补肾健脾活血方对大鼠绝经后骨质疏松症的防治作用

目的研究补肾健脾活血方对大鼠绝经后骨质疏松症的防治作用。方法 72只雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾健脾活血方组(2.979 g/kg)、阿仑膦酸钠维D_3片(Ⅱ)组(1.02 mg/kg),双侧卵巢切除法进行造模。药物干预12周后,双能X射线法检测大鼠腰椎骨密度,骨生物力学检测腰椎最大载荷和刚度,实时荧光定量PCR法检测wnt2、wnt3a、lrp5、lrp6、β-catenin、OPN、Runx2、osterix mRNA表达,Western blot法检测wnt3a、β-catenin蛋白表达。结果与模型组比较,补肾健脾活血方组腰椎骨密度、最大载荷及刚度均明显增高(P<0.05),能显著降低OPN mRNA表达(P<0.05),显著增高wnt3a、lrp5、β-catenin、Runx2、osterix mRNA表达及wnt3a、β-catenin蛋白表达(P<0.05)。结论补肾健脾活血方对大鼠绝经后骨质疏松症有一定的防治作用,其机制可能与调控wnt/β-catenin信号通路和OPN的表达有关。     

补肾健脾方干预大鼠成骨细胞增殖和凋亡的实验研究

目的:通过对补肾健脾方调控细胞凋亡途径干预大鼠成骨细胞增殖和凋亡的实验研究,探讨其治疗骨质疏松症的作用机制。方法:15只6个月龄SD雌性大鼠,随机分为补肾健脾方组、阿伦膦酸钠组、空白对照组(等体积生理盐水),每组5只,连续给药12 d,腹主动脉采血收集血清备用。细胞实验分为3组:空白对照组,补肾健脾方含药血清组和阿伦膦酸钠含药血清组。运用MTS测定成骨细胞增殖,实时荧光定量聚合酶链式反应法(qRT-PCR)测定Caspase-3、ERO1、Bax和Bcl-2 mRNA表达量。结果:MTS测定结果显示48 h和72 h补肾健脾方含药血清均对大鼠成骨细胞的增殖无明显的影响,差异无统计学意义(P0.05)。qRT-PCR结果显示补肾健脾方含药血清相比于空白对照组能明显降低Caspase-3(P0.01)和Bax(P0.05)基因表达水平,提高Bcl-2 mRNA表达量,差异有统计学意义(P0.01),但阿伦膦酸钠含药血清组Caspase-3和Bax基因下调更明显。结论:补肾健脾方含药血清能减少成骨细胞的凋亡,可能是通过Caspase-3/Bcl-2途径实现的。补肾健脾方对治疗骨质疏松症有一定的作用。     

牡蛎钙补肾中药血清对骨形成蛋白-4诱导成骨信号转导机制的调控作用

目的:用血清药理学方法研究牡蛎钙补肾中药血清对离体大鼠成骨细胞中骨形成蛋白-4诱导成骨信号转导机制的调控作用.方法:采用多次胶原酶消化法获得足够数量的成骨细胞(OB),用改良钙钴法测定碱性磷酸酶(ALP)活性以鉴定0B.用含药血清进行细胞培养48h后,用逆转录多聚酶链反应技术(RT-PCR)检测各组0B中BMP-4和Smad5、6mRNA表达.结果:与模型空白组比较,牡蛎钙补肾中药组可明显上调OB中BMP-4和Smad5 mRNA表达,下调Smad6mRNA表达.结论:牡蛎钙补肾中药血清可以提高OB中BMP-4和Smad5基因表达、降低Smad6基因表达,这可能是其防治骨质疏松症的重要机制之一.     

补肾健脾药物血清对大鼠成骨细胞Smad2 mRNA表达影响的研究

目的:研究补肾健脾中药吸收后不同浓度血清对离体大鼠成骨细胞转化生长因子(TGF)-β1细胞内信号转导分子Smad2表达的调节作用,探讨补肾健脾中药治疗绝经后骨质疏松症(OP)的作用机制.材料方法:采用胶原-胰蛋白酶消化法获得新生大鼠的成骨细胞(rOB),用改良钙钻法测定碱性磷酸酶(ALP)活性以鉴定rOB;以补肾健脾药物吸收后药物血清,加入体外培养的rOB中进行培养,分别以RT-PCR法及免疫细胞化学方法检测rOB的Srnad2 mRNA和蛋白的表达.结果:补肾健脾吸收后药物血清可上调rOB的Smad2的mRNA和蛋白的表达,并呈一定的浓度依赖性(P＜0.01).结论:补肾健脾中药通过诱导rOB TGF-β1的信号转导分子Smad2的mRNA和蛋白的表达而促进rOB的增长与分化.     

活血荣络方对Aβ_(25-35)损伤神经胶质细胞Wnt5α、Fz5、CaMKⅡ表达的影响

目的:旨在通过细胞实验,从Wnt5a-Fz5-Ca MKⅡ通路揭示活血荣络方治疗阿尔茨海默病(AD)的分子机制,为中医药治疗阿尔茨海默病提供新思路、新方法。方法:分别将Aβ_(25-35)损伤星形胶质细胞铺板,以(2.5~3)×104/孔的密度接种到96孔板中,并随机分为6组,分别为2倍活血荣络方组、1倍活血荣络方组、0.5倍活血荣络方组、多奈哌齐组、s FRP组、空白组;待细胞的融合率为85%~90%时,含药组分别给予相应的含药血清,s FRP组给予s FRP,空白组予以空白血清。取生长对数期细胞加相应刺激分别处理12、24、48、72 h。分别取细胞上清液分离细胞,用MTT法检测细胞毒力,用流式细胞术检测细胞凋亡;用化学免疫法检测Wnt5、Fz5、Ca MKⅡ的含量。结果:各组OD值随着时间的延长而增高,2倍活血荣络方组72 h OD值明显高于12 h(P0.05),而空白组、s PRF组、2倍、0.5倍活血荣络方组、多奈哌齐组4个时间点见无明显差异(P0.05);各给药组细胞活性均高于空白组(P0.05),其中2倍活血荣络方组细胞活性最高;s FRP组细胞活性低于空白组(P0.05)。各组细胞凋亡数目随着时间的延长而增高,其中空白组72 h细胞凋亡比例高于12 h(P0.05),s PRF组72 h细胞凋亡比例明显高于12 h;2倍、1倍活血荣络方组、0.5倍活血荣络方组、多奈哌齐组4个时间点见无明显差异(P0.05);各给药组细胞凋亡比例明显低于空白组及s PRF组,其中2倍活血荣络方组细胞活性最高;s FRP组细胞凋亡比例高于空白组(P0.05)。各给药组Wnt5α、Fz5、Ca MKⅡ的表达均高于空白组(P0.05),其中2倍活血荣络方组Wnt5α表达明显高于空白组(P0.01),空白组明显高于s PRF组(P0.05);其它给药组间比较:2倍活血荣络方组明显高于1倍活血荣络方组、多奈哌齐组及0.5倍活血荣络方组(P0.01),1倍活血荣络方组与多奈哌齐组Wnt5α表达程度无明显差异(P0.05),此两组Wnt5α表达均高于0.5倍活血荣络方组(P0.05)。结论:活血荣络方能有效提高Wnt5α、Fz5、Ca MKⅡ的表达,减轻神经毒性的积累及细胞凋亡反应的发生,保护神经胶质细胞,延缓AD发病进展,其中以2倍活血荣络方效果最佳。     

补肾健脾活血方结合阿仑膦酸钠片治疗骨质疏松症疗效观察

目的:分析补肾健脾活血方结合阿仑膦酸钠片治疗骨质疏松症的临床效果。方法:选取2017年11月—2019年7月在我院进行治疗的骨质疏松症患者60例,按照治疗方法的不同分为对照组和观察组,各30例。对照组给予阿仑膦酸钠片治疗,观察组给予阿仑膦酸钠片结合补肾健脾活血方治疗,观察疗效。结果:观察组L2-4腰椎、股骨颈、Ward’s三角区以及大粗隆处的骨密度均显著高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:采用补肾健脾活血方结合阿仑膦酸钠片治疗骨质疏松症,可有效提高骨密度,达到治疗效果,值得临床推广。     

补肾健脾活血方对去卵巢大鼠BMP2/Smad信号通路的影响

目的:研究补肾健脾活血方对去卵巢大鼠骨形态发生蛋白2(BMP2)/Smad信号通路的影响。方法:72只6月龄雌性SD大鼠,随机分为假手术组(24只),手术组(48只),双侧卵巢切除法造模,术后3个月两组各随机选取12只检测骨密度验证造模成功。手术组剩余的36只大鼠随机分为双侧卵巢切除模型组(OVX),补肾健脾活血方组(BSJPHX,给药剂量2.979 g·kg~(-1)),阿仑膦酸钠维D3片(Ⅱ)组(ALN,给药剂量1.02 mg·kg~(-1)),假手术组,OVX组给与等体积生理盐水灌胃。12周后处死各组大鼠,双能X射线法检测大鼠全身骨密度,生物力学试验进行胫骨三点弯曲试验,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测BMP2,Smad1,Runt相关转录因子2(Runx2),骨保护素(OPG)基因的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测BMP2,p-Smad1,Runx2,OPG蛋白的表达。结果:造模3个月后,与假手术组比较,OVX组大鼠骨密度明显降低,最大载荷及刚度均降低,BMP2,Smad1,Runx2,OPG基因和蛋白表达水平显著降低(P0.05);给药3个月后,与OVX组比较,BSJPHX组,ALN组骨密度均明显增高,最大载荷及刚度均增加,能显著提高BMP2,Smad1,Runx2,OPG基因和蛋白表达水平(P0.05)。结论:补肾健脾活血方既能通过调控BMP2/Smad通路的信号转导,又能上调OPG的表达,这可能是补肾健脾活血方防治绝经后骨质疏松症的机制之一。     

二仙汤及其拆方含药血清对成骨细胞分化的影响

目的:研究二仙汤及其君、臣、佐、使拆方含药血清对成骨细胞分化的影响。方法:实验以成骨细胞系MC3T3-E1细胞为基础,分为空白组、白藜芦醇15mg/kg组、二仙汤整方8g/kg组及依据君臣佐使关系的4个拆方组,即淫羊藿+仙茅3.2g/kg组、淫羊藿+仙茅+巴戟天4.8g/kg组、淫羊藿+仙茅+当归4.8g/kg组、淫羊藿+仙茅+知母+黄柏4.8g/kg组。分别灌胃大鼠,制备含药血清,分别以10%含药血清作用于成骨细胞,以对硝基苯磷酸盐(pNPP)法和碱性磷酸酶(ALP)染色检测成骨细胞ALP活性;以Von Kossa染色法检测成骨细胞矿化结节形成;采用Western blot法检测成骨细胞骨钙素(OC)、骨形成蛋白-2(BMP-2)的表达。结果:与空白组比较,二仙汤整方和各拆方组10%含药血清均能显著增强成骨细胞ALP的活性,其中二仙汤整方组、淫羊藿+仙茅+知母+黄柏组提高成骨细胞ALP活性的作用最为明显,二仙汤整方和各拆方组均可显著提高成骨细胞OC、BMP-2的表达。结论:二仙汤及各拆方含药血清均不同程度地提高成骨细胞ALP活性,增强矿化结节的形成,促进OC、BMP-2的表达,知母、黄柏的作用尤为重要。     

生龙接骨胶囊对骨折大鼠BMP-Smad信号通路的影响

目的 探讨生龙接骨胶囊对骨折大鼠BMP-Smad信号通路的影响。方法 将大鼠随机分为假手术组、模型组和生龙接骨胶囊组(600 mg/kg),建立胫骨骨折大鼠模型，给药4周后，苏木精和伊红(HE)染色评估骨折区域形态，免疫组化染色检测骨折区域Col-Ⅰ表达，Western blot法检测骨折区域组织BMP-2、Smad1、Smad4、RUNX-2、OSX、VEGF蛋白表达。制备生龙接骨胶囊含药血清，以此处理成骨细胞，CCK-8实验检测成骨细胞活力，试剂盒检测ALP活性，RT-qPCR法检测细胞BMP-2、Smad1、Smad4、RUNX-2、OSX、VEGF mRNA表达。结果 X线片、HE染色和Col-Ⅰ免疫组化染色均显示生龙接骨胶囊促进了胫骨骨折愈合。与模型组比较，生龙接骨胶囊组大鼠骨折区域组织BMP-2、Smad1、Smad4、RUNX-2、OSX、VEGF蛋白表达均升高(P<0.05)。与对照组比较，生龙接骨胶囊含药血清组成骨细胞活力、ALP活性和BMP-2、Smad1、Smad4、RUNX-2、OSX、VEGF mRNA表达均升高(P<0.05)。结论 生龙接骨胶囊...     

刘氏正骨方2号对过表达Sclerostin腺病毒转染后BMSCs促成骨分化的影响

目的探究刘氏正骨方2号对过表达Sclerostin腺病毒转染后BMSCs中Wnt信号通路及成骨相关因子的影响。方法分别用刘氏正骨方2号含药血清、BMP-2干预BMSCs,并分为对照组、中药组、BMP-2组,采用CCK-8法检测细胞活性,ALP染色、茜素红染色检测成骨诱导28 d后各组细胞ALP活性和矿化情况,荧光定量PCR、Western Blot法检测各组细胞中Col1A2、OCN、OPN、Sclerostin表达。采用腺病毒转染技术过表达BMSCs中Sclerostin基因,分为空白对照组、过表达Sclerostin组,再分别用空白血清、中药血清体外干预3 d后,检测Wnt信号通路相关分子(LRP5、β-catenin)和成骨相关因子Runx2的表达情况。结果与空白对照组比较,中药组BMSCs细胞活性及成骨分化程度增强,BMP-2组成骨分化程度高于中药组,但BMP-2组细胞活性最低(P0.05);在Sclerostin基因表达方面,中药组出现表达抑制,而BMP-2组呈上调趋势(P0.05)。腺病毒转染BMSCs可抑制BMSCs细胞活性,上调Sclerostin mRNA和蛋白表达。与NT比较,Ad-SOST组细胞活性降低,LRP5、β-catenin、Runx2表达下调(P0.05);与空白血清比较,中药血清干预后NT组、Ad-SOST组细胞活性不同程度增强,而LRP5、β-catenin、Runx2表达上调(P0.05)。结论刘氏正骨方2号具有增强BMSCs细胞活性、促进成骨分化作用,可影响过表达Sclerostin腺病毒转染后BMSCs的LRP5、β-catenin、Runx2表达。     

淫羊藿苷对人成骨细胞增殖与分化的影响

目的:观察淫羊藿苷对人成骨细胞增殖和分化的影响。方法:将人骨髓基质干细胞定向诱导分化为成骨细胞,取第3,4代细胞,MTT法观察淫羊藿苷对人成骨细胞的增殖作用,碱性磷酸酶(ALP)比活性测定观察淫羊藿苷对人成骨细胞分化的影响,RT-PCR方法检测淫羊藿苷对人成骨细胞 BMP-2 mRNA表达的影响。结果:浓度为20μg·mL^-1的淫羊藿苷能够显著促进人成骨细胞的增殖和分化,且使BMP-2 mRNA的表达升高。结论:淫羊藿苷具有促进人成骨细胞增殖和分化的作用,这一作用可能与其升高人成骨细胞BMP 2 mRNA的表达有关。     

重楼皂苷对新生大鼠成骨细胞增殖、分化及Smurf1、Cthrc1、BMP-2表达的影响

目的:探究重楼皂苷对新生大鼠成骨细胞增殖、分化及Smurf1、Cthrc1、BMP-2表达的影响。方法:获取新生大鼠颅骨成骨细胞,经原代培养后传代培养,应用倒置显微镜观察并通过茜素红染色鉴定。将第三代成骨细胞接种至含不同浓度重楼皂苷(0μg/ml、3μg/ml、10μg/ml、30μg/ml)的培养基中培养。应用MTT实验检测重楼皂苷对成骨细胞增殖能力的影响。应用碱性磷酸酶(ALP)活性检测和钙结节染色评估重楼皂苷对成骨细胞分化能力的影响。应用荧光实时定量PCT(qRT-PCR)评估重楼皂苷对成骨细胞分化过程中Smurf1、Cthrc1、BMP-2基因表达的影响。结果:与空白对照组相比,重楼皂苷浓度3μg/ml、10μg/ml、30μg/ml组的细胞增殖能力、ALP活性、钙化结节数量均显著增加。重楼皂苷各浓度组的BMP-2、Cthrc1 mRNA和蛋白表达水平均显著增加,而Smurf1 mRNA和蛋白表达水平均显著降低。结论:重楼皂苷能够通过抑制Smurf1表达、增强Cthrc1表达参与调控BMP-2相关信号通路,从而促进新生大鼠颅骨成骨细胞增殖分化过程。     

补肾复方含药血清对大鼠成骨细胞OPG、ODF表达的影响

为研究补肾复方对大鼠成骨细胞OPG、ODF表达影响。以补肾活血方、补肾健脾方、龟鹿二仙膏、金匮肾气丸、六味地黄丸、左归丸6种补肾中药复方及生理盐水给体重为250g左右的大鼠灌胃,提取含药血清;采用酶消化法从初生2天SD大鼠头盖骨中分离出成骨细胞,用含药血清及生理盐水进行成骨细胞传代培养;取第2代细胞,培养至细胞铺满培养瓶约80%时,更换含药血清培养液24小时;用含药血清培养液24小时后终止培养,提取总RNA,应用RT-PCR方法观察六种补肾复方对大鼠成骨细胞OPG、ODF表达影响。结果显示补肾活血方、补肾健脾方、金匮肾气丸、六味地黄丸和左归丸含药血清培养的大鼠成骨细胞OPG的表达量高于生理盐水对照组,龟鹿二仙膏含药血清培养的大鼠成骨细胞OPG的表达量低于生理盐水对照组,其中补肾活血方组、补肾健脾方组大鼠成骨细胞OPG表达量明显高于生理盐水对照组,统计学有显著性差异(P<0.05)。6种补肾复方含药血清培养的大鼠成骨细胞ODF表达量均低于生理盐水对照组,其中补肾活血方组、补肾健脾方组和金匮肾气丸组大鼠成骨细胞ODF表达量明显低于生理盐水对照组,统计学有显著性差异(P<0.05)。表明补肾活血方、补肾健脾方含药血清能增加大鼠成骨细胞OPG表达量,降低大鼠成骨细胞ODF表达量。     

二仙汤含药血清对过氧化氢诱导成骨细胞骨形成的影响

目的探讨二仙汤治疗骨质疏松症的可能作用机制。方法成骨细胞以5×103/孔接种于96孔板,分为正常组、模型组、戊酸雌二醇组和二仙汤高、中、低剂量组,每组6孔。除正常组外其余各组用含600μmol/L过氧化氢(H2O2)的完全培养基培养3h诱导成骨细胞骨形成模型。正常组用空白对照血清培养,戊酸雌二醇组给予8%戊酸雌二醇含药血清培养,二仙汤高、中、低剂量组分别给予8%、4%、2%二仙汤含药血清培养48h,检测成骨细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活力、钙结节生成以及骨形成蛋白2(BMP-2)和骨保护素(OPG)蛋白表达。另外以钙离子通道阻断剂Nifdipine(10μmol/L)进行干预,观察Nifdipine对H2O2刺激成骨细胞后细胞增殖、ALP活性及BMP-2、OPG蛋白表达以及Nifdipine干预下二仙汤含药血清对H2O2刺激成骨细胞后细胞增殖、ALP活性及BMP-2、OPG蛋白表达的影响。结果与正常组比较,模型组细胞增殖、ALP活性、钙结节及BMP-2表达降低(P0.05或P0.01)。二仙汤各剂量组能不同程度促进成骨细胞增殖,提高ALP活力和钙结节生成,促进BMP-2、OPG蛋白表达(P0.05或P0.01)。Nifdipine能提高H2O2刺激下成骨细胞BMP-2、OPG蛋白表达(P0.05或P0.01)。与Nifdipine组比较,二仙汤含药血清和Nifdipine合用则显著提高H2O2刺激下的成骨细胞增殖,降低BMP-2、OPG蛋白表达(P0.01)。结论二仙汤含药血清能明显改善氧化刺激对成骨细胞骨形成的影响,其机制可能与调节钙离子通道有关。     

益骨汤含药血清通过经典Wnt信号通路促进成骨细胞增殖分化的研究

目的:在经典wnt信号通路抑制剂大鼠Dickkopf相关蛋白1(DKK1)的干预下,观察益骨汤含药血清对成骨细胞的经典Wnt信号通路的影响,探究益骨汤治疗骨质疏松的作用机制,为临床使用补肾活血中药防治骨质疏松症提供实验依据。方法:将40只雌性SD大鼠随机分成2组,益骨汤水提液组和空白对照组,连续灌胃10天,获取含药血清。从乳鼠颅盖骨中分离培养成骨细胞,实验分为4组,即A组(益骨汤含药血清组)、B组(DKK1组)、C组(DKK1+益骨汤含药血清组)、D组(空白血清对照组)。进行细胞增殖MTT检测、碱性磷酸酶活性检测,RT-PCR检测经典Wnt/β-catenin通路中β-链蛋白(β-catenin)、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP-5)、DKK1基因的表达情况。结果:根据MTT法动态观察各组成骨细胞增殖,发现成骨细胞增殖呈规律性:48 h至72 h成骨细胞呈对数增长期,96 h后细胞增殖逐渐受到抑制。同一时间点与B组比较,A、C、D各组成骨细胞的增殖和ALP活性显著较高,差异均有统计学意义(P0.05)。同一时间点与D组比较,A组成骨细胞的增殖和ALP活性显著较高,差异均有统计学意义(P0.05)。与B组比较,A、C、D组β-catenin mRNA、LRP-5 mRNA、TCF mRNA的表达均明显升高,DKK1 mRNA的表达明显降低,差异均有统计学意义(P0.05)。与D组比较,A组β-catenin mRNA、LRP-5 mRNA、TCF mRNA的表达均明显升高,DKK1 mRNA的表达明显降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:益骨汤含药血清可能是通过抑制DKK1的高表达,从而上调经典Wnt/β-catenin信号中β-catenin、LRP-5、TCF基因的表达,达到促进成骨细胞增殖,起到抗骨质疏松作用。     

牵张应力下骨碎补总黄酮对成骨细胞增殖及相关蛋白含量的影响

目的:观察骨碎补总黄酮对牵张应力下成骨细胞增殖及相关蛋白含量的影响。方法:对大鼠成骨样细胞系ROS1728作体外培养,取3代对数生长期成骨细胞,采用Flexcell细胞牵张系统构建成骨细胞牵张体系,使用骨碎补总黄酮含药血清进行干预24 h。应用MTT法绘制成骨细胞生长曲线;碱性磷酸酶染色法观察成骨细胞内碱性磷酸酶(ALP)含量及分布情况;采用碱性磷酸酶定量检测方法测定各组成骨细胞内ALP含量;采用ELISA法测定骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、转化生长因子-β1(TGFβ-1)的表达。结果:12 h及24 h骨碎补总黄酮各剂量组中成骨细胞数量及ALP、BMP-2、TGFβ-1含量均明显增加,与空白组比较,差异均有统计学意义(P0.05);同时,与骨碎补总黄酮低剂量组比较,骨碎补总黄酮中、高剂量组成骨细胞数目及ALP和BMP-2的含量增高,差异均有统计学意义(P0.05);骨碎补总黄酮各剂量组中TGFβ-1的含量比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:在牵张应力下,骨碎补总黄酮可明显促进成骨细胞增殖及相关蛋白的合成。     

养血活血解毒方及其拆方药物血清对佛波酯诱导的血管内皮细胞ERK/NF-κB通路的影响

目的探讨养血活血解毒方治疗银屑病的可能作用机制。方法将养血活血解毒方拆分为养血活血类药物和解毒类药物。80只Wistar大鼠随机分为空白组、全方组、养血活血方组、解毒方组,每组20只。全方组、养血活血方组、解毒方组分别给予相应药物10.18、6.17、4.01 g/(kg·d)剂量灌胃,空白组予4 ml的蒸馏水灌胃,连续4天,制备含药血清。人真皮微血管内皮细胞(HDMEC)分为空白组、模型组、全方组、养血活血组、解毒组。除空白组外,其余各组采用佛波酯诱导细胞活化。同时加入相应药物的10%含药血清作用24 h。检测各组内皮细胞增殖情况、迁移情况、管腔形成情况,以及血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血管内皮细胞生长因子受体(VEGFR)、细胞外调节蛋白激酶1(ERK1)、细胞外调节蛋白激酶2(ERK2)mRNA表达,检测VEGF/VEGFR通路及细胞外调节蛋白激酶/核因子κB(ERK/NF-κB)通路蛋白表达。结果与空白组比较,模型组细胞增殖,迁移细胞数量,管腔形成数量,VEGF、VEGFR、ERK2 mRNA及VEGF/VEGFR通路、EKR/NF-κB通路相关蛋白表达升高(P0.01);与模型组比较,全方组和解毒组细胞增殖,迁移细胞数量,VEGF、VEGFR mRNA表达和p-ERK1、p-EKR2、p-NF-κB p65蛋白表达水平均降低,全方组VEGF、p-VEGFR蛋白表达降低,且全方组细胞增殖、ERK2 mRNA表达低于解毒组(P0.05或P0.01)。结论养血活血解毒方可通过干预ERK/NF-κB通路,调控促血管新生因子VEGF及其受体的表达,从而对银屑病血管新生的病理环节发挥治疗作用,且全方药效最佳,其养血活血组分未对内皮细胞增生环节有影响。     

补肾壮骨颗粒对去势大鼠骨密度和SRC-3及PGC-1α表达的影响

目的研究补肾壮骨颗粒对去势大鼠骨密度和血清、骨髓组织中类固醇受体辅助激活因子3(SRC-3)及过氧化物酶体增殖物活化受体γ协同刺激因子-1α(PGC-1α)表达的影响。方法将40只大鼠随机分为假手术组、模型组、中药组、阿仑膦酸钠组,每组10只。模型组、中药组、阿仑膦酸钠组均建立去卵巢骨质疏松模型,造模4 d后,中药组给予补肾壮骨颗粒2.5 mg/kg灌胃,阿仑膦酸钠组给予阿仑膦酸钠7 mg生药/kg灌胃,假手术组和模型组给予10 mL/kg生理盐水灌胃。连续干预12周后取血,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测4组大鼠血清SRC-3及PGC-1α水平;处死大鼠,运用小动物双能X射线骨密度仪测量4组大鼠股骨离体骨密度(BMD),实时荧光定量PCR法检测4组大鼠骨髓组织中SRC-3 mRNA及PGC-1αmRNA表达量。结果模型组、中药组、阿仑膦酸钠组血清SRC-3、PGC-1α水平及SRC-3 mRNA、PGC-1αmRNA表达量均明显低于假手术组(P均0.05),中药组均明显高于模型组和阿仑膦酸钠组(P均0.05);阿仑膦酸钠组SRC-3 mRNA表达量明显高于模型组(P0.05),而血清SRC-3、PGC-1α水平和PGC-1αmRNA表达量与模型组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。中药组和模型组大鼠骨密度均明显低于假手术组(P均0. 05),中药组和阿仑膦酸钠组骨密度均明显高于模型组(P均0.05),中药组与阿仑膦酸钠组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论补肾壮骨颗粒可能通过提高去势大鼠血清及骨髓组织中SRC-3和PGC-1α分子及基因表达水平而促进骨形成,从而提高骨密度。     

黄芪多糖对大鼠原代成骨细胞的影响及其机制研究

目的研究黄芪多糖对体外培养大鼠原代成骨细胞增殖、分化及矿化的影响及其作用机制。方法体外培养的新生SD大鼠颅骨原代成骨细胞体系中分别加入不同质量浓度(0.1、0.3、1、3、10、30、100μg/mL)的黄芪多糖,24、48 h后MTT法检测细胞增殖,碱性磷酸酶(AKP)活性检测法检测细胞分化,茜素红染色法观察黄芪多糖10μg/mL对细胞矿化的影响,Western blotting法检测黄芪多糖1、10μg/mL作用于细胞24 h后,对细胞中骨形成蛋白(BMP-2)的表达、MAPK信号通路中关键蛋白ERK、P38、p-ERK、p-P38等表达的影响。结果黄芪多糖能剂量相关地促进大鼠原代成骨细胞的增殖、分化及矿化,同时上调BMP-2、p-ERK、p-P38蛋白的表达,提高p-ERK/ERK、p-P38/P38值。结论黄芪多糖可通过促进BMP-2的表达、上调其下游的ERK MAPK和P38 MAPK的磷酸化水平来促进成骨细胞增殖、分化。     

淫羊藿苷对尾悬吊模拟失重诱导大鼠骨丢失的防护作用

目的 研究淫羊藿苷对尾悬吊模拟失重大鼠骨丢失的影响。方法 大鼠随机分为空白组、模型组、阿仑膦酸钠组(2.0 mg/kg)、淫羊藿苷组(30 mg/kg),每组10只。大鼠灌胃给药6周,每周称重1次,从第3周开始,除空白组外,其他各组均给予尾悬吊处理。6周后,ELISA法检测大鼠相关骨代谢标志物水平;双能X线骨密度仪检测大鼠骨密度;三点弯曲力学实验分析大鼠股骨生物力学性能;Micro-CT扫描仪观察大鼠股骨形态结构特性并对骨小梁进行三维重建,测定相关空间结构参数;Schr9dinger Maestro 12.8软件将阿仑膦酸钠、淫羊藿苷分别与BMP-2、OPG、RANK、RANKL蛋白进行分子对接;Western blot法检测股骨组织BMP-2、OPG、RANK、RANKL蛋白表达。结果 与模型组比较,淫羊藿苷组骨吸收相关标志物水平降低(P<0.05,P<0.01),骨形成相关标志物水平、骨密度、股骨骨应力、弹性模量及最大载荷、股骨组织BMP-2和OPG蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01);淫羊藿苷较阿仑膦酸钠与骨代谢蛋白对接更好,更易发生作用。结论 淫羊...