脂质体介导端粒酶反义RNA对人乳腺癌细胞MCF-7活性及增殖的影响

目的:探讨经脂质体介导转染端粒酶反义RNA对MCF-7细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法:用脂质体介导法将pBBS212-hTR(反义端粒酶RNA真核表达载体)导入人乳腺癌细胞MCF-7中,采用TRAP-PCR-ELISA法测定端粒酶活性,四唑盐比色(MTT)法检测MCF-7细胞的增殖,FCM分析等方法观察其对MCF-7细胞的增殖影响。结果:端粒酶反义RNA能显著抑制MCF-7细胞的端粒酶活性,抑制MCF-7细胞的增殖并诱导其凋亡。结论:脂质体转染反义端粒酶RNA在封闭细胞端粒酶活性表达的同时,可促进MCF-7细胞凋亡。     

不同基因位点的人端粒酶RNA反义寡核苷酸对食管癌EC9706细胞增殖及端粒酶活性的影响

目的:探讨封闭人端粒酶RNA不同基因位点的硫代修饰性反义寡核苷酸(ASODN)对食管癌细胞增殖及端粒酶活性的影响.方法:采用阳离子脂质体介导的方法,将不同浓度(0 μmol/L、5 μmol/L、10 μmol/L、20μmol/L和30 μmol/L)的5条ASODN(ASODN-1、ASODN-2、ASODN-3、ASODN-4和ASODN-5)和无关序列寡核苷酸(N-ODN)分别导入食管癌EC9706细胞中,应用MTT法及端粒酶活性的定性及定量检测法,测定ASODN对食管癌EC9706细胞增殖及端粒酶活性的抑制作用.结果:5条ASODN和1条N-ODN按照N-ODN、ASODN-4、ASODN-5、ASODN-2、ASODN-1和ASODN-3的顺序,对细胞增殖及端粒酶活性的抑制作用逐渐增高(P＜0.05).结论:封闭hTR功能区的反义寡核苷酸可有效抑制食管癌细胞增殖及端粒酶活性.     

反义端粒酶RNA对肺癌细胞A549抑制作用研究

目的 探讨反义人端粒酶RNA(human telomeric,RNA,hTR)对肺癌细胞A549端粒酶活性和细胞增殖的抑制作用，研究以端粒酶为靶的肺癌基因治疗的可能性。方法 将端粒酶hTR的cDNA反向插入到逆转录病毒载体pLXRN中，转染包装细胞PT67后获得反义hTR重组病毒，感染肺癌细胞A549。处理前后采用TRAP法检测端粒酶活性，光镜观察细胞形态，DNA电泳观察凋亡情况。结果 作用后端粒酶活性和细胞增殖受到明显抑制，并出现明显的细胞凋亡。结论 反义hTR 对肺癌细胞A549端粒酶活性具有明显的抑制作用，使肺癌细胞A549生长抑制，促进细胞凋亡。     

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对MGC-803胃癌细胞的影响

目的探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸(antisense oligodeoxy nucleotides,ASODN)对MGC-803胃癌细胞端粒酶活性及细胞生长的影响。方法将实验分为正常对照组、端粒酶正义寡聚脱氧核苷酸(sense oligodeoxy nucleotides,SODN)组和不同剂量的ASODN组;脂质体介导的ASODN和SODN作用于MGC-803细胞后,分别采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)、酶联免疫吸附法(ELISA)、吖啶橙染色法、流式细胞术检测细胞的体外增殖、端粒酶活性、细胞形态、细胞凋亡和细胞周期的改变。结果转染48h后,终浓度为1、3及5μmol/L的ASODN对MGC-803细胞端粒酶活性及细胞的增殖均有抑制作用,与正常对照组比较差异显著(P<0.01),并呈一定剂量依赖性;流式细胞仪检测到凋亡峰,细胞被阻滞在G1/S期;吖啶橙染色后光镜下观察发现有典型的凋亡小体。结论以端粒酶RNA模板区为靶点的ASODN明显抑制MGC-803胃癌细胞的增殖,其机制可能是通过降低细胞的端粒酶活性而诱发细胞的凋亡,ASODN对胃癌的治疗具有重要价值。     

端粒酶逆转录酶基因反义寡核苷酸抑制膀胱癌细胞生长的机制

目的 :探讨端粒酶逆转录酶基因 (hTERT)反义寡核苷酸 (ASODN)对T2 4膀胱癌细胞生长的影响及作用机制 .方法 :采用脂质体介导技术 ,将hTERT基因ASODN转染入T2 4膀胱癌细胞中 ,应用端粒酶PCR ELISA法检测端粒酶活性变化 ,MTT法测定细胞生长变化 ,流式细胞术观察对细胞周期影响 .结果 :hTERT基因ASODN作用T2 4膀胱癌细胞后显著地抑制膀胱癌细胞端粒酶活性 ,吸光度A值降为 0 .4 5 .癌细胞生长增殖受限 ,抑制作用具有序列特异性和剂量依赖性 ,并出现细胞凋亡现象 ,凋亡率为 14 .8%,与SODN转染组及空白对照组进行比较 ,有显著性差异 (P <0 .0 5 ) .结论 :hTERT基因ASODN能特异性抑制T2 4膀胱癌细胞生长 ,下调端粒酶活性 ,促进细胞凋亡 .为膀胱肿瘤基因治疗的临床应用提供新靶点     

端粒酶反义RNA对人髓性白血病细胞系HL-60的作用

目的 探讨抗端粒酶在急性白血病治疗中的意义。方法 用脂质体介导法将pBBS212-hTR(反义端粒酶RNA真核表达载体）导入人髓性白血病细胞系HL-60中,采用TRAP法测定端粒酶活性,细胞生长动力学检测,电镜,DNA片段分析等方法观察其对HL-60细胞的端粒酶活性、细胞增殖及细胞凋亡影响。结果 端粒酶反义RNA能显抑制HL-60细胞的端粒酶活性,抑制HL-60细胞的增殖并促进其凋亡。结论 以端粒酶反义RNA抑制端粒酶活性是治疗白血病的潜在途径。     

降低端粒酶表达对人喉癌细胞系Hep-2生长的影晌

目的：用表达端粒酶反义RNA的方法研究端粒酶在喉癌细胞生长中的作用。方法：将端粒酶反义RNA真核表达载体，pBBS212-hTR转染入人喉癌Hep-2细胞系中，采用端粒重复扩增法测定端粒酶活性，用MTT法及流式细胞仪检测细胞周期，并用电镜观察细胞生长状况。结果：端粒酶反义RNA表达后能抑制Hep-2细胞的端粒酶活性，抑制细胞增殖并促进其凋亡.结论：以端粒酶反义RNA降低端粒酶的方法对人喉癌细胞系Hep-2的生长有明显抑制作用。     

核酶对肝癌SMMC-7721细胞端粒酶活性及凋亡的影响

目的:观察针对人端粒酶RNA模板区的核酶对肝癌细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响。方法:利用脂质体Lipofectamine介导,将已构建好的带有端粒酶核酶基因的重组质粒pBBS212Rz及空载质粒pBBS212转染肝癌SMMC-7721细胞,采用TRAP-ELISA法检测端粒酶活性,用倒置相差显微镜及流式细胞仪观察细胞生长和凋亡情况。结果:重组质粒pBBS212Rz转染的肝癌SMMC-7721细胞的端粒酶活性明显下降,细胞生长速度明显变慢,凋亡加速。结论:端粒酶核酶对肝癌细胞端粒酶活性和细胞生长有抑制作用,可望成为肝癌基因治疗的方法。     

端粒酶RNA特异性核酶抑制卵巢癌细胞端粒酶的活性

目的：研究端粒酶RNA特异性核酶对卵巢癌细胞活性的抑制作用。。方法：用脂质体法将构建好的核酶逆转录病毒载体转染至卵巢癌HO－8910细胞，以MTT比色法检测细胞的生长，应用流式细胞仪分析细胞周期细胞，观察细胞的增殖情况，同时扩增端粒重复序列，结合杂交分析，检测细胞的端粒酶活性。结果：MTT检测发现转染核酶后的细胞生长的潜伏期延长（48→72h），对数生长期减缓（4→5d），流式细胞仪结果显示其G1期比例明显增高（70．0％→80．5％，P＜0．01），S期细胞比例明显降低（19．0％→13．7％，P＜0．01），细胞增殖下降，细胞的端粒酶活性亦降低。结论端粒酶RNA特异性核酶能抑制卵巢癌细胞粒酶活性，抑制细胞增殖。     

端粒酶的义寡核苷酸抑制肺癌细胞端粒酶活性的研究

目的探讨端粒粒酶反义寡核苷酸对肺癌细胞端粒酶活性的抑制作用.方法脂质体介导的端粒酶反义寡核苷酸转染A549肺腺癌细胞株,采用TRAP-PCR-ELIsA法半定量检测转染后肺腺癌细胞端粒酶活性,观察它们的变化结果端粒酶反义寡核苷酸转染A549细胞72h后,A549细胞端粒酶活性明显下调.结论端粒酶反义寡核苷酸可以有效抑制肺腺癌细胞端粒酶活性.     

人端粒酶RNA反义寡核苷酸对顺铂诱导K562细胞凋亡的影响

目的研究人端粒酶RNA(hTR)反义寡核苷酸(ASODN)可否增强K562细胞对顺铂的敏感性。方法采用与hTR模板区互补的硫代ASODN处理K562细胞,用端粒酶重复扩增分析-PCR-ELISA检测法观察端粒酶活性的变化;琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡的DNA断裂;Annexin V PI双染后流式细胞仪检测凋亡细胞百分率。结果经ASODN作用后,K562细胞端粒酶活性明显下降。ASODN作用K562细胞24 h,再加入顺铂作用72 h,琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯形条带,而正义寡核苷酸(SODN)与顺铂联合作用组及单用顺铂组均未见到明显的DNA梯形条带。ASODN作用K562细胞24 h,再加入5 μmol/L 顺铂作用48、72 h的凋亡细胞百分率(18.3%和31.6%)分别与SODN联合顺铂作用组(9.6%和10.5%)、单用顺铂组(7.1%和9.4%)比较,差异有显著性(P<0.01)。结论以hTR模板区为靶点,ASODN能抑制端粒酶活性并促进顺铂诱导K562细胞的凋亡。     

人端粒酶RNA反义寡核苷酸对顺铂诱导K562细胞凋亡的影响

OBJECTIVE: To research whether the antisense oligodeoxynucleotide (ASODN) of RNA component of human telomerase (hTR) can increase the susceptibility of K562 cells to cisplatin. METHODS: K562 cells were treated with phosphorothoate ASODN complementary to the template region of hTR in vivo. The changing of telomerase activity was assayed by TRAP-PCR-ELISA and apoptosis by DNA gel electrophoresis, Annexin V, flow cytometry. RESULTS: There was a marked decrease in telomerase activity in ASODN treated cells as compared with that in control and sense oligodeoxynucleotide (SODN)-treated cells; but no difference between the latter two groups. Agarose gel electrophoresis of genomic DNA from K562 cells treated with ASODN and cisplatin combination for 72 h showed typical DNA ladder; neither did DNA ladder from K562 cells treated with SODN plus cisplatin nor cisplatin alone. Apoptosis rates of K562 cells treated with ASODN for 24 h and then with cisplatin for 72 h were significantly increased. There were statistically significant difference in the percentage of apoptotic cells between hTR ASODN plus cisplatin and SODN plus cisplatin or cisplatin alone group. CONCLUSION: ASODN complementary to the template region of hTR can significantly suppress the telomerase activity and enhance cisplatin-induced apoptosis of K562 cells in vivo.     

hTR反义寡核苷酸对急性白血病原代细胞端粒酶活性及凋亡的影响

目的　探讨端粒酶RNA(hTR)反义寡核苷酸 (ASODN)对急性白血病 (AL)原代细胞端粒酶活性及细胞凋亡的影响。方法　应用与人hTR起始密码子互补的硫代ASODN处理AL原代细胞 ,用台盼蓝拒染的方法计数活细胞 ,用端粒酶重复扩增分析 (TRAP) -PCR -ELISA检测法观察端粒酶活性的变化 ,用Giemsa染色、Hoechst332 5 8 PI双染荧光显微镜检查及流式细胞仪检测凋亡细胞的发生。结果　经hTR -ASODN作用后 ,AL原代细胞端粒酶活性明显受到抑制 ,并与ASODN的浓度和处理时间相关 ,10 μmol/LASODN在作用 72h时端粒酶活性为( 0 0 95± 0 0 6 ) ,较细胞对照组 ( 1 15 4± 0 15 )下调明显 (P <0 0 1) ;在作用第 5天经荧光显微镜可观察到ASODN组细胞凋亡形态学变化。流式细胞仪检测到其凋亡率为 ( 31 72± 8 6 4 ) ,与细胞对照组的凋亡率 ( 6 33± 0 91)比较 ,差异有显著性 (P <0 0 1)。结论　hTR -ASODN可明显抑制AL原代细胞端粒酶活性并诱导其凋亡 ,hTR可能成为白血病基因治疗新靶点     

端粒酶11-聚体寡核苷酸联合依托泊苷对肺癌细胞的作用

目的: 探讨依托泊苷(VP-16)单独或联合端粒酶11-聚体寡核苷酸对肺腺癌细胞的作用。方法: VP-16单独或联合脂质体介导的端粒酶11-聚体寡核苷酸与肺腺癌细胞株共培养,MTT法检测细胞生长抑制率;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡;以TRAP-ELISA法半定量测定细胞端粒酶活性。结果: VP-16抑制肺腺癌细胞株SPC-A₁细胞生长,抑制率18.9%,下调端粒酶活性,与未加VP-16比较均有明显不同(P<0.01),可诱导细胞凋亡。VP-16联合反义寡核苷酸(ASODN)与联合正义寡核苷酸(SODN)对SPC-A₁细胞的抑制率分别为43.5%和41.0%,两者差异无显著性(P>0.05);联合用药效果明显优于单用VP-16,差异有显著性(P<0.01)。结论: 化疗药联合短链正、反义核苷酸可抑制肺癌细胞生长,较二者单独应用可提高疗效,同时降低副作用。     

端粒酶反义寡核苷酸体外抑制宫颈癌细胞端粒酶活性的研究

目的探讨端粒酶反义寡核苷酸(ASON)对宫颈癌Hela细胞端粒酶活性的影响.方法针对端粒酶RNA的ASON作用于Hela细胞,同时以加有转染剂FuGENE6者为对照组,计数连续作用1,3,5 d后的细胞数.TRAP方法测定端粒酶的活性.结果ASON组与随机引物及空白对照组比较,端粒酶活性降低,细胞的增殖速度延缓;有转染剂FuGENE6的ASON组的细胞增殖数目和端粒酶活性显著低于无FuGENE6的ASON组;细胞对有FuGENE6的ASON的摄取显著多于单纯的ASON.在FuGENE6的介导下,ASON对端粒酶活性的抑制与ASON的浓度和治疗时间呈正相关.结论针对端粒酶RNA的ASON能抑制Hela细胞的端粒酶活性,转染剂FuGENE6可以增强端粒酶ASON对宫颈癌细胞端粒酶活性的抑制作用.     

Effect of antisense oligonucleotides of telomerase on the growth of RCZ cells derived from renal cell carcinoma in culture

目的 :研究端粒酶反义抑制剂对肿瘤细胞的影响。方法 :以端粒酶 RNA模板区为靶点 ,序列为 TAGGGTTAGACAA的硫代磷酸修饰的反义寡核苷酸 ( PS- ASON)及 1 3个寡核苷酸的随机引物与肾癌细胞株 RCZ细胞共同孵育 ,计数 1～ 43d细胞数 ,计算细胞倍增时间 ,通过 MTT法测定 ASON对细胞生长的抑制率。结果 :ASON实验组与随机引物对照组比较能明显减少细胞增殖数目 ( P<0 .0 1 )、增加抑制率 ( P<0 .0 1 )及延长倍增时间 ( P<0 .0 0 5) ;并且其抑制效果显示出剂量的依赖性 ( P<0 .0 5) ,具有序列选择特异性。结论 :以端粒酶 RNA模板区为靶点的反义寡核苷酸抑制肾癌 RCZ细胞增殖 ,可能对肿瘤治疗有潜在的意义     

端粒酶11-聚体寡核苷酸对肺癌细胞的作用

目的探讨端粒酶11-聚体正义寡核苷酸(S0DN)、反义寡核苷酸(ASODN)对肺腺癌细胞株(SPC-A1)的作用。方法脂质体介导的11-聚体正、反义寡核苷酸与肺腺癌低分化SPC-A1细胞株共培养后，MTT法检测细胞生长抑制率；瑞氏染色后观察细胞形态学变化；流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡。结果①ASODN抑制肺腺癌细胞SPC-A1生长，诱导细胞凋亡。②SODN抑制肺腺癌细胞SPC-A1生长，可能通过诱导细胞分化途径。③无义寡核苷酸(NODN)对肺腺癌细胞SPC-A1生长无抑制。结论ASODN和SODN分别通过诱导细胞凋亡和诱导细胞分化途径抑制肺腺癌细胞SPC-A，生长。     

端粒酶反义寡核苷酸对膀胱癌治疗作用的体外实验

目的：探讨端粒酶反义核苷酸对膀胱癌的治疗作用。方法：用TRAP-银染方法检测25例膀胱癌组织和4例癌旁组织中端粒酶活性的表达。以端粒酶RNA模板区为靶点,不同剂量的序列为TAGGGTTAGACAA的硫代磷酸修饰的反义寡核苷酸（PS-ASON）作为实验组（A、B、C）,以硫代磷酸修饰 13个核苷酸的随机引物作为对照组（D）,仅加入培养液作为空白对照组（E）,与人膀胱癌细胞株BIU87细胞共同孵育1~30 d,计细胞数,光镜及电镜观察,DNA凝胶电泳检测、流式细胞仪测定和分析细胞的凋亡和坏死。结果：25例膀胱癌组织中,24例（96%）表达端粒酶活性,4例癌旁组织无端粒酶活性表达。与随机引物及空白对照组比较,实验组的ASON能明显减少细胞增殖数目,实验组细胞在第2、8天及8天后出现较明显的凋亡峰和DNA梯状电泳带,并出现退化、老化、凋亡和坏死的形态学变化,凋亡率明显增高（P<0.001）,并显示剂量的依赖性（P<0.01）。 结论：以端粒酶RNA模板区为靶点的反义寡核苷酸引起膀胱癌BIU87细胞增殖抑制,退化、老化、凋亡和坏死,对膀胱癌的治疗有潜在的意义。     

VEGF反义寡核苷酸抑制胆囊癌生长增殖和凋亡的体外实验研究

目的:探讨VEGF反义寡核苷酸转染对人胆囊癌GBC-SD细胞生长、增殖和凋亡的影响。方法:运用Oligofectamine介导VEGF反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,ASODN)和错义寡核苷酸(Scrambled Oligodeoxynucleotide,SODN)转染人胆囊癌(GBC-SD)细胞。采用MTT法测定转染后各组细胞的生长曲线及抑制率,流式细胞术检测转染后不同时间各组细胞凋亡情况。结果:SODN组、SODN十Oligofectamine组对GBC-SD细胞生长无显著影响(P>0.05),ASODN组及ASODN十Oligofectamine组则能显著抑制GBC-SD细胞生长(P<0.05),且ASODN十Oligofectamine组对GBC-SD细胞生长增殖抑制作用较ASODN组更为强(P<0.05)。流式细胞术检测结果发现ASODN十Oligofectamine组能促进GBC-SD细胞凋亡(P<0.05)。结论:VEGFASODN转染能抑制胆囊癌GBC-SD细胞生长和增殖,Oligofectamine介导能明显增强VEGF ASODN的抑制作用;Oligofectamine介导VEGF反义寡核苷酸转染能促进胆囊癌GBC-SD细胞的凋亡。