大鼠坐骨神经切断后相应脊髓节段中GAP-43表达的变化

目的 探讨成年Wister大鼠在坐骨神经切断后GAP-43于相应脊髓节段前角运动神经元内的表达变化.方法 选取健康成年雄性Wister大鼠60只,随机分为坐骨神经切断组和对照组,分别于术后1、2、4、8、12、16周处死后取其L4～L6脊髓,利用免疫组织化学技术检测GAP-43在相应脊髓节段中的表达变化,并利用影像分析系统进行统计学分析.结果 在对照组中GAP-43表达呈阴性,随着时间的变化无明显改变.坐骨神经切断组与对照组在不同时相中的变化:1周时对照组中胞体内GAP-43有明显表达,2周达到高峰,4～8周时呈下调趋势,9～16周时GAP-43在神经元中仍有表达.结论 坐骨神经切断可导致成年大鼠相应脊髓阶段中前角运动神经元GAP-43表达明显增加,表明周围神经损伤后,神经元的再生能力增强,但并不能长时间持续.     

成年大鼠坐骨神经切断后脊髓运动神经元死亡方式的研究

目的探索成年大鼠坐骨神经切断损伤后脊髓前角运动神经元的死亡方式.方法选择大鼠坐骨神经切断损伤模型,术后48 h、7 d、15 d、30 d动物经4%多聚甲醛常规灌注固定,取L4～L6脊髓节段,TUNEL染色和电镜观察.结果坐骨神经切断后TUNEL染色和电镜观察均检测到脊髓前角运动神经元典型的凋亡形态学改变.结论周围神经切断后脊髓前角运动神经元出现凋亡,表明神经元的凋亡可能为成年大鼠周围神经损伤引发神经元死亡的重要病理过程.     

坐骨神经切断后脊髓前角GDNF mRNA的表达变化及其意义

目的：探讨大鼠坐骨神经切断后,脊髓前角胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）mRNA的表达变化及其意义。方法：切断SD大鼠两侧坐骨神经,建立脊髓前角运动神经元损伤模型,应用半定量RT-PCR方法,观察大鼠L3-L5脊髓前角运动神经元GDNFmRNA的表达。结果：坐骨神经切断前,GDNF mRNA在脊髓前角少量表达,坐骨神经切断后1天表达减少20%,4天减少40%,7天减少70%,14天后减少80%。结论：脊髓前角运动神经元GDNF mRNA表达减少,是“细胞体-轴突-靶器官”轴质流中断所致,为应用外源性GDNF治疗脊髓损伤提供了理论基础。     

蛛网膜下隙局部应用GDNF对脊髓前角运动神经元的保护作用

目的 研究周围神经损伤后经蛛网膜下隙置管局部应用外源性胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neu-rotrophic factor,GDNF)对脊髓前角运动神经元的保护作用. 方法 成年SD大鼠随机分为2组:GDNF组(坐骨神经切断术后给予GDNF)和NS组(术后给予生理盐水).切断两组大鼠左侧坐骨神经致相应脊髓前角运动神经元部分损伤,行蛛网膜下隙置管,实验组注入外源性GDNF(10 μg/ml),对照组注入同等剂量的生理盐水,于2,4,8周行坐骨神经功能指数检测;取L4-6节段脊髓标本冰冻切片,行胆碱酯酶(ChE)和酸性磷酸酶(ACP)染色并进行图像分析. 结果 GDNF组脊髓前角运动神经元ChE阳性颗粒面积比NS组有明显提高(P<0.05),ACP阳性颗粒面积低于NS组(P<0.05);GDNF组坐骨神经功能指数亦优于NS组. 结论 周围神经损伤后通过蛛网膜下隙注入外源性GDNF对相应的脊髓运动神经元有保护作用.     

地塞米松对坐骨神经损伤后脊髓神经元形态的影响

目的 观察地塞米松对大鼠坐骨神经损伤后脊髓运动神经元形态学的影响.方法 27只成年Wis-tar 雄性大鼠随机分为4组.神经损伤组:大鼠右侧股外侧切口,钳夹右侧坐骨神经造成神经损伤;地塞米松组:于神经损伤后局部肌肉间隙内注射地塞米松0.5 mg/(kg·d);生理盐水组:在神经损伤后注射等量生理盐水;正常对照组:不做任何处理.手术后不同时间段分别取各组动物L4～L6节段脊髓,制做石蜡切片,观察脊髓运动神经元形态及数量的变化.结果 神经损伤组可见同侧脊髓前角运动神经元胞体变小,尼氏体数目减少,模糊不清.地塞米松组神经损伤后的脊髓前角运动神经元和尼氏体的形态明显改善,数量增加.结论 大鼠坐骨神经损伤后局部应用地塞米松可改善脊髓前角运动神经元的形态结构,恢复蛋白质合成功能.     

银杏叶提取物对坐骨神经损伤后运动神经元超微结构的影响

目的　研究银杏叶提取物 (EGb761)对大鼠坐骨神经损伤后脊髓前角运动细胞超微结构的影响。方法　SD大鼠 18只 ,随机分成两组 ,银杏叶提取物 (EGb761)组和生理盐水 (SAL)组。切断大鼠坐骨神经并将神经远近端分别反折结扎 ,术后经腹腔分别注射EGb761( 10 0mg (kg·d)和同体积的SAL ,于 2、4、6周取材L4～ 6 节段脊髓 ,电镜下观察前角大型运动神经元细胞核及细胞器的超微结构形态变化 ,用体视学方法计算每张照片线粒体、内质网及溶酶体面积密度变化。结果　两组脊髓前角大型运动神经元超微结构均发生损伤性改变 ,实验组超微结构形态以及线粒体、内质网及溶酶体体积密度变化程度明显好于对照组。结论　银杏叶提取物能减轻大鼠坐骨神经损伤后前角运动神经元超微结构的损伤性改变 ,对运动神经元有一定的保护作用     

大鼠坐骨神经损伤修复术后相应脊髓节段Bcl-2、Bax蛋白表达及神经细胞凋亡

目的探讨成年大鼠坐骨神经损伤修复术后相应脊髓节段Bcl-2、Bax蛋白表达及神经细胞凋亡为临床治疗周围神经损伤提供实验依据。方法选取健康成年大鼠68只,随机分为正常对照组、假手术组和实验组,分别于术后不同时间取相应脊髓节段做HE染色、TUNEL染色、免疫组化染色,进行脊髓切片形态观察、检测神经细胞的凋亡及脊髓Bcl-2、Bax蛋白表达。结果假手术组术后无阳性变化。实验组术后脊髓前角运动神经元胞体数目减少,1d后可见脊髓内TUNEL阳性细胞,14d后表达至高峰。1d后,凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达,14d后达高峰,28d后仍有表达。Bcl-2/Bax值越小,凋亡细胞数量越多。结论大鼠坐骨神经损伤修复术后相应脊髓节段存在神经细胞凋亡,Bcl-2/Bax比值的变化是神经凋亡的重要指标。     

转化生长因子β1在大鼠周围神经再生过程中的作用

目的：探讨转化生长因子β1(TGFβ1)在大鼠周围神经损伤后再生过程中的作用及是否参与了再生中脊髓前角运动神经元碱性成纤维生长因子（bFGF）表达的调节。方法: 将48只成年SD大鼠在右侧坐骨神经压榨损伤术后随机分为TGFβ1组和生理盐水（NS）组。TGFβ1组在坐骨神经压榨损伤近心端注射TGFβ1 50μL(0.1μg/mL)，术后隔日在右侧下肢后群肌内注射TGFβ1 50μL, 对照组同样方法注射等量NS。实验动物分别存活3，7，14和21d后运用免疫组织化学方法检测TGFβ1对脊髓前角运动神经元bFGF蛋白的表达变化。存活21d的实验动物还用半薄切片和Fast Blue逆行荧光示踪方法观察TGFβ1对坐骨神经损伤后远端的再生情况。结果：TGFβ1组脊髓前角bFGF蛋白的表达高于NS组（P<0.05）；损伤远侧端再生轴突数目、直径与髓鞘厚度TGFβ1组均明显好于NS组（P<0.05）； TGFβ1实验组脊髓和背根节内荧光标记细胞数量明显多于NS组（P<0.01）。结论：外源性TGFβ1可以促进周围神经损伤后再生；TGFβ1上调周围神经损伤后脊髓前角运动神经元bFGF的表达。     

联合应用神经营养素-4胶质细胞源性神经营养因子对脊髓前角运动神经元的保护作用研究

目的研究周围神经损伤后经蛛网膜下腔置管局部联合应用神经营养素（NT）-4和外源性胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）对脊髓前角运动神经元的保护作用。方法成年SD大鼠随机分为3组,GDNF组、NT-4组和GDNF联合NT-4组。切断大鼠坐骨神经致相应脊髓前角运动神经元损伤,于第5、6腰椎椎间隙行蛛网膜下腔置管,并注入外源性GDNF（10μg/mL）和NT-4,不同时间处死动物并取材,对L4～6节段脊髓标本冰冻切片,行苏木素-伊红染色、尼氏体染色、胆碱酯酶染色。结果 GDNF联合NT-4组脊髓前角运动神经元的存活率、胆碱酯酶阳性颗粒面积均比前2组有明显提高,组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论周围神经损伤后通过蛛网膜下腔联合注入NT-4、GDNF较两者单独使用更有利于保护脊髓运动神经元。     

大鼠不同类型臂丛根性损伤后脊髓运动神经元NOS的表达

目的 研究成年大鼠不同类型臂丛损伤后脊髓运动神经元一氧化氮合酶（NOS）表达与神经元死亡之间的关系。方法 选用76只健康成年SD大鼠，分别造成臂丛神经根性切断伤与根性撕脱伤，于损伤后不同时间观察脊髓前角运动神经元的存活率，以及NOS在脊髓前角运动神经元中的表达情况。结果 臂丛神经根性切断伤后，损伤侧脊髓前角运动神经元无明显死亡，且未见NOS表达。臂丛神经根性撕脱伤后1周，损伤侧脊髓前角运动神经元数目开始减少，并出现NOS阳性表达。之后随着NOS阳性神经元增多，神经元死亡率也增加，6周后神经元数目基本维持稳定而NOS阳性神经元逐渐减少消失。结论 臂丛神经根性撕脱伤后，NOS参与损伤后脊髓运动神经元死亡，或在运动神经元死亡中起重要作用。     

慢性镉中毒致大鼠肌萎缩侧索硬化症样改变的研究

目的:探讨小剂量慢性镉中毒法建立大鼠肌萎缩侧索硬化症动物模型的可行性.方法:成年大鼠饮水慢性染镉.每天饮用含镉去离子水(150mg/L),记录每天饮水量,120 d后取材.采用神经电生理、光镜、电镜技术测定大鼠坐骨神经传导速度、股二头肌形态学变化、脊髓前角运动神经元形态学变化;同时采用原子吸收石墨炉法、生物化学技术测定脊髓内镉含量以及脊髓组织细胞内铜锌超氧化物歧化酶1(CuZn-SOD_1)活性、丙二醛含量的变化.结果:染镉后120d,大鼠运动神经传导速度减慢但股二头肌纤维直径变化不明显;脊髓前角运动神经元胞体平均截面积有变小、神经元胞浆内粗面内质网排列紊乱并出现核糖体脱颗粒现象;染镉后脊髓内镉含量增加、脊髓组织匀浆内CuZn-SOD_1酶活性降低,而丙二醛含量升高.结论:镉可以在成年大鼠脊髓内蓄积,导致前角运动神经元形态和功能损伤.提示慢性镉中毒法可用于建立大鼠肌萎缩侧索硬化症的动物模型.     

地塞米松对大鼠坐骨神经损伤后脊髓神经元碱性成纤维细胞生长因子的影响

目的:周围神经损伤的再生修复是神经科学研究的重要课题.碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在神经系统的生长发育过程中起重要作用.地塞米松可用于治疗神经损伤.文中通过制备大鼠坐骨神经钳夹损伤模型,观察地塞米松对大鼠坐骨神经损伤后脊髓运动神经元bFGF的影响. 方法:56只Wistar大鼠分为4组.神经损伤组:大鼠右侧股外侧切口,钳夹右侧坐骨神经造成神经损伤;地塞米松组:神经损伤后即刻局部肌肉间隙内注射地塞米松0.5mg/(kg·d);等渗盐水组:在神经损伤后等时间点注射等量等渗盐水;正常对照组:不做任何处理.用免疫组化技术观察脊髓前角运动神经元bFGF的变化. 结果:地塞米松明显提高神经损伤后脊髓运动神经元bFGF的表达. 结论:地塞米松通过增强坐骨神经钳夹损伤后脊髓前角运动神经元内bFGF的表达,促进受损神经元的功能恢复.     

选择性臂丛损伤后脊髓降钙素基因相关肽mRNA的表达

目的探讨选择性臂丛损伤后脊髓前角、后角降钙素基因相关肽（CGRP）表达变化对脊髓运动神经元轴索再生的影响。方法 29只SD大鼠随机分为4组：撕脱组（A组,n=8）,撕脱＋切断组（B组,n=8）和撕脱＋半横断组（C组,n=8）和对照组（n=5）。术后2周取脊髓第7颈节的前角和后角,用SYBRGreen荧光定量RT-PCR方法检测脊髓前角、后角中CGRPmRNA的表达。结果对照组脊髓前、后角CGRPmRNA呈低表达,前角表达略高于后角。A、B、C三组前角CGRPmRNA表达上调,C组上调幅度最显著,A、B、C三组后角CGRPmRNA表达均下调。结论脊髓CGRP表达改变是臂丛损伤再生中的特异性蛋白的重组反应,尤其是前角CGRP高表达对运动神经元轴突再生可能具有重要作用。脊髓前、后角的CGRP的功能可能不同。     

外源性NGF对坐骨神经损伤后脊髓前角细胞CNTF表达的影响

目的　探讨坐骨神经损伤后脊髓前角细胞睫状神经营养因子 (CNTF)表达变化及外源性神经生长因子(NGF)与CNTF表达的关系。方法　采用大鼠坐骨神经损伤动物模型 ,分为给药组和对照组 ,每只大鼠又分为损伤侧组 (L组 )和健侧组 (R组 )两个亚组。用原位杂交、免疫组化技术检测CNTF的表达水平 ,观察各组在 1d、7d、1 4d、2 1d及 2 8d时的变化。用计算机图像自动处理系统进行定量分析研究。结果　给药组损伤侧脊髓前角细胞中CNTF表达水平除 1d、7d组外其余均多于对照组 (P <0 .0 5 ) ;而两组健侧脊髓前角细胞中CNTF表达水平无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论　①外源性NGF能促进坐骨神经损伤后损伤侧脊髓前角细胞中CNTF表达水平的增加 ;而对健侧CNTF表达水平无明显作用。②坐骨神经损伤后损伤侧脊髓前角细胞中CNTF表达水平在最初的 3周内逐渐下降 ,然后开始恢复 ,但至第 4周尚未恢复到开始时的水平 ;而两组健侧CNTF表达水平则无明显差异 (P >0 .0 5 )。     

神经病理性痛大鼠脊髓背角钾氯共转运体的表达

目的 观察左侧坐骨神经分支选择结扎切断(SNI)模型致神经病理性痛大鼠的脊髓背角钾氯共转运体(KCC2)表达的变化.方法 将27只健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为SNI组(18只)和假手术组(9只).SNI组大鼠暴露坐骨神经及其3个末端分支(腓肠神经、腓总神经和胫神经),结扎并切断腓总神经和胫神经,保留腓肠神经完整;假手术组大鼠仅暴露坐骨神经及其分支,不切断.应用vonFrey纤毛检测SNI术后不同时间段的大鼠机械痛阈值;应用免疫印迹技术观察SNI术后不同时间相应的脊髓腰膨大(L4、L5)节段脊髓背角KCC2的表达.结果 术后1、3、5、7 d,SNI组大鼠左侧后肢的缩足阈值呈显著下降趋势,分别为(3.23±0.49)、(0.60±0.09)、(0.38±0.07)、(0.21±0.06)g,并且在随后的观察期内一直维持在这一低水平.术后1、3、5 d,SNI组大鼠腰膨大节段脊髓的左侧背角KCC2的表达量(即KCC2表达量与内参a-tublin表达量的比值)为0.97±0.09、0.32±0.10、0.53±0.15,分别较右侧的1.27±0.08、0.63±0.09、1.11±0.18显著减少(P值均＜0.05);术后3 d,右侧的表达量为0.63±0.09,较假手术组的1.15±0.13显著下降(P＜0.05);至术后7 d,脊髓背角两侧KCC2的表达量基本恢复正常水平.结论 SNI模型可致病理性神经痛早期损伤侧脊髓背角KCC2的表达明显减少,可能在慢性神经病理性痛的发展过程中发挥作用.     

神经再生素促进大鼠坐骨神经损伤后再生

目的:探讨神经再生素(NRF)对大鼠坐骨神经损伤后再生的影响.方法:SD大鼠30只,雌雄各半,随机分为3组:NRF低、高剂量组和空白对照组.分别于坐骨神经夹伤术后10、15、20 d测定大鼠坐骨神经功能指数(SFI),分离出大鼠双侧坐骨神经行电生理学检测,计算神经干动作电位恢复率;各组随机选取2只大鼠,应用透射电镜观察再生坐骨神经超微结构;其余大鼠行光镜下观察脊髓腰膨大(L4～L6)、夹伤远端处坐骨神经、损伤侧腓肠肌组织,并测定脊髓前角运动神经元数、再生有髓神经纤维数、腓肠肌肌细胞截面积等指标.结果:术后10 d各组SFI无显著差异,术后15 d仅仅高剂量组SFI明显优于对照组(P＜0.01),术后20 d高、低剂量组SFI均优于对照组(P＜0.01,P＜0.05);术后20 d高、低剂量组及对照组大鼠坐骨神经干动作电位的恢复率分别为(57±26)%、(44±15)%、(31±9)%,其中高剂量组与对照组相比有显著差异(P＜0.05);高剂量NRF组的有髓神经纤维成熟度优于对照组,而变性纤维少于对照组;光镜下NRF高剂量组再生神经纤维排列致密整齐、结构均匀,腓肠肌肌细胞饱满、排列整齐,双侧脊髓前角运动神经元更接近;NRF高剂量组脊髓前角运动神经元计数、有髓神经纤维计数均显著高于对照组(P＜0.05,P＜0.01),NRF高、低剂量组腓肠肌肌细胞截面积显著高于对照组(P＜0.01,P＜0.05).结论:NRF能促进坐骨神经再生及其功能恢复.     

丙戊酸钠对大鼠坐骨神经损伤后脊髓运动神经元的保护作用

目的:观察丙戊酸钠对鼠坐骨神经切断后脊髓运动神经元凋亡及Bcl-2基因表达的影响。方法:采用清洁级SD大鼠30只,行右坐骨神经横形切断后即刻原位吻合术,制成周围神经损伤模型后,随机分为丙戊酸钠口服组(A组)、生理盐水对照组(B组)。分别于术后1,4,7,14,28 d取材,应用TUNEL法检测细胞凋亡数,用免疫组化技术检测脊髓运动神经元Bcl-2的表达,并对脊髓凋亡细胞以及阳性运动神经元进行计数。结果:坐骨神经切断后4,7,14 d,实验组脊髓运动神经元Bcl-2吸光度明显高于对照组(P<0.05);坐骨神经切断后7,14 d,实验组脊髓神经元凋亡率明显低于对照组(P<0.05)。结论:丙戊酸钠对鼠坐骨神经损伤后脊髓神经元具有保护作用。     

几丁质在大鼠坐骨神经损伤早期修复作用的研究

目的：探讨几丁质（chitin）对坐骨神经损伤早期（伤后30天内）所引起的脊髓前角运动神经元死亡以及功能丧失的保护作用。方法：实验动物随机分成对照（SAL）组和实验组（chitin）组，采用硅胶管套接大鼠切断的坐骨神经，硅胶管内给予生理盐水（SAL）或几丁质溶液（chitin），分别于术后7、14和30d应用尼氏染色，酶组织化学染色方法，检测神经损伤侧的脊髓前角运动神经元死亡数目，及酸性磷酶酶（ACP）的变化幅度；测量术后10、20和30d坐骨神经功能指数（SFI）的恢复率。结果：与SAL组比较，术后7、14和30d，chitin组脊髓前角运动神经元死亡率分别降低了6.31%、6.26%和10.15％；脊髓前角运动神经元中酸性磷酸酶变化的幅度分别下降了46％、57％和87％；术后10、20、30dSFI恢复率分别提高了1.44%、2.52％和5.69％。结论：几丁质对周围神经损伤后的神经元死亡有较好的保护作用和良好的促恢复作用。     

臂丛神经根损伤后aFGF基因在脊髓运动神经元的表达

目的：研究大鼠臂丛神经根损伤后酸性成纤维细胞生长因子（aFGF)在脊髓前角运动神经元的表达及表达的保护作用。方法：选用120只健康成年SD系大鼠，随机分为脊髓神经根损伤组、假手术组和正常对照组，每组再设1h组、6h组、24h组、48h组，实验组造成臂丛神经损伤，取大鼠脊髓标本，然后应用免疫组化技术（LSAB）染色，观察aFGF基因在脊髓前角运动神经元的表达。结果：在脊髓神经根损伤后的手术后不同时间组中，损伤脊髓神经元表达不同。在损伤1h表达高峰，持续至伤后6h，在脊髓神经损伤24h后恢复正常。在假手术组和正常对照组的手术后不同时间组中，表达结果无差异。结论：神经元损伤后，脊髓运动神经元aFGF基因表达增加，提示这与脊髓运动神经元修复机制有关，尤其是早期修复过程中aFGF基因表达增加具有很重要的抗损伤保护作用。     

Influence of sodium ferulate on the expression of Bcl-2 and Bax in the spinal cord neurons in rats with neuropathic pain

目的 观察阿魏酸钠对神经病理性疼痛大鼠脊髓中Bcl-2和Bax表达的影响,探讨阿魏酸钠对脊髓的保护作用.方法 成年雄性Wistar大鼠随机分为两组:A组(n=30)为生理盐水组,结扎左侧坐骨神经后每天腹腔注入2ml生理盐水;B组(n=30)为阿魏酸钠组,结扎坐骨神经后向腹腔注入2ml阿魏酸钠,100mg.kg-1·d-1,连续7d.分别在术前及术后6h、1d、3d、7d进行行为学测定,记录缩足阈值,检测脊髓中Bcl-2和Bax的表达,采用TUNEL法观察脊髓神经元凋亡.结果 两组大鼠坐骨神经结扎后均可诱发出神经病理性疼痛;凋亡神经元和Bcl-2和Bax阳性细胞均于术后6h开始出现,并于术后1d开始迅速增加,术后3d达峰值.与生理盐水组相比较,阿魏酸钠组大鼠脊髓组织中神经细胞凋亡指数和Bax表达水平显著降低,而Bcl-2的表达水平却显著增加(P＜0.05).结论 阿魏酸钠可能通过促进Bcl-2表达,抑制Bax表达,从而抑制了大鼠脊髓神经元凋亡,对脊髓有保护作用.