA的分泌提示LNCaP-AI细胞能够在去雄激素环境中恢复分泌PSA的功能。结论激素递减法成功的建立了AIPC细胞亚系模型LNCaP-AI,利用该模型能够模拟前列腺癌由雄激素依赖发展为雄激素非依赖的过程。     

microRNA-148a对前列腺癌细胞系LNCaP神经内分泌分化的影响

目的探讨microRNA(miRNA)-148a对前列腺癌细胞系LNCaP神经内分泌分化的影响。方法采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)验证miRNA-148a在雄激素依赖性与雄激素非依赖性前列腺癌细胞系中的差异表达。采用miRNA-148a及其抑制物(anti-miRNA-148a)改变LNCaP细胞中miRNA-148a的表达量,观察LNCaP细胞神经内分泌分化的差异程度,并检测神经内分泌分化标志物神经元特异性烯醇化酶(NSE)的差异表达。结果 LNCaP-AI细胞中的miRNA-148a相对表达量显著低于LNCaP细胞(P<0.05)。下调miRNA-148a在LNCaP细胞中的表达量,可明显促进LNCaP细胞神经内分泌分化。结论 miRNA-148a可以抑制LNCaP细胞的神经内分泌分化,可能成为前列腺癌生物治疗的新靶点。     

miRNA-29c抑制前列腺癌细胞系LNCaP的增殖和侵袭

目的观察miRNA-29c(miR-29c)对前列腺癌细胞系LNCaP增殖和侵袭能力的影响,探讨其潜在的应用价值。方法采用qRT-PCR观察雄激素依赖性(LNCaP)与雄激素非依赖性(LNCaP-AI)前列腺癌细胞中miR-29c的表达差异;采用miR-29c抑制物(anti-miR-29c)下调LNCaP细胞中miR-29c的表达量,绘制LNCaP细胞生长曲线,利用流式细胞仪测定细胞周期;Transwell侵袭实验分析miR-29c抑制前后LNCaP细胞的体外侵袭能力。结果 qRT-PCR显示LNCaP-AI细胞中miR-29c水平明显低于LNCaP细胞(P<0.05);下调LNCaP细胞中miR-29c的表达量,可明显促进LNCaP细胞体外增殖及侵袭能力(P<0.05)。结论 miR-29c的正常表达有利于抑制LNCaP细胞的体外增殖和侵袭,有望成为前列腺癌生物治疗的潜在靶点。     

活化的STAT3蛋白质抑制剂PIAS3在前列腺癌中的表达及意义

目的 比较活化的STAT3蛋白质抑制剂(PIAS3)在人雄激素依赖性前列腺癌(ADPC)和雄激素非依赖性前列腺癌(AIPC)中的表达情况,探讨其表达与前列腺癌发生雄激素非依赖的关系.方法 应用cDNA芯片技术筛选出AIPC中的上调基因PIAS3.分别用免疫组织化学、Western印迹及半定量RT-PCR技术检测PIAS3在ADPC和AIPC组织及细胞系中的差异表达.结果 (1)基因芯片结果显示PIAS3基因在ADPC和AIPC中表达有显著性差异,在AIPC中明显高表达.(2)半定量RT-PCR显示PIAS3mRNA在AIPC细胞中的表达水平高于ADPC细胞.(3)Western印迹结果显示:PIAS3蛋白质在AIPC细胞系中表达水平显著高于ADPC细胞系.(4)免疫组化检测结果显示PIAS3在前列腺癌中表达阳性,在AIPC中PIAS3阳性表达率明显高于ADPC,两者差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PIAS3的表达水平和前列腺癌的雄激素依赖情况相关,在AIPC中表达水平显著高于ADPC.提示PIAS3基因对雄激素受体的调节发挥了重要作用,使前列腺癌细胞在无雄激素的条件下继续增殖,可能是雄激素非依赖发生的关键.     

雄激素非依赖性前列腺癌细胞亚系模型LNCaP-AI的建立

目的:建立雄激素非依赖性前列腺癌细胞亚系模型LNCaP-AI.方法:长期在去雄激素的血清环境下培养雄激素依赖性LNCaP细胞,培养出能够适直无雄激素环境的LNCaP-AI细胞亚系.MTT、RT-PCR、免疫荧光方法观察LNCaP-AI细胞在无雄激素环境下的增殖能力和表达及分泌前列腺特异性抗原(PSA)的水平.结果:LNCaP前列腺癌细胞在无雄激素中培养3个月后逐渐适应了无雄激素的环境,成为雄激素非依赖的LNCaP-AI细胞亚系.LNCaP-AI细胞在无雄激素的环境下迅速增殖,能够分泌PSA,但其PSA mRNA的表达水平是正常生长LNCaP细胞的44%.结论:成功构建雄激素非依赖性前列腺癌细胞亚系模型LNCaP-AI,可以模拟前列腺癌由雄激素依赖发展为雄激素非依赖的过程.     

雄激素依赖性和雄激素非依赖性前列腺癌差异膜抗原的筛选

目的:探讨雄激素依赖性和非依赖性前列腺癌细胞差异表达膜蛋白的筛选方法。方法:提取雄激素依赖性前列腺癌(androgen dependent prostate cancer, ADPC) 细胞株LNCaP 和雄激素非依赖性前列腺癌(androgen independentprostate cancer, AIPC) 细胞株PC-3 膜蛋白作为抗原,采用免疫共沉淀方法,与ADPC 和AIPC 患者的血清各3 例交叉孵育,行Western 印迹检测,比较、识别杂交后差异表达蛋白条带,串联质谱分析鉴定,细胞免疫荧光和组织免疫组织化学方法验证。结果:共获得11 个差异表达的膜蛋白(Neural-Cadherin precursor,ER60 precursor, Claudin-4 等);细胞免疫荧光结果显示Claudin-4 在LNCaP 和PC-3 细胞存在明显差异,在ADPC 组织中阳性表达率(34.3%) 低于AIPC 组织中阳性表达率(72.4%, P<0.05)。结论:本研究所采用的方法筛选前列腺癌差异表达膜蛋白具有可行性;Claudin-4 可能在雄激素非依赖性前列腺癌的发生和发展中发挥重要的作用。     

雄激素非依赖性前列腺癌发生机制的研究进展

在我国,前列腺癌的发病率和病死率逐年上升。早期前列腺癌为雄激素依赖性前列腺癌(ADPC),且大多数前列腺癌患者起初对内分泌治疗有效,但经过14~30个月治疗后,ADPC逐渐变为对内分泌治疗无效的雄激素非依赖性前列腺癌(AIPC)。AIPC的形成机制非常复杂,目前尚未阐明,大体涉及肿瘤的异质性、雄激素受体变异、分泌环路形成、基因突变以及信号转导通路的改变和前列腺癌肿瘤干细胞等。     

前列腺癌细胞核内雄激素受体靶基因的筛选

目的筛选雄激素依赖性前列腺癌（PC）和雄激素非依赖性PC细胞核内的雄激素受体靶基因。方法取雄激素依赖性PC细胞株LNCaP和雄激素非依赖性PC细胞株LNCaP-AI进行培养,使用染色质免疫共沉淀技术在全基因组水平上筛选LNCaP、LNCaP-AI细胞中的雄激素受体结合位点,联合高通量测序技术寻找雄激素受体靶基因。采用RT-PCR法检测并比较LNCaP、LNCaP-AI细胞中雄激素受体差异靶基因表达水平。结果LNCaP、LNCaP-AI细胞中分别发现9021、4949个基因组测序数据富集区域,其中4143、2380个落在雄激素受体结合位点,将这些位点定位到基因组后分别得到2796、1854个雄激素受体相关基因（相同的基因有789个）。多数靶基因集中在肌动蛋白细胞骨架的调节、紧密连接、血管平滑肌收缩信号通路;LN-CaP与LNCaP-AI细胞的差异靶细胞通路为黏着斑通路。从LNCaP与LNCaP-AI细胞测序得到的雄激素受体差异靶基因中筛选出富集程度较高的雄激素受体差异靶基因2个,即LIFR、PSMA6。LNCaP-AI细胞中LIFR、PSMA6mRNA表达水平均明显高于LNCaP细胞（均P＜0.05）。结论LIFR、PSMA6为PC细胞核内雄激素受体靶基因。     

前列腺癌细胞激素非依赖性转化过程中microRNA的差异化表达

目的 对比观察雄激素依赖前列腺癌细胞(LNCaP)与雄激素非依赖前列腺癌细胞(LNCaP-AI)中microRNA的表达差异,探讨前列腺癌激素依赖向非依赖转化的转录后调控机制.方法 利用Agilent基因芯片检测LNCaP及LNCaPAI细胞microRNA的表达,用RT-PCR方法对其中6个microRNA进行验证,并对差异表达的microRNA所调控靶基因功能进行生物信息学分析.结果 基因芯片检测发现:与LNCaP相比,LNCaP-AI细胞有27个microRNA表达降低,11个microRNA表达升高.对其中6个microRNA进行RT-PCR验证,结果与基因芯片结果一致.通过检索http://www.mirbase.org/针对microRNA调控的靶基因,并参考已知的与雄激素非依赖相关基因的功能,发现LNCaP细胞转化为激素非依赖的LNCaP-AI细胞过程中,差异表达的microRNA主要调控表皮生长因子受体(EGFR)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、Bcl-2及雄激素相关代谢酶.结论 前列腺癌激素非依赖转化过程中存在microRNA的差异表达,可能涉及雄激素受体(AR)旁路信号通路、金属酶、抗凋亡基因及雄激素相关代谢酶基因等.     

激素递减法成功建立雄激素非依赖性LNCaP细胞亚系

目的:利用激素递减法对LNCaP细胞进行去雄环境培养,建立雄激素非依赖的LNCaP细胞(LNCaP-AI)亚系并予以鉴定.方法:利用活性炭处理的血清培养模拟去雄细胞环境,逐步递减培养基中激素10 d,后完全在非雄培养,共连续培养3个月,直到LNCaP细胞重新进入快速生长期,利用CCK-8法、放免法、RT-PCR法分别测定细胞生长曲线、PSA及雄激素(AR)表达情况.结果:LNCaP细胞在激素递减后,生长缓慢,呈神经内分泌样改变和成簇生长,经过共3个月的连续非雄培养,细胞重新恢复以前的形态及生长.CCK-8测定提示LNCaP-AI细胞能够在去雄环境中生长,放免法提示LNCaP-AI细胞能够在去雄环境中恢复分泌PSA功能,RT-PCR方法提示LNCaP-AI细胞显著高表达AR.结论:激素递减方法可以3个月左右有效地建立雄激素非依赖的LNCaP细胞亚系.     

IL-6调节miR-21在激素抵抗性前列腺癌中的机制研究

目的检测转染微核糖核酸-21抑制剂（miR-21-inhibitor）前后前列腺癌细胞PC3在不同白细胞介素-6（IL-6）浓度下微核糖核酸-21（miR-21）的表达情况,细胞的增殖能力及雄激素受体（AR）,转录信号诱导和激活者3（STAT3）水平。分析IL-6和miR-21在前列腺癌非依赖性进程中的作用及意义。方法通过RT-PCR检测不同IL-6浓度培养下非依赖性细胞系PC3在转染miR-21前后miR-21的表达情况。通过CCK-8检测转染前后细胞的增殖能力。通过western blot检测不同IL-6浓度培养下PC3细胞AR,STAT3的表迭情况。结果转染miR-21能显著的抑制前列腺癌细胞miR-21的表达量,并抑制前列腺癌细胞的增殖。IL-6在短期促进PC3细胞的增殖,并且诱导miR-21的高表达。IL-6短期能够诱导PC3细胞系AR,STAT3高表达。结论IL-6在非依赖性前列腺癌的进展中起重要作用,长期培养下IL-6对前列腺癌细胞系的作用需要进一步研究。miR-21与前列腺癌的恶性程度及依赖性相关,在前列腺癌的非依赖性进程中起重要作用,miR-21有希望成为非依赖性前列腺癌的一个潜在治疗靶点。IL-6可以诱导miR-21高表达,AR,STAT3在这-通路中起重要作用。     

雄激素调控前列腺癌中PTTG1表达的研究

目的:阐明雄激素与前列腺癌中雄激素应答基因PTTG1(pituitary tumor transforming gene 1)表达的关系.方法:选择基因芯片筛选的大鼠前列腺雄激素应答基因PTTG1,应用Northern Blot检测其在去势大鼠补充雄激素Mib(Mibolerone)前后在前列腺组织中的表达.应用免疫组化检测PTTG1在人前列腺癌组织中的表达,进一步以Northern Blot检测雄激素依赖性前列腺癌细胞系LNCaP及雄激素非依赖性前列腺癌细胞系 PC3和DU145中PTTG1的表达情况.结果:PTTG1在去势7 d的大鼠前列腺组织中没有表达,而补充Mib 2 d后即有显著的表达;PTTG1主要表达于人前列腺癌上皮细胞;0.1 nmol/L Mib作用48 h可显著上调LNCaP细胞PTTG1的表达;与LNCaP细胞比较,PC3和DU145中PTTG1的基础表达水平更高.结论:雄激素可显著上调大鼠前列腺组织及人前列腺癌细胞中PTTG1的表达,提示PTTG1可能在人前列腺癌的发生、发展中发挥重要的作用.     

人前列腺不同生长发育期雄激素受体表达变化

目的检测雄激素受体(AR)在人前列腺不同生长发育时期表达的变化,探讨它们变化的病理意义。方法采用免疫组化两步法检测10例胎儿前列腺(EP)、10例正常前列腺(NP)、20例前列腺增生(BPH)、20例雄激素依赖性前列腺癌(ADPC)和15例激素非依赖性前列腺癌(AIPC)组织的AR表达。结果 EP细胞浆和细胞核均有AR表达,且间质细胞AR表达先于腺上皮AR表达。NP组织的AR表达主要集中在上皮细胞核,与EP相比,基底细胞和间质细胞AR表达明显减少,而BPH组织的腺上皮细胞和间质细胞均有AR的较强表达。AR在前列腺癌(Pca)的表达位于癌细胞核,AIPC的AR表达比ADPC明显增强。结论 AR表达的变化与人前列腺不同生长发育时期和前列腺癌的发生发展密切相关。     

TCP1-β在雄激素非依赖性前列腺癌细胞增殖中的作用

目的:探讨TCP1-β在雄激素非依赖性前列腺癌细胞(AIPC)增殖中的作用?方法:选择雄激素依赖性的前列腺癌细胞系LnCap和雄激素非依赖性的前列腺癌细胞系PC3作为模型,用不含酚红的培养基和活性炭吸附过的血清培养LnCap和PC3细胞,检测其对雄激素的依赖性;采用RNA干扰(RNAi)技术抑制PC3-Ad和LnCap细胞的TCP1-β表达,Q-PCR?Western blot方法检测TCP1-β的表达变化;MTT方法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡情况;并用生物信息学方法探讨可能参与TCP1-β调控AIPC增殖的信号通路?结果:① 撤除雄激素后,LnCap细胞增殖受到显著抑制,而PC3细胞增殖未受明显影响;② 转染TCP1-β的siRNA后,PC3-Ad和LnCap细胞的TCP1-β表达受到显著抑制(P = 0.002,P = 0.006);③ PC3-Ad的TCP1-β表达受到显著抑制后,细胞的增殖受到抑制(P = 0.015),但是细胞没有出现明显凋亡;TCP1-β表达抑制对LnCap 细胞的增殖和凋亡都没有产生显著影响;④TCP1-β可能参与了PI3K/Akt信号通路对AIPC增殖的调控作用?结论:TCP1-β过表达可能参与了AIPC细胞的增殖调控?     

前列腺癌中EphA1基因表达的初步研究

目的:检测前列腺癌中EphA1基因转录及受体表达水平,探讨其表达异常的机制及其临床意义。方法:利用RT-PCR法检测雄激素依赖性前列腺癌细胞系LNCaP和雄激素非依赖性前列腺癌细胞系PC-3中EphA1基因mRNA表达情况,采用甲基化特异性PCR(MSP)方法进行甲基化状态分析;用免疫组化方法检测19例前列腺癌和22例良性前列腺组织标本中EphA1受体表达情况。结果:LNCaP和PC-3细胞中均未检测到EphA1基因转录;PC-3细胞中EphA1基因启动子区内CpG岛存在高甲基化现象,而LNCaP细胞则不存在;前列腺癌和良性前列腺增生组织中EphA1受体表达率分别为36.8%和45.5%,其差异无统计学意义(P>0.05)。结论:前列腺癌细胞LNCaP和PC-3中无明显EphA1基因表达,甲基化可能是导致该基因下调的机制之一。EphA1基因的甲基化在前列腺癌进展及由雄激素依赖向雄激素非依赖转化过程中可能发挥一定作用。     

雄激素依赖性和非依赖性前列腺癌雄激素受体表达水平的变化

目的:从雄激素受体表达水平变化的角度,探讨雄激素依赖性前列腺癌向雄激素非依赖性前列腺癌转化的可能机理。方法:体外培养雄激素依赖性前列腺癌细胞株(LNCaP细胞)和雄激素非依赖性前列腺癌细胞株(PC-3细胞),应用流式细胞术测定两种细胞株在生理盐水和二氢睾酮(DHT)作用下雄激素受体(AR)的表达水平。结果:两种细胞株均有AR表达,两种条件下AR的表达水平分别为:LNCaP细胞生理盐水处理组85.99±4.97,DHT处理组93.74±3.63;PC-3细胞生理盐水处理组8.52±1.57,DHT处理组9.52±1.75,两种条件下LNCaP细胞的AR表达水平均高于相应条件下PC-3细胞的AR表达水平,两者有显著性差异(P<0.05)。DHT作用下LNCaP细胞的AR表达水平显著高于生理盐水作用下LNCaP细胞的AR表达水平(P<0.05);DHT作用下PC-3细胞的AR表达水平与生理盐水作用下PC-3细胞的AR表达水平无显著性差异(P>0.05)。结论:雄激素依赖性前列腺癌细胞过表达AR,并且二氢睾酮能促进其表达AR;雄激素非依赖性前列腺癌细胞AR表达较少,二氢睾酮对其AR表达无明显作用,雄激素依赖性前列腺癌向雄激素非依赖性前列腺癌转化可能与前列腺癌雄激素受体表达水平下降有关。     

染料木黄酮通过PI3K/AKT途径抑制雄激素非依赖性LNCaP细胞

目的 利用LNCaP细胞建立去势抵抗前列腺癌细胞模型,研究染料木黄酮(GEN)对去势抵抗前列腺癌细胞生长的影响及可能的机制.方法 在无激素的血清环境下长时间培养LNCaP细胞,获得稳定生长的雄激素非依赖性 LN-CaP前列腺癌细胞,并鉴定细胞.以不同浓度的 GEN(0、6. 25、12. 5、25、50、100、200 μmol/L)分别作用于雄激素依赖性LNCaP和雄激素非依赖性LNCaP细胞24、48、72 h ,利用CCK-8法检测细胞增殖活性,Western blot法检测前列腺特异性抗原(PSA)、P53抑癌基因、细胞周期蛋白(Cyclin D1)、增殖细胞核抗原( PCNA)在雄激素非依赖LNCaP细胞中的表达水平. Western blot法检测其对PI3K/AKT信号通路的调节作用.结果 GEN对雄激素非依赖性LNCaP细胞增殖具有明显的抑制作用,并呈剂量、时间依赖关系. Western blot显示雄激素非依赖性前列腺癌细胞内PCNA、Cyclin D1随着GEN浓度的增加逐渐下调,P53随着GEN浓度的增加逐渐上调(P＜0. 05). GEN抑制了PI3K和AKT的磷酸化.结论 GEN可以在体外抑制雄激素非依赖性LNCaP细胞的增殖,其作用可能是通过抑制PI3K/AKT信号通路,进而抑制细胞增殖实现的.