自发性高血压大鼠室周灰质中NOS阳性神经元的形态学观察

【目的】探讨自发性高血压大鼠(SHR)脑室与中脑水管周围灰质中一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元的变化及其与高血压病的可能关系。【方法】选10月龄成年SHR大鼠12只,同龄正常血压对照大鼠(Wistar-Kyoto,WKY)12只,灌注固定后取脑和脑干作冠状位冰冻切片,行NADPH-d组织化学方法染色,光镜观察和图象分析。【结果】(1)NOS阳性神经元主要分布在中脑水管周围灰质(PAG)的背外侧部,下丘脑第三脑室(3V)室周灰质,以及第四脑室(4V)室底灰质中;在3V周围,NOS阳性神经元散在分布,并可区分为室管膜下(远位)、膜内和膜上3种;左、右侧脑室周围未见阳性神经元分布。(2)SHR组上述部位的NOS阳性神经元数量较少,且平均灰度值增加(染色变浅),两组间比较具有统计学意义(P<0.05)。【结论】SHR室周灰质中NOS阳性神经元数量减少、NOS水平下降,NO合成减少,可能参与了高血压病的发病过程。     

大鼠中枢神经NOS阳性触液神经元的形态学观察

目的：探讨脑脊液中一氧化氮（NO）的来源及其分泌的形态学基础,了解中枢神经一氧化氮合酶（NOS）阳性触液神经元的分布特征。方法：将12只成年雄性Wistar大鼠脑冠状位切片行NADPH－组织化学方法染色,对环脑室系统及脑表面NOS阳性触液神经元作了观察。结果：NOS阳性触液神经元主要见于中脑水管和第三脑室（3V）。在中脑水管,触液神经纤维来自中脑的中央灰质,特别是其背外侧部;来自脑干的被盖痛外侧核和中缝背核。在3V,NOS阳性纤维主要来自室调周核、室旁核,NOS阳性胞体有位于室管膜下（远位）、膜内和膜上3种。阳性纤维密集地分布于室管膜内。在中央管、第四脑室底、脑表面也有少量触液神经元。结论：脑脊液中的NO来自室管周及脑表面NOS触液神经元之合成和分泌。     

NPY在雌性大鼠间脑不同脑区的差异性分布

目的观察神经肽Y(NPY)免疫反应阳性物质在成年雌性大鼠间脑不同脑区的分布。方法采用亲合免疫组织化学SABC法。结果NPY免疫反应阳性神经元集中分布于下丘脑弓状核。NPY免疫反应阳性纤维密集分布于丘脑室旁核和下丘脑弓状核、室旁核、室周核等处。实验中见下丘脑弓状核和丘脑室旁核有纤维伸入第三脑室室管膜内。结论NPY的分布呈现出性别差异,NPY可能通过“脑-脑脊液神经体液回路”发挥重要功能。     

单宁酸-氯化铁法对SHR血管密度的观察

目的 探讨高血压病时多器官微血管密度的变化,以及它与高血压的因果关系. 方法用单宁酸-氯化铁组织化学方法媒染成年(12月)及幼年(4周)SHR、WKY 4组大鼠脑、肾、骨骼肌毛细血管,并对血管密度进行定量分析. 结果与成年组WKY相比,成年组SHR脑、肾、骨骼肌微血管密度均有所减低(P<0.01);血压尚未升高的幼年组SHR与幼年组WKY相比,肾皮质毛细血管密度有所减低(P<0.01).结论 成年SHR存在微血管稀少的现象是高血压的结果;幼年SHR肾皮质微血管减少可能是高血压病的一个早期征象,同时推测微血管减少也可能是高血压病的原因之一.     

自发性高血压大鼠内皮素不同组织分布及其意义

为探讨内皮素(ET)在自发性高血压大鼠(SHR)与正常血压大鼠(WKY)体内分布规律及其意义。本文选用SHR和WKY大鼠各10只,用放免法测定其血浆、脑组织和主动脉血管组织中内皮素含量的变化。发现SHR血浆、脑和主动脉中ET量均显著高于WKY组(P分别<0.01);WKY组脑较血管组织含量低(P<0.01),SHR组两者无显著性差异(P>0.05)。认为内皮素不同组织分布的变化可能与高血压的发生发展及并发症有关。     

老龄大鼠脑室管膜周围血管加压素神经元免疫细胞化学研究

为观察老龄大鼠室管膜周围血管加压素（Vasopressin,VP)能神经元的分布和VP表达的变化，应用免疫细胞化学方法，对青年组织和老龄组大鼠下丘脑VP能神经元进行免疫细胞化学反应，结果显示，老龄组大鼠第三脑室，侧脑室和穹窿下器的脑室管膜周围可见较多环脑室分布,VP免疫反应增强的VP能神经元和神经纤维，而正常青年组大鼠第三脑室，侧脑室和穹窿下器的脑室管膜周围则极少见类似分布的VP免疫反应阳性神经元，上述部位VP免疫反应神经元的增加和VP表达增强可能与机体老龄化过程有关，并可能对老年时期脑血管的调节产生重要影响。     

神经肽Y在雌性大鼠尾壳核的分布

目的观察神经肽Y免疫反应阳性物质在成年雌性大鼠尾壳核及其周围区域的分布。方法采用亲合免疫组织化学SABC法。结果NPY免疫反应阳性神经元大量分布于尾壳核,NPY免疫反应阳性纤维分布稀疏。近侧脑室处可见阳性细胞存在于尾壳核室管膜下区域,其串珠状突起可伸入室管膜内;也有细胞出现在紧邻胼胝体处,其膨体突起可伸入胼胝体。结论NPY可能参与尾壳核多种功能的调节并通过脑-脑脊液神经体液回路发挥重要功能。     

龟板含药血清体外诱导成年大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元

【目的】观察龟板含药血清体外诱导成年大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元的能力。【方法】采用龟板含药血清体外定向诱导第五代骨髓间充质干细胞，免疫组化鉴定神经丝蛋白(NFP)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。【结果】成年大鼠骨髓间充质干细胞受龟板血清诱导后神经元样细胞NF表达阳性，诱导后12h，神经元样细胞NF阳性表达达到高峰。【结论】龟板含药血清可以在体外诱导成年大鼠骨髓间充质分化为神经元。     

5-LO在SHR大鼠脑动脉平滑肌细胞中的表达及意义

【摘要】 目的 探讨5脂氧合酶（5-LO）在自发性高血压大鼠(SHR)脑动脉平滑肌细胞中的表达及意义。方法 选取16周龄雄性SHR和WKY大鼠,各15只,WKY大鼠作为正常对照。采用免疫荧光法检测5-LO在脑动脉血管中的表达,透射电镜观察动脉内膜表现,ELISA检测血清及动脉5-LO表达。结果 WKY大鼠动脉内膜光滑,平滑肌细胞排列整齐无增生,SHR大鼠内皮细胞肿胀,平滑肌细胞肥大变形排列紊乱;SHR大鼠脑动脉平滑肌细胞5-LO荧光强度为（110.93±5.92）,明显强于WKY大鼠（P＜0.05）;SHR大鼠血清和脑动脉5-LO水平分别为（2671.04±30.18）ng/l和（1950.04±30.08）ng/l,明显高于WKY大鼠,差异比较有统计学意义（P＜0.05）。结论 5-LO在SHR大鼠脑动脉平滑肌细胞和血液中表达异常增高,可能在高血压脑血管损害过程中起作用。     

大鼠中脑导水管周围灰质一氧化氮合酶阳性神经元的生后发育研究

目的：研究大鼠生后不同年龄段(1，7，14，21，28d)中脑导水管周围灰质内NOS阳性神经元的发育。方法：运用NADPH—d组织化学法。结果：在生后1d的中脑导水管灰质的背外侧核出现密集深染的NOS阳性神经元，胞体小，有短的突起。随着日龄的增加，NOS神经元经历了胞体由小到大、形态日趋成熟、突起日趋丰富、单位面积中神经元的密度逐渐降低的变化过程。神经元胞体的直径和密度在生后14d前有显著性变化，而在14d后变化渐不明显。结论：中脑导水管周围灰质的NOS阳性神经元的生后发育主要在1～14d之间。     

自发性高血压大鼠肾内血管内皮生长因子表达的变化

[目的]探讨血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)在自发性高血压大鼠 (Spontaneously Hypertensive Rat,SHR)血压升高前、后肾内的表达情况,分析其与高血压时肾毛细血管稀少的关系;[方法]应用免疫组化SP法及计算机图象分析技术,对幼年(6周龄,n=15)和成年(12月龄,n= 15)SHR大鼠及幼年(6周龄,n=10)和成年(12月龄,n=10)同系正常血压对照组京都Wistar大鼠(Wistar-Kyoto, WKY)肾VEGF蛋白的表达水平进行了定量分析;[结果]在4组大鼠的肾内均观察到了VEGF阳性反应,反应产物呈棕色颗粒状,主要分布于肾小球的足细胞和球内系膜细胞中,其中12月龄SHR组表达水平较其它3组高,阳性细胞数多及灰度值高(P<0．05),而6周龄和12月龄WKY及6周龄SHR 3组间表达水平差异无显著性(P>0．05);[结论]随着成年SHR大鼠血压的升高,肾小球VEGF蛋白的表达水平上调。这可能是对高血压所致的肾毛细血管减少的一种反应,高表达的VEGF可对抗由于缺血缺氧诱导的肾毛细血管内皮细胞凋亡,并促进微血管再生;但高表达的VEGF由于其增加毛细血管的通透性很可能参与了高血压时的肾损害。     

玄参提取物降低自发性高血压大鼠血压的作用机制

目的：探讨玄参提取物（extracts of Radix Scrophulariae,ERS）对自发性高血压大鼠（spontaneously hypertensive rat,SHR）的血压、缩血管物质及动脉形态的影响。方法：50只SHR随机分为SHR组、SHR加卡托普利（40mg／kg）组、SHR加ERS小剂量（70mg／kg）组、SHR加ERS中剂量（140mg／kg）组和SHR加ERS大剂量（280mg／kg）组;20只Wistar—Kyoto（WKY）大鼠随机分为WKY和WKY加ERS（140mg／kg）组。各给药组口服相应剂量药物,WKY组与SHR组灌服蒸馏水,每天1次,连续给药20周。给药前及治疗过程中,每3周监测大鼠血压;于给药第21周取材,酶联免疫吸附测定法检测大鼠血清血管活性物质去甲肾上腺素（noradrenaline,NA）、血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）、血栓烷A2（thromboxaneA2,TXA2）和6-酮前列腺素F1。及血管内皮缩血管肽Ⅰ（endothelin-1,ET-1）的浓度;取腹主动脉,苏木素和伊红染色分析腹主动脉形态变化,并计算中膜厚度和中膜厚度,／内腔半径比值。结果：给予ERS治疗3～21周可显著降低SHR的血压,显著降低血清NA、Ang1I、TXA。及血管ET-1的浓度,改善SHR腹主动脉组织的病理形态学变化,并显著降低其中膜厚度／内腔半;径比值。ERS对WKY大鼠血压及血管活性物质的影响不大。结论：ERS能显著降低SHR的血压,抑制其血管壁的增厚,显示出良好的降压作用和抗动脉硬化作用,其作用机制可能与抑制缩血管活性因子NA、Ang11、ET-1及TXBz的释放有关。     

阿折地平对自发性高血压大鼠左心室肥厚的抑制作用

目的 观察阿折地平对自发性高血压大鼠（spontaneous hypertension rat,SHR）心肌肥厚的抑制作用,初步探讨阿折地平抑制和逆转左心室肥厚(left ventricular hypertrophy, LVH)的可能机制。方法 20只SHR随机分为阿折地平组和SHR组,另选同源同系、血压正常的Wistar Kyoto大鼠10只作为正常对照组( WKY组),分别给予阿折地平（3mg·kg-1）和生理盐水灌胃,所有大鼠10周后测定收缩压（SBP）、心率（HR）、左心室重量指数(LVW／BW)、血清和心肌组织中一氧化氮（NO）和肿瘤坏死因子（TNF-α）含量。结果 SHR组与WKY组比较,SHR组SBP、LVW／BW 明显升高（P＜0.05）,血清和心肌中NO含量明显降低（P＜0.05）,TNF-α含量明显升高（P＜0.05）;应用阿折地平治疗10周后,SHR组与阿折地平组比较,阿折地平组SBP、LVW／BW有所升高（P＜0.05）,血清和心肌中NO含量明显升高（P＜0.05）,TNF-α含量明显降低（P＜0.05）。结论 阿折地平可以抑制高血压大鼠心肌肥厚,机制可能与其升高NO水平,抑制TNF α表达有关。     

苦瓜提取物对自发性高血压大鼠的血压影响及机制研究

目的观察苦瓜提取物对自发性高血压大鼠（SHR）血压的影响,并初步探讨其作用机制。方法6～8周龄雄性SHR大鼠50只随机分为模型对照组（SHR组）、卡托普利组（c组）、苦瓜提取物低剂量组（L组）、苦瓜提取物中剂量组（M组）和苦瓜提取物高剂量组（H组）,另取10只WKY大鼠作为正常对照组（WKY组）。连续灌胃8周,每2周平行测量大鼠收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、平均动脉压（MBP）。末次给药后腹主动脉取血测定血管紧张素II（AngII）和内皮素（ET-1）等指标。结果与SHR组比较,C组SBP、DBP、MBP极显著降低（P〈0．01）,血清AngII和ET-1浓度也显著降低（P〈0．05）;L组SBP变化差异无统计学意义,DBP和MBP显著降低（P〈0．05）;M组和H组的SBP、DBP、MBP均有不同程度降低（P〈0．01,P〈0．05）;H组血清AngII和ET-1浓度显著降低（P〈0．05）。结论苦瓜提取物能降低SHR大鼠的血压,其作用机制可能与降低血清AngII和ET—1浓度有关。     

人参、三七、川芎提取物对血管平滑肌细胞衰老相关β半乳糖苷酶及p16-cyclinD/CDK-Rb通路的影响

目的：观察人参、三七、川芎提取物延缓自发性高血压大鼠（spontaneously hypertensive rat,SHR）血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC）衰老的作用及其可能的细胞周期调控机制。方法：取大鼠胸主动脉用于分离VMSC,采用原代细胞培养的方法建立SHR大鼠VMSC模型,实验分为Wistar-Kyoto（WKY）大鼠对照组、SHR模型组、缬沙坦组、中药低剂量组和中药高剂量组。采用衰老相关β半乳糖苷酶（senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-gal）染色法观察细胞衰老情况,流式细胞仪分析细胞周期分布,逆转录聚合酶链式反应和蛋白质印迹法检测各组细胞p16、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、细胞周期蛋白依赖性激酶4（cyclin-dependent kinase4,CDK4）和成视网膜母细胞瘤蛋白（retinoblastoma protein,Rb）的表达。结果：SA-β-gal染色显示,与WKY组比较,SHR组SA-β-gal阳性细胞数明显增多（P〈0.01）,人参、三七、川芎提取物可使SHR VSMC SA-β-gal阳性细胞数明显减少（P〈0.01）;流式细胞仪检测显示,与WKY组比较,SHR组VSMC在G1期明显减少,S期细胞明显增加,中药干预后SHR的VSMC G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少（P〈0.05）;实时荧光定量聚合酶链式反应检测显示,与WKY组比较,SHR组VSMC的p16和Rb mRNA表达量明显减少,cyclin D1和CDK4mRNA表达增加;人参、三七、川芎提取物干预后SHR VSMC p16和Rb mRNA表达量增加,cyclin D1和CDK4mRNA减少。蛋白质印迹法显示,与WKY组比较,SHR组VSMC的p16蛋白表达量明显减少,cyclin D1、CDK4和磷酸化Rb蛋白表达量明显增加（P〈0.05）;中药干预后SHR VSMC p16蛋白表达增加,cyclin D1、CDK4和磷酸化Rb蛋白表达量减少（P〈0.05）。结论：人参、三七、川芎提取物通过改变p16-cyclin D/CDK-Rb通路因子的表达而发挥延缓SHR VSMC衰老的作用。     

p-MEK1/2与原发性高血压大鼠左心室肥厚关系的研究

目的动态观察p-MEK1/2在原发性高血压大鼠(SHR)左心室表达,进一步探讨MEK1/2-ERK1/2通路在高血压左心室重构中的作用。方法对比观察各周龄SHR大鼠与WKY大鼠血压,心脏/体重比值变化;免疫组织化学方法检测左心室p-MEK1/2的表达。结果整个实验过程中,WKY血压保持在正常水平,SHR16、SHR24组动脉收缩压均明显高于同周龄WKY组(P<0.05);与同周龄WKY相比SHR24组的心脏/体重比值增加明显(P<0.05);SHR24左心室相对壁厚度明显高于SHR8和WKY24大鼠(P<0.05);WKY和SHR大鼠左心室p-MEK1/2蛋白表达量均随着周龄的增加而增加,但SHR16、SHR24明显高于同周龄WKY(P<0.05)。结论 MEK1/2-ERK1/2通路可能有促进高血压左心室心肌肥厚发展的作用。     

原发性高血压条件下骨髓来源内皮祖细胞数量及功能的变化

目的了解原发性高血压对体外培养骨髓来源内皮祖细胞（EPC）数量及功能的影响。方法将自发性高血压大鼠（SHR）分为6、12周龄组,以同周龄正常血压Wistar-Kyoto（WKY）大鼠为对照。以密度梯度离心法分离骨髓来源单个核细胞体外培养．差速贴壁法培养7d后收集贴壁细胞并行鉴定为骨髓来源内皮祖细胞,测定EPC数量、细胞增殖活力（MTT法）、NO分泌及细胞凋亡率。结果6周龄SHR骨髓来源EPC数量与6周龄WKY大鼠比较差异无统计学意义（P〉0．05）,细胞增殖能力、NO分泌能力受损（P〈0．05）,凋亡率稍增多但差异无统计学意义（P〉0．05）。12周龄SHR骨髓来源EPC数量与12周龄WKY大鼠比较明显减少（P〈0．01）,细胞增殖能力、NO分泌能力受损（P〈0．01）,凋亡增多（P〈0．05）。结论随着SHR血压升高和原发性高血压病程延长．骨髓来源内皮祖细胞数量减少。功能减退,凋亡增多。     

复方山菊对自发性高血压大鼠血压 血脂及全血黏度的影响

目的:观察复方山菊口服给药对自发性高血压大鼠(SHR)血压、血脂及血黏度的影响。方法:SHR灌服不同剂量复方山菊[0.05、0.15、0.45g/(kg.d)],每2周以尾袖法测定血压;16周后以终点比色法检测血浆甘油三酯(TG)和总胆固醇(CHOL),直接测定法检测血浆高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL),旋转法检测全血黏度(WBV)。结果:复方山菊各剂量组血压明显下降;复方山菊0.15、0.45g/(kg.d)剂量组血浆CHOL、HDL及LDL均明显降低;复方山菊0.45g/(kg.d)剂量组全血黏度低切变率明显降低。结论:复方山菊具有降低SHR血压、血脂和血黏度作用。     

自发性高血压大鼠心肾交感神经的分布状况

目的探讨自发性高血压大鼠心脏及肾脏交感神经的分布状况。方法选取6及12周龄的自发性高血压大鼠（SHR）和相应周龄的同源正常血压大鼠（WKY），以儿茶酚胺合成限速酶酪氨酸羟化酶（TH）的表达作为交感神经分布的标志，采用免疫组织化学检测TH，尾套法检测大鼠血压及心率。结果6及12周龄的SHR血压及心率高于相应周龄的WKY 鼠。6 及12 周龄的SHR心脏及肾脏TH 的表达高于相应周龄的WKY 鼠。SHR12 周龄时肾脏TH的表达高于6 周龄，心脏TH的表达在2 个周龄组差异无统计学意义。结论SHR心及肾脏交感神经纤维分布密度增加，并且随着高血压的进展，肾脏交感神经纤维分布密度有增加的趋势。     

阿托伐他汀的降血压作用及其机制实验研究

目的观察阿托伐他汀对自发性高血压大鼠（SHR）血压的影响,并通过其对血管紧张素Ⅱ1型（AT1）受体表达的影响探讨其调节血压的机制。方法将24只16周雄性sHR随机分为4组：SHR对照组,阿托伐他汀50mg剂量组[50mg／（kg·d）],阿托伐他汀10mg剂量组[10mg／（kg·d）],缬沙坦组[20mg／（kg·d）],灌胃给药共6周。在给药前和给药后,每2周采用尾袖法测量大鼠尾动脉收缩压（SBP）,化学比色法检测大鼠主动脉活性氧（Ros）浓度;免疫组织化学法和原位杂交法检测AT．受体蛋白和mRNA表达。结果实验前SHR各组SBP无差异,但显著高于WKY组（P〈0．01）;给药后4。6周,50mg剂量组SBP明显下降（P〈0．01）,10mg剂量组SBP无明显变化;自给药后2周缬沙坦组SBP逐渐下降（P〈0．01）。SHR对照组血清ROS水平显著高于WKY组（P〈0．01）;用药6周后,50mg剂量组血清ROS水平明显降低（P〈0．05）。SHR对照组心肌AT1受体蛋白阳性表达明显高于WKY组（P〈0．01）,50mg剂量组AT．受体蛋白阳性表达明显减少,平均光密度值显著降低（P〈0．01）。SHR对照组AT1受体mRNA表达明显高于wKY组（P〈0．01）,50mg剂量组AT．受体mRNA表达下调,平均光密度值显著降低（P〈0．01）：结论阿托伐他汀可降低SHR的血压,下调SHR心肌细胞AT1受体表达,减少ROS生成,改善血管内皮功能而发挥降低血压的作用。