桑叶改善3T3-L1细胞胰岛素抵抗的作用及其机制分析

目的:观察桑叶含药血清对脂肪细胞株3T3-L1胰岛素抵抗(IR)模型葡萄糖消耗量及细胞活力的影响,筛选出桑叶含药血清的最佳浓度,并检测其对炎症因子含量的影响,探讨可能的作用机制。方法:取对数生长期3T3-L1前脂肪细胞,10 mg·L~(-1)胰岛素(Ins),0. 25 mmol·L~(-1)地塞米松(DEX),0. 5 mmol·L~(-1)3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)诱导48 h后,10 mg·L~(-1)Ins再次诱导48 h,待其分化为成熟脂肪细胞后,1μmol·L~(-1)DEX诱导96 h以建立IR细胞模型。桑叶水提物含药血清培养12,24,36,72 h后,采用葡萄糖氧化酶法检测桑叶含药血清培养后细胞葡萄糖的消耗量,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测桑叶含药血清培养后IR模型的细胞活力,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测桑叶含药血清对细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的影响,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定桑叶含药血清对胰岛素信号通路胰岛素受体(InsR),胰岛素受体底物(IRS),磷酸化IRS1(p-IRS1),葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)蛋白表达的影响。结果:桑叶含药血清可显著提高IR细胞葡萄糖消耗量(P 0. 01),增强细胞活力(P 0. 01),降低炎症因子TNF-α的含量(P 0. 01),调节胰岛素信号通路下游蛋白的表达量(P 0. 05,P 0. 01)。结论:桑叶可明显改善3T3-L1细胞IR状态,其作用机制可能与抑制TNF-α表达、促进胰岛素信号通路蛋白的表达有关。     

葫芦巴4－羟基异亮氨酸对高糖诱导小鼠3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的影响

目的 研究葫芦巴活性成分4－羟基异亮氨酸（4-hydroxyisoleucine, 4-HIL）对高糖诱导的小鼠前脂肪细胞（3T3-L1）胰岛素抵抗的作用及其机制。方法 以25 mmol/L葡萄糖加0.6 nmol/L胰岛素诱导小鼠3T3-L1脂肪细胞建立胰岛素抵抗细胞模型,予以不同浓度4-HIL（5、10、20 μmol/L）进行干预。采用［3H］－脱氧-D-葡萄糖摄入法检测葡萄糖摄取率,PCR法检测肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-alpha,TNF-α）mRNA表达量,ELISA法检测细胞上清TNF-α蛋白水平。以棕榈酸（palmitic acid,PA）为对照。结果 25 mmol/L葡萄糖加0.6 nmol/L胰岛素作用18 h后,3T3-L1脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖转运抑制了63％;PCR显示脂肪细胞内TNF-α mRNA的表达较正常脂肪细胞明显增高（P<0.05）;ELISA显示细胞上清中的TNF-α分泌量增加70 pg/mL（P<0.05）。PA组表现出类似结果。分别加入5、10、20 μmol/L 4-HIL作用24 h后,3T3-L1脂肪细胞胰岛素刺激所产生的葡萄糖转运分别增加35％、50％、60％;PCR检测显示,脂肪细胞内TNF-α mRNA的表达随着药物浓度的增加呈递减趋势,与模型组及PA组比较,差异有统计学意义（P<0.05）;与模型组比较,药物干预后脂肪细胞培养基上清TNF-α分泌水平分别下降10、18、39 pg/mL（P<0.05）。结论 4-HIL可以显著改善高糖诱导的小鼠3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗,同时4-HIL能够抑制TNF-α的分泌。     

小檗碱对白介素-6诱导胰岛素抵抗 3T3-L1脂肪细胞脂联素表达的影响

目的:观察小檗碱对白介素-6(IL-6)诱导胰岛素抵抗的3T3-L1脂肪细胞脂联素表达的影响。方法:选用IL-6诱导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗(IR)模型。以20μg·L-1IL-6培养48 h,将3T3-L1脂肪细胞随机分为正常对照组、模型组、吡格列酮组(50μmol.L-1)和小檗碱高、中、低剂量组(10,20,50μmol.L-1),以葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖消耗量,观察小檗碱对脂肪细胞葡萄糖摄取的影响,鉴定IR模型;采用实时荧光定量PCR技术测定脂肪细胞脂联素基因mRNA水平。结果:模型组葡萄糖消耗量及脂联素基因表达水平与正常对照组比较,均显著降低(P<0.05);小檗碱高、中、低剂量组及吡格列酮组均能显著增加葡萄糖消耗量及脂联素基因表达水平(P<0.05)。结论:小檗碱可增加白介素-6诱导胰岛素抵抗的3T3-L1脂肪细胞脂联素基因mRNA的表达,改善胰岛素抵抗状态。     

小檗碱对3T3-L1前脂肪细胞及其胰岛素抵抗模型的影响

目的:探查小檗碱的体外安全浓度及其对脂肪细胞的抗胰岛素抵抗(IR)活性。方法:3T3-L1前脂肪细胞分为空白组和小檗碱不同浓度(0.001~10μmol·L-1)组,48 h后MTT法测定各组的A值。成熟的3T3-L1脂肪细胞分为空白组和IR模型组,模型组细胞经10μmol·L-1胰岛素(Ins)诱导24,48 h。检测各组培养液和细胞葡萄糖含量。检测IR模型细胞经小檗碱不同浓度(0.000 1~1μmol·L-1)干预24,48 h后的培养液中葡萄糖含量。结果:小檗碱0.01~1μmol·L-13个浓度和10μmol·L-1作用的前脂肪细胞A值均显著升高或降低(P0.05,P0.01);经Ins诱导24,48 h的培养液和细胞葡萄糖含量均显著增加或减少(P0.01);作用24 h的小檗碱0.01~1μmol·L-1和作用48 h的0.000 1~1μmol·L-1各浓度组培养液中的葡萄糖量均显著减少(P0.01)。结论:小檗碱的体外细胞安全浓度较低,低浓度小檗碱对脂肪细胞即具有显著的抗IR活性。     

苦瓜总皂苷对3T3-L1胰岛素抵抗脂肪细胞炎症因子的影响

目的探讨苦瓜总皂苷对3T3-L1胰岛素抵抗脂肪细胞葡萄糖摄取量、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的影响。方法采用MTT法确定苦瓜总皂苷浓度,利用油红"O"染色法鉴定脂肪细胞的形成,用地塞米松处理脂肪细胞复制胰岛素抵抗细胞模型,添加苦瓜总皂苷作用24 h后,运用实时荧光定量逆转录多聚酶联反应(RT-q PCR)检测脂肪细胞中TNF-α和IL-6的m RNA表达,酶标记免疫吸附测定法(ELISA)检测培养液中TNF-α和IL-6蛋白含量变化。结果选定用于实验的苦瓜总皂苷的作用时间为24 h,浓度为苦瓜高剂量组(5 mg·m L~(-1))、苦瓜低剂量组(2.5 mg·m L~(-1));诱导分化3T3-L1细胞12 d形成成熟细胞;地塞米松处理3T3-L1脂肪细胞48 h胰岛素抵抗脂肪细胞模型复制成功;苦瓜总皂苷干预3T3-L1胰岛素抵抗脂肪细胞后,葡萄糖摄取量显著增高(P0.01),TNF-α和IL-6的表达和蛋白分泌显著降低(P0.01),并呈浓度依赖性。结论苦瓜可以改善胰岛素抵抗细胞模型的胰岛素抵抗状态,与降低炎症因子表达相关。     

3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型建立、优化及分子指标鉴定

[摘要]：目的：探讨3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗（Insulin Resistance,IR）模型建立条件、优化及分子指标鉴定。方法：采用3-异丁基-1-黄嘌呤（3-isobutyl-1-methylxanthine, IBMX）,地塞米松（Dexamethason,DEX）和胰岛素联合诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞,油红O染色鉴定。采用1μmol·L-1DEX诱导建立IR-3T3-L1脂肪细胞,1μmol·L-1DEX联合10μmol·L-1罗格列酮（Rosiglitazone,ROS）联合诱导建立IR-3T3-L1脂肪细胞。葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法（Glucose oxidase-peroxidase,GOD-POD）检测不同时间点细胞培养液葡萄糖含量,确认IR-3T3-L1细胞模型最佳诱导时间和IR状态稳定性;甘油磷酸氧化酶法(glycerol phosphate oxidase,GPO-POD)测定胞内甘油三酯（Triglyceride,TG）含量。荧光定量qPCR和Western blot法分别检测脂联素（Adiponectin,ADPN）和葡萄糖转运蛋白-4（Glucose transporter 4,GLUT4）mRNA基因和蛋白质表达水平。结果：DEX作用3T3-L1脂肪细胞96h葡萄糖消耗差值比例最大,为46.84%;DEX ROS作用72h葡萄糖消耗差值比例最大,为22.77%,可确认为两种IR模型建立的最佳时间点,其后可保持稳定IR状态至少60h。两类IR细胞中的GLUT4和ADPN mRNA和蛋白表达水平较正常组显著降低（P<0.01）,相较于DEX ROS组,DEX单独诱导细胞内GLUT4和ADPN mRNA和蛋白表达水平降低更显著。结论：DEX组和DEX ROS组两种诱导方法抑制GLUT4和ADPN mRNA和蛋白表达水平来建立稳定可靠的IR-3T3-L1细胞模型,但DEX单独诱导IR模型方法更稳定可能与更有效抑制了ADPN mRNA和蛋白表达导致葡萄糖消耗下降更为显著。     

糖耐康颗粒对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞炎症因子的影响

目的：探讨糖耐康颗粒对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞炎症因子的影响。方法：通过地塞米松与胰岛素共同诱导3T3-L1脂肪细胞建立胰岛素抵抗模型，检测中药糖耐康对细胞上清中TNF-α、IL－6、CRP水平的影响。结果：与正常组比较，模型组TNF－α、IL-6、CRP水平明显升高；经中药糖耐康以及西药吡格列酮干预后，TNF－α、IL－6、CRP水平显著下降，与模型组比较有显著差异。结论：TNF－α、IL－6、CRP参与胰岛索抵抗的发生，中药糖耐康可能通过降低炎症因子的水平发挥改善胰岛素抵抗的作用。     

软脂酸制备3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型的方法

目的用软脂酸（PA）诱导3T3-L1脂肪细胞,探讨用PA制备3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗（IR）模型的方法。方法将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟的脂肪细胞,用油红O染色法鉴定细胞。用不同浓度的PA（0mmol/L、0.25mmol/L、0.5mmol/L、1.0mmol/L）干预3T3-L1脂肪细胞24h,收集各组细胞培养液,用葡萄糖氧化酶法测定各组细胞培养液葡萄糖的含量,观察PA对3T3-L1脂肪细胞糖摄取的影响。结果 0.25mmol/L PA就可明显抑制成熟的3T3-L1脂肪细胞葡萄糖的摄取（P〈0.01）,且呈浓度依赖性。与对照组相比,0.25mmol/L PA组、0.5mmol/L PA组、1.0mmol/L PA组葡萄糖摄取率分别下降5.25%、10.29%、14.54%。结论在胰岛素刺激下,0.25mmol/L PA作用于3T3-L1脂肪细胞24h就可诱导细胞产生IR,且随着浓度的增加其效果逐渐增强。     

胱硫醚γ-裂解酶抑制剂逆转TNF-α引起的脂肪细胞胰岛素抵抗研究

目的观察胱硫醚γ-裂解酶(CSE)抑制剂对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的脂肪细胞胰岛素抵抗的影响。方法用TNF-α培养3T3-L1脂肪细胞,建立胰岛素抵抗脂肪细胞模型。经或未经CSE抑制剂炔丙基甘氨酸(PPG)和二辛可宁酸(BCA)预处理的脂肪细胞与TNF-α作用24 h后,观察脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖消耗和摄取及硫化氢(H2S)含量的变化。结果 TNF-α可增加内源性H2S生成并减少3T3-L1脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖消耗和摄取。BCA和PPG预处理可逆转TNF-α导致的脂肪细胞胰岛素抵抗。结论内源性CSE/H2S系统在胰岛抵抗的发生发展中发挥着重要作用,可能是治疗胰岛素抵抗的一个新方向。     

三黄消渴汤对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞的影响

目的探讨三黄消渴汤配伍对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞糖脂代谢的调控作用,阐明其降糖机理。方法培养3T3-L1前脂肪细胞并采用以地塞米松、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤和胰岛素诱导分化为成熟的脂肪细胞,采用地塞米松诱导成熟的脂肪细胞建立胰岛素抵抗3T3-L1细胞模型。以该模型为手段,以葡萄糖消耗量、细胞游离脂肪酸的溢出水平为主要指标,通过拆方、组方对三黄消渴汤的降糖作用进行研究。结果与模型组相比,黄连组和配伍组均可降低培养液中葡萄糖的含量(P0.01),提高葡萄糖的利用率,配伍组效果优于单药组。且含或不含10 nmol·L-1胰岛素的条件下,各组培养上清液中游离脂肪酸浓度均明显低于模型组(P0.01),与胰岛素(10 nmol·L-1)无依存关系。结论三黄消渴汤配伍能显著增加3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖消耗量,同时可减少游离脂肪酸的溢出,通过调节糖代谢和脂代谢改善胰岛素抵抗。     

葛根素改善3T3-L1 脂肪细胞葡萄糖摄取和胰岛素抵抗

目的：探讨葛根素对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗（Insulin resistance,IR）模型葡萄糖利用和IR的影响及其作用机制。方法：诱导分化3T3-L1前脂肪细胞为成熟脂肪细胞;用地塞米松诱导建立3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型。成功建立模型后,将实验分为5组进行,分别为空白组、模型组、葛根素10 mg·L-1组、葛根素100 mg·L-1组、葛根素200 mg·L-1组;其中,空白组不建模,模型组建模但不用药物干预,各葛根素组为在建立模型后,给予不同浓度的葛根素干预。用葛根素干预24小时后,以葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法测定细胞培养基中葡萄糖浓度,四甲基偶氮唑蓝[3-(4,5-dimehyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazoliumbromide, MTT]比色法检测细胞增值活力;然后分别用Real time PCR、Western Blot 方法检测细胞葡萄糖转运蛋白4（glucosetransporter type 4, GLUT4）、磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K）、蛋白激酶B（protein kinaseB, PKB/AKT）、腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphate activated protein kinase, AMPK）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator -activated receptor gamma, PPARγ）mRNA基因和蛋白表达。结果：葛根素干预后,细胞培养基中葡萄糖浓度均较模型组降低（P < 0.01）;GLUT4、PI3K、AKT、AMPK、PPARγ mRNA水平及蛋白表达较模型组均增加（P < 0.05）。结论：葛根素能增加3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型葡萄糖利用、改善IR,其作用机制可能与上调P13K、AKT、AMPK、PPARγ基因和蛋白表达,进而增加葡萄糖运转有关。     

糖耐康对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的 探讨中药糖耐康治疗2型糖尿病的作用机制.方法 44只Wistar大鼠随机分为中药组(n=18),空白组(n=20),西药组(n=6).中药组给予糖耐康灌胃,制备中药血清;西药组给予吡格列酮灌胃制备西药血清;空白组给予蒸馏水灌胃制备空白血清.用3T3-L1脂肪细胞制备胰岛素抵抗模型,分为模型组、吡格列酮组及糖耐康高、中、低剂量组,并以正常脂肪细胞作为空白组.糖耐康高剂量组予含中药血清的培养液,糖耐抗中剂量组予含1份空白血清及2份中药血清配置的培养液,糖耐康低剂量组予含2份空白血清及1份中药血清的培养液,吡格列酮组予含西药血清的培养液,空白组和模型组给予基础培养液.各组均培养72h后采用ELISA法测各组细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,免疫荧光法观察各组细胞内TNF-α蛋白表达,RT-PCR法测定细胞内TNF-α mRNA水平. 结果 模型组脂肪细胞TNF-α蛋白水平较正常组显著升高(P＜0.01);各给药组TNF-α蛋白水平均显著低于模型组(P＜0.01),且糖耐康高、中剂量组显著低于吡格列酮组(P＜0.01).模型组细胞内有大量TNF-α阳性反应颗粒,糖耐康中剂量组和高剂量组及吡格列酮组TNF-α阳性反应颗粒较模型组明显减少.与模型组比较,糖耐康高剂量组、中剂量组及吡格列酮组TNF-α mRNA表达明显减少,且以糖耐康中剂量组最少.结论 糖耐康能够有效改善成熟的3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗,明显降低胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞中TNF-α的蛋白及其mRNA表达水平,这可能是其治疗2型糖尿病的作用机制之一.     

健脾化痰汤对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞炎症细胞因子分泌的影响

目的:观察健脾化痰汤含药血清对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞分泌脂联素、TNF-α和IL-6的影响,探讨其改善IR可能机制。方法:采用细胞培养技术,将3T3-L1小鼠前脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞,通过地塞米松诱导建立IR细胞模型,将脂肪细胞分为正常组(基础培养液加10%空白组血清培养正常脂肪细胞)、IR组(基础培养液加10%空白组血清培养IR脂肪细胞)、中药组(基础培养液加10%健脾化痰组血清培养IR脂肪细胞)和西药组(基础培养液加10%比格列酮组血清培养IR脂肪细胞),培养48 h,葡萄糖氧化酶法检测细胞培养上清液中葡萄糖浓度,ELISA法检测细胞培养上清液中脂联素、TNF-α和IL-6含量。结果:与正常组比较,IR组葡萄糖消耗量和脂联素含量显著降低(P<0.05),TNF-α和IL-6含量显著升高(P<0.05);与IR组比较,中药组和西药组葡萄糖消耗量和脂联素含量明显升高(P<0.05),TNF-α和IL-6含量显著降低(P<0.05)。结论:脂联素、TNF-α和IL-6参与IR发生,健脾化痰汤可能通过调节IR脂肪细胞炎症细胞因子分泌,改善IR。     

地黄寡糖对3T3-L1脂肪细胞增殖及胰岛素抵抗的作用

目的：探讨地黄寡糖对脂肪细胞增殖和胰岛素抵抗的影响。方法：培养3T3-L1前脂肪细胞,用四甲基偶氮唑盐（MTT）方法检测3T3-L1前脂肪细胞及脂肪细胞的增殖情况,同时采用地塞米松诱导3T3-L1脂肪细胞建立胰岛素抵抗模型,检测地黄寡糖对细胞培养基中葡萄糖浓度的影响。结果：在DMEM高糖培养基中,地黄寡糖可促进3T3-L1前脂肪细胞增殖,抑制3T3-L1脂肪细胞增殖,作用呈明显量效关系；使3T3-L1前脂肪细胞及3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗量增加,呈明显量效关系；地黄寡糖能明显增加胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞培养基中的葡萄糖消耗量,增强对胰岛素的敏感性。结论：地黄寡糖可以促进前脂肪细胞的增殖,抑制脂肪细胞的增殖,地黄寡糖对地塞米松诱导的3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗具有明显的改善作用。     

黄连改善胰岛素抵抗药效物质基础研究

目的:从细胞途径多方面观察黄连药材、部位及其成分等对3T3-L1前脂肪细胞诱导分化及脂肪细胞胰岛素抵抗的影响,探索黄连改善胰岛素抵抗的药效物质基础。方法:培养3T3-L1前脂肪细胞,采用地塞米松、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤和胰岛素共同诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为脂肪细胞,并建立胰岛素抵抗模型。依据黄连传统用药经验,观察黄连"药材-部位-生物碱成分"对脂肪细胞分化的影响,对胰岛素抵抗模型细胞培养液中葡萄糖消耗的影响。结果:除非生物碱部位在6.0μg.L-1具有明显促进分化作用外,其余各组无论黄连水提物、不同提取部位还是不同生物碱成分均能明显抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化,其中单体成分盐酸黄连碱在浓度16.5μmol.L-1时抑制作用最为明显;同时,各组也均能降低培养液中葡萄糖的含量,提高葡萄糖的利用率,改善胰岛素抵抗,作用与马来酸罗格列酮相似,其中单体成分盐酸药根碱在浓度10.5μmol.L-1时改善作用明显优于其余各成分。结论:黄连具有明显改善胰岛素抵抗,抑制前脂肪细胞分化的作用,其疗效可能是各成分协同作用的结果;同时其抑制分化作用也提示黄连在增加细胞对葡萄糖摄取的同时不会引起脂肪的聚集而造成体重增加,这对防治与胰岛素抵抗相关的代谢综合征或并发症具有一定临床意义。     

荷叶水提物对3T3-L1前体脂肪细胞增殖、凋亡及前体脂肪细胞、成熟脂肪细胞IL-6 mRNA、TNF-α mRNA的影响

目的:研究荷叶水提物对3T3-L1前体脂肪细胞增殖、凋亡的影响,以及对3T3-L1前体脂肪细胞、成熟脂肪细胞白介素-6(IL-6)信使核糖核酸(mRNA)、肿瘤坏死因子(TNF-α)mRNA的影响。方法:体外培养3T3-L1细胞,采用MTT法检测荷叶水提物对3T3-L1前体脂肪细胞增殖的影响;采用荧光定量PCR检测其对3T3-L1前体脂肪细胞和成熟脂肪细胞IL-6 mRNA、TNF-αmRNA的表达,采用DAPI染色法检测其对3T3-L1前体脂肪细胞凋亡的影响。结果:不同质量分数的荷叶水提物均能抑制3T3-L1细胞增殖,且呈现量-效关系;1 g/L荷叶水提物可增高3T3-L1成熟脂肪细胞TNF-αmRNA和IL-6 mRNA的表达,降低3T3-L1前体脂肪细胞TNF-αmRNA的表达;还可以促进3T3-L1前体脂肪细胞的凋亡。结论:荷叶水提物可能是通过抑制细胞增殖、降低细胞炎症因子mRNA的表达、促进细胞凋亡进而影响脂肪细胞的活性。     

五味清浊散对3T3-L1细胞TNF-α浓度和基因表达的影响

目的:观察五味清浊散(WQS)对脂肪细胞血糖浓度和TNF-α水平及其mRNA其表达的影响。方法:药物处理48h后,采用GOD-POD法检测3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗(IR)模型培养液中葡萄糖浓度,ELISA法检测TNF-α浓度,RT-PCR法检测TNF-α基因mRNA的表达。结果:WQS使脂肪细胞IR模型培养液葡萄糖、TNF-α浓度降低,并下调TNF-α基因mRNA的表达。结论:WQS有显著的降糖作用,并下调TNF-α水平。     

3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型的建立、优化及分子指标鉴定

目的探讨3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)模型建立的条件、优化及分子指标鉴定。方法采用3-异丁基-1-黄嘌呤(3-isobutyl-1-methylxanthine,IBMX)、地塞米松(Dexamethason,DEX)和胰岛素联合诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞,跟踪观察其诱导分化过程中的形态变化,并采用油红O染色鉴定。采用DEX(1μmol·L~(-1))单独诱导及DEX(1μmol·L~(-1))+罗格列酮(Rosiglitazone,ROS,10μmol·L~(-1))联合诱导建立IR-3T3-L1脂肪细胞。采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法(Glucose oxidase-peroxidase,GOD-POD)检测不同时间点细胞培养液中葡萄糖含量,确定IR-3T3-L1脂肪细胞模型的最佳诱导时间,考察3T3-L1脂肪细胞模型IR状态的稳定性;采用CCK-8法测定IR-3T3-L1脂肪细胞活性;采用甘油磷酸氧化酶法(glycerol phosphate oxidase,GPO-POD)测定IR-3T3-L1细胞甘油三酯(Triglyceride,TG)含量;采用实时荧光定量PCR(q PCR)和Western Blot法分别检测IR-3T3-L1脂肪细胞的脂联素(Adiponectin,ADPN)及葡萄糖转运蛋白4(Glucose transporter 4,GLUT4)的mRNA、蛋白质表达水平。结果 DEX诱导3T3-L1脂肪细胞96 h,葡萄糖消耗差值比例达最大为46.84%;DEX+ROS诱导72 h,葡萄糖消耗差值比例达最大为22.77%,可作为2种IR模型建立的最佳时间点。与正常组比较,DEX及DEX+ROS诱导建立的2种IR模型葡萄糖消耗量均显著降低(P0.05,P0.01),2种方法建立的IR-3T3-L1细胞模型60 h内均保持稳定;IR模型组细胞活性均无明显变化(P0.05),2种诱导试剂对IR脂肪细胞活性均无明显影响;IR模型组TG含量均显著升高(P0.01),DEX+ROS组TG含量明显高于DEX组;IR模型组ADPN、GLUT4 mRNA及蛋白表达水平均显著下调(P0.01),且DEX组下调幅度较DEX+ROS组更加明显。结论 DEX单独诱导及DEX+ROS联合诱导2种方法均可建立稳定的IR-3T3-L1细胞模型,DEX诱导IR-3T3-L1细胞模型优于DEX+ROS,其机制可能与GLUT4及ADPN表达显著降低有关。     

葛根素对3T3-L1前脂肪细胞分化及胰岛素抵抗模型糖代谢的影响

目的:研究葛根素(Pur)对3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化的影响,以及在胰岛素抵抗状态下对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖代谢的影响。方法:不同浓度Pur干预3T3-L1细胞,MTT法检测其对细胞增殖的影响;油红O染色法检测其对前脂肪细胞分化过程及成脂的影响;地塞米松诱导3T3-L1细胞建立胰岛素抵抗模型,用不同浓度Pur进行干预,测定细胞的葡萄糖消耗量。结果:Pur(3～300μmol/L)对3T3-L1前脂肪细胞增殖无明显影响;Pur(30～300μmol/L)促进3T3-L1细胞的分化成脂,增加胰岛素抵抗状态下3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖代谢,且具有量效关系。结论:Pur能够促进3T3-L1细胞的分化成脂,增加胰岛素抵抗状态下3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖代谢,改善胰岛素抵抗。     

黄蜀葵花中黄酮类成分对前脂肪细胞增殖、分化及胰岛素抵抗的影响

黄蜀葵花中富含黄酮类成分,具有保护心血管、改善肾功能等作用。该文采用3T3-L1前脂肪细胞诱导分化的成熟脂肪细胞,建立胰岛素抵抗模型,分为正常组,模型组,异槲皮苷(HY)、金丝桃苷(JY)、槲皮素(QT)、槲皮素-3'-O-葡萄糖苷(QG)、棉皮素-8-O-β-葡萄糖醛酸(GG)给药组,BCA法检测细胞培养液中葡萄糖的含量,荧光定量q PCR检测PPARγ,C/EBPα,SREBP-1,脂联素,内酯素,抵抗素基因mRNA的表达水平。结果显示,5种黄酮类化合物5μmol·L-1浓度时可促进3T3-L1前脂肪细胞的增殖,浓度为100μmol·L-1时可抑制前脂肪细胞的增殖;与正常组比较,模型组细胞对葡萄糖摄取量降低(P0.01);与模型组相比,5种黄酮类化合物100μmol·L-1给药组细胞葡萄糖消耗量显著上升(P0.01),PPARγ,C/EBPα,脂联素表达明显增加(P0.01),SREBP-1,抵抗素,内酯素的表达明显降低(P0.01),促使脂肪细胞分化。研究表明,HY,JY,QT,QG,GG能调控前脂肪细胞增殖,促进脂肪细胞分化及糖脂代谢相关因子PPARγ,C/EBPα,SREBP-1,脂联素,内酯素,抵抗素的表达,促进前脂肪细胞分化,增加葡萄糖利用,从而改善胰岛素抵抗。