亚硒酸钠对HL—60细胞生长,分化和环核苷酸水平的影响

研究亚硒酸钠对人急性白血病细胞（ＨＬ－６０细胞，ＡＭＬ－Ｍ２型白血病细胞）生长、分化及胞内环核苷酸水平的影响。方法ＨＬ－６０细胞用ＲＰＭＩ１６４０培养液培养，对比研究加与不加亚硒酸钠的差别，环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）、环磷酸鸟苷（ｃＧＭＰ）水平的测定用放射免疫分析法。结果１．５×１０－５ｍｏｌ／Ｌ或３．０×１０－５ｍｏｌ／Ｌ的亚硒酸钠能显著抑制ＨＬ－６０细胞的生长，且呈剂量依赖性，１．５×１０－５ｍｏｌ／Ｌ的亚硒酸钠能促进ＨＬ－６０细胞的分化，对静息的胞内ｃＧＭＰ水平有明显的降低作用，对照组（０．０７±０．０２９）ｐｍｏｌ／１０６ｃｅｌｓ，３０ｍｉｎ，亚硒酸钠组（０．０６±０．０１７）ｐｍｏｌ／１０６ｃｅｌｓ，３０ｍｉｎ（Ｐ＜０．０５）。对肾上腺素刺激的胞内ｃＧＭＰ水平也有明显的降低作用，对照组（０．０７±０．０１８）ｐｍｏｌ／１０６ｃｅｌｓ，３０ｍｉｎ，亚硒酸钠组（０．０５±０．０１４）ｐｍｏｌ／１０６ｃｅｌｓ，３０ｍｉｎ（Ｐ＜０．０５）。结论亚硒酸钠的抑瘤作用可能与降低细胞内ｃＧＭＰ水平有关。     

鬼臼叉甙诱导HL－60细胞分化时c－myc蛋白的表达

目的：观察小剂量鬼臼叉甙对ＨＬ－６０细胞的诱导分化作用和对ｃ－ｍｙｃ蛋白表达的影响。方法：应用加入鬼臼叉甙（ＶＰ－１６）和维甲酸（ＲＡ）的含２０％小牛血清的培养基培养人类早幼粒细胞株（ＨＬ－６０），分别在培养后１、２、４、６ｄ测定细胞各时相的ｃ－ｍｙｃ蛋白水平。结合细胞形态、细胞化学和氯化硝基四氮唑蓝（ＮＢＴ）还原试验，观察ＶＰ－１６、ＲＡ对ＨＬ－６０细胞的诱导分化作用及其与ｃ－ｍｙｃ蛋白表达的关系。结果：与ＲＡ一样，小剂量ＶＰ－１６能诱导ＨＬ－６０细胞向粒系分化。并且在ＨＬ－６０细胞分化过程中ｃ－ｍｙｃ蛋白水平明显降低。ＶＰ－１６处理的ＨＬ－６０细胞其ｃ－ｍｙｃ蛋白降低与其诱导分化作用呈负相关。结论：实验结果提示，ｃ－ｍｙｃ原癌基因表达的变化可能是ＶＰ－１６诱导ＨＬ－６０细胞分化的机制之一。     

鬼臼叉甙诱导HL—60细胞分化时c—myc蛋白的表达

目的：观察小剂量鬼臼叉甙对ＨＬ－６０细胞的诱导分化作用和对ｃ－ｍｙｃ蛋白表达的影响。方法：应用加入鬼臼叉甙（ＶＰ－１６）和维甲酸（ＲＡ）的含２０％小牛血清的培养基培养人类早幼粒细胞株（ＨＬ－６０），分别在培养后１、２、４、６ｄ测定细胞各时相的ｃ－ｍｙｃ蛋白水平。结合细胞形态、细胞化学和氯化硝基四氮唑蓝（ＮＢＴ）还原试验，观察ＶＰ－１６、ＲＡ对ＨＬ－６０细胞的诱导分化作用及其与ｃ－ｍｙｃ蛋白表达的关     

联苯双酯对HL－60白血病细胞的诱导分化作用

为探讨抗肝炎药物联苯双酯（ＤＤＢ）对人早幼粒白血病细胞株ＨＬ－６０（ＨＬ－６０）的影响。方法应用细胞生物学的方法进行ＨＬ－６０细胞生长曲线、ＮＢＴ还原能力、细胞吞噬活力、酸性磷酸酶活力测定结果ＤＤＢ能抑制ＨＬ－６０细胞增殖。ＨＬ－６０细胞用ＤＤＢ（１０－４ｍｏｌ／Ｌ）处理６天后，近５０％的细胞可获得硝基蓝四氮唑（ＮＢＴ）还原能力，同样浓度的ＤＤＢ处理４天后，其ＨＬ－６０细胞的吞噬能力也明显增强；细胞形态学观察发现ＤＤＢ处理的ＨＬ－６０细胞分化趋向于成熟的中性粒细胞。结论ＤＤＢ能显著提高ＨＬ－６０细胞酸性磷酸酶活力，并具有诱导ＨＬ－６０细胞向中性粒细胞分化的作用。     

反义寡核苷酸对HL60细胞c-myc基因表达的抑制和诱导分化作用

目的研究ｃｍｙｃ反义寡核苷酸对ＨＬ６０细胞中ｃｍｙｃ基因的表达及ＨＬ６０细胞分化的影响。方法采用针对原癌基因ｃｍｙｃ的ｍＲＮＡ５’非翻译区的一个１８ｂｐ的反义寡核苷酸５’ｄ（ＣＴＴＣＴＣＧＡＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧ）３’与人早幼粒白血病细胞系ＨＬ６０细胞共培养５ｄ，检测ｃｍｙｃｍＲＮＡ量的变化及其对ＨＬ６０细胞分化的影响。结果用ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ检测出ＨＬ６０细胞ｃｍｙｃｍＲＮＡ的含量减少；细胞形态学变化以及非特异性酯酶（ＮＳＥ）染色、硝基四氮唑蓝（ＮＢＴ）还原试验均提示ＨＬ６０细胞出现了分化，部分细胞向粒细胞方向分化，部分细胞向单核细胞方向分化。结论ｃｍｙｃ反义寡核苷酸能够抑制ｃｍｙｃ基因的表达并能诱导ＨＬ６０细胞分化。     

硒提高肿瘤患者NK细胞和T淋巴细胞功能

硒对肿瘤患者细胞免疫功能促进作用的体外试验表明：当亚硒酸钠（Ｎａ２ＳｅＯ３）的作用浓度为４．３４×１０－７ｍｏｌ／Ｌ时，２０例患者淋巴细胞转化明显加强：３Ｈ－ＴｄＲ掺入量由１．０７（±０．５７）ＫＢｑ／１０６淋巴细胞增加到１．５９（±０．７５）Ｋ即／１０５淋巴细胞，Ｐ＜０．０１，同时，硒还显著提高ＮＫ细胞杀伤活性：１４例患者ＮＫ细胞介导的３Ｈ－ＴｄＲ释放率由３０．９７％±１３．９％增至４０．２８％×１３．０１％。Ｐ＜０．０５。提示适宜浓度的硒可能是一种免疫促进剂，硒在免疫功能低下的肿瘤患者的综合治疗中可能具有临床的应用价值。     

急性白血病Bcl-2反义寡核苷酸基因治疗的实验研究

目的选用２０ｎｔＢｃｌ－２反义硫代磷酸寡核苷酸（Ａｓ－Ｐｓ－ＯＤＮ，ＡＳＰＯ），并以其正义寡核苷酸（ＳＰＯ）为对照做如下问题探讨：（１）普通剂量（５～２０μｍｏｌ）ＡＳＰＯ对ＨＬ６０细胞、正常及缺铁性贫血患者骨髓细胞及急性白血病病人骨髓细胞或外周白血病细胞（幼稚细胞≥８５％）的作用；（２）大剂量（１６０μｍｏｌ）正义或反义寡核苷酸对ＨＬ６０细胞作用的特点，并通过ＡＳＰＯ引起ＨＬ６０细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达变化和ＳＰＯ对ＨＬ６０细胞毒性的变化，寻找可能的最佳效应剂量和最小毒性剂量；（３）ＡＳＰＯ联合化疗药物对ＨＬ６０细胞和原代急性白血病细胞的作用。方法台盼蓝拒染试验和克隆培养测定细胞的生长能力；免疫细胞化学染色和流式细胞仪检测Ｐ２６Ｂｃｌ－２蛋白表达，ＲＴ－ＰＣＲ法检测Ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ（Ｂｃｌ－２／β－ａｃｔｉｎ）相对水平；光、电镜下观察凋亡细胞形态，吖啶橙染色及流式细胞仪检测细胞凋亡率，ＤＮＡ提取及电泳观察凋亡细胞ＤＮＡ降解片段的形成；ＭＴＴ法检测ＰＳ－ＯＤＮ及化疗药物的细胞毒作用。结果（１）普通剂量的ＡＳＰＯ即能降低ＨＬ６０细胞及白血病细胞Ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ的表达，并抑制ＨＬ６０细胞及１８／２０例白血病细     

大剂量Bcl-2反义硫代磷酸寡核苷酸对细胞系的毒性作用

目的 探讨大剂量Ｂｃｌ－２反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸（ＡＳ－ＰＳ－ＯＤＮ,ＡＳＰＯ）对ＨＬ６０细胞系的毒性作用,同时了解毒性与剂量的关系。方法 应用四氮唑蓝比色法、台盼蓝拒染试验,ＣＦＵ－ＨＬ６０克隆培养法观察大剂量Ｂｃｌ－２ ＡＳＰＯ对ＨＬ６０细胞的毒性作用,同时应用免疫细胞化学染色及流式细胞仪检测Ｐ２６ Ｂｃｌ－２蛋白表达,吖啶橙染色及ＤＮＡ片段电泳对细胞凋亡的观察。并以其正义ＰＳＯＤＮ（ＳＰＯ     

组胺H2受体激动剂4—甲基组胺对阿糖胞苷抑制HL—60细胞增殖的负？…

在用４－甲基组胺（４－ＭＨ）激动ＨＬ－６０细胞上的组胺Ｈ２受体后,观察抗白血病药物阿糖胞苷（Ａｒａ－Ｃ）对ＨＬ－６０白血病细胞增殖抑制作用的影响。以＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入和集落培养为增殖指标,用ＮＢＴ还原试验检测细胞的分化,用ＨＰＣＬ和荧光分光光度法分别检测细胞内ｃＡＭＰ和Ｃａ＾２＋离子的变化。结果显示,ＨＬ－６０细胞上的组胺Ｈ２受体经４－ＭＨ激动后,Ａｒａ－Ｃ对其增殖的抑制作用明显减弱。     

家蚕细胞基因工程人α-干扰素注射液对离体培养HL_(60),KB细胞及对小鼠体内S_(180),EAC细胞的影响

家蚕细胞基因工程人α－干扰素注射液（ＩＨＩＦＮ－α）具有抑制肿瘤生长的作用。对于离体培养的ＨＬ６０和ＫＢ细胞，ＩＨＩＦＮ－α有直接抑制肿瘤细胞生长的作用，且呈剂量依赖性关系。在体研究中，ＩＨＩＦＮ－α２．０×１０６ＩＵ／ｋｇ对Ｓ１８０有较明显的抑制趋向（Ｐ＜０．０１），抑瘤率达２１．０％；而对于ＥＡＣ，ＩＨＩＦＮ－α４．０×１０５ＩＵ／ｋｇ及２．０×１０６ＩＵ／ｋｇ两个剂量都无明显延长生存时间的作用；ＩＨＩＦＮ－α与５－Ｆｕ１０ｍｇ／ｋｇ合用对Ｓ１８０小鼠抑瘤率以及ＥＡＣ小鼠存活天数并无增效作用；但是５－Ｆｕ１０ｍｇ／ｋｇ与２．０×１０６ＩＵ／ｋｇＩＨＩＦＮ－α合用却能明显减小ＥＡＣ小鼠第９天的腹围（Ｐ＜０．０５，与５－Ｆｕ比较）。     

亚硒酸钠对MNNG诱导胎胃粘膜上皮细胞非程序DNA合成的影响

为探讨硒化学诱癌剂所致胃粘膜上皮细胞损伤的防护作用，本文应用液闪法观察了不同浓度亚硒酸钠对ＭＮＮＧ诱导的胎胃粘膜上皮细胞非程序ＤＮＡ合成的影响。结果表明，加入亚硒酸钠１０－５Ｍ和１０Ｍ－６浓度组由ＭＮＮＧ诱导的非程序ＤＮＡ合成水平（８１．７±８．５，５１．０±６．０）显著低于对照组（１７９．０±１２．８）（Ｐ＜０．０５～０．０１），而１０－７Ｍ浓度组（１２５．０±１１．９）与对照组相比差别则无显著意义（Ｐ＞０．０５）。以上结果提示，一定浓度的亚硒酸钠对ＭＮＮＧ诱导的胃粘膜上皮细胞损伤有保护作用。     

IL—6对ADM诱导HL—60细胞凋亡影响的研究

目的：探讨白细胞介素－６（ＩＬ－６）加阿霉素（ＡＤＭ）对早幼粒细胞株（ＨＬ－６０）凋亡作用的影响。方法：采用ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳,光镜形态学观察,台盼兰活细胞拒染试验分别检测ＩＬ－６、ＡＤＭ、及ＩＬ－６加ＡＤＭ对ＨＬ－６０细胞凋亡的影响。结果：①中、高剂量ＩＬ－６抑制细胞凋亡（Ｐ＜０．０５）,低剂量无影响,（Ｐ＞０．０５）。②ＡＤＭ诱导细胞凋亡的作用强度及细胞凋亡百分率依次为：高剂量＞中剂量＞低剂     

各型麻风病人皮肤单核细胞HLA－DR抗原表达的研究

应用免疫细胞化学方法观察多菌型瘤型麻风（ＬＬ）１３例，界线类偏瘤型麻风（ＢＬ）３例，界线类麻风（ＢＢ）２例，界线类偏结核样型麻风〔ＢＴ）４例，结核样型麻风（ＴＴ）２例以及５例正常人皮肤水泡液内单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达。结果发现，正常对照组单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达率明显高于病人组（Ｐ＜０．０１）；各病人组间ＨＬＡ－ＤＲ表达率亦有显著性差别（Ｐ＜０．０１和Ｐ＜０．０５），其中以ＬＬ／ＢＬ组最低，依次为ＢＢ组、ＴＴ／ＢＴ组。提示麻风，特别是ＬＬ病人对麻风杆菌缺乏特异的细胞免疫可能与病人单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达减少，影响其向Ｔ细胞传递抗原关。     

人早幼粒白血病细胞系HL—60体外诱导分化研究

用体外短期液体培养技术，观察ＲＡ和不同来源的造血调控因子对ＨＬ－６０细胞增殖与分化的影响。以生长曲线和倍增时间作为观察各种试剂对ＨＬ－６０细胞增殖作用的指标；以ＮＢＴ还原反应和细胞形态变化作为分化成熟的指标。结果是ＲＡ、ＰＨＡ－ＬＣＭ单用时对ＨＬ－６０细胞均有抑制增殖和诱导分化作用，ＰＷＭ－ＳＣＭ、ＬＰ３－ＣＭ仅部分抑制增值、而ＦＧＦ、Ｈｕ－ＣＳＦ和ＥＰＯ等无效。各种造血生长因子分别与ＲＡ合用时，     

蛋白激酶C在维甲酸诱导人早幼粒白血病细胞成熟分化中的作用

为探究维甲酸（ｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄ，ＲＡ）诱导人早幼粒白血病细胞ＨＬ－６０分化的作用机理，作者以鱼精蛋白为底物，用［γ－￣（３２）Ｐ］ＡＴＰ同位素标记，动态检测诱导前后蛋白激酶Ｃ（ＰｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣ，ＰＫＣ）的活性变化，并观察ＰＫＣ亚细胞分布。结果发现，ＲＡ诱导后细胞质ＰＫＣ活性显著升高，以ＰＫＣ抑制剂（Ｈ－７）处理后再进行诱导，ＨＬ－６０细胞分化受阻。表明细胞质ＰＫＣ活性增高在ＲＡ诱导ＨＬ－６０细胞分化中起重要作用；但未见ＰＫＣ向细胞膜转移，提示ＲＡ诱导ＨＬ－６０细胞分化可能还通过其它途径进行。     

HGPRT基因突变技术在检测化学诱变剂中的应用

本研究用Ｎ－甲基Ｎ＇－硝基亚硝基胍（ＭＮＮＧ）和苯并芘（Ｂ（ａ）Ｐ）诱导了中国仓鼠Ｖ７９细胞毒性和次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶（ＨＧＰＲＴ）基因突变。结果表明，ＭＮＮＧ（０．７３５ｍｇ，Ｌ－１）和Ｂ（ａ）Ｐ（１ｍｇ·Ｌ－１）引起细胞存活率分别为７４．１％和７７．８％。阴性对照如空白对照、Ｓ９对照和溶剂对照的细胞自发突变频率低于０．４３×１０－５。ＭＮＮＧ和Ｂ（ａ）Ｐ＋Ｓ９诱发Ｖ７９细胞６－巯基鸟嘌呤抗性ＨＧＰＲＴ突变频率分别为１．１７×１０－５和１．３４×１０－５，比溶剂对照高４．９０和３．３５倍（Ｐ＜０．０１和Ｐ＜０．０５）。提示ＭＮＮＧ和Ｂ（ａ）Ｐ对Ｖ７９细胞呈细胞毒性和遗传毒性效应。     

用流式细胞仪检测脉冲磁场对HL-60细胞程序性死亡及周期的影响

目的：研究脉冲磁场（ＰＥＭＦ）对人早幼粒白血病（ＨＬ－６０）细胞程序性死亡（ＰＣＤ）及周期的影响。方法：以ＨＬ－６０细胞为研究对象，用流式细胞仪进行分析。结果：以ＰＥＭＦ频率为２５０Ｈｚ，场强为５ＭＴ照射ＨＬ－６０细胞，流式细胞仪分析的结果表明，ＰＣＤ呈时间依赖性增加。作用后８ｈ，ＰＣＤ增加到３８．８６％，明显高于对照组。ＰＥＭＦ对ＨＬ－６０细胞周期有影响，随着磁场作用后时间的延长，Ｇ０／Ｇ１期细胞逐渐减少，Ｇ２／Ｍ期细胞逐渐增加。磁场作用后８ｈ，Ｇ０／Ｇ１期细胞减少到４７．４４％，磁场作用后１６ｈ，Ｇ２／Ｍ期细胞增加到４６．５５％。结论：ＰＥＭＦ诱发ＨＬ－６０细胞ＰＣＤ可能与ＰＥＭＦ改变ＨＬ－６０细胞周期有关。     

ＮＡＮＯＧ基因在侧群表型干细胞样肝癌细胞中的表达及意义

摘要：【目的】基于侧群（ＳＰ）细胞分选方法,从肝癌细胞Ｈｕｈ７和Ｈｅｐ３Ｂ中分选ＳＰ表型干细胞样肝癌细胞,观察干细胞标记物ＮＡＮＯＧ基因在该ＳＰ表型肝癌细胞中的表达。【方法】采用流式细胞术检测和分选肝癌细胞Ｈｕｈ７和Ｈｅｐ３Ｂ中的ＳＰ细胞和非侧群（ＮＳＰ）细胞,细胞生长曲线法检测ＳＰ和ＮＳＰ细胞的增殖能力,Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ侵袭实验检测ＳＰ和ＮＳＰ细胞的侵袭能力,ＭＴＴ法检测ＳＰ和ＮＳＰ细胞对５－氟尿嘧啶（５－ＦＵ）和阿霉素（ＤＯＸ）的药物敏感性;Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲ和ＷＢ检测ＳＰ与ＮＳＰ细胞中ＮＡＮＯＧ基因的表达。【结果】肝癌细胞Ｈｕｈ７和Ｈｅｐ３Ｂ中分选的ＳＰ细胞比例分别为（５．３±０．８）％和（１３．４９±１．０）％。生长曲线表明Ｈｕｈ７和Ｈｅｐ３Ｂ的ＳＰ细胞的增殖速度快于ＮＳＰ细胞（Ｐ＜０．０５）,体外侵袭实验结果显示Ｈｕｈ７和Ｈｅｐ３Ｂ的ＳＰ细胞体外侵袭能力高于ＮＳＰ细胞（Ｐ＜０．０５）,ＭＴＴ结果显示Ｈｕｈ７和Ｈｅｐ３ＢＳＰ细胞对５－ＦＵ和ＤＯＸ有耐药性,高于ＮＳＰ细胞（Ｐ＜０．０５）。Ｈｕｈ７和Ｈｅｐ３ＢＳＰ细胞ＮＡＮＯＧｍＲＮＡ平均表达水平分别是ＮＳＰ细胞的４．１７和５．５１倍（Ｐ＜０．０５）,ＮＡＮＯＧ蛋白平均表达水平分别是ＮＳＰ细胞的３．７８和５．０１倍（Ｐ＜０．０５）。【结论】肝癌细胞Ｈｕｈ７和Ｈｅｐ３Ｂ中分选的ＳＰ细胞符合肿瘤干细胞的部分生物学特征,ＮＡＮＯＧ基因在ＳＰ表型干细胞样肝癌细胞中高表达。     

人早幼粒白血病细胞系HL－60体外诱导分化研究

用体外短期液体培养技术，观察ＲＡ和不同来源的造血调控因子对ＨＬ－６０细胞增殖与分化的影响。以生长曲线和倍增时间作为观察各种试剂对ＨＬ－６０细胞增殖作用的指标；以ＮＢＴ还原反应和细胞形态变化作为分化成熟的指标。结果是ＲＡ、ＰＨＡ－ＬＣＭ单用时对ＨＬ－６０细胞均有抑制增殖和诱导分化作用，ＰＷＭ－ＳＣＭ、ＬＰ３－ＣＭ仅部分抑制增殖，而ＦＧＦ、Ｈｕ－ＣＳＦ和ＥＰＯ等无效。各种造血生长因子分别与ＲＡ合用时，能加强ＲＡ对ＨＬ－６０细胞的增殖抑制和诱导分化作用的有ＦＣＦ、ＰＷＭ－ＳＣＭ、ＰＨＡ－ＬＣＭ和Ｈｕ－ＣＳＦ等；ＬＰ３－ＣＭ仅增强抑制增殖：ＥＰＯ未显示作用。     

补充硒减轻5—氟尿嘧啶对大鼠空肠功能的损害

目的：探讨补充硒减轻腹腔注射５－氟尿嘧啶对大鼠空肠功能损伤的机理．方法：６０只大鼠随机分为补硒组（Ｓｅ）和非补硒组（ＮＳｅ）,经腹腔注射５－ＦＵ后,分别于注射后第１,３,５日处死,检测大鼠空肠粘膜水分、硒含量、丙二醛含量及谷胱甘肽过氧化物酶和双糖酶活性．结果：两组动物空肠粘膜水分含量无显著差别;Ｓｅ组空肠粘膜硒含量显著高于ＮＳｅ组（Ｐ＜０．０１）;丙二醇含量在注射５－ＦＵ后第１,３日显著低于ＮＳｅ组（Ｐ＜０．０５）;谷胱甘肽过氧化物酶活性在注射后第五日显著高于ＮＳｅ组（Ｐ＜０．０５）;蔗糖酶及麦芽糖酶活性在注射后第３日显著高于ＮＳｅ组（Ｐ＜０．０５,Ｐ＜０．０１）．结论：补充硒减轻５－氟尿嘧啶对大鼠空肠功能的近期损害．