二仙汤对过氧化氢诱导的成骨细胞蛋白组学及PI3K信号通路的影响

采用过氧化氢(H_2O_2)复制细胞氧化应激模型,探讨二仙汤对过氧化氢(H_2O_2)刺激的成骨细胞蛋白组学的影响及其保护机制。取新出生(24 h以内)乳鼠的头盖骨培养原代成骨细胞,实验分为正常组、模型组、福善美组、二仙汤组4组,空白组和模型组加入空白血清,福善美组和二仙汤组则分别加入福善美含药血清和二仙汤含药血清干预45 h后,除正常组外,各组均加入H_2O_2刺激3 h后,提取细胞蛋白,采用Nano-LC-LTQ-Orbitrap系统检测,Protein Discovery软件进行蛋白鉴定,SIEVE软件进行相对定量定性分析;另外用LY294002(10μmol·L~(-1))阻断PI3K信号通路,实验分为空白对照组、模型组、LY294002组、二仙汤组、二仙汤+LY294002组,观察LY294002干预下二仙汤含药血清对H_2O_2刺激成骨细胞后细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性及BMP-2、OPG、p-Akt、p-FoxO1蛋白表达的影响。结果显示,二仙汤组与模型组比较共发现78个差异蛋白,这些蛋白参与PI3K/Akt、胰高血糖素、雌激素、胰岛素等信号通路的调节;使用LY294002后,二仙汤对成骨细胞增殖的促进作用被削弱,OPG、p-FoxO1表达显著下调,BMP-2、p-Akt表达有下调趋势但无显著性,然而LY294002和二仙汤均提高了成骨细胞ALP活力,这可能与细胞状态、细胞分化进程有关。以上结果表明,二仙汤含药血清对H_2O_2刺激的成骨细胞有保护作用,PI3K/Akt信号通路是内在机制之一。     

二仙汤含药血清外泌体经FN1促进成骨细胞骨形成

目的:探讨二仙汤含药血清外泌体蛋白的变化及其对成骨细胞骨形成的作用。方法:对二仙汤含药血清外泌体进行提取、鉴定。体外培养MC3T3-E1成骨细胞，分为正常对照组、空白血清外泌体2.5、5μg/mL组、二仙汤含药血清外泌体2.5、5、10μg/mL组。CCK8法检测成骨细胞增殖情况；碱性磷酸酶(ALP)染色法观察成骨细胞ALP;茜素红染色观察成骨细胞矿化结节；Western blot法检测细胞中骨形态发生蛋白2(BMP-2)蛋白表达。运用蛋白质组学技术对血清外泌体进行差异性蛋白分析。采用纤连蛋白(FN1)联合空白血清外泌体(3 nmol/L纤连蛋白+5μg/mL、12 nmol/L纤连蛋白+5μg/mL)处理成骨细胞，通过试剂盒检测成骨细胞ALP活力；Western blot法检测FN1对成骨细胞中BMP-2蛋白表达的影响。结果:与空白血清外泌体2.5μg/mL组相比，二仙汤含药血清外泌体组成骨细胞的增殖、ALP染色程度和茜素红染色程度明显升高(P<0.05或P<0.01),BMP-2的蛋白表达明显上调(P<0.05)。从血清外泌体中共鉴定到256个蛋白，其中96个蛋白...     

益骨胶囊含药血清对晚期糖基化终末产物作用下成骨细胞分化及BMP-2和OPG的影响

目的研究益骨胶囊含药血清对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)作用下成骨细胞分化活性及对骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein2,BMP-2)和骨保护蛋白(osteopro-tegerin,OPG)的影响,探讨益骨胶囊防治骨质疏松(osteoporosis,OP)的作用机制。方法选取10月龄SD雌性大鼠40只,随机分为益骨胶囊高、中、低剂量组及空白组,每组10只。运用大鼠灌胃的方法制备含药血清和对照血清。二次酶消化法分离培养新生SD大鼠颅骨成骨细胞,传代后分为空白对照组、模型组、中药低、中、高剂量组。模型组用AGEs(400mg/L)处理,中药低、中、高剂量组分别用AGEs(400mg/L)和低、中、高剂量含药血清共同处理,分别用pNPP、ELISA、茜素红染色法检测成骨细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性、Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen,ColⅠ)、骨钙素(bone gla protein,BGP)以及矿化结节,RT-PCR测定成骨细胞中BMP-2、OPG mRNA的表达,ELISA法检测BMP-2、OPG蛋白的表达量。结果原代分离培养的新生大鼠成骨细胞具有典型的成骨细胞特征;与空白对照组比较,模型组成骨细胞(OB)ALP、ColⅠ、BGP、BMP-2、OPG蛋白及BMP-2、OPG mRNA表达降低,矿化结节减少,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,中药各剂量组ALP、ColⅠ、BGP、BMP-2、OPG蛋白及BMP-2、OPG mRNA表达升高,矿化结节增加,且随剂量增加而明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论益骨胶囊含药血清提高AGEs作用下成骨细胞分化和矿化能力,提高BMP-2、OPG的表达,这可能是益骨胶囊防治OP的机制之一。     

二仙汤及其拆方含药血清对成骨细胞分化的影响

目的:研究二仙汤及其君、臣、佐、使拆方含药血清对成骨细胞分化的影响。方法:实验以成骨细胞系MC3T3-E1细胞为基础,分为空白组、白藜芦醇15mg/kg组、二仙汤整方8g/kg组及依据君臣佐使关系的4个拆方组,即淫羊藿+仙茅3.2g/kg组、淫羊藿+仙茅+巴戟天4.8g/kg组、淫羊藿+仙茅+当归4.8g/kg组、淫羊藿+仙茅+知母+黄柏4.8g/kg组。分别灌胃大鼠,制备含药血清,分别以10%含药血清作用于成骨细胞,以对硝基苯磷酸盐(pNPP)法和碱性磷酸酶(ALP)染色检测成骨细胞ALP活性;以Von Kossa染色法检测成骨细胞矿化结节形成;采用Western blot法检测成骨细胞骨钙素(OC)、骨形成蛋白-2(BMP-2)的表达。结果:与空白组比较,二仙汤整方和各拆方组10%含药血清均能显著增强成骨细胞ALP的活性,其中二仙汤整方组、淫羊藿+仙茅+知母+黄柏组提高成骨细胞ALP活性的作用最为明显,二仙汤整方和各拆方组均可显著提高成骨细胞OC、BMP-2的表达。结论:二仙汤及各拆方含药血清均不同程度地提高成骨细胞ALP活性,增强矿化结节的形成,促进OC、BMP-2的表达,知母、黄柏的作用尤为重要。     

龟鹿二仙汤含药血清对大鼠成骨细胞增殖功能、OPG及ODF系统的研究

目的:探讨龟鹿二仙汤含药血清对大鼠成骨细胞(osteoblast,OB)增殖功能、OB关键基因骨保护素(OPG)、破骨细胞分化因子(ODF)的mRNA表达变化的研究,分析龟鹿二仙汤防治骨质疏松症的作用机理。方法:①采用胰蛋白酶-Ⅱ型胶原同浓度(10%、15%、20%)的龟鹿二仙汤含药血清培养大鼠成骨细胞(OB)24、48、72 h,应用MTT比色法来检测其对OB增殖功能的影响。②采用荧光定量PCR测定OB中OPG、ODF的表达。结果:龟鹿二仙汤含药血清对OB的增殖作用呈浓度依赖性,即20%>15%>10%;在培养24、48 h、72 h后显著促进其增殖作用。OPG mRNA表达在龟鹿二仙汤含药血清20%浓度时最强,且明显高于对照组(P<0.01),而ODF基因mRNA表达在20%浓度时最低,且明显低于对照组(P<0.01)。结论:龟鹿二仙汤含药血清对体外培养SD大鼠OB增殖具显著作用且呈浓度依赖性,可在分子水平上调节OPG、ODF表达,可能与其治疗骨质疏松机制相关。     

骨碎补总黄酮对模拟失重下共育骨细胞中ALP活性及BMP-2和OPG基因表达影响

目的:通过观察骨碎补总黄酮对模拟失重共育骨细胞OPG和BMP-2基因表达的影响,探讨其在失重条件下骨丢失骨代谢的影响及其作用机制。方法:体外分离培养成骨细胞和破骨细胞,建立成骨-破骨细胞共育体系,利用回转器建立骨细胞失重模型;共育骨细胞中加入不同浓度骨碎补总黄酮血清培养液,在模拟失重下,48 h后,检测ALP活性,用RT-PCR法检测OPG和BMP-2基因表达。结果:与正常对照组比较,失重模型组成骨细胞在回旋48 h后细胞培养液中的ALP活性显著降低(P0.05);与失重对照组比较,含药血清组ALP活性和OPG和BMP-2表达均显著升高(P0.05)。结论:利用共育骨细胞实验研究成骨细胞、破骨细胞相互作用及影响,中剂量骨碎补能有效提高失重下共育成骨细胞增殖及分化,与浓度相关。     

仙鹿健骨汤含药血清对成骨细胞矿化结节及BMP-2表达影响的实验研究

目的:观察仙鹿健骨汤含药血清对体外培养的新生SD大鼠成骨细胞矿化功能及骨形成蛋白(BMP-2)表达的影响。方法:取12周龄Wister雌性大鼠48只,随机分为6组,每组8只,分为仙鹿健骨汤低、中、高剂量组(A、B、C组),α-D3对照组(D组)、模型组(E组)及空白对照组(F组),制备含药血清备用。成骨细胞建立采用新生SD乳鼠5只(24h内颅盖骨)进行体外细胞传代培养,分别采用茜素红染色、免疫组化染色法观察体外培养成骨细胞矿化结节变化及成骨细胞BMP-2表达。结果:B、C组及D组对成骨细胞矿化结节形成的作用均优于E组,并接近于F组水平,但组间比较无明显差异,通过免疫组化染色发现各组均有BMP-2的棕黄色深染,但B、C组阳性细胞比例明显高于其他各组,与E组比较有显著差异。结论:仙鹿健骨汤含药血清能明显增加成骨细胞矿化结节形成数,促进矿化功能,并且提高成骨细胞BMP-2表达水平,这可能是该方防治骨质疏松症的机理之一。     

电针刺激后大鼠血清对成骨细胞OPG、RANKL mRNA及其蛋白表达的影响

目的观察电针刺激去卵巢骨质疏松症模型大鼠的血清对体外培养成骨细胞的骨形成因子骨保护素(osteoprotegerin, OPG)和骨吸收因子(receptor activator for nuclear factor-?B ligand, RANKL)mRNA表达及其蛋白浓度的影响。方法将45只雌性SD大鼠,随机分为空白组(A组)、模型组(B组)、电针刺激组(C组),每组15只。除A组外,B组、C组均切除双侧卵巢。造模成功后,C组给予电针刺激,B组正常饲养,A组不做任何处理,常规正常饲养。12周后,采用水合氯醛麻醉各组大鼠,心脏采血,经过处理后加到体外培养的大鼠成骨细胞培养液中。采用碱性磷酸酶(ALP)检测成骨细胞活性,RT-qPCR法检测大鼠血清对OPG、RANKL mRNA表达的影响,ELISA法检测大鼠血清对OPG、RANKL蛋白浓度的影响。结果各组大鼠血清处理成骨细胞后,与A组比较,B组ALP的活性明显降低(P0.05),C组电刺激后成骨细胞内ALP的活性明显增加(P0.05)。与B组比较,A组及C组OPG mRNA表达及其蛋白浓度表达明显降低(P0.05);与A组比较,C组OPG mRNA表达及其蛋白浓度均明显降低(P0.05)。与B组比较,C组及A组RANKL mRNA表达及其蛋白浓度表达明显降低(P0.05);与A组比较,C组RANKL mRNA及蛋白浓度明显降低(P0.05)。C组大鼠骨密度明显高于B组(P0.05)。结论电刺激后的大鼠血清可以提升ALP、OPG水平,降低RANKL水平,其治疗骨质疏松症的机制可能与此有关。     

抗骨增生胶囊含药血清对大鼠成骨细胞增殖、分化的影响

目的探讨抗骨增生胶囊含药血清对大鼠成骨细胞增殖、分化及骨保护蛋白(OPG)和核因子-кB受体活化子配体(RANKL)蛋白表达的影响。方法采用中药血清药理学方法制备含抗骨增生胶囊大鼠血清。取乳鼠颅骨,利用复合胶原蛋白酶反复消化,离心,体外培养成骨细胞。加入不同浓度的抗骨增生胶囊含药血清进行干预,噻唑蓝(MTT)法检测中药血清对成骨细胞增殖的影响,测定碱性磷酸酶(ALP)活性,Western Blot检测OPG和RANKL蛋白表达。结果成骨细胞经抗骨增生胶囊含药血清作用后,细胞的生长呈现不同程度的增殖,中、高剂量中药组在24、48、72 h均有明显的促进作用(P0.01),且呈剂量依赖性。低剂量中药组在24、48 h时与空白对照组比较差异无统计学意义(P0.05),72 h时作用较强(P0.05)。除低剂量组培养24 h外,低、中、高剂量中药组培养24、48、72 h后,ALP分泌均呈不同程度增加,均有明显的促进作用(P0.01)。成骨细胞经过抗骨增生胶囊含药血清低、中、高剂量作用72 h后,对比值进行统计分析,与空白对照组比较,OPG表达明显升高(P0.01),RANKL表达明显降低(P0.01)。结论抗骨增生胶囊含药血清可以促进成骨细胞的增值、分化,从而促进骨形成。     

骨康含药血清对大鼠成骨细胞BMP-2表达的影响

目的:通过观察骨康含药血清对成骨细胞BMP-2表达的影响,探讨其治疗骨质疏松症的作用机制。方法:将6只大白兔随机分为3组:正常血清组、骨康含药血清组和雌二醇含药血清组,分别将血清添加入体外分离、培养的成骨细胞,每组8个样本,采用酶联免疫吸附法,检测成骨细胞BMP-2的表达。结果:骨康含药血清组BMP-2含量显著低于空白对照组(P<0.05),骨康含药血清组与雌二醇含药血清组BMP-2的含量无明显差异。结论:在去势状态下,骨康可能通过促进BMP-2的分泌,达到治疗骨质疏松症的目的。     

独活寄生汤含药血清对成骨细胞OPG/RANKL蛋白表达的影响

目的:检测独活寄生汤含药血清对成骨细胞0PG/RANKL蛋白表达的影响,从分子生物学层面探究独活寄生汤治疗骨质疏松症的机理,为独活寄生汤治疗骨质疏松症提供理论及实验依据.方法:体外培养原代SD新生24h大鼠成骨细胞,分别用生理盐水血清对照组、独活寄生汤含药血清低浓度,中浓度,高浓度作用于成骨细胞,采用MIT法检测独活寄生汤含药血清对成骨细胞生长的影响,Western Blot检测独活寄生汤含药血清对成骨细胞OPG、RANKL蛋白表达的影响.结果:独活寄生汤含药血清以浓度及时间的依赖方式促进成骨细胞生长;Western Blot结果显示不同浓度的独活寄生汤含药血清能促进成骨细胞OPG蛋白的表达,并且抑制成骨细胞RANKL蛋白的表达.结论:独活寄生汤含药血清可以通过OPG、RANKL系统促进成骨细胞的增殖并且影响成骨细胞的分化.     

独活寄生汤含药血清对成骨细胞OPG/RANKL mRNA表达的影响

目的:检测独活寄生汤含药血清对成骨细胞OPG/RANKL mRNA表达的影响,从分子生物学层面探究独活寄生汤治疗骨质疏松症的机理。方法:原代体外培养SD乳大鼠成骨细胞,分别用生理盐水血清对照组、独活寄生汤含药血清低浓度,中浓度,高浓度作用于成骨细胞,采用碱性磷酸酶(ALP)检测成骨细胞活性,RT-PCR法检测独活寄生汤含药血清对成骨细胞OPG、RANKL mRNA表达的影响。结果:独活寄生汤能增加成骨细胞内碱性磷酸酶的活性,RT-PCR结果显示不同浓度的独活寄生汤含药血清能促进OPGmRNA的表达,并且抑制成骨细胞RANKL mRNA的表达。结论:独活寄生汤含药血清一则可以通过抑制RANKL分泌从而降低破骨细胞活性;二则促进成骨细胞分泌OPG,使之与RANKL结合增多,进而使破骨细胞活性降低,从而达到治疗骨质疏松的目的。     

针刺对快速老化骨质疏松小鼠P6骨代谢因子OPG、BMP-2的影响

目的:探讨针刺治疗骨质疏松的机制。方法:以快速老化骨质疏松小鼠P6(SAMP6)及正常同源抗快速老化小鼠R1(SAMR1)为模型,采用Western Blot等方法,观察SAMP6对照组、SAMP6针刺组、SAMP6非穴位刺激组和SAMR1对照组股骨护骨素(OPG)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)蛋白表达的变化。结果:SAMP6对照组股骨OPG、BMP-2表达显著下调(P<0.05);针刺后两者表达上调并趋于正常(P<0.05)。结论:SAMP6小鼠发生骨质疏松与OPG、BMP-2等骨代谢因子表达异常有关,针刺可通过促进成骨细胞形成并分泌骨代谢因子来刺激骨形成,降低骨转换率,达到改善骨质疏松的作用。     

黄芪散对高糖作用下成骨细胞相关功能的影响

目的:观察黄芪散含药血清对高糖条件下成骨细胞功能的影响及与糖尿病性骨质疏松发病机制相关基因的影响,探讨黄芪散(HQS)对糖尿病性骨质疏松症的疗效机制。方法:选用健康清洁级5周龄Wistar大鼠10只,随机分为正常组和药物组。制备黄芪散含药血清和空白血清,选用健康清洁级新生大鼠乳鼠4只,体外以酶消化法分离培养新生乳鼠颅骨成骨细胞(Ob),行细胞计数(CCK-8)法测定高糖条件下(25.5 mmol·L~(-1))5%,10%,20%,30%含药血清对细胞增殖的影响,选取增殖活性最佳血清浓度,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)法检测黄芪散对成骨功能相关基因骨桥蛋白(OPN),骨钙素(OC),碱性磷酸酶(ALP)和胰腺-骨骼相关基因骨保护素(OPG),叉头转录因子1(Fox O1)表达的影响。结果:10%和30%血清浓度组细胞增殖较空白组有明显升高(P0.05);20%血清浓度组较空白组有显著升高(P0.01)。与空白组比较,5%浓度条件下,OPN,OPG mRNA表达明显下调(P0.05);10%浓度条件下,OC,ALP,OPN mRNA表达明显上调(P0.05,P0.01);OPG,Fox O1 mRNA较空白组表达显著下调(P0.01)。20%浓度和10%浓度条件差异性一致,OPN,OPG,Fox O1 mRNA影响趋势较10%浓度药物血清组更明显。20%浓度血清条件下,与空白组比较,OC和OPN蛋白表达显著上调(P0.01),OPG蛋白表达显著下调(P0.01)。结论:黄芪散对糖尿病性骨质疏松的疗效机制可能与其促进高糖作用下成骨细胞增殖作用有关,与下调胰腺-骨骼相关基因OPG,Fox O1表达有关。     

少阳生骨方含药血清对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的:探讨少阳生骨方对BMSCs成骨分化的影响,并初步探究其可能的作用机制。方法:以不同浓度少阳生骨方含药血清(0.035、0.07、0.14、0.28、0.56 g/mL)干预BMSCs,MTT法检测细胞增殖。将BMSCs分为少阳生骨方含药血清组(含药血清组)、对照组(无药血清组)、经典诱导组(阳性对照),碱性磷酸酶染色测定成骨活性,茜素红染色鉴定矿化结节形成,免疫组化检测各组中BMP-2、Runx2蛋白表达水平。结果:0.28、0.56 g/kg灌胃少阳生骨方含药血清对BMSCs有显著的促增殖作用(P0.05),少阳生骨方含药血清诱导7、14天能显著增加BMSCs碱性磷酸酶活性、矿化结节数及成骨相关蛋白BMP-2、Runx2阳性表达(P0.05)。结论:少阳生骨方能诱导BMSCs成骨分化,其机制可能与上调BMP-2、Runx2蛋白的表达有关。     

中药骨康对成骨细胞OPG和RANKL分泌的影响

目的：通过观察骨康含药血清对成骨细胞OPG、RANKL表达的影响,探讨其治疗骨质疏松的作用机制。方法：体外分离、培养成骨细胞,实验分为3组：正常血清组、中药骨康血清组和雌二醇含药血清组。采用酶联免疫吸附法,检测成骨细胞OPG和RANKL的表达。结果：中药骨康含药血清组RANKL含量显著低于空白对照组（P〈0.05）,而OPG分泌量显著高于空白对照组（P〈0.05）;中药骨康含药血清组与雌二醇含药血清组OPG和RANKL的含量无明显差异。结论：在去势状态下,中药骨康可能是抑制RANKL分泌,上调OPG分泌,而达到治疗骨质疏松症的作用。     

补肾健脾活血方对成骨细胞增殖分化及BMP-2、Smad5影响的研究

目的:研究中药复方补肾健脾活血方对大鼠成骨细胞增殖分化及骨形成蛋白-2 (BMP-2)、Smad5表达的影响。方法:将60只3月龄雌性SD大鼠随机分为空白组、补肾健脾活血方组、阿仑膦酸钠组,每组20只。制备对应的含药血清后分别干预成骨细胞,采用细胞计数法(CCK-8)检测成骨细胞增殖活性,碱性磷酸酶染色(ALP)检测成骨细胞分化能力,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测BMP-2、Smad5 m RNA表达,蛋白免疫印迹法检测BMP-2、Smad5蛋白表达。结果:干预12 h、24 h、48 h时,各组细胞活性逐渐增强,干预48 h后各组细胞活性均降低。干预48 h时,与空白组、阿伦磷酸钠组比较,补肾健脾活血方组细胞活性最强(P0.05)。补肾健脾活血方组成骨细胞ALP染色最深,明显深于空白组和阿仑膦酸钠组。与空白组比较,补肾健脾活血方组BMP-2、Smad5蛋白及mRNA表达升高(P0.05);阿仑膦酸钠组BMP-2 mRNA表达降低(P0.05)。与阿仑膦酸钠组比较,补肾健脾活血方组BMP-2、Smad5蛋白及mRNA表达升高(P0.05)。结论:中药复方补肾健脾活血方可以促进大鼠成骨细胞增殖分化,提高BMP-2、Smad5 mRNA和蛋白表达。     

骨碎补对微重力下共培养骨细胞中成骨细胞分化的影响

目的:观察模拟微重力下骨碎补对成骨细胞破骨细胞共培养中成骨细胞分化影响及ALP、OPG、Runx2表达作用机制。方法:建立成骨细胞破骨细胞共培养系统,模拟微重力下加骨碎补总黄酮。正常重力组(A组)和微重力空白组(B组)加等容生理盐水组大鼠血清。骨碎补低剂量组(C组)加含低浓度骨碎补血清0.054 g/(kg·d),骨碎补中剂量组(D组)加含中浓度骨碎补血清0.162 g/(kg·d),骨碎补剂量组(E组)加入高浓度骨碎补血清0.486 g/(kg·d)。A组置于培养箱中,B、C、D、E置于摸拟微重力回转器48 h。测成骨细胞ALP活性、OPG、Runx2表达。结果:与正常对照组比较,微重力组成骨细胞ALP活性降低(P0.05);与微重力空白对照组比较,含药组ALP活性、OPG和Runx2表达升高,中剂量组差异显著(P0.05)。结论:中剂量骨碎补能提高微重力下成骨细胞破骨细胞共培养系统中提高成骨细胞ALP活性、OPG、Runx2表达,促成骨细胞增殖、分化。     

二仙汤对围绝经期综合征模型大鼠卵巢中凋亡蛋白Bcl-2、Bax的作用研究

目的观察二仙汤对围绝经期综合征(Perimenopausal syndrome,MPS)模型大鼠卵巢凋亡蛋白Bcl-2、Bax的作用,探讨二仙汤治疗MPS的作用机制。方法将大鼠分为假手术组、模型组、戊酸雌二醇组和二仙汤组,并建立MPS模型。造模成功后,各组给予对于药物。观察大鼠自主活动时间变化;采用放射免疫测定血清E2、FSH、LH表达水平;采用ELISA检测大鼠下丘脑β-EP、5-HT表达水平;采用HE染色观察卵巢病理形态变化。比色法检测血清SOD、MDA、GSH-Px表达水平;Real time-PCR和免疫组化检测大鼠卵巢Bcl-2、Bax的基因和蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠活动时间和活动路程明显减少(P0.01),而静止时间明显增加(P0.01)。与模型组比较,戊酸雌二醇组和二仙汤组大鼠活动时间和活动路程增加(P0.01,P0.05),而静止时间减少(P0.01)。与假手术组比较,模型组大鼠血清E_2、SOD表达水平显著降低(P0.01),而FSH、LH、MDA、GSH-Px表达水平显著升高(P0.01)。与模型组比较,戊酸雌二醇组和二仙汤组大鼠血清E2、SOD表达水平升高(P0.01,P0.05),而FSH、LH、MDA、GSH-Px表达水平降低(P0.01)与假手术组比较,模型组大鼠下丘脑β-EP、5-HT表达水平显著降低(P0.01)。与模型组比较,戊酸雌二醇组和二仙汤组大鼠下丘脑β-EP、5-HT表达水平升高(P0.01,P0.05)。假手术组大鼠卵巢成熟卵泡、黄体数量较多,血管丰富,颗粒细胞层次多。模型组大鼠卵巢萎缩、血管减少、颗粒细胞层次较少,同时成熟卵泡数、黄体数也较少。戊酸雌二醇组和二仙汤组大鼠卵巢萎缩减轻,颗粒细胞、成熟卵泡数和黄体数减少好转。与假手术组比较,模型组大鼠卵巢中Bcl-2的基因和蛋白表达水平显著下降(P0.01),而Bax的基因和蛋白表达水平显著升高(P0.01),与模型组比较,戊酸雌二醇组和二仙汤组大鼠卵巢Bcl-2的基因和蛋白表达水平升高(P0.01,P0.05),而Bax的基因和蛋白表达水平降低(P0.01,P0.05)。结论二仙汤可以改善MPS模型大鼠的症状,其机制可能与其调节卵巢中凋亡蛋白Bcl-2和Bax的表达有关。     

牵张应力下骨碎补总黄酮对成骨细胞增殖及相关蛋白含量的影响

目的:观察骨碎补总黄酮对牵张应力下成骨细胞增殖及相关蛋白含量的影响。方法:对大鼠成骨样细胞系ROS1728作体外培养,取3代对数生长期成骨细胞,采用Flexcell细胞牵张系统构建成骨细胞牵张体系,使用骨碎补总黄酮含药血清进行干预24 h。应用MTT法绘制成骨细胞生长曲线;碱性磷酸酶染色法观察成骨细胞内碱性磷酸酶(ALP)含量及分布情况;采用碱性磷酸酶定量检测方法测定各组成骨细胞内ALP含量;采用ELISA法测定骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、转化生长因子-β1(TGFβ-1)的表达。结果:12 h及24 h骨碎补总黄酮各剂量组中成骨细胞数量及ALP、BMP-2、TGFβ-1含量均明显增加,与空白组比较,差异均有统计学意义(P0.05);同时,与骨碎补总黄酮低剂量组比较,骨碎补总黄酮中、高剂量组成骨细胞数目及ALP和BMP-2的含量增高,差异均有统计学意义(P0.05);骨碎补总黄酮各剂量组中TGFβ-1的含量比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:在牵张应力下,骨碎补总黄酮可明显促进成骨细胞增殖及相关蛋白的合成。