Prx 1高表达对人PC3前列腺癌细胞氧化损伤的作用

目的:探讨过氧化物还原酶1(Prx 1)表达增加对人肿瘤细胞抗过氧化氢毒性作用的影响。方法:构建Prx 1真核表达质粒,稳定转染培养的人PC3前列腺癌细胞,用Western blot检测Prx 1在稳定转染PC3细胞中的表达,用MTT法观察细胞的存活率。结果:Western blot分析表明,Prx 1真核表达质粒稳定转染的PC3细胞表达Prx 1显著增加;MTT分析表明,在过氧化氢浓度为0.25、0.5、1和2 mmol.L-1时,Prx 1稳定转染的PC3细胞存活率显著增加。结论:Prx 1高表达显著增强人PC3前列腺癌细胞抗过氧化氢毒性作用。     

注射用脑蛋白水解物对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞增殖与氧化损伤的影响

目的：探讨注射用脑蛋白水解物对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞的增殖与过氧化氢氧化损伤的影响。方法：采用MTT法,观察不同浓度的注射用脑蛋白水解物对体外培养的大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞（PC12）生长及过氧化氢损伤保护的作用。结果：注射用脑蛋白水解物对PC12细胞的增殖及氧化损伤的保护作用存在量效关系。结论：注射用脑蛋白水解物可促进PC12细胞生长,并可保护细胞减轻过氧化氢的损伤。     

Aβ25-35诱导PC12细胞周期紊乱及对P53和Cyclin D1基因表达的影响

目的:探讨Aβ25-35诱导体外去血清培养的PC12细胞周期变化及对P53和Cyclin D1基因表达的影响。方法:PC12细胞同步于G0期,采用终浓度为0-45μmol/L或浓度为25μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞,用MTT比色法分析细胞存活率;流式细胞仪检测分析细胞周期的改变;RT-PCR和Western blot从mRNA及蛋白水平检测P53和Cyclin D1基因的变化。结果:随着Aβ25-35剂量的增加,PC12细胞存活率降低(P<0.01);流式细胞仪分析表明去血清培养24 h可使约90%PC12细胞停滞于G0/G1期,25μmol/L Aβ25-35诱导组8,16,24 h与对照组比较,S期百分率明显增加(P<0.01),16 h后细胞凋亡率明显增加(P<0.01),可见明显的亚二倍体峰(Ap峰);P53 mR-NA表达和P53蛋白表达降低、Cyclin D1 mRNA表达和Cyclin D1蛋白表达增高。结论:Aβ25-35降低去血清培养的PC12细胞存活率,诱导同步化于G0/G1的PC12细胞重新进入细胞周期,并阻滞于S期,同时出现凋亡,可能与下调P53的表达,上调Cyclin D1的表达有关。     

PTEN基因调控Raf-1磷酸化对前列腺癌PC3细胞凋亡的影响

目的探讨PTEN基因表达通过调控Raf-1磷酸化对前列腺癌PC3细胞凋亡的影响。方法 FTS和MK2206 2HCl分别抑制Ras和AKT,PTEN基因过表达和干扰后检测Raf-1磷酸化水平并观察前列腺癌PC3细胞光镜下形态变化、MTT检测细胞活力、流式细胞仪测定细胞凋亡率以及Western blot检测Bax、Bcl-2、Caspase-8、Caspase-9、 Caspase-12和Caspase-3表达水平,分析PTEN基因的不同表达和Raf-1磷酸化水平与PC3细胞凋亡的关系。结果与对照组相比,PTEN基因过表达后,Raf-1磷酸化水平降低,PC3细胞变形、体积缩小、细胞核固缩,细胞活力降低,细胞凋亡率增加,凋亡蛋白Caspase-8、Caspase-9、Caspase-12、Caspase-3以及促凋亡蛋白Bax表达量增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达量降低(P<0.01); PTEN基因干扰表达减低后,Raf-1磷酸化水平增强,PC3细胞形态和数目变化无显著差异,细胞活力和细胞凋亡率变化无显著差异,凋亡蛋白Caspase-8、Caspase-9、Caspase-12、Ca... 更多     

黄芪甲苷对PC12细胞缺糖缺氧损伤的保护作用

目的：探究黄芪甲苷对PC12细胞缺糖缺氧损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法：体外培养PC12细胞,应用无糖Earle’s稀释Na2S2O4建立缺糖缺氧模型,尼莫地平做阳性对照,使用不同浓度的黄芪甲苷进行预保护。显微镜下观察细胞形态差异;以MTT法测定细胞活力;酶标法测定上清液中LDH含量;Western-blot法测定Bcl-2与Bax蛋白表达量。结果：黄芪甲苷能够提高PC12细胞在缺糖缺氧环境下的细胞存活率,降低LDH漏出量;能够增加Bcl-2蛋白的表达,降低Bax蛋白的表达,降低Bax/Bcl-2比值。结论：黄芪甲苷对PC12细胞的缺糖缺氧损伤具有一定的保护作用,其作用机制可能与其抑制细胞凋亡有关。     

地黄活性成分梓醇抗Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡作用

目的 探讨地黄活性成分梓醇对β淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导PC12细胞凋亡的保护作用.方法 常规培养PC12细胞,加入不同浓度梓醇,24 h后加20μmol/LAβ25-35,48 h后观察梓醇的作用,MTT法测定细胞存活率,TUNEL法测定细胞凋亡发生率,半定量RT-PCR检测细胞Bax和Bcl-2 mRNA表达.结果 梓醇终浓度1×10-5 mol/L和1 ×10-4 mol/L显著提高PC12细胞存活率(P＜0.05和P＜0.01);1×10-4 mol/L显著降低细胞凋亡发生率(P＜0.01).Aβ25-35损伤可引起凋亡相关蛋白Bax mRNA的表达增加,梓醇终浓度5×10-5 mol/L和1×10-4 mol/L有降低作用(P＜0.05和P＜0.01);同时Aβ25-35使Bcl-2 mRNA的表达降低,梓醇有提高作用(P＜0.05和P＜0.01).结论 地黄活性成分梓醇有对抗Aβ25-35损伤引起的PC12细胞凋亡作用.     

原花青素对β-淀粉样肽25-35诱导PC12细胞par-4 和bcl-2基因表达的影响

目的探讨原花青素(PC)对β-淀粉样肽(Aβ25-35)诱导凋亡PC12细胞par-4和bcl-2基因mRNA和蛋白表达的影响。方法采用MTT比色法分析细胞存活率,Hoechst33258-PI荧光染色法检测细胞凋亡,RT-PCR方法检测PC12细胞par-4和bcl-2基因mRNA的表达,Westernblotting检测PC12细胞Par-4和Bcl-2蛋白表达。结果不同剂量(5、10、20、30mg/L)PC预处理PC12细胞1h可剂量依赖性对抗Aβ25-35引起的细胞凋亡,提高PC12细胞的存活率,减少Aβ25-35引起的PC12细胞核固缩、凝聚和碎裂,降低par-4基因mRNA表达及蛋白表达,增加bcl-2基因mRNA表达及蛋白表达。结论PC可剂量依赖性对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用,其机制可能与下调凋亡基因par-4和上调抗凋亡基因bcl-2表达有关。     

淫羊藿苷对基因转染PC12细胞α-突触核蛋白过表达和泛素-蛋白酶体系统的影响

目的观察淫羊藿苷在体外试验中对α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)及相关蛋白表达的影响及其作用机制。方法 不同浓度的淫羊藿苷与转染α-Syn基因PC12细胞共孵育24h,应用RT-PCR法检测各组细胞α-Syn mRNA含量,Western免疫印迹法检测细胞中α-Syn、泛素化蛋白羧基端水解酶(Ubiquitin C-terminal hydrolase protein,UCH-L1)和Parkin蛋白的表达,观察淫羊藿苷对它们的影响。结果 淫羊藿苷浓度40～80μmol/L与转染α-Syn基因细胞孵育24h,能够明显减少模型细胞中α-SynmRNA含量,抑制Syn蛋白表达和聚集,增强UCH-L1和Parkin蛋白表达。结论 淫羊藿苷在体外对基因转染细胞的α-Syn过表达和聚集有明显抑制作用,其作用机制与抑制α-Syn合成和增强α-Syn降解有关。     

过氧化氢对PC12细胞PI3K、Akt表达的影响

目的探讨不同浓度过氧化氢(H202)对PC12细胞PI3K、Akt mRNA及蛋白表达的影响,为氧化损伤致PC12细胞凋亡提供实验依据。方法 PC12细胞贴壁后,换无血清DMEM培养液继续培养24 h,实验分为对照组、不同浓度H2O2组(100、150、200μmol·L-1)。24 h后,采用RT-PCR和Western Blot方法分别检测PI3K、Akt mRNA及蛋白的表达变化。结果与对照组相比,各浓度H2O2均可降低PI3K、Akt mRNA和蛋白的表达,且随着H2O2浓度增加,与对照组相比,PI3K、Akt mRNA表达逐渐降低(P<0.05);PI3K、Akt蛋白表达水平逐渐降低(P<0.05);且150μmol·L-1H2O2可显著降低PI3K、Akt mRNA及蛋白的表达(P<0.05)。结论 H2O2可剂量依赖性的降低PI3K、Akt mRNA和蛋白的表达,从而诱导PC12细胞的凋亡。     

自由基清除剂对PrP106-126诱导的分化PC12细胞存活率影响的研究

目的 从细胞存活率角度观察探讨自由基清除剂—依达拉奉对PrP106—126诱导的分化PC12细胞损伤的保护作用，从而寻找更加有效的朊蛋白病的治疗方法。方法 应用MTT法，体外观察不同浓度的依达拉奉对PrP106—126诱导的分化PC12细胞存活率改变的影响。结果 不同浓度的依达拉奉（15、30、45、60μmol／L）对PrP106—126诱导的分化PC12细胞均有保护作用，随着浓度的增加，保护作用更加明显，呈量效和时效依赖关系。结论 依达拉奉对PrP106—126诱导的分化PC12细胞具有抗氧化损伤保护作用，其作用可以通过提高感染PrP106—126后的分化PC12细胞的存活率而表现出来。     

转染过氧化氢酶-过氧化物酶基因对H2O2诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的观察转染过氧化氢酶-过氧化物酶(CPX)基因对过氧化氢(H2O2)诱导细胞凋亡的保护作用.方法以CPX基因转染PC12细胞,用遗传霉素(G-418)筛选出含目的基因的单克隆细胞系.以RT-PCR法检测CPX基因mRNA的表达,用免疫细胞化学、酶活性测定技术检测目的蛋白的表达;用H2O2处理细胞,观察其抗凋亡的能力;通过电镜、DNA片段化的测定、MTT比色微量分析及流式细胞凋亡率分析观察转基因后对H2O2诱导细胞凋亡的保护作用.结果用H2O2处理细胞,未转染CPX基因的PC12细胞出现凋亡的特征性形态学改变,电泳可见断裂的DNA片段;流式细胞仪检测细胞凋亡率较转染组明显增加;MTT比色微量分析显示细胞活力下降(均P<0.01).而转染CPX基因的PC12细胞以上改变均不明显,形态学接近正常,细胞凋亡的各项指标均明显改善.结论转染CPX基因能保护H2O2所致的神经细胞凋亡.     

维生素B12对氧化应激损伤下神经细胞的保护机制

目的：探索维生素B12预处理对H2O2诱导下的神经细胞损伤的保护作用及自噬和凋亡蛋白表达的影响。方法：将大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞（PC12）分为对照组（Control组）RPMI 1640培养、损伤组（H2O2组）RPMI 1640培养并加入200 μmol/L的H2O2刺激,维生素B12保护组（H2O2+VitB12组）RPMI 1640培养加入200 μmol/L维生素B12预处理和200 μmol/L的H2O2刺激。24 h后检测细胞的活性,Western blot和免疫荧光检测凋亡及自噬相关蛋白表达水平。结果：与Control组比较,H2O2组的细胞存活率、细胞DNA复制水平降低,Bcl-2和P62蛋白的表达量下降,Bax、ATG-5和LC3蛋白的表达量明显上升,胞浆内LC3的激活数量上升（均P＜0.05)。与H2O2组比较,H2O2+VitB12组细胞存活率和细胞DNA复制水平上升,Bcl-2和P62蛋白的表达量上升,Bax、ATG-5和LC3蛋白的表达量显著下降,胞浆内LC3的激活数量下降（均P＜0.05)。结论：维生素B12能通过调控自噬抑制氧化应激诱导下的细胞凋亡。     

银杏内酯B对H_2O_2诱导PC12细胞氧化损伤的影响

目的 :探讨银杏内酯B(ginkgolideB)对过氧化氢 (Hydrogenperoxide ,H2 O2 )引起PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法 :用噻唑兰 (MTT)检测PC12细胞的存活率 ;乳酸脱氢酶法检测PC12细胞损伤 ;用硫代巴比妥酸法测定细胞脂质过氧化物 ;同时检测细胞内抗氧化酶的活性。结果 :PC12细胞在 5 0～ 30 0 μmol LH2 O2 作用 3h后 ,细胞的死亡率及乳酸脱氢酶 (LDH)释放明显增加 ,抗氧化酶如超氧化物歧化酶 (superoxidedismutase ,SOD)、谷胱甘肽过氧化酶 (glutathioneperoxidase ,GSH Px)活性显著降低 ,而脂质过氧化物生成增多。银杏内酯B 10～ 10 0 μmol L能显著降低细胞死亡率、LDH释放及丙二醛 (MDA)的生成 ,且能明显提高抗氧化酶的活性。结论 :银杏内酯B可拮抗H2 O2 引起的PC12细胞损伤 ,其机理可能与银杏内酯B减少脂质过氧化物的生成 ,提高抗氧化酶的活性有关     

缺糖损伤对PC12细胞的效应及对葡萄糖调节蛋白75的表达影响

目的 :探讨缺糖损伤对PC12细胞的效应及对葡萄糖调节蛋白 75 ( grp75 )的表达影响。 方法 :通过形态学观察、MTT法及流式细胞术检测缺糖损伤对PC12细胞活力的影响 ,通过RT -PCR法检测缺糖损伤对 grp75在PC12细胞中表达的影响。结果 :PC12细胞在无糖培养条件下 ,细胞活力逐渐下降 ,48小时后 ,大部分细胞死亡 ,部分细胞为凋亡。而 grp75的表达随着无糖培养时间的增加而上调。 结论 :缺糖损伤导致PC12细胞活力下降 ,并引起 grp75的上调表达     

莫达非尼抑制过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡

目的:研究莫达非尼(modafinil)对过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用,并对其机制进行探讨.方法:以噻唑兰(MTT)法测定PC12细胞存活率;用流式细胞术检测PC12细胞凋亡的百分率;测定细胞内罗丹明123(Rhodamine123)的荧光强度,反映细胞线粒体膜电位的改变.结果:莫达非尼能抑制过氧化氢(200 μmol/L)、硝普钠(500μmol/L)和连二亚硫酸钠(2 mmol/L)对PC12细胞的损伤.过氧化氢(200 μmol/L)24h可以诱导PC12细胞凋亡(凋亡率为32.65%).莫达非尼(15,7.5 μmol/L)显著降低凋亡细胞的百分率(凋亡百分率分别为7.95%、15.46%).并且莫达非尼可以抑制过氧化氢引起的线粒体膜电位降低.结论:莫达非尼对PC12细胞有保护作用.能抑制过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡,这一作用可能与其抑制过氧化氢引起的线粒体膜电位降低有关.     

bcl-2基因克隆、转染及其在PC12细胞中的表达

【目的】研究bcl 2基因 (bcl 2 )在PC12细胞中的表达。【方法】构建真核表达载体pcDNA3 bcl 2 ,采用脂质体介导将重组质粒导入PC12细胞 ,Westernblot和原位免疫组化检测外源基因表达。【结果】本实验成功构建了真核表达载体pcDNA3 bcl 2 ,并用脂质体介导的方法获得了稳定表达bcl 2的细胞克隆 ;Westernblot显示有 2 6ku的蛋白质表达 ,bcl 2单克隆抗体免疫组化染色呈阳性反应。【结论】重组质粒 pcDNA3 bcl 2经转染能够在PC12细胞中有效表达 ,为进一步研究 bcl 2对PC12细胞的生物学功能奠定了基础。     

去甲乌药碱对过氧化氢引起的PC12细胞损伤的保护作用研究

目的 探讨去甲乌药碱对过氧化氢(H₂O₂)引起的PC12细胞损伤的保护作用。方法 将PC12细胞分为对照组、H₂O₂组(100 μM H₂O₂)、去甲乌药碱组(50 μM去甲乌药碱+100 μM H₂O₂),CCK8法检测细胞活力,TUNEL染色检测细胞凋亡情况,流式检测ROS水平,氧化应激标志物MDA、SOD分别采用TBA法和WST法检测,蛋白免疫印迹检测凋亡相关蛋白Caspase3、Bax和Bcl-2的表达情况。结果 与H₂O₂组比较,去甲乌药碱组细胞活力显著提高,ROS、MDA含量显著降低,SOD活性显著升高,Caspase3、Bax表达量减少,Bcl-2表达量增加。结论 去甲乌药碱能通过抗氧化及抗凋亡抑制H₂O₂引起的PC12细胞损伤。     

蛋白C基因新突变的分子发病机制研究

目的对一个新发现的蛋白C（protein C,PC）基因突变PC E29K进行体外表达研究以探讨其导致PC缺陷的分子发病机制。方法采用定点突变方法构建PC E29K突变表达质粒,脂质体法转染COS-7细胞、培养。采用ELISA法测定培养上清液和细胞裂解液中的PC：Ag,用激光共聚焦显微镜对培养细胞进行细胞免疫荧光染色分析。结果转染了突变质粒的Cos-7细胞培养上清中PC：Ag的含量为野生型的23.7%,细胞裂解液中PC：Ag的含量为野生型的81.1%。PC E29K突变型蛋白多在内质网中滞留,在高尔基体中定位减少。结论 PC E29K仅有部分从细胞内分泌出来,且部分在细胞内降解,因此,分泌障碍和部分降解加速是该突变导致PC缺陷的直接原因。     

甲基苯丙胺对PC12细胞中二硫键异构酶S亚硝基化的影响

目的：研究甲基苯丙胺（METH）对PC12细胞中二硫键异构酶（PDI）S亚硝基化的影响以及对神经元的毒性作用。方法不同浓度的METH处理PC12细胞,CCK-8法检测细胞存活率,L-NNA与不同浓度的METH共同处理PC12细胞,生物素转化法检测各细胞内PDI及S亚硝基化PDI（PDI-SNO）表达情况,CCK-8法检测细胞存活率情况,HE染色法观察细胞形态学变化。结果 METH使得PC12细胞存活率降低,PDI-SNO表达率增高,当同时用一氧化氮合酶抑制剂N-硝基-L-精氨酸（L-NNA）与METH共同处理细胞时,L-NNA可有效地提高细胞的存活率,抑制PDI-SNO的表达率。结论 METH可对PC12细胞产生明显毒性作用,且使PC12细胞中的PDI发生显著的S亚硝基化。     

DJ-1对MPP+诱导的多巴胺能神经元损伤的保护机制研究

目的 探讨DJ-1基因对MPP+诱导的多巴胺能神经元损伤模型的保护机制.方法 用神经生长因子(NGF)将PC12诱导成神经元样分化的细胞株(多巴胺能神经元).用1-甲基-4苯基吡啶离子(MPP+)诱导帕金森病PC12细胞损伤模型,用CCK-8试剂盒检测细胞增殖活性,DHE染色法检测ROS水平变化.Western blot检测DJ-1和TH蛋白表达变化,RT-qPCR检测α-synuclein和凋亡相关基因的RNA水平.用pCDH1-cmv载体过表达DJ-1后检测DJ-1对MPP+环境中细胞的保护作用.用RT-qPCR检测α-synuclein、p53和Bax的表达变化.结果 160μmol/L的MPP+处理18 h后,PC12细胞活性降低,细胞内ROS水平升高,处理48 h后细胞凋亡增加.DJ-1和TH蛋白表达均明显下调,RNA水平上α-synuclein、p53和Bax表达增加.过表达DJ-1能够保护MPP+中的细胞活性,抑制ROS水平升高.α-synuclein以及凋亡基因p53和Bax的表达升高受到抑制,细胞凋亡减少.结论 MPP+作用于多巴胺神经元,可以下调DJ-1和TH蛋白,促进α-synuclein积累ROS水平升高,并使p53和Bax表达增加,导致细胞凋亡增加.DJ-1基因能够能够在MPP+处理时抑制p53和Bax的表达,减少α-synuclein积累,降低细胞内ROS水平,保护细胞免受MPP+引起的损伤.