FasL反义RNA抑制人T淋巴细胞致凋亡作用的研究

目的：探讨反义RNA抑制活化T淋巴细胞FasL的表达及其对Fas阳性细胞的致凋亡作用。为FasL反义RNA的应用提供实验依据。方法：获得FasL反义RNA重组逆转录病毒，调整感染滴度后转染活化人外周血单个核细胞(HPBMC)。采用流式细胞仪检测转染细胞表面FasL的表达以及对Fas^ IL-60细胞的致凋亡能力。结果：空病毒载体的重复转染上调活化HPBMC FasL的表达，但转染重组病毒能有效抑制活化HPBMC表达：FasL，表达率由13．93％下降至7．19％；FACS检测HL-60细胞的凋亡显示，转染重组病毒使活化：HPBMC对IL-60细胞的致凋亡作用明显下降，凋亡率由33．48％降为17．28％。结论：FasL反义RNA能有效抑制活化淋巴细胞表达FasL及由其介导的凋亡作用，但究竟采用何种载体转录FasL的反义RNA有待研究。     

细胞凋亡、增殖和Fas/FasL系统在大肠癌中的作用

目的 :探讨细胞凋亡、增殖及相关基因Fas、FasL在大肠癌发生发展中的作用。方法 :用免疫组化SP法检测 4 0例大肠腺癌、15例腺瘤及 15例正常组织Fas、FasL、PCNA蛋白的表达 ,并以TUNEL法对相应标本行凋亡细胞检测。结果 :凋亡指数随肿瘤分化程度的降低呈下降趋势 ,与淋巴结转移相关 (P <0 .0 5 )。增殖指数随肿瘤分化程度的降低呈上升趋势 ,但与淋巴结转移无相关性 (P >0 .0 5 )。在正常粘膜、大肠腺瘤、大肠腺癌中Fas表达逐渐降低 ,FasL表达逐渐增高 ,均有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :Fas、FasL异常表达促使肿瘤细胞逃避自身免疫攻击 ,细胞凋亡、增殖的平衡失调及Fas FasL系统异常表达在大肠癌发生发展中起重要作用。     

FasL相互作用蛋白的筛选及其在大肠癌研究中的意义

目的建立FasL相互作用蛋白的酵母双杂交系统，筛选与FasL相互作用的蛋白质，探讨FasL及其相互作用蛋白在大肠癌发生与发展中的意义，为筛选大肠癌早期诊断标志物和治疗靶标提供理论依据。方法以FasL作为诱饵蛋白，在人胎肝cDNA文库中筛选与FasL相互作用的蛋白质；将FasL相互作用蛋白的基因转染人直肠癌HR-8348细胞，通过细胞学实验（四唑蓝比色法），研究FasL及相互作用蛋白对直肠癌细胞耐药性的影响；应用免疫组织化学方法检测FasL及相互作用蛋白在大肠癌标本中表达情况，比较在大肠癌不同分期中这些蛋白的表达差异，研究他们在大肠癌发生与发展中的作用机制。结果筛选出10个与FasL特异性相互作用的蛋白，包括金属硫蛋白1K、1G、2A，组织蛋白酶B，脂肪酸合成酶，干扰素d诱导蛋白27，磷脂清除酶，丝氨酸／苏氨酸样激酶，锚着黏附蛋白以及纤维微丝蛋白一5等。细胞耐药实验证实，FasL与金属硫蛋白和组织蛋白酶之间的相互作用能够增强人直肠癌HR-8348细胞的耐药能力。免疫组织化学结果表明，癌变的大肠癌组织中FasL、组织蛋白酶、金属硫蛋白表达明显增高，高于正常大肠黏膜（P〈O．05）。结论FasL与组织蛋白酶、金属硫蛋白、锚着黏附蛋白等之间的相互作用与大肠癌的侵袭力及癌细胞产生耐药性密切相关：FasL、组织蛋白酶、金属硫蛋白可能为大肠癌诊断的标志物；FasL及其相互作用蛋白可作为治疗大肠癌新的分子标靶。     

Fas/FasL系统与肿瘤免疫逃避的研究进展

Fas抗原（（APO-1／CD95）与Fas配体（FasL）组成的Fas系统，在将凋亡信号转导人细胞内发挥重要作用。效应细胞FasL结合靶细胞Fas抗原后，在数小时内通过细胞凋亡途径使靶细胞死亡。近年来很多研究发现Fas在多种细胞表面均有表达，而FasL表达只限于少量细胞类型，诸如淋巴细胞．免疫特权器官的细胞和多种恶性肿瘤细胞，同时已证实表达FasL的肿瘤周围激活的Fas阳性淋巴细胞凋亡异常增加。另一方面，肿瘤的发生在很大程度上是因为转化的细胞不能正常凋亡所致。因此，研究如何抑制肿瘤的Fas反击（counterattact）和如何促进肿瘤细胞的凋亡将为肿瘤治疗提供新的途径。通过对FasL功能的深入研究将有助于充分认识FasL基因治疗的潜力，甚至提供一种有效的治疗措施。     

大肠癌原发灶及其肝转移灶组织中Fas、FasL的表达及意义

目的：探讨大肠癌原发性灶及其肝转移灶组织Fas,FasL蛋白的表达比较及其意义。方法：应用S－P免疫组化法检测30例大肠癌原发灶及其肝转移灶组织，20例正常肠黏膜组织中Fas,FasL的表达情况。结果：大肠癌原发灶的肝转移灶的FasL表达率显著低于正常中的表达，但原发灶与转移灶之间差别不显著。原发灶和肝转移灶的FasL表达率分别为63．33％和86．67％，显著高于正常组织中的表达，转移灶瘤细胞FasL表达率高地原发灶中的表达，二者差别具有统计学意义（P＜0．05）。原发灶的正常组织中的表达，转移灶瘤细胞FasL表达率高于原发灶中的表达，二者差别具有统计学意义（P＜0．05）。原发灶的转移灶中TILs均可测得Fas,FasL不同程度的表达。结论：FasL在大肠癌肝转移中起主要作用，瘤细胞Fas通过Fas,FasL介导凋记消灭肿瘤浸润淋巴细胞，为其自身在肝脏建群生长提供空间，逃避系统监视，促进转移过程顺利进行。     

大肠癌组织蛋白酶B和FasL表达临床意义的研究

目的探讨组织蛋白酶B（CatB）和FasL在大肠癌组织中表达及其对患者预后的影响。方法采用免疫组化方法，检测78例大肠癌原发灶、正常结肠黏膜中CatB、FasL表达。用Kaplan—Meier生存分析对比CatB、FasL表达对患者生存率的影响。结果在大肠癌原发灶、正常肠黏膜中CatB表达阳性率分别为51．3％、26．9％,FasL表达阳性率分别为43．6％、19．2％。大肠癌原发灶中CatB、FasL阳性率高于正常肠黏膜组织。Dukes’c期CatB、FasL表达阳性率高于Dukes A、B期（X^2=11．3267、8．2659，P〈0．01），低分化腺癌和黏液腺癌的CatB、FasL表达阳性率高于高分化和中分化腺癌（X^=-10．1584、7．2096，P〈0．01）。CatB和FasL表达双阳性组患者生存率低于CatB或FasL单一阳性组及两者表达均为阴性组。结论CatB和FasL增强表达与大肠癌的发生、发展有关，检测CatB、FasL表达对判断大肠癌预后有重要意义。     

心肌细胞凋亡与Fas/FasL基因表达变化及牛磺酸的影响

目的 观察大鼠缺血心肌细胞凋亡与Fas／FasL基因表达变化及牛磺酸对其的影响。方法 结扎冠状动脉制备心肌缺血模型，缺口末端标记法检测心肌凋亡细胞，免疫组织化学法检测Fas／FasL蛋白水平．RT—PCR法分析Fas基因mRNA表达变化。结果 缺血后心肌细胞凋亡指数、Fas／FasL蛋白阳性染色细胞指数及Fas基因的mRNA表达水平均明显增加．心肌组织SOD活性和MDA含量升高．Ca^ -ATP酶活性降低。牛磺酸能明显降低心肌细胞凋亡指数，Fas基因mRNA表达及Fas／FasL蛋白阳性染色细胞指数．抑制心肌组织MDA的生成．提高Ca^2 -ATP酶活性。结论 牛磺酸对缺血心肌细胞凋亡与Fas／FasL基因表达水平增高均有较好的拮抗作用。     

前列腺癌中FasL的表达及意义

目的：检测细胞凋亡基因FasL在前列腺癌组织中的表达,并探讨其意义。方法：应用免疫组织化学方法检测9例正常前列腺组织和24例前列腺癌标本中FasL蛋白的表达。结果：前列腺癌组织中FasL的表达显著高于正常前列腺组织中的表达（P＜0．01）。结论：FasL表达异常可能在前列腺癌的发生发展过程中起重要作用。     

大肠癌与细胞凋亡及诱导凋亡治疗

大肠癌为常见的恶性肿瘤,细胞凋亡调控失常在其发生和发展中起着重要作用.近年来,随着对大肠癌与细胞凋亡相关机制研究的不断深入,诱导细胞凋亡治疗成为大肠癌治疗的一个新的研究方向.该文就大肠癌与细胞凋亡及诱导凋亡治疗的相关研究进展进行综述.     

大肠癌与细胞凋亡及诱导凋亡治疗

大肠癌为常见的恶性肿瘤,细胞凋亡调控失常在其发生和发展中起着重要作用。近年来,随着对大肠癌与细胞凋亡相关机制研究的不断深入,诱导细胞凋亡治疗成为大肠癌治疗的一个新的研究方向。该文就大肠癌与细胞凋亡及诱导凋亡治疗的相关研究进展进行综述。     

Caspase-3基因在大肠癌、大肠腺瘤中的表达及其与细胞凋亡的关系

目的探讨大肠癌、大肠腺瘤中Caspase-3基因的表达及其与细胞凋亡的关系。方法采用免疫组化S-P法和原位末端标记法分别检测28例大肠癌、10例大肠腺瘤及5例正常大肠黏膜中Caspase-3基因的表达水平及细胞凋亡。结果Caspase-3基因在大肠癌、大肠腺瘤和正常黏膜组织中表达分别为46．4％（13／28）、60．0％（6／10）、80.0％（4／5），三者之间有显著性差异（P〈0．01）。大肠癌、大肠腺瘤中细胞凋亡指数显著高于正常黏膜组织（P〈0．01），凋亡指数与肿瘤的分化程度有关（P〈0．01），与病理类型、Dukes分期无关。大肠癌、大肠腺瘤中Caspase-3基因表达与细胞凋亡指数密切相关，阳性表达的细胞平均凋亡指数明显高于阴性表达的平均凋亡指数（P〈0．01），而正常黏膜组织中二者无显著性差异（P〉0．05）。结论肿瘤早期阶段的细胞凋亡异常和过度增生，可能是大肠癌的发病原因之一，作为细胞凋亡的调控因子，Caspase-3可能在大肠癌的发生发展中起重要作用。     

凋亡相关蛋白Fas/FasL和BcL-2在自身免疫性甲状腺病中的表达及意义

目的:探讨HT(桥本氏甲状腺炎)及DTG(弥漫性毒性甲状腺肿)细胞凋亡相关蛋白Fas/FasL和BcL-2的表达及其意义.方法:采用免疫组化S-P法检测HT及DTG中凋亡相关蛋白的表达,并分析凋亡相关蛋白的表达与两种甲状腺疾病病理发生发展的关系.结果:HT及DTG滤泡细胞表达Fas蛋白,阳性率分别为40%和60%,并且在靠近淋巴细胞浸润区的甲状腺滤泡细胞阳性反应较强,正常甲状腺组织滤泡细胞则未见表达.HT及DTG分别与正常甲状腺组织相比有显著差异P＜0.01.在正常甲状腺组织,HT及DTG中均有滤泡细胞表达FasL和BcL-2,而FasL的表达三者相比均无显著差异.BcL-2的表达在正常甲状腺组织和DTG中较强,而在HT中的表达较弱,与正常甲状腺组织和DTG相比有显著差异P＜0.01.结论:结果提示在HT中滤泡细胞通过表达Fas和FasL,经过Fas与FasL的作用导致部分滤泡细胞凋亡,并通过BcL-2表达的减弱,降低了抗凋亡的作用.在DTG中由于滤泡细胞通过增强BcL-2的表达,从而使得Fas和FasL介导的滤泡细胞凋亡作用减弱.本研究结果显示凋亡相关蛋白的表达在自身免疫性甲状腺病的发生发展中有重要作用.     

肺纤维化大鼠模型中细胞凋亡及Fas/FasL mRNA的表达

目的探讨细胞凋亡及Fas/FasL mRNA的表达在肺纤维化过程中的作用。方法通过博来霉素复制大鼠肺纤维化模型,同时设立正常对照组,采用TUNEL法、RT-PCR法检测肺组织细胞凋亡以及Fas/FasL mR-NA表达。结果肺纤维化模型复制成功。模型组肺组织细胞凋亡上调可持续至第28d,于第14d前后达高峰。Fas/FasL mRNA表达与细胞凋亡呈同步改变。结论细胞凋亡及Fas/FasL mRNA表达的上调可能是博来霉素致大鼠肺纤维化发生、发展的重要原因。     

问号钩端螺旋体诱导J774A.1细胞FasL/Fas表达上调及FasL/Fas相关细胞凋亡的研究

目的：了解FasL／Fas途径参与问号钩端螺旋体（简称钩体）诱导细胞凋亡及其FasL／Fas表达水平变化。方法：建立问号钩体黄疸出血群赖型56601株感染小鼠单核一巨噬细胞J774A．1模型。采用DAPI染色法观察问号钩体56601株感染细胞凋亡的形态学特征，流式细胞术定量检测感染细胞的凋亡率及FasL中和抗体对细胞凋亡的阻断作用。PE标记抗小鼠FasL或Fas单克隆抗体染色法，观察问号钩体56601株感染细胞FasL／Fas表达情况。采用流式细胞术定量检测感染细胞的FasL／Fas表达水平。结果：问号钩体56601株感染J774A．1细胞4h时，部分细胞出现染色质浓缩及边缘化现象；感染24h时上述病变现象更加明显且有部分细胞核裂解。问号钩体56601株感染J774A．1细胞4h和24h的凋亡率分别为53．6％和64．31％。FasL中和抗体预处理细胞后，问号钩体56601株感染细胞4h或24h的凋亡率分别为10．27％和15．90％。J774A．1细胞被问号钩体56601株感染后4和24h，FasL表达率分别从感染前的4．19％上升至21．69％和65．70％，Fas表达率分别从感染前的12．88％上升至91．96％和88．01％。结论：诱导细胞凋亡是问号钩体56601株损伤J774A．1细胞的重要机制。问号钩体可上调靶细胞FasI。／Fas表达水平；并通过FasL／Fas途径诱导J774A．1细胞凋亡。     

bcl-2, c-myc在人类大肠癌中的表达及意义

0引言细胞调亡与肿瘤的发生、发展关系密切．肿瘤细胞的凋亡受多种基因的网络式调控，bC人2，C-myC是较为重要的细胞凋亡调控基因．大肠癌是目前常见的消化道恶性肿瘤之一．我们运用免疫组织化学方法对大肠癌患者肿瘤组织内的bCI-2和。-nyC的分布及表达进行了研究．l材料?..     

基因转移FasL诱导人黑色素瘤细胞凋亡的体外实验

目的 探讨体外基因转移Fas配体（Fas-ligand,FasL)对人恶性黑色素瘤细胞凋亡的影响。方法 用携带人FasL,cDNA的缺陷型重组腺病毒载体（Ad-FL)，在体外转导两株黑色素瘤细胞，并使其表达；通过流式细胞仪，RT－PCR法进行Fas/FasL表达检测，TUNEL法及荧显微镜相关凋亡检测，分析，结果 流式细胞仪和RT－PCR检测两株黑色素瘤细胞表面均表达Fas，不表达FasL，而Ad-FL转导的两株黑色素瘤细胞均能表达FasL，Ad-FL能显著诱导两株黑色素瘤细胞在体外凋亡或抑制其生长。结论 重组腺病毒FasL在体外诱导人黑色素瘤凋亡效果显著。     

Fas和FasL在急性胰腺炎中的共表达及其与凋亡的关系

目的探讨凋亡调控基因Fas、FasL在大鼠急性胰腺炎中的表达及其与腺泡细胞凋亡的关系。方法通过胰胆管内逆行注射不同浓度的牛磺胆酸钠，建立不同严重程度的急性胰腺炎模型，用RT-PCR、免疫组化法检测胰腺组织Fas、FasL mRNA及蛋白的表达，原位末端标记法检测各组大鼠胰腺腺泡细胞凋亡。结果在正常的胰腺腺泡细胞中即存在着Fas、FasL mRNA及蛋白的表达，且呈现共区域化特点，凋亡细胞极少。在炎症程度较轻的胰腺组织，Fas和FasL mRNA的表达水平显著提高．腺泡细胞凋亡指数亦明显提高，随胰腺炎症程度的加重，Fas和FasL mRNA的表达逐渐下降．腺泡细胞凋亡指数亦逐渐下降。结论Fas／FasL系统可能参与了正常胰腺组织的细胞更新和自稳；是介导急性胰腺炎时腺泡细胞凋亡的一个重要途径。     

肺纤维化大鼠肺组织细胞凋亡及Fas/FasL基因的表达

目的:检测大鼠肺纤维化时肺组织细胞凋亡及Fas/FasL 基因的表达,探讨细胞凋亡在肺纤维化过程中的作用.方法:通过博来霉素复制大鼠肺纤维化模型,同时设立正常对照组,采用TUNEL法、RT-PCR 和Western Blot法检测肺组织细胞凋亡、Fas/FasL mRNA以及蛋白的表达.结果:肺纤维化模型复制成功;模型组肺组织细胞凋亡率、Fas/FasL mRNA和蛋白表达均显著高于对照组.结论:细胞凋亡及Fas/FasL基因表达的上调在博来霉素致大鼠肺纤维化发生、发展的过程中起了重要作用.     

Fas和FasL在鼻息肉组织中的表达研究

目的探讨Fas和FasL因子在鼻息肉发病机制中的作用。方法应用免疫组化SP法检测24例鼻息肉组织和10例下鼻甲组织中上皮细胞、腺上皮细胞、炎性细胞Fas和FasL因子的表达，并作对比分析。结果（1）Fas和FasL因子在下鼻甲组织均有表达。（2）鼻息肉上皮细胞、腺上皮细胞中Fas阳性表达显著低于下鼻甲组织（均P〈0．01），FasL阳性表达显著大于下鼻甲组织（均P〈0．01），且FasL表达显著高于Fas；鼻息肉炎性细胞中Fas和FasL阳性表达均显著高于下鼻甲组织（均P〈0．01），而FasL表达低于Fas。结论（1）Fas／FasL系统可能参与了正常鼻黏膜的细胞更新和自稳。（2）鼻息肉上皮细胞、腺上皮细胞均存在着Fas的表达下调和FasL的表达上调，致使上皮细胞逃避了Fas／FasL系统介导的细胞凋亡而过度增殖：Fas／FasL系统在鼻息肉炎性细胞凋亡抑制中具有重要作用。     

肝癌细胞通过Fas/FasL途径触发T淋巴细胞的凋亡

目的：研究肝癌细胞表面Fas/FasL系统的变化及对其逃避机体免疫监控的影响。方法：采用流式细胞术和RT-PCR检测肝癌细胞株HepG2、Hep3B和PLC/PRF/5Fas和FasL的表达;观察化疗药物争光霉素诱导肝癌细胞FasL表达及FasL表达上调后的肝癌细胞触发淋巴细胞株Jurkat细胞凋亡的作用。结果：HepG2、Hep3B和PLC/PRF/5肝癌细胞株Fas表达均阴性;HepG2 FasL mRNA的表达为阴性,而Hep3B 和PLC/PRF/5FasL mRNA的表达均阳性。经争光霉素（0.6mg/ml）诱导后,上述肝癌细胞Fas的表达无明显变化,而其FasL的表达却增加,与Jurkat细胞混合孵育则触发后发生显性调亡。结论：肝癌细胞可能一方面降低或不表达Fas而对Fas介导的凋亡耐受,另一方面又增强自身FasL的表达以诱发与之接触的T淋巴细胞凋亡,在完成免疫逃避的同时,可对周围的T细胞实施反攻击。