复方参七汤在人结肠癌细胞株裸鼠肝转移中的应用

目的 :建立人结肠癌细胞株裸鼠肝转移模型 ,研究复方参七汤对裸鼠肝转移的影响。方法 :对 2 4只BAL B/ C裸鼠 ,经脾脏注入指数生长期的人结肠癌 (低分化腺癌 )细胞悬液 (L s174 t) 0 .1ml,含细胞数 1× 10 6个 ,切除脾脏 ,分成实验组和对照组各 12只。实验组每天喂以含 0 .6 ml/ 2 0 g体重复方参七汤颗粒饲料 ,对照组裸鼠喂以颗粒饲料 ,记录裸鼠体重、神志、摄食。喂养 3周后 ,抽取各组裸鼠心脏血后处死 ,观察腹腔内肿瘤生长情况 ,检查肝转移癌灶数目 ,挖出各个癌结节并称重。标本作病理组织学检查 ,同时采用免疫组化 (SP)方法检测肿瘤转移抑制基因 nm2 3H1- NDPK表达 ;采用巢式逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)法 ,检测裸鼠血中 CK2 0 m RNA表达。结果 :(1)建立人结肠癌细胞株裸鼠肝转移模型 ,肝转移率 10 0 %。病理组织学证实肝转移癌细胞具有人结肠癌 (低分化腺癌 )特征。 (2 )实验组裸鼠实验前后体重增长 4 .12± 0 .5 3g,明显高于对照组 3.2 1± 0 .5 9g(P<0 .0 5 )。 (3)实验组裸鼠肝转移癌结节的数目 2 .4 2± 0 .99个 ,明显低于对照组 4 .17± 1.99个 (P<0 .0 5 )。(4 )实验组裸鼠肝转移癌重 6 3.6 7± 2 1.2 9m g,明显低于对照组 94 .32± 37.86 m g(P<0 .0 5 )。 (5 )实验组裸鼠肝转移癌重 /肝重     

人结肠癌细胞裸鼠肝转移模型及其血中CK20mRNA表达的研究

目的 :建立人结肠癌裸鼠肝转移模型 ,检测血中 CK2 0 m RNA表达 ,应用于结肠癌肝转移的防治研究。方法 :BAL B/ C裸鼠 12只 ,腹腔内注射戊巴比妥钠麻醉 ,经脾脏注入指数生长期的人结肠癌低分化腺癌细胞悬液( L S174 t) 0 .1m l,含细胞数 1× 10 6 个 ,切除脾脏 ,喂养 2 0天后 ,建立人结肠癌裸鼠肝转移模型。随后 ,心脏采血检测血中 CK2 0 m RNA表达 ,处死裸鼠观察腹腔内肿瘤生长和肝转移癌灶数目及大小 ,作病理组织学检查。采用巢式逆转录聚合酶链反应 ( RT- PCR)法 ,检测裸鼠血中 CK2 0 m RNA表达。结果 :12只裸鼠均建立人结肠癌裸鼠肝转移模型 ,无1只死亡。初期活跃如常体形无改变 ,10天后裸鼠出现消瘦、精神差 ,摄食量减少。裸鼠尸解肝脏表面均有灰白色转移癌结节形成 ,其它脏器未发现转移癌灶。病理组织学示肝转移癌灶具有人结肠癌低分化腺癌特征。血中 CK2 0 m RNA均阳性表达。结论 :经脾脏注入 L S174 t细胞悬液可建立人结肠癌裸鼠肝转移模型 ,裸鼠血中 CK2 0 m RNA阳性表达 ,证实血中存在着结肠癌细胞 ,是形成肝转移灶的条件。     

人结肠癌肝转移裸鼠肝组织中端粒酶逆转录酶的表达

目的 建立人结肠癌HT-29裸鼠肝转移模型,检测肝脏组织中人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达.方法 Balb/c裸鼠30只,腹腔内注射戊巴比妥麻醉,经脾脏注入人结肠癌HT-29细胞悬液,并切除脾脏,建立裸鼠肝转移模型.处死动物后观察肿瘤生长情况,并作病理学检查;采用RT-PCR方法检测裸鼠肝脏组织中hTERT mRNA的表达.结果 30只裸鼠均发生人结肠癌肝转移,肝转移率100%,病理学证实肝转移发生,肝脏组织中hTERT mRNA表达阳性.结论 脾种植HT-29细胞建立人结肠癌裸鼠肝转移模型,肝脏组织中hTERT mRNA阳性表达,提示hTERT在结肠癌肝转移早期诊治中的意义.     

人结肠癌肝转移裸鼠肝组织中端粒酶逆转录酶的表达

目的建立人结肠癌HT-29裸鼠肝转移模型,检测肝脏组织中人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达。方法Balb/c裸鼠30只,腹腔内注射戊巴比妥麻醉,经脾脏注入人结肠癌HT-29细胞悬液,并切除脾脏,建立裸鼠肝转移模型。处死动物后观察肿瘤生长情况,并作病理学检查;采用RT-PCR方法检测裸鼠肝脏组织中hTERT mRNA的表达。结果30只裸鼠均发生人结肠癌肝转移,肝转移率100%,病理学证实肝转移发生,肝脏组织中hTERTmRNA表达阳性。结论脾种植HT-29细胞建立人结肠癌裸鼠肝转移模型,肝脏组织中hTERTmRNA阳性表达,提示hTERT在结肠癌肝转移早期诊治中的意义。     

血管生成抑制剂联合放射治疗大肠癌肝转移模型

目的观察血管生成抑制剂联合放射治疗对大肠癌肝转移模型的治疗作用。方法采用BALB/cAnude裸小鼠,LS174T人大肠癌细胞株,脾脏切除脾脏种植法建立裸鼠大肠癌肝转移模型。并给予血管生成抑制剂2-ME及放射治疗,观察肝转移生长抑制及肿瘤组织微血管生成的抑制作用。结果脾切除脾脏种植法建立大肠癌肝转移模型的成功率达100%;种植后4周2-ME联合放射治疗组肝转移灶平均重量53.6±4.7 mg,而对照组为173.9±11.6 mg;微血管密度分别为8.4±1.7和41.2±6.3。结论2-ME联合放射治疗对肝转移灶的生长产生明显的抑制作用,抑制肿瘤微血管的形成是其有效性的机制之一。     

复方参七汤对胃、结直肠癌抑制作用的实验研究

目的:研究复方参七汤治疗胃、结直肠癌的作用机制。方法:(1)复方参七汤对人胃癌细胞的体外抑制实验;(2)对MNNG诱发大鼠腺胃癌的体内抑制诱癌率实验;(3)对裸鼠结肠癌肝转移的体内抑制实验。结果:(1)复方参七汤对人胃癌BGC-823细胞株半数杀伤浓度(LC50)为0.048g/ml,随药物浓度增高,杀伤作用亦增强;半数抑制浓度(IC50)为0.007g/ml,随药物浓度增高,抑制有丝分裂指数逐渐减小,而抑制细胞集落形成亦增大;(2)复方参七汤对MNNG诱发大鼠腺胃癌发生率明显降低,实验组为6.9%(3/43)显著低于对照组58.9%(23/39),(P<0.01);对MNNG诱发大鼠腺胃癌组织中PCNA和CyclinD1阳性表达明显降低,实验组为13.88%(5/36)和22.86%(8/35),显著低于对照组75.76%(25/33)和62.86%(22/35),(P<0.01);(3)复方参七汤对人结肠癌LS174t细胞株接种裸鼠肝转移的肝转移数、肝转移癌重和肝癌重/肝重明显降低,实验组为2.42±0.99,63.67±21.29和8.90±3.10,显著低于对照组4.17±1.99,94.32±37....     

两种大肠癌细胞株小鼠肝转移模型的建立及比较

目的 建立人、鼠大肠癌细胞肝转移动物模型,为研究大肠癌肝转移机制及筛选、评估抗转移药物提供工具.方法 选取鼠大肠癌细胞株CT26和人大肠癌细胞株LoVo,分别接种于Balb/c小鼠及裸鼠脾脏内,观察其成瘤情况、肝脏转移率及生存期,并对两种模型进行初步比较.结果 两种细胞株均能复制出大肠癌肝转移动物模型,病理结果证实肝转移肿瘤符合典型的低分化腺癌特征.CT26细胞在免疫功能完整的小鼠体内,仍具有良好的成瘤性和转移率,较LoVo细胞建立的裸鼠肝转移模型转移率更高,成瘤时间更短.结论 成功复制出两种人鼠大肠癌细胞株肝转移动物模型,均能较好模拟大肠癌体内肝转移过程.     

大肠癌患者手术期间门静脉血中癌细胞CK20mRNA的检测及意义

目的:研究手术刺激对大肠癌患者门静脉血中癌细胞的影响。方法:应用RT-PCR技术,检测82例大肠癌患者术前和术后门静脉血中CK20mRNA的表达。结果:手术前54.9%的患者CK20mRNA表达阳性,CK20mRNA阳性检出率与Dukes分期、淋巴结转移、肝转移存在差别有显著性。手术后门静脉血中有76.8%的患者CK20mRNA表达阳性,较术前阳性表达明显增多(P<0.005)。结论:门静脉血液中癌细胞的存在是大肠癌的一种常见的早期事件,手术刺激可增加肿瘤细胞向门静脉血中释放。     

脾切除法建立裸小鼠人结肠癌肝转移模型

为建立大肠癌根治术后肝转移动物模型,在裸小鼠脾内注入人结肠癌细胞,５ｍ ｉｎ 后切除脾脏。术后第３０ 天发现肝转移率为１００％ ,肝外其它脏器未见转移结节,组织学证实肝转移结节为低分化腺癌。结果表明本法可成功地建立裸小鼠人结肠癌肝转移模型     

结直肠癌肝转移临床与实验的防治研究

目的 :降低结直肠癌根治术后肝转移发生率 ,提高结直肠癌根治术的疗效。方法 :(1)实验研究 :经脾脏注入 L s174 t细胞株脾切除法 ,建立人结肠腺癌 L s174 t细胞株接种裸鼠肝转移模型 ;检测实验组和对照组裸鼠肝转移癌灶数目、癌重及癌重 /肝重和肝转移组织中 nm 2 3- H1 表达。 (2 )临床研究观察组为结直肠癌根治术 +门静脉插管化疗4 8例 ,其中长期服用中药 5例 ;对照组为结直肠癌根治术 4 6例 ,比较术后肝转移发生率和生存率。结果 :(1)观察组裸鼠实验前后体重增长值 (4 .12± 0 .5 3g)明显高于对照组 (3.2 1± 0 .5 9g) ,P<0 .0 5。实验组裸鼠肝转移癌结节的数目 (2 .4 2± 0 .99个 )、癌重 (6 3.6 7± 2 1.2 9m g)及癌重 /肝重 (8.9%± 3.1% )均明显低于对照组 (4 .17± 1.99个 ) ,(94 .32± 37.86 m g)及 (13.2 %± 5 .3% ) ,P<0 .0 5。观察组裸鼠肝转移 nm2 3- H1 - NDPK阳性表达率为 6 6 .6 7%明显高于对照组16 .6 7% ,P<0 .0 5。 (2 )观察组结直肠癌根治术后肝转移发生率 12 .5 0 % ,明显低于对照组 34.78% (P<0 .0 5 )。观察组结肠癌根治术后 3、5年生存率分别为 87.5 0 %和 79.17% ,明显高于对照组的 6 7.39% ,5 2 .17% (P<0 .0 5 )。结论 :根治性切除结直肠癌是主要的防治方法 ;门静脉插管化     

人结肠癌裸鼠原位移植瘤模型的建立

目的 建立人结肠癌裸鼠原位移植瘤模型.方法 使用对数生长期的人结肠癌细胞(lovo)在8只裸鼠结肠浆膜至黏膜逐层注射,以完成原位移植瘤模型的制备,同时皮下种植8只裸鼠作为对照组.分别于第4、6、8、12周各组分别处死裸鼠2只,观察原位种植肿瘤的成瘤率、生长情况、转移率和腹水出现率.结果 16只裸鼠实验期间无1只死亡,成瘤率为100%, 原位种植成瘤率为100%(8/8),区域淋巴结转移率100%(8/8),肝转移率为100%(8/8),肺脏转移率为75.0%(6/8),腹膜转移率为75.0%(6/8),腹水出现率为27.5%(3/8).皮下种植组未见转移.结论 本实验成功建立了人结肠癌裸鼠原位移植瘤模型,该模型的生物学行为与临床病程非常相似,为研究人结肠癌转移机制和干预措施提供了较为理想的动物模型.     

Pyk2对人类结肠癌细胞肝转移能力及超微结构的影响

目的:研究在裸鼠结肠癌肝转移模型中,富含脯氨酸的蛋白酪氨酸激酶2(proline-rich tyrosine kinase 2,Pyk2)对人结肠癌细胞肝转移能力和超微结构的影响。方法:利用正义及反义cDNA技术,在人结肠癌细胞系SW480基础上,构建Pyk2高表达的细胞系SW480-Pyk2+及低表达的细胞系SW480-Pyk2-作为实验组,并以转染空载体的细胞系SW480-vector和原细胞系SW480作为对照组。4组共32只4周龄的Babl/c nu/nu雄性裸鼠,用脾注射保留脾脏法构建裸鼠肝转移瘤模型。6周后处死裸鼠,用Western blot检测瘤细胞中Pyk2蛋白的表达,计数肝转移瘤数目,电子显微镜下观察肝转移瘤细胞的超微结构。结果:6周后裸鼠肝转移模型建立成功,Western blot显示SW480-Pyk2+组的蛋白表达量明显高于空载体组(SW480-vector)和SW480组,SW480-Pyk2-组的蛋白表达量明显低于SW480组和SW480-vector组;肝转移瘤计数显示SW480-Pyk2+组明显少于SW480-vector组及SW480组,SW480-Pyk2-组明显多于SW480-vector组及SW480组(P<0.05),而SW480-vector组与SW480组之间无明显差异;电子显微镜下观察发现,SW480-Pyk2+组细胞连接发育较成熟,有形成腺腔趋势,微绒毛较多,细胞器较多,粗面内质网较多,细胞异型性较轻;而SW480-Pyk2-组细胞连接发育不良,细胞器少,微绒毛短小而稀疏,细胞核异形明显,有核沟。结论:Pyk2能减少结肠癌肝转移灶的数量,改善细胞的异型性和细胞连接发育,并可能通过此机制抑制肿瘤转移。     

卡介苗联合DC-CIK细胞对裸鼠结肠癌生长及肝转移的抑制作用

目的研究卡介苗联合树突状细胞（DC）及细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）对BALB/c裸鼠结肠癌肝转移的抑制作用。方法 60只BALB/c裸鼠腹腔内注射人结肠癌细胞株SW480建立结肠癌肝脏转移模型,随机分为对照组、DC-CIK组、卡介苗联合DC-CIK组（联合组）,每组20只。联合组建模后第2天,鼠尾静脉注射卡介苗（12.5 mg/kg）,隔日1次,共15次,并注射DC-CIK细胞免疫治疗,每周2次,共8次,DC-CIK组只注射DC-CIK细胞,对照组注射等量生理盐水。建模后30 d处死裸鼠,测量各组裸鼠原发灶的大小、肝转移瘤的数量,运用细胞角蛋白-18（CK-18）免疫组化单克隆抗体检测转移瘤组织来源;检测肿瘤转移灶的凋亡指数（AI）、肿瘤转移灶微血管密度（MVD）和血清血管内皮细胞生长因子（VEGF）浓度。结果各组脾脏的原发灶体积平均数分别为：对照组1.272 cm^3,DC-CIK组1.096 cm^3,联合组0.859 cm^3;与DC-CIK组、对照组比较,联合组脾脏原发灶体积明显缩小（P均〈0.05）。各组肝转移肿瘤为结肠腺癌CK-18（＋）;联合组肝转移瘤数量明显少于对照组和DC-CIK组（P均〈0.05）。联合组肿瘤转移灶AI高于DC-CIK组、对照组（P均〈0.05）,血清VEGF浓度、MVD计数均明显低于DC-CIK组、对照组（P均〈0.05）。结论卡介苗联合DC-CIK细胞或单独应用DC-CIK细胞均能明显抑制裸鼠结肠癌生长及肝转移,但卡介苗联合DC-CIK细胞的肿瘤抑制效果更好。     

131I标记抗CEA单抗预防人结肠癌肝转移的实验研究

目的 探索早期应用＾１３１Ｉ标记惮朱癌肝转移的可行性。方法 在建立人结肠腺癌习肝转移后，于１５ｍｉｎ、１０、２０ｄ经尾静注射＾１３１Ｉ标记抗ＣＥＡ单抗，于放射免疫疗法后４周和裸鼠死亡时，检查肝转移癌的数目、大小、瘤重、组织不和生存期。结果早期治疗组的肝转移癌数目、大小和瘤重均明显减小，瘤结节内有明显坏死，生存期延长。结论 早期应用＾１３１Ｉ标记抗ＣＥＡ单抗能有效地抑制肝转移癌的形成。     

CK20 mRNA在大肠癌患者外周血中阳性表达的临床意义

目的：研究大肠癌患者外周血中CK20 mRNA的阳性表达可作为肿瘤细胞血行播散的标志，探讨CK20 mRNA阳性表达与肿瘤病理指标的关系，观察大肠癌患者手术前、后外周血中CK20 mRNA表达的变化情况。方法：采用巢式逆转录多聚酶链反应（RT－PCR）的方法，对大肠癌42例、原发性肝细胞肝癌5例、对照组（非癌肿）10例患者手术前、后不同时间外周血中肿瘤细胞的靶基因CK20 mRNA表达进行检测。结果：对照组（非癌肿）10例及原发性肝细胞肝癌5例手术前、后外周血中CK20 mRNA均为阴性表达。大肠癌组42例，手术前外周血中CK20 mRNA阳性表达率为50．0％（21／42），手术后48h外周血中CK20 mRNA阳性表达率为59．5％（25／42）。大肠癌患者外周血中CK20 mRNA的阳性表达率与肿瘤细胞病理分化程度无关，与Dukes分期、淋巴结转移、远处转移有关。结论：大肠癌患者外周血中CK20 mRNA的阳性表达可作为肿瘤细胞血行播散的标志，有助于判断大肠癌的预后及鉴别原发性肝细胞肝癌和大肠癌肝转移。手术操作会促使肿瘤细胞向血液中播散，手术过程中应加强预防措施以减少癌细胞的播散。     

血管生成抑制剂联合分化诱导剂治疗结肠癌肝脏转移的实验研究

目的:实验通过建立人LOVO细胞结肠癌裸鼠肝脏转移瘤模型,研究血管生成抑制剂(TNP-470)联合分化诱导剂(RA)抗结肠癌转移的效应,二者是否具有协同效果.方法:建立人LOVO细胞结肠癌裸鼠肝脏转移瘤模型,随机分为4组,模型建立后分组治疗,至治疗结束时处死裸鼠,检测肝脏转移率和肝转移结节数及肝脏转移瘤组织中血管内皮生...     

E-cad在低位直肠癌淋巴结转移裸鼠模型血清及移植瘤中的表达及其意义

目的探讨裸鼠低位直肠癌淋巴结转移模型血清及移植瘤组织中E-钙黏蛋白(E-cad)的表达情况,分析其在直肠癌淋巴结转移过程中的作用。方法取对数生长期的人大肠癌细胞株SW480接种于裸鼠直肠黏膜下,建立裸鼠低位直肠癌淋巴结转移模型。120只裸鼠随机分为3组,每组40只,A组(直肠癌模型组)采用二甲基肼注射+SW480种植,B组(二甲基肼对照组)采用二甲基肼注射,C组(空白对照组)不作任何处理。采用ELISA检测血清E-cad的含量,采用Western blot法、RT-PCR法检测种植瘤组织中E-cad蛋白及mRNA表达水平。结果A组裸鼠的血清E-Cad含量为(19.48±1.25)mg/L,明显高于B组裸鼠和C组裸鼠的血清E-Cad含量(2.36±0.18mg/L和2.15±0.12 mg/L)(t=8.28,9.01,P0.05)。发现侧方淋巴结转移的裸鼠血清E-Cad含量,明显高于未发现侧方淋巴结转移的裸鼠,差异有显著性(t=10.28,P0.05)。A组裸鼠移植瘤组织中E-Cad蛋白的表达强度弱于B组和C组(t=9.81,7.69,P0.05)。A组中,有侧方淋巴结转移发生的裸鼠移植瘤组织中E-Cad蛋白表达强度较未有侧方淋巴结转移发生的裸鼠移植瘤组织中表达明显减弱,差异有显著性(t=9.36,P0.05)。A组裸鼠移植瘤组织中E-Cad mRNA表达明显下调,与B组和C组比较,有明显的差异(P0.05)。A组中发现侧方淋巴结转移的裸鼠移植瘤组织中E-Cad mRNA表达强度明显下调,与未发现侧方淋巴结转移的裸鼠比较,差异有显著性(t=7.85,P0.05)。结论血清E-cad的表达水平可能与直肠癌淋巴转移密切相关,同时直肠癌组织中E-Cad蛋白和mRNA表达减弱或缺失,导致癌细胞间粘附性降低,促进癌细胞获得侵袭和转移的能力。     

TNP-470和MMC联合应用对鼠结肠癌生长和肝转移的作用

目的：研究O-(氨乙酰-氨甲酰基)烟曲霉醇（TNP-470）和丝裂霉素（MMC）联合应用对结肠癌生长和肝转移的抑制作用。 方法：建立裸鼠结肠癌的原位生长和肝转移模型,随机分为对照组、TNP-470组、MMC组及联合用药组（TNP-470+MMC）。 结果：4个组瘤重分别为(499±247)、(478±180)、(275±80)和（255±65）mg,肝转移率分别为87.5%、25.0%、75.0%和12.5%,与对照组比较联合用药组抑制作用最明显（P<0.01）,且治疗后各组裸鼠活动良好,无明显体重减轻。 结论：TNP-470与MMC联合应用对结肠癌的生长及肝转移的抑制有协同作用,且未加重TNP-470引起的体重减轻等毒副作用。