氧化型脂蛋白(a)对兔主动脉平滑肌细胞增殖的影响

为探讨脂蛋白（a）高度致动脉粥样硬化作用的可能机制，本文通过体外CU2 氧化法进行了低密度脂蛋白和脂蛋白（a）的氧化，并利用细胞计数及氚标胸腺密啶脱氧核苷掺入法，比较观察了天然和氧化的脂蛋白（a）及低密度脂蛋白对培养的兔主动脉平滑肌细胞增殖的影响。结果发现，在相同氧化时间内脂蛋白（a）对Cu2 的氧化敏感性较低密度脂蛋白低；氧化后的脂蛋白（a）和低密度脂蛋白均可明显促进平滑肌细胞增殖使DNA合成增加（P＜0．01），且其作用较相应的天然脂蛋白大（P＜0．05．P＜0．01）、此结果提示：脂蛋白（a）经氧化后促进平滑肌细胞增殖可能是其致动脉粥样硬化的机制之一。     

水杨酸钠诱导PC12细胞凋亡的作用

目的:观察水杨酸钠诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)凋亡的作用并初步探讨其机制。方法:实验于2004-07/2005-11在武汉大学完成。选择大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)为观察对象,将PC12细胞培育于培养板,无血清同步化后随机分组。以不同浓度的水杨酸钠[低浓度(0.3125,0.625mmol/L),高浓度(1.25,2.5,5mmol/L)]处理72h,MTT法检测细胞活力;倒置显微镜和荧光显微镜下观察细胞形态;流式细胞术检测凋亡率;Westernblotting检测胞内NF-κB的含量。结果:水杨酸钠为1.25～5mmol/L时显著减少PC12细胞的存活率(P<0.01);并引起典型的凋亡形态学改变:表现为细胞体积明显缩小、变圆,部分细胞从贴壁状态变为悬浮状态,折光性减弱。流式细胞术检测细胞凋亡率,随着水杨酸钠浓度的增加,细胞凋亡率明显升高,较低浓度水杨酸钠(0.3125,0.625mmol/L)处理组凋亡率与对照组比较升高不明显(P>0.05)。高浓度水杨酸钠(1.25,2.5,5mmol/L)处理组细胞出现典型凋亡峰,凋亡率较对照组显著增高,差异有显著性(P<0.01),并且具有浓度依赖性。随着水杨酸钠作用浓度的增加,PC12细胞中NF-κBP65蛋白表达水平逐渐降低。结论:高浓度的水杨酸钠可以体外诱导PC12细胞凋亡;水杨酸钠可剂量依赖性的减少PC12细胞内的NF-κB含量。     

铁调节转运体1 mRNA与耐药性癫痫

目的观察耐药性癫痫患者脑组织中铁调节转运体1（IREG1）mRNA的表达,探讨其在耐药性癫痫发病中的作用。方法收集耐药性癫痫患者术后脑组织,首先用基因芯片进行差异基因表达的筛选,然后用RT-PCR从基因水平进行验证,并与对照组比较。结果含有4097条人类全长基因的芯片扫描显示有142个基因表达有差异,37个基因表达下调,105个基因表达上调。目的IREG1 mRNA在耐药性癫痫患者颞叶中表达明显增加（P〈0.05）,Cy3和Cy5信号比值为2.75。RT-PCR在实验组和对照组的灰度值分别为2.6138,1.7708,变化趋势与芯片扫描结果相同。结论IREG1 mRNA可能参加了耐药性癫痫的形成,并在耐药性癫痫的发病机制中起着一定作用。     

重组apo(a) Kringle Ⅳ-10的纯化及生物活性

目的:通过研究重组apo(a) Kringle Ⅳ-10(KⅣ-10) 的赖氨酸结合能力对纤溶酶原与内皮细胞结合的影响,探讨apo(a)在抑制纤溶过程中的作用,为Lp(a)致动脉粥样硬化机制研究提供依据.方法:将含apo (a) 野生型KⅣ-10 (wt-KⅣ-10 / Trp72)和突变型KⅣ-10 (mut-KⅣ-10/Arg72)基因片段的重组质粒,分别转化至E.coli DH5α菌株中并表达含这2个重组片段的融合蛋白,通过Glutathione-Agarose beads亲和层析进行分离和提纯,经L-Lys-Sepharose 4B亲和层析检测其赖氨酸结合能力.再以异硫氰酸荧光素标记的纤溶酶原为配基,观察这2种基因表达片段对纤溶酶原与人脐静脉内皮细胞结合的影响.结果:实验结果显示:在E.coli DH5α菌株中表达的GST-wt-KⅣ-10/Trp72能有效抑制纤溶酶原与人脐静脉内皮细胞的结合;而GST-mut-KⅣ-10/Arg72在任一浓度范围内均无这种抑制作用.结论:apo (a) KⅣ-10对纤溶的抑制作用与其赖氨酸结合能力密切相关;而KⅣ-10的赖氨酸的结合能力与其赖氨酸结合位点中的Trp72有关.     

高浓度花生四烯酸诱导小鼠成纤维细胞L929凋亡的研究

目的：探讨花生四烯酸是否能诱导小鼠成纤维细胞L929凋亡及其可能机制。方法：噻唑蓝（MTT）法检测细胞存活率,比色法测定乳酸脱氢酶（LDH）释放率,硫代巴比妥酸法测定细胞脂质过氧化产物丙二醛（MDA）含量,Hoechst 33258染色观察凋亡细胞核形态变化,DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA降解。结果：L929细胞在40-160 μmol/L花生四烯酸作用24 h后,细胞存活率明显下降,LDH释放率和细胞MDA含量显著增加（P<0.01）。经160 μmol/L花生四烯酸处理后的L929细胞呈现典型的凋亡核固缩表现。琼脂糖凝胶电泳显示DNA凋亡梯带。结论：高浓度花生四烯酸（80-160 μmol/L）能诱导小鼠成纤维细胞L929凋亡,可能与其促脂质过氧化作用有关。     

同型半胱氨酸诱导PC12细胞凋亡的研究

目的：研究同型半胱氨酸（Hcy）在生理浓度铜离子（10 μmol/L Cu²⁺）作用下能否诱导PC12细胞凋亡及对bcl-2、bax基因表达的影响。 方法: 将细胞随机分成对照组和处理组，采用MTT法检测细胞活力；倒置相差显微镜、荧光显微镜和流式细胞仪检测细胞凋亡；半定量RT-PCR分析bcl-2和bax mRNA的表达水平。 结果: 0.125-1.0 mmol/L Hcy在Cu²⁺的作用下可以导致PC12细胞凋亡，具有明显的剂量-效应关系；bcl-2 mRNA表达降低，bax mRNA表达升高，且效应与Hcy浓度相关。 结论: 高浓度Hcy在生理浓度Cu²⁺作用下可诱导PC12细胞凋亡，且凋亡作用与Hcy浓度相关。其机制可能是通过调节bcl-2和bax mRNA的比值起作用的。     

H1型调宁蛋白mRNA在胆道中的表达与妊娠豚鼠胆囊结石形成关系的实验研究

目的探讨妊娠胆囊结石形成过程中h1型调宁蛋白mRNA表达变化对胆道动力学改变的影响，从分子水平上阐明妊娠胆结石形成的机制。方法将30只成年雌性豚鼠随机等分为未孕组、孕30d组和孕60d组3组，每组各10只。实验组豚鼠按雌雄4：1比例搭配同笼喂养交配，建立豚鼠妊娠胆结石模型。动物剖腹后穿刺胆囊收集胆汁；采集门静脉血，分离血清；取除胆囊及Oddi括约肌。分别测定胆汁中总胆固醇（TC）、总胆红素（TBiL）、总胆汁酸（TBA）浓度，血清雌二醇（E2）及孕酮（Pg）含量，应用半定量RT—PCR法测定胆囊平滑肌和Oddi括约肌中h1型调宁蛋白（h1-Calponin）mRNA的表达量变化。结果妊娠豚鼠胆汁呈成石性胆汁生化改变。孕60d组胆汁TC、TbiL较非孕组明显增高（P〈0．05），TBA浓度显著降低（P〈0．01）；血清E2、Pg含量较非孕组明显升高（P〈0．001）；孕60d组豚鼠胆囊平滑肌中h1-calponin mRNA表达量明显高于非孕组（P〈0．001），而Oddi括约肌中h1-calponin mRNA表达量较非孕组明显降低（P〈0．01）。结论妊娠豚鼠h1-calponin mRNA表达在胆囊平滑肌中增高，在Oddi括约肌中下降，导致胆道运动功能紊乱和胆汁淤滞，可能是妊娠胆囊结石形成的关键因素。     

鼻内镜下泪囊鼻腔造口术治疗3O例慢性泪囊炎体会

2004年以来我们对30例慢性泪囊炎患者行鼻内镜下泪囊鼻腔造口术治疗，疗效确切，现将临床资料总结如下。 1资料与方法 1．1一般资料 30例患者中男13例，女17例，年龄40-65岁，平均55岁。[第一段]     

青皮煎剂预防大鼠急性化学性肝损伤的实验研究

目的研究青皮煎剂预防急性化学性肝损伤的作用。方法将大鼠随机分为4组,低剂量组和高剂量组分别灌喂0.4g.kg-1.d-1和0.8g.kg-1.d-1青皮煎剂,正常对照组和模型组灌喂等量蒸馏水,5d后以0.2g/kg四氯化碳(CCl4)造模,处死大鼠。检测大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性和肝组织均浆中丙二醛(MDA)含量及超氧化物岐化酶(SOD)活性,并观察肝细胞形态结构的变化。结果不同剂量的青皮煎剂均能降低血清AST、ALT活性,降低MDA含量,增加SOD活性,并能有效地减轻肝细胞的变性、坏死,呈现明显的量效依赖性。结论青皮煎剂具有预防化学性肝损伤的保护作用。     

良性脑膜瘤中PR、VEGF表达及PCNA、Ki-67标记指数与肿瘤复发间的关系

目的 通过对孕激素受体（PR）、血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达及肿瘤增殖指标增殖细胞核抗原（PCNA）、Ki-67表达量的分析,探讨上述诸因素与肿瘤复发间的关系。方法 56例脑膜瘤标本分为复发组（n=30）、初发组（n=26）,应用免疫组织化学方法检测其PR、VEGF表达情况,同时检测PCNA、Ki-67的表达量,统计学分析它们与肿瘤复发间的关系。结果 复发组PCNA LI（75±7）%,明显高于初发组（26±7）%;复发组Ki-67 LI（4.0±4.6）%,高于初发组（1.1±1.7）%;PR表达阳性：复发组7例（23.33%）,初发组21例（80.77%）;VEGF表达阳性：复发组13例（43.33%）,初发组9例（34.62%）。结论 PCNA LI、Ki-67及PR表达与脑膜瘤复发有一定的关系,而VEGF表达无统计学意义。