阿尔茨海默病淀粉样肽级联假说及其相关基因研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是老年人群中最常见的一种痴呆症,为一种原因不明的神经系统退行性病变.AD的组织病理学表现主要为老年斑(senile plaques,SP)、神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFTs),以及由凋亡引起的区域性神经细胞死亡等.老年斑在镜下呈球形病变,表现为退变的神经轴突围绕中心淀粉样物质,这种淀粉样物质主要是β-淀粉样肽(β-amyloid,AB).     

The Regulatory Action of Radix Astragali on M-Cholinergic Receptor of the Brain of Senile Rats

The changes in density of M-cholinergic receptors in different areas of senile rats and the regulatoryaction of Huang Qi (黄芪 Radix Astragali,a drug for warming yang and replenishing qi) were observedby autoradiography.The results showed that the gray scale displayed in brain sections was clear andmainly distributed in the cortex,hippocampus and striate body,while that due to nonspecificcombination was negligible.The gray scale in the cortex,hippocampus and striate body of theexperimental group was markedly lower than that in the young control rats,decreased respectively by24.87%,14.12% and 12.76% (all P<0.05);but it was obviously higher than those in the senile controlrats,increased respectively by 24.15%,14.38% and 13.47% (P<0.05).The data indicate that Huang Qi(黄芪 Radix Astragali) may up-regulate the decreased density of M-cholinergic receptors in the brain ofsenile rats.     

新蛋白质合成介导知母活性成分对M_2受体稳定性的调节作用

目的 探讨知母活性成分ZMS提高CHOm2细胞毒蕈碱样乙酰胆碱2型受体 (M_2受体) mRNA表达的机制.方法 体外培养至80% ～90%融合的CHOm2细胞分为ZMS 1组(单纯添加1×10~(-5) mol/L ZMS作用24 h)、ZMS 2组(添加1×10~(-5) mol/L ZMS作用24 h后加入1 μg/mL环己酰亚胺作用12 h)、ZMS 3组(加入1 μg/mL 环己酰亚胺预处理4 h后加入1×10~(-5) mol/L ZMS作用24 h),以上各组分别设立对照组(以等体积DMSO替代ZMS,其他处理与相应ZMS组相同).各组细胞培养基中均加入放线菌素D抑制mRNA合成,于不同时间点收集CHOm2细胞,Real-time PCR检测M_2受体mRNA相对表达量并计算半衰期.结果 与相应对照组比较,ZMS 1组和ZMS 2组CHOm2细胞M_2受体mRNA的半衰期明显延长,分别为(4.75±0.54)h vs(2.13±0.23)h和(5.43±1.13)h vs (2.46±0.09) h(均P<0.05);添加1 μg/mL 环己酰亚胺预处理的ZMS 3组CHOm2细胞M2受体mRNA半衰期的(3.06±0.23)h与其相应对照组的(3.00±0.20)h比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 ZMS提高M2受体mRNA的稳定性需要有新蛋白质合成的参与.     

ZDY101和SZ201对α-分泌性淀粉样前体蛋白生成的影响

目的探讨ZDY101和SZ201及二者不同配比联合应用对HEK293sw细胞生成α-分泌性淀粉样前体蛋白的影响. 方法用Western blot法检测HEK293sw细胞生成的α-sAPP含量,观察ZDY101、SZ201及二者不同配比联合应用在24 ～48h、48 ～72h时段内α-sAPP生成量的变化. 结果24 ～48h时段的实验中,ZDY101和SZ201浓度分别为1×10-5mol/L时,α-sAPP含量分别为2.06±0.73、2.64±1.21,明显高于DMSO对照组的1.00 (P＜0.01);48～72h时段的实验中,ZDY101和SZ201单独应用且浓度分别为1×10-5mol/L时,α-sAPP含量也明显高于DMSO对照组的1.00(P＜0.01).二者相加的效果高于ZDY101、SZ201单独应用(P＜0.05).如果二者联合应用,降低各自的浓度,总浓度仍为1×10-5mol/L时,提高α-sAPP含量的效果不明显. 结论ZDY101、SZ201在一定浓度时,能增加α-sAPP的生成,二者联合应用效果更强.     

老年早期及老年晚期大鼠脑胆碱能M型受体的改变

采用放射自显影技术测定脑切片胆碱能Ｍ型受体，观察大鼠在老年早期和老年晚期不同脑区Ｍ型受体密度的变化。结果：所得脑切片自显影像灰度层次清晰，主要分布在皮质、海马、纹状体等部位，非特异结合灰度很低。图像分析仪分别给出不同脑区的平均灰度值，老年鼠皮质、海马、纹状体的灰度显著低于青年鼠，老年早期大鼠３个脑区分别降低２４８７％，１４１２％，１２７６％（Ｐ＜００５）；老年晚期分别降低２９４５％，２４３３％，１５３１％（Ｐ＜００５）。结论：老年大鼠大脑皮质、海马、纹状体部位胆碱能Ｍ型受体密度显著降低，老年晚期比老年早期降低的幅度更大     

梓醇对β肾上腺素受体及M胆碱受体失平衡的双向调节作用

目的探讨地黄中的梓醇是否为地黄滋阴作用的有效活性成分。方法用放射配基结合分析单点法,测定甲亢模型小鼠大脑β肾上腺素受体(β受体)密度和自然衰老小鼠大脑M胆碱受体(M受体)密度,并以电迷路法考察自然衰老小鼠行为学的改变。结果甲亢组脑β受体密度显著高于对照组,分别为(20.9±7.2)和(15.7±5.2)fmol/mg蛋白,梓醇治疗的两组动物显著低于甲亢组,分别为(18.6±7.2)和(18.4±5.6)fmol/mg蛋白(P<0.05)。自然衰老模型组用Y电迷路测得的学习7 d后正确率仅为70%,喂服两种剂量的梓醇8周后,学习7 d后正确率达到90%以上,与老年对照组比较均有显著提高(P<0.01),与喂服阳性对照药知母皂甙元组正确率相仿。与此同时,老年对照组、知母皂甙元组、小剂量和大剂量梓醇组的脑M受体密度分别为(639±134)、(739±181)、(754±121)和(830±156)fmol/mg蛋白,表明3个用药组与老年对照组比较,均能显著提高脑M受体(P<0.05)。结论梓醇能重现地黄水煎剂对β肾上腺素受体及M胆碱受体失平衡的双向调节作用,提示梓醇是地黄滋阴作用的有效活性成分。     

ZDY101和SZ201对α-分泌性淀粉样前体蛋白生成的影响

目的探讨ZDY10 1和SZ2 0 1及二者不同配比联合应用对HEK2 93sw细胞生成α -分泌性淀粉样前体蛋白的影响。　方法用Westernblot法检测HEK2 93sw细胞生成的α -sAPP含量 ,观察ZDY10 1、SZ2 0 1及二者不同配比联合应用在 2 4～ 48h、48～ 72h时段内α -sAPP生成量的变化。　结果 2 4～ 48h时段的实验中 ,ZDY10 1和SZ2 0 1浓度分别为 1× 10 - 5mol L时 ,α -sAPP含量分别为 2 .0 6± 0 .73、2 .6 4± 1.2 1,明显高于DMSO对照组的 1.0 0(P <0 .0 1) ;48～ 72h时段的实验中 ,ZDY10 1和SZ2 0 1单独应用且浓度分别为 1× 10 5mol L时 ,α -sAPP含量也明显高于DMSO对照组的 1.0 0 (P <0 .0 1)。二者相加的效果高于ZDY 10 1、SZ2 0 1单独应用 (P <0 .0 5 )。如果二者联合应用 ,降低各自的浓度 ,总浓度仍为 1× 10 - 5mol L时 ,提高α -sAPP含量的效果不明显。　结论ZDY10 1、SZ2 0 1在一定浓度时 ,能增加α -sAPP的生成 ,二者联合应用效果更强。     

α-突触核蛋白的生物学功能及其在帕金森病中的作用

α-Synuclein is identified as a constant component of dopaminergic neuronal pale eosinophilic inclusions "the Lewy bodies" in Parkinson’s disease. In fact, normal α-synuclein has lots of biological functions, which regulates synaptic plasticity, integrates presynaptic signaling, regulates dopamine level in the synapse, modulates microglial activation and lipid metabolism, and exerts heat shock protein-like function. However, abnormal α-synuclein leads to pathological lesion. Many studies show that pathological α-synuclein levels are elevated under the condition of its gene mutation, certain posttranslational modifications, dysfunction of molecular chaperones or ubiquitin proteasome system. The pathological α-synuclein plays an important role in neurodegeneration, in particular, Parkinson’s disease because it interrupts integrity of synaptic vesicles, ER-Golgi traffic and axonal transport, inhibits histone acetylation and chaperone-mediated autophagy, stabilizes itself against proteasomal degradation, and leads to neuroinflammation and abnormal phosphorylation of tau.     

淋巴细胞β受体与放射配基结合所需孵育时间的确定

介绍理论运算和实验测量相结合，确定淋巴细胞膜碎片β受体与标记配基结合所需平衡时间的方法。结果表明：二种方法所得平衡时间基本一致。多点法时平衡时间需25-30min；单点法时需5-7min。     

四种“虚证”模型的建立及其与环核苷酸系统的关系

用小鼠造成四种病理模型:甲状腺素型(体内甲状腺素过多):他巴唑型(甲状腺功能抑制):氢考Ⅰ型(肾上腺皮质激素过多);氢考Ⅱ型(肾上腺皮质机能抑制)。以β激动剂造成血浆 cAMP 升高,以 M 胆碱激动剂造成血浆 cGMP 升高,并以助阳药(附子、肉桂),滋阴药(生地、龟板)作实验性治疗。结果表明,甲状腺素型及氢考Ⅰ型 cAMP 系统反应性升高,滋阴药使之改善,他巴唑型及氢考Ⅱ型 cGMP 系统反应性升高或 cAMP 反应性降低,助阳药使之改善。故初步认为前两种属"阴虚"模型,后两种属"阳虚"模型。