一种新家兔症状性蛛网膜下腔出血模型的建立

目的 建立新的家兔症状性蛛网膜下腔出血模型。方法 采用单侧颈动脉结扎后枕大池二次注血的方法制成兔蛛网膜下腔出血（SAH）模型。实验分为4组,即正常对照组（N组）、结扎右侧颈总动脉组（L组）、枕大池二次注血组（SAH组）、结扎后枕大池二次注血组（L-SAH组）。观察并比较各组动物神经功能改变、基底动脉经颅多普勒超声血流速度变化以及基底动脉和海马形态学变化。结果 SAH组和L-SAH组均出现了神经功能症状,SAH组较轻,L-SAH组较重且持续时间长。SAH组和L-SAH组枕大池二次注血后血流速度均明显加快,根据平均血流速度计算的基底动脉痉挛程度：SAH组在二次注血后1d、3d、7d分别为32.70±5.81、21.29±7.98、4.21±6.55;而L-SAH组为29.97±6.37、21.51±10.25、12.40±7.46。结论 兔单侧颈动脉结扎后枕大池二次注血可制成症状性蛛网膜下腔出血模型,可用于研究SAH后神经功能损害及药物干预。     

两种蛛网膜下腔出血动物模型的CTA比较

目的探讨多排螺旋cT血管造影对兔蛛网膜下腔出血（SAH）诱发迟发性脑血管痉挛（DCVS）两种动物模型的效果。方法兔枕大池二次注血蛛网膜下腔出血模型（A组）与症状性蛛网膜下腔出血模型（B组）各20只,分别于1d、4d、7d、11d、14d行CTA检查,测量其血管痉挛程度。结果枕大池二次注血模型血管痉挛在注血后4d达到高峰,14d开始缓解,通过CTA测量血管直径了解痉挛程度。结论两种模型比较,CTA测量枕大池二次注血模型中血管痉挛的变化可靠、微创,为研究蛛网膜下腔出血后迟发性脑血管痉挛提供了确实可靠的动物模型和观察手段。     

微透析法观察蜕皮甾酮对家兔蛛网膜下腔出血的作用

目的通过微透析的方法,观察蛛网膜下腔出血(SAH)后家兔海马内能量物质和谷氨酸的含量变化,了解蜕皮甾酮(EDS)对其干预的效果。方法 30只家兔分为5组,即结扎右侧颈总动脉组(L组)、结扎后枕大池二次注血组(L-SAH组)、结扎后枕大池二次注血尼莫地平治疗组(Nim/SAH组)、结扎后枕大池二次注血蜕皮甾酮(1 mg/kg,4/d)治疗组(EDS/SAH 1 mg组)、结扎后枕大池二次注血蜕皮甾酮(3 mg/kg,4/d)治疗组(EDS/SAH 3 mg组)。比较观察微透析所测得的各组家兔海马SAH前后葡萄糖、丙酮酸、乳酸、谷氨酸的含量变化。结果乳酸/丙酮酸比值(L/P)在SAH后有上升趋势。SAH后3 d时EDS/SAH 3 mg组右侧海马组织间液中L/P较其它组低(P<0.05)。谷氨酸的含量在SAH后也明显增高,10 d时达高峰。Nim/SAH组1 d和3 d右侧海马组织间液谷氨酸含量较L-SAH组降低(P<0.05),在SAH后1 d和3 d EDS/SAH 3 mg组较L-SAH组和Nim/SAH组也明显降低(P<0.01)。结论蜕皮甾酮能减轻家兔SAH后海马组织能量代谢的紊乱和谷氨酸的堆积。     

辛伐他汀对兔蛛网膜下腔出血后迟发性脑血管痉挛中血管壁增殖的影响

目的 探讨辛伐他汀对兔蛛网膜下腔出血(SAH)后迟发性脑血管痉挛(CVS)中血管壁增殖的影响.方法 36只新西兰大白兔随机分为3组:①对照组,常规饲养并枕大池二次注入0.9%生理盐水;②SAH组,通过二次枕大池注血建立SAH模型;③辛伐他汀+SAH组,每日胃灌辛伐他汀5 ms/kg,连续7 d后建立SAH模型.各组兔模型前后行两次脑血管造影.灌注后取基底动脉组织制作病理切片,分别于光镜和透射电镜下观察其显微以及超微结构.采用免疫组化及免疫荧光方法检测基底动脉组织中增殖细胞核抗原(PCNA)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达量的变化,同时采用Real-Time PCR检测其血小板源性生长因子-B(PDGF-B)基因表达量的变化.采用SPSS10.0软件进行统计分析.结果 通过脑血管造影可以观察到二次注血后兔基底动脉出现明显的痉挛,管径变细;而给予辛伐他汀后,痉挛减轻.SAH组兔基底动脉壁略有增厚,电镜显示平滑肌细胞内合成旺盛;而给予辛伐他汀预处理后这些变化明显减轻.SAH组兔基底动脉管壁平滑肌细胞内α-SMA、PCNA、PDGF-B表达明显高于对照组(P＜0.05),而给予辛伐他汀后三者表达量明显降低(P＜0.05).结论 辛伐他汀可能通过抑制迟发性CVS中血管壁平滑肌细胞的增殖来缓解SAH后迟发性CVS.     

NF-κB圈套防治兔SAH后CVS的实验研究

目的 研究NF-κB圈套寡核苷酸对SAH后脑血管痉挛(CVS)的防治作用.方法 利用兔枕大池二次注血模型,在二次注血前枕大池分别注入NF-κB诱骗寡核苷酸、乱序寡核苷酸与脂质体的混合物,利用DSA测定兔基底动脉直径,了解CVS的情况,并以常规HE染色、免疫组化和原位杂交等方法观察兔基底动脉管壁形态以及NF-κB在管壁上的表达.结果 统计学结果显示,NF-κB诱骗寡核苷酸组血管狭窄的程度、形态学改变以及NF-κB在管壁上的表达较乱序寡核苷酸组和对照组明显减轻.结论 NF-κB圈套作为一种新的治疗模式,对CVS的防治有良好的效果.     

川芎嗪对实验性SAH后CVS防治作用的研究

目的研究兔症状性蛛网膜下腔出血(SAH)后脑血管痉挛(CVS)与内皮素(ET)和一氧化氮(NO)的关系及川芎嗪的保护作用.方法采用双侧颈动脉结扎和枕大池二次注血制成兔SAH模型,观察SAH前后动物进食量和神经功能改变,用放射免疫方法和硝酸还原酶法分别测定血液和脑脊液中ET和NOx-含量,以氢清除法测定局部脑血流量(rCBF).结果SAH后大部分动物进食量有不同程度的下降,所有动物均有不同程度的神经功能障碍和rCBF下降.SAH后血液和脑脊液中ET含量增加,NOx-含量下降(P＜0.01).上述变化随出血时间延长和出血量的增大而增加.川芎嗪治疗组上述变化均有不同程度的改善.结论双侧颈动脉结扎后枕大池二次注血可制成可靠的兔症状性SAH后CVS的动物模型.兔SAH后ET和NO含量的改变与CVS的发生密切相关,并进而导致临床症状的恶化.川芎嗪可通过抑制SAH后ET和NO的变化而对CVS的发生和发展起到防治作用.     

蛛网膜下腔出血大鼠基底动脉血小板源性生长因子的表达变化

目的探讨血小板源性生长因子(PDGF)在大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后脑血管痉挛(CVS)血管壁的表达及关系。方法将30只大鼠按照枕大池二次注血的方法建立模型,然后分别于建立模型后的1 d、3 d、5 d、7 d、14 d将大鼠处死,取出基底动脉制作石蜡切片在光镜下观察。采用免疫组化法检测大鼠基底动脉血管壁PDGF的表达水平。结果模型组中PDGF在基底动脉血管壁上的表达,3 d和5 d组最明显,与脑血管痉挛程度的变化是一致的。结论通过枕大池二次注血能够成功的模拟SAH后CVS的发生。PDGF参与了SAH后CVS的过程,并可能起了重要的作用。     

实验性SAH后CVS与ET、NO的关系

目的　研究兔症状性蛛网膜下腔出血（SAH）后脑血管痉挛（CVS）与内皮素（ET）和一氧化氮（NO）的关系。方法　采用双侧颈动脉结扎和枕大池二次注血法制成兔SAH模型，观察SAH前后动物进食量和神经功能改变，用放射免疫方法和硝酸还原酶法分别测定血液和脑脊液中ET和NOx     

上胸段硬膜外阻滞与尼莫地平减轻兔脑血管痉挛作用的比较

目的比较上胸段硬膜外阻滞（HTEB）减轻兔蛛网膜下腔出血（SAH）后脑血管痉挛（CVS）的作用是否优于尼莫地平。方法切开置管法制备HTEB模型的新西兰兔60只,按随机数字表法随机分成4组（n=15）：假手术组、对照组）、HTEB治疗组和尼莫地平治疗组。＂枕大池二次注血法＂（0.5ml/kg）制成兔SAH模型,1、7和14d后用经颅多普勒检测基底动脉平均血流速度（Vm）。处死后取基底动脉,光镜下观察其形态学变化。结果与假手术组相比,对照组、HTEB治疗组和尼莫地平组的基底动脉Vm均明显升高（P〈0.01）;但HTEB治疗组和尼莫地平组的基底动脉Vm明显低于对照组（P〈0.05）,而两治疗组差异无统计学意义（P〉0.05）。光镜下,对照组基底动脉管壁增厚、管腔变窄;两治疗组管壁增厚不明显,管腔仍有狭小,较对照组明显改善;两治疗组之间血管壁变化无明显差异。结论 HTEB减轻兔SAH后CVS的程度与尼莫地平相当。     

钾离子通道激动剂对蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的作用

目的 观察早期使用不同剂量特异性钾离子通道激活剂对蛛网膜下腔出血（SAH）后脑血管痉挛（CVS）的作用。方法 将24只雄性新西兰白兔随机等分为4组：①对照组：枕大池注入生理盐水；②SAH组；③SAH＋小剂量钾离子通道激活剂Cromakalin组（0．1mg／kg）；④SAH＋大剂量Cromakalin组（0．3mg／kg）。采用枕大池注血法建立兔SAH模型，1h后开始静脉输注Cromakalin，每12h给药1次，共4次。注血后48h采用灌注固定法处死动物动物，留取基底动脉标本，通过测定基底动脉血管横截面积来评价CVS的程度。结果 基底动脉横截面积测定的结果提示SAH组较对照组明显缩小（P〈0．01），而SAH＋小剂量Cromakalin组及SAH＋大剂量Cromakalin组均较SAH组痉挛明显改善（P〈0．05）。结论 早期使用特异性钾离子通道激活剂Cromakalin能改善兔SAH模型的基底动脉血管痉挛。     

上胸段硬膜外阻滞对兔蛛网膜下腔出血后急性期脑血管痉挛的预防作用

目的建立兔的上胸段硬膜外阻滞（HTEB）模型和蛛网膜下腔出血（SAH）模型，探讨HTEB对SAH后脑血管痉挛（CVS）的预防作用。方法用切开置管法制备HTEB模型的新西兰兔30只，随机分为3组（n=10）：正常组、对照组（单纯SAH）和实验组（HTEB＋SAH）。采用枕大池穿刺一次注血法（0．5ml／kg）制成兔SAH模型。1d后用经颅多普勒检测兔基底动脉血流速度（Vm）。处死后取基底动脉，光镜下观察其形态学变化。结果与正常组相比，对照组和实验组的基底动脉Vm均明显升高（P〈0．05或〈0．01）；但实验组的基底动脉Vm则明显低于对照组（P〈0．05）。在光镜下，对照组基底动脉管壁收缩、管腔变窄，实验组变化程度轻于对照组。结论HTEB可以减轻兔SAH后急性CVS的程度。     

细胞色素C在兔蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛中的作用

目的 观察兔蛛网膜下腔出血(SAH)后基底动脉细胞色素C(Cyt-C)的表达规律,以探讨其在细胞凋亡中的作用及与脑血管痉挛(CVS)的关系.方法 36只新西兰大白兔随机分为对照组(6只)和SAH组(30只).SAH组采用枕大池二次注血法建立兔CVS模型,对照组行枕大池二次注入生理盐水.应用苏木精-伊红染色观察基底动脉形态学变化,TUNEL法检测基底动脉上细胞凋亡情况,免疫组化检测基底动脉内皮细胞和平滑肌细胞的Cyt-C表达.结果 对照组基底动脉结构正常,偶见凋亡细胞和Cyt-C表达.SAH组基底动脉出现相应病理学改变,管腔狭窄呈双相期改变;基底动脉上细胞凋亡和Cyt-C表达均在SAH后增多,于第7天达高峰,第10天逐渐下降.与对照组比较,SAH组内各时间点基底动脉直径和Cyt-C表达差异均有统计学意义(P<0.05).结论 兔CVS模型的基底动脉中存在细胞凋亡,Cyt-C是启动细胞凋亡的重要因素,在CVS发生和发展过程中起重要作用.     

大鼠蛛网膜下腔出血后MMP-9在基底动脉壁中的表达变化

目的探讨大鼠蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage,SAH）后基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在基底动脉壁中的表达变化及其与脑血管痉挛（Cerebral Vasospasm,CVS）的关系。方法健康成年雄性SD大鼠51只,并随机分为正常组、对照组和SAH组,应用枕大池一次注血法制成SAH动物模型,对照组和SAH组大鼠在SAH后1 d,3 d,5 d,7 d,14 d时间点通过HE染色光镜下观察基底动脉的病理学变化,测定血管壁厚度及血管腔内径,以此评价脑血管痉挛;应用免疫组化法评估大鼠基底动脉管壁中MMP-9在不同时间点的表达水平。结果 HE染色显示SAH组基底动脉管腔狭窄,管壁增厚,3 d时最明显,之后狭窄程度渐减轻,14 d时基本正常;SAH后基底动脉壁MMP-9表达增加,表达高峰为注血后3～5 d,随后开始下降,14 d恢复正常。结论大鼠SAH存在明确的CVS,SAH后MMP-9在基底动脉壁中的表达上调,并与CVS的时相一致,提示MMP-9可能参与了CVS的病理过程。     

兔蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛与脑细胞外液相关性实验研究

目的探讨蛛网膜下腔出血(SAH)后脑血管痉挛的脑代谢变化规律及其与脑血管痉挛程度的相关性。方法 16只成年新西兰白兔随机分为:枕大池2次注生理盐水组(NS组)8只,枕大池2次注血组(SAH组)8只。两组均采用微透析仪于注血(或生理盐水)前、后第1,3,5,7天检测脑细胞外液的葡萄糖、乳酸、丙酮酸、谷氨酸及天冬氨酸的浓度,并计算乳酸与丙酮酸(L/P)比值。经颅多普(TCD)测定两组兔基底动脉血流速度;DSA测定两组兔基底动脉直径。结果与注血前相比,SAH组注血后各指标均有不同程度变化。基底动脉直径显著缩小及血流速度明显增快均于第3天开始(P0.05),并于第5天达高峰;且轻度和中度脑血管痉挛血流速度与管径呈负相关(γ轻=0.673,P0.01;γ中=0.613,P0.01)。乳酸和L/P比值均于第1天明显升高(P0.05),第5天达高峰;且与基底动脉直径变化呈负相关(γ乳酸=0.624,P0.01;γL/P=0.713,P0.01)。谷氨酸第1天显著升高(P0.05),后急剧下降。结论 TCD可通过检测血流速度变化判断兔脑血管痉挛情况,但痉挛程度的判断存在局限性。脑细胞外液乳酸和L/P比值变化可预测兔脑血管痉挛的发生并判断其痉挛程度。     

基底动脉中Caspase3、8的表达与蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的关系

目的探讨天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3、8(Caspase3、8)在蛛网膜下腔出血(SAH)后在基底动脉中的表达及其与脑血管痉挛的关系。方法新西兰大白兔36只,随机分成对照组(n=6)和实验组(n=30),后者再随机分为SAH后1、3、5、7、10d等5个亚组,每亚组各6只。采用枕大池二次注血法建立SAH模型,应用免疫组化和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP原位切口末端标记法分别检测基底动脉内皮细胞Caspase3、8表达和凋亡。结果凋亡细胞在实验组SAH后第1天出现,第7天凋亡水平达到最高。实验组Caspase3、8表达水平明显高于与对照组(P<0.05)。Caspase3、8的表达在SAH后第1天就可观察致到,第5天和第7天出现强烈表达,第l0天表达明显减弱。结论本结果提示在兔脑血管痉挛的基底动脉中存在细胞凋亡;Caspase3、8可能参与了SAH后脑血管痉挛的发生和发展。     

降钙素基因相关肽与内皮素受体A在兔实验性蛛网膜下腔出血后脑组织表达的对照研究

目的探讨降钙素基因相关肽(CGRP)和内皮素受体A(ETRA)在蛛网膜下腔出血(SAH)后脑组织中的表达情况及意义。方法日本大耳白家兔45只,随机分为SAH模型组(20只),盐水对照组(15只),穿刺对照组(5只),空白对照组5只。采用枕大池2次注血法制作SAH的动物模型,并进行CGRP和ETRA的免疫组化染色,观察CGRP和ETRA的免疫表达。结果CGRP和ETRA免疫阳性标记在SAH组模型均有表达,CGRP阳性细胞在1h时少量表达,3～7d时表达明显,其中5d时最显著,10d时阳性细胞表达已经减少,但未达到正常水平。SAH模型组ETRA主要表达在神经元和胶质细胞胞浆内,建模后1h时染色较淡;3d时染色最强烈;5d时染色较3d弱,此后染色逐渐变淡。结论SAH后脑组织CGRP和ETRA的表达增强,并呈现明显的动态改变,但两者的变化趋势并不同步;CGRP和ETRA可能在延迟性神经功能障碍的发生与发展中起重要作用。     

尼莫地平对蛛网膜下腔出血大鼠额叶转化生长因子-β1表达的影响

目的：探讨尼莫地平对蛛网膜下腔出血（SAH）大鼠额叶转化生长因子-β1（TGF—β1）表达和血管痉挛的影响。方法：枕大池二次注血法制作SAH模型。54只成年健康雄性SD大鼠随机分为对照组（n=6）、SAH组（n=24）和尼莫地平处理组（n=24），其中SAH组和尼莫地平处理组随机均分为1、3、5和7d等4组（n=6）。尼莫地平处理组于二次注血后30min时经股静脉注入尼莫地平2mg／kg，此后每天经腹腔注射尼莫地平2mg／kg。HE染色光镜下观察基底动脉病理学变化，测定内径；免疫组化法检测各组大鼠额叶TGF—β1表达。结果：SAH组和尼莫地平处理组基底动脉内径显著小于对照组（P〈0．01），而SAH组与尼莫地平处理组无显著差异。SAH1d时，TGF—β1表达增加，3d时达高峰，5d和7d时显著低于1d和3d时（P〈0．01），但仍照著高于对照组（P〈0．01）。与SAH组相比，尼莫地平处理组1d和3d时TGF-β1表达无显著差异，5d和7d时显著增加。结论：SAH后额叶TGF—β1表达发生改变，与脑血管痉挛有关，提示TGF-β1参与了脑血管痉挛的病理学过程。尼莫地平可能通过增加SAH后啮组织中TGF-β1表达对缺血脑组织起着保护作用。     

三种方法制作大鼠蛛网膜下腔出血模型

目的探讨三种方法制作大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)模型的应用价值。方法分别采用颈内动脉穿刺法(PIC)、枕大池2次注血法(ACM)和交叉前池注血法(APC)制作大鼠SAH模型。观察不同模型的病死率、蛛网膜下腔血液分布及含量、脑血管痉挛程度及持续时间、伴发脑水肿、血-脑屏障(BBB)通透性等方面的改变。结果三种方法均成功制作SAH模型。病死率:PIC为46.2%,ACM为25.0%,APC为11.1%。血管痉挛高峰时间:PIC与APC均为第2天,第3～5天恢复正常;ACM为第5天,持续7 d。蛛网膜下腔血液量:ACM为(240.50±25.38)lμ,APC为(172.15±25.45)μl;PIC模型变异大,为60～520 lμ,平均(267.12±45.86)μl。PIC模型脑水肿最重,ACM与APC模型脑水肿相对较轻。PIC模型造成严重的BBB通透性损害,另两组损害程度相近。结论三种方法制成的模型适用于研究SAH不同病理生理改变的需要。PIC脑水肿重,病死率高,适用于SAH后脑损害的机制研究;ACM脑血管痉挛的时间特征与人SAH后血管痉挛接近,适用于血管痉挛的机制研究;APC血液恒定分布于前循环,病死率低,...