人肺腺癌吉非替尼耐药细胞系A549/GR的建立及小白菊内酯逆转耐药机制研究

目的建立人肺腺癌吉非替尼耐药细胞系A549/GR,研究其耐药机制,探讨小白菊内酯(PAR)逆转A549/GR耐药的机制。方法以吉非替尼为诱导剂,人肺腺癌细胞系A549为诱导对象,采用大剂量冲击和逐步增加剂量相结合的方法,诱导建立人肺腺癌吉非替尼耐药细胞系A549/GR。采用细胞毒实验(MTT)法测定细胞耐药指数,免疫印迹法(Western blotting)检测细胞耐药相关蛋白表达水平,进一步通过MTT法检测PAR对A549/GR的逆转倍数,Annexin V-FITC双标法检测PAR的促凋亡作用,Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白表达水平。结果所建立的人肺腺癌吉非替尼耐药细胞系A549/GR耐药指数为18.7。A549/GR细胞中MDR和ABCG2耐药相关蛋白表达水平较A549升高。MTT结果显示PAR对耐药细胞A549/GR的逆转倍数为8.66。Annexin V-FITC凋亡检测结果显示PAR能有效促进A549/GR细胞凋亡,Western blotting检测显示PAR能有效降低survivin、Bcl-2两种抑制凋亡相关蛋白的表达。结论成功建立了人肺腺癌吉非替尼耐药细胞系A549/GR;PAR通过促进A549/GR细胞凋亡有效逆转其耐药。     

粒状头样蛋白2下调诱导上皮间质转化促进肿瘤细胞对吉非替尼耐药

目的 探讨粒状头样蛋白2（GRHL2）在肿瘤靶向治疗药物表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）吉非替尼获得性耐药中的作用和可能机制。方法 利用吉非替尼浓度逐步递增的体外诱导方法培养人结直肠癌细胞DiFi和人肺腺癌细胞HCC4006,获得吉非替尼耐药细胞株。通过RNA测序方法筛选在耐药细胞株与其亲代细胞中差异表达的基因并进行实时荧光定量PCR验证。使用pcDNA3.1-GRHL2质粒转染耐药细胞株使GRHL2过表达,用CCK-8法检测细胞对吉非替尼的敏感性。采用蛋白质印迹法检测耐药细胞株中上皮标志物E-cadherin和间质标志物Vimentin的表达变化,并通过CellMiner^TM数据库分析60株人肿瘤细胞系中GRHL2表达与E-cadherin和Vimentin表达的关系。结果 成功获得DiFi和HCC4006的耐药细胞株。通过RNA测序和实时荧光定量PCR验证发现GRHL2在耐药细胞株中表达下调,而在耐药细胞株中过表达GRHL2后细胞恢复了对吉非替尼的敏感性。蛋白质印迹分析表明耐药细胞株中上皮标志物E-cadherin表达下调,而间质标志物Vimentin表达上调;CellMiner^TM数据库分析表明GRHL2的表达与E-cadherin/Vimentin比值高度一致。结论 GRHL2表达下调通过诱导上皮间质转化介导肿瘤细胞对吉非替尼的耐药。     

自噬对PC9/GR细胞吉非替尼敏感性及PD-L1影响的体外研究

目的 探讨在体外影响自噬对吉非替尼耐药肺腺癌细胞PC9/GR药物敏感性及程序性死亡配体-1(PD-L1)的影响.方法 实时荧光定量PCR及Western blot法检测吉非替尼敏感细胞株PC9及吉非替尼耐药细胞株PC9/GR自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1及PD-L1表达水平;CCK-8实验检测PC9和PC9/GR细胞对吉非替尼敏感性以及抑制PC9/GR自噬后各组细胞增殖情况;Western blot法检测调控PC9/GR自噬后LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p62及PD-L1的表达.结果 PC9/GR细胞中自噬及PD-L1表达高于PC9细胞,CCK-8实验显示PC9/GR细胞对吉非替尼IC50.高于PC9细胞,抑制自噬后PC9/GR细胞对吉非替尼药物敏感性部分恢复(P＜0.05).Western blot显示在PC9/GR细胞中诱导自噬PD-L1表达增加,抑制自噬PD-L1表达减少,且随自噬抑制剂处理的时间及浓度的改变而变化(P＜0.05).结论 体外实验结果提示,抑制自噬可能增强肺腺癌耐药细胞对吉非替尼的敏感性,提示PD-L1可能被自噬调控,PD-L1可能参与体外抑制自噬逆转吉非替尼耐药的过程.     

长链非编码RNA BANCR与非小细胞肺癌EGFR-TKI耐药的相关研究

目的：探讨长链非编码RNA BANCR与非小细胞肺癌表皮生长因子受体（EGFR）-酪氨酸激酶抑制剂（TKI）耐药之间的相关性。方法：选择EGFR19外显子区缺失突变的细胞株以及野生型细胞株进行研究,应用实时荧光定量PCR法（qRT-PCR）检测耐吉非替尼细胞株PC9/GR及亲本细胞株PC9中BANCR的表达差异,发现BANCR在PC9/GR细胞中显著低表达。在PC9/GR细胞中过表达BANCR,分别应用CCK8法、克隆形成实验、流式细胞术检测过表达后PC9/GR细胞对吉非替尼药物敏感性,细胞增殖能力,联合吉非替尼处理后细胞凋亡变化;Western blot检测过表达BANCR后对PC9/GR细胞上皮间质转化（EMT）的影响。结果：①吉非替尼的敏感细胞株的RNA BANCR表达水平较高,耐药细胞株的RNA BANCR表达水平较低（P<0.05）。②在PC9/GR细胞中过表达BANCR,相对于对照组,吉非替尼对PC9/GR细胞的半数抑制浓度（IC50）减低,前后差异具有统计学意义（P<0.05）。过表达BANCR后PC9/GR细胞增殖能力减弱,经吉非替尼处理后细胞凋亡增多（P<0.05）。③与空白对照组比较,Western blot结果显示过表达BANCR的PC9/GR细胞E-钙粘蛋白表达水平明显升高,N-钙粘蛋白水平明显降低。结论：长链非编码RNA BANCR可诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖;过表达BANCR可以增加PC9/GR细胞对吉非替尼的敏感性,逆转其耐药性,这一作用机制可能是通过调控EMT过程来发挥作用的。     

资讯

吉非替尼对恶性间皮瘤无效，EGFR激酶结构域的再突变与肺癌对吉非替尼或埃罗替尼的继发耐药有关，小细胞肺癌表达EGFR且其酪氨酸磷酸化可被吉非替尼抑制，中国大陆肺腺癌患者可能会从吉非替尼，急性肺损伤是吉非替尼的严重不良反应。     

吉非替尼联合5-氟尿嘧啶对肺癌细胞株A549的影响及机制研究

目的:研究吉非替尼联合5-氟尿嘧啶(5-Fu)对肺癌细胞株A549的影响及分子机制。方法:应用PCR扩增和基因测序明确A549细胞是否存在K-Ras基因突变。应用MTT法检测吉非替尼、5-氟尿嘧啶及吉非替尼联合5-氟尿嘧啶对肺癌细胞株A549细胞的增殖抑制,采用ChouTalalay方法判定2种药物的联合作用,计算CI指数。应用流式细胞术检测吉非替尼联合5-氟尿嘧啶对A549细胞凋亡的影响。应用流式细胞术检测吉非替尼对A549细胞细胞周期的影响。应用Western-blot方法检测吉非替尼联合5-氟尿嘧啶及对A549细胞EGFR/p-EGFR的影响。结果:A549细胞经基因测序验证为EGFR野生型,含有KRAS突变。吉非替尼和5-氟尿嘧啶联用作用A549细胞具有协同效应,CI值<1,随着药物浓度增高,CI值逐渐减小。联合吉非替尼和5-氟尿嘧啶使A549细胞凋亡率显著增高。吉非替尼作用后S期细胞比例显著增多。结论:吉非替尼联合5-氟尿嘧啶作用于肺癌细胞株A549具有协同作用,机制与凋亡增加,吉非替尼导致S期细胞比例增多和下调p-EGFR表达水平有关。     

长链非编码RNA BANCR与非小细胞肺癌EGFR⁃TKI耐药的相关性研究

目的：探讨长链非编码RNA BANCR与非小细胞肺癌表皮生长因子受体?酪氨酸激酶抑制剂（epidermal growth factor receptor?tyrosine kinase inhibitor,EGFR?TKI）耐药之间的相关性。方法：选择EGFR 19外显子缺失突变的细胞株PC9以及EGFR?TKI吉非替尼诱导的耐药细胞株PC9/GR进行研究。应用实时荧光定量PCR法（qRT?PCR）检测PC9/GR及PC9细胞中BANCR的表达差异。在PC9/GR细胞中过表达BANCR,应用CCK?8法检测细胞对吉非替尼药物敏感性,克隆形成试验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测上皮间质转化相关蛋白的表达。结果：①BANCR在PC9/GR细胞中显著低表达（P < 0.05）。②在PC9/GR细胞中过表达BANCR后,相对于对照组,吉非替尼对PC9/GR细胞的半数抑制浓度（half inhibition concentration,IC50）降低（P < 0.05）。过表达BANCR后PC9/GR细胞增殖能力减弱,经吉非替尼处理后细胞凋亡增多（P < 0.05）。③Western blot结果显示过表达BANCR的PC9/GR细胞E?钙黏蛋白（E?cadherin）表达水平明显升高,N?钙黏蛋白（N?cadherin）表达水平明显降低（P < 0.05）。结论：长链非编码RNA BANCR可诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖;过表达BANCR可以增加PC9/GR细胞对吉非替尼的敏感性,逆转其耐药性,其机制可能与调控上皮间质转化有关。     

CRISPR/Cas9介导TKI对非小细胞肺癌基因靶向吉非替尼耐药敏感性的影响及其机制

目的：探讨CRISPR/Cas9介导酪氨酸激酶抑制剂（TKI）对非小细胞肺癌基因靶向吉非替尼耐药敏感性的影响，并阐明其机制。方法：利用CRISPR/Cas9系统建立酪氨酸激酶（TKs）敲除A549细胞株，按照TKI表达情况分为A549、A549TKs^-/+和A549TKs^-/-细胞株。Western blotting法检测细胞株中P53、MDM2、Bcl-2和Bax蛋白表达水平，CCK-8法检测A549、A549TKs^-/+和A549TKs^-/-细胞活性，细胞划痕实验检测A549、A549TKs^-/+和A549TKs^-/-细胞株的细胞迁移情况，流式细胞术检测A549、A549TKs^-/+和A549TKs^-/-细胞凋亡率，克隆形成实验检测细胞集落形成情况。结果：CRISPR/Cas9系统成功建立了TKs敲出A549细胞株，A549、A549TKs^-/+和A549TKs^-/-细胞活性比较差异无统计学意义（P>0.05）；3种细胞凋亡率比较差异无统计学意义（P>0.05），细胞迁移情况变化不大。经6 mol·L^-1吉非替尼干预72 h后，与A549细胞株比较，A549TKs^-/+和A549TKs^-/-细胞株的细胞活性降低（P<0.05），细胞凋亡率升高（P<0.05），细胞划痕愈合率明显降低（P<0.05），细胞迁移能力明显减弱；与A549细胞株比较，A549TKs^-/+和A549TKs^-/-细胞株中P53和Bax蛋白表达水平降低（P<0.05），MDM2和Bcl-2蛋白表达水平明显升高（P<0.05），细胞集落生成率明显降低（P<0.05）。结论：采用吉非替尼对敲除A549细胞株进行干预可以降低细胞活性和迁移能力，升高细胞凋亡率和吉非替尼耐药的敏感性。     

吉非替尼联合用药对肺癌敏感A549、耐药A549/GR细胞株的实验研究

目的：研究吉非替尼联合用药对肺癌敏感A549、耐药A549/GR细胞株的影响。方法用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测和培养肺癌敏感A549和耐药A549/GR细胞株,待24 h、48 h、72 h后采用不同浓度的吉非替尼、奥曲肽、顺铂、5-FU进行单用和联用处理,流式细胞术检测细胞凋亡率,分析药物的增效效果。结果联合用药对肺癌敏感A549和耐药A549/GR细胞株可起到协同抑制作用,与单独用药组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。联合用药组的肺癌敏感 A549、耐药A549/GR 细胞株培育48 h 后的IC50=（5.3±0.5）、（5.4±0.8） mg/L,单药组IC50=（20.1±1.2）、（20.3±1.4） mg/L,差异有统计学意义（P＜0.05）。对照组、单药组、联合用药组诱导肺癌敏感A549和耐药A549/GR细胞株后凋亡率差异明显,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论吉非替尼联合用药对细胞的增生具有协同抑制作用,对其他肺癌的治疗也具有一定的效果。     

NF-κB亚单位p50/p65激活促进肺腺癌H1650细胞吉非替尼耐药

目的探究NF-κB经典通路激活与人肺腺癌H1650细胞吉非替尼耐药的内在联系。方法选择肺腺癌HCC827和H1650 亲代细胞株,吉非替尼连续处理60 d,检测细胞株生长情况和各细胞株595nm吸光度,确定各细胞株细胞存活率和H1650亲代 细胞被诱导成H1650耐药细胞株。Western blot检测各细胞株P-IκBα、NF-κB P-p50和P-p65表达量,Image J灰度仪计算出胞浆 和胞核P-p50和P-p65与内参蛋白灰度比值,比较吉非替尼和吉非替尼加吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）联合用药状态下,各 细胞株细胞存活率和P-IκB、P-p50和P-p65的表达。结果在无吉非替尼和吉非替尼加PDTC药物干预下,H1650耐药细胞PIκBα 表达增加,胞浆和胞核P-p50和P-p65表达,H1650耐药细胞株>H1650亲本细胞株>吉非替尼敏感HCC827细胞株（P<0.05, P<0.01）;单独使用吉非替尼干预,H1650 耐药细胞株细胞抑制率较H1650 亲本细胞株和HCC827 细胞株降低（P<0.05,P< 0.01）,H1650耐药细胞株P-p50和P-p65表达较其他两类细胞株升高（P<0.05）;与无吉非替尼干预比较,H1650亲代和耐药细胞 P-p50和P-p65均有显著降低（P<0.05,P<0.01）;吉非替尼联合PDTC干预,显示H1650亲代和耐药细胞存活率、胞浆和胞核Pp50 和P-p65表达均较吉非替尼组降低（P<0.01,P<0.01）。结论NF-κB经典传导通路激活是H1650亲代细胞残存和转化为吉 非替尼耐药细胞的主要因素之一,吉非替尼联合PDTC用药可抑制P-IκBα生成和P-p50、P-p65的激活,从而降低H1650残存细 胞生存率和耐药细胞的产生。     

耐培美曲塞人肺癌细胞系的建立

目的培美曲塞是新一代的抗肿瘤药物,但其在肺癌治疗中的耐药现象日益明显,建立耐培美曲塞人肺腺癌细胞株A549/Pemetrexed有利于对培美曲塞耐药的深入研究。方法以人肺腺癌细胞株A549为亲代细胞,采用"血浆峰浓度冲击与逐步增加剂量相结合诱导"法,用培美曲塞进行诱导,建立耐培美曲塞细胞株A549/Pemetrexed,测定其生长曲线、倍增时间和克隆增长率,并与A549相比较。结果 A549/Pemetrexed对培美曲塞的耐药指数为(14.81±1.47),并对吉西他滨、5氟脲嘧啶、顺铂、卡铂耐药,耐药指数分别为(9.20±2.65)、(12.2±1.79)、(5.79±0.68)、(7.98±1.02);对紫杉醇、多西他赛敏感,耐药指数分别为(1.44±0.34)、(1.04±0.21);增殖速度与A549接近,分别为(63.03±0.98)h和(62.63±1.23)h。结论本研究建立的A549/Pemetrexed细胞株生长稳定,可用于下游的实验研究。     

无血清培养联合多柔比星诱导A549细胞耐药

目的： 探索快速建立肺癌耐药细胞模型的新方法,并探讨肺癌耐药和干细胞的相关性。方法： 应用无血清培养联合药物筛选法建立肺腺癌细胞耐药株A549/ADM;MTT法检测其对多种常用化疗药物的耐药程度;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡、ABCB1和ABCG2的表达水平及细胞内多柔比星的浓度;细胞免疫荧光及流式细胞仪通过特异性表面抗原标记法（CD133）检测肿瘤干细胞含量。裸鼠皮下种植瘤试验评估A549/ADM的致瘤性。结果： A549细胞经无血清培养可见细胞球形成;A549/ADM细胞对多柔比星、长春新碱、紫杉醇均产生了耐药,其耐药指数分别为A549的13.167,12.86,3.4倍;与亲代A549相比, 耐药株A549/ADM S期细胞比例由(45.76±1.41)% 降低至(23.33±1.32)%,细胞凋亡百分率由(58.23±0.82)% 减少至(16.49±0.77)%;耐药株A549/ADM中ABCB1和ABCG2的表达水平明显增高(P<0.05),且细胞内多柔比星浓度明显低于A549细胞; CD133细胞在A549/ADM和A549中的比例分别为(6.2±0.7)％和(1.9±0.2)％(P<0.05),免疫荧光检测A549/ADM细胞CD133表达水平较A549细胞高;A549/ADM具有高致瘤性。结论： 无血清培养联合多柔比星诱导能高效富集肺癌干细胞,成功建立了人肺腺癌A549/ADM多药耐药细胞模型。     

人肺腺癌亲代与耐顺铂细胞系耐药与凋亡相关基因表达差异及其相关性

目的 探讨人肺腺癌亲代与耐顺铂细胞系A549和A549^DDP耐药及凋亡相关基因表达的差异，以及多药耐药的发病机制。方法 采用逆转录-PCR及免疫细胞化学方法检测A549和A549^DDP细胞多药耐药相关蛋白(MRP)、肺耐药蛋白(LRP)、bcl-2及C-erbB-2的表达水平。结果 逆转录-PCR结果显示：A549细胞表达MRP、bcl-2及C-erbB-2mRNA，无LRP mRNA表达，A549^DDP细胞亦表达MRP、bcl-2及C-erbB-2mRNA，且表达LRP mRNA，耐药细胞MRP及C-erbB-2mRNA表达水平较亲代显增高，bcl-2mRNA表达水平与亲代无显性差异(P=0．731)；A549^DDP细胞血管生成因子及耐药相关基因mRNA表达水平较A549细胞显增高，差异有显性(P=0．007)。免疫细胞化学结果显示：亲代和耐药细胞bcl-2蛋白表达呈强阳性，亲代C-erbB-2及LRP呈阴性，MRP轻度阳性，耐药细胞MRP蛋白呈中度阳性，C-erbB-2及LRP轻度阳性。结论 A549细胞的原发耐药与耐药及凋亡相关基因MRP、C-erbB-2和Bcl-2的异常表达和协同作用有关。A549^DDP细胞MRP和C-erbB-2的表达增强，且表达LRP，可能是继发耐药的产生机制。     

耐药肺腺癌细胞株A549/CDDP生物学特性及染色体核型分析

目的 建立氯氨顺铂诱导肺腺癌耐药细胞株A549／CDDP。分析A549／CDDP生物学特性及染色体核型，为肺腺癌的治疗提供实验依据。方法 采用氯氨顺铂（Cis—diaminodichloroplatin，CDDP）大剂量冲击加逐步诱导法建立肺腺癌耐药细胞株A549／CDDP，MTT法检测细胞耐药指数．生物发光法测定细胞能量代谢，流式细胞仪测试细胞周期，染色体G显带技术和光谱核型分析（spectral karyotyping，SKY）技术分析染色体变化。结果 MTT检测结果表明。A549／CDDP对7种不同的化疗药物表现了不同的耐药性，其ATP、ADP、AMP含量显著降低，细胞周期无明显变化。G显带结果表明A549／CDDP染色体为亚三倍体，SKY分析出现数条衍生染色体。结论 CDDP可以成功诱导肺腺癌耐药细胞株A549／CDDP，A549／CDDP衍生染色体可能与肺腺癌耐药有关。     

CA916798基因通过PI3K/AKT/mTOR通路参与顺铂耐药的机制分析

摘要：目的观察阻断PI3K/AKT/mTOR通路对人肺腺癌细胞A549 及多药耐药人肺腺癌细胞A549/CDDP内CA916798 基因
mRNA表达的影响。方法以雷帕霉素、LY294002分别作用于人肺腺癌细胞A549和多药耐药人肺腺癌细胞A549/CDDP,检测
顺铂作用后细胞生长及增殖情况,RT-PCR 检测CA916798 基因mRNA表达水平。结果以雷帕霉素和LY294002 分别阻断
A549、A549/CDDP细胞的PI3K/AKT/mTOR通路后,细胞对于顺铂的耐药性均显著下降（P<0.05）,CA916798基因的表达均显
著下调（P<0.05）。结论CA916798基因位于PI3K/AKT/mTOR通路下游,可能是CA916798诱导肺癌顺铂耐药的机制之一。
     

EXPRESSION DIFFERENCES OF VASCULAR GROWTH FACTORS IN HUMAN LUNG ADENOCARCINOMA CELL LINE A549 AND CISPLATIN-RESISTANT HUMAN LUNG ADENOCARCINOMA CELL LINE A_(549)~(DDP)

Objective To elucidate the expression differences of vascular growth factors in human lungadenocarcinoma cell line A549 and cisplatin-resistant human lung adenocarcinoma cell line A549DDP . Methods RT-PCR and immunohistochemistry was used to detect the mRNA and protein expressions of vascular endothelial growth factor ( VEGF) and basic fibroblast growth factor ( bFGF) in A549 and A549DDP . Results VEGF and bFGF mRNA were expressed in A549 and in A549DDP VEGF and bFGF mRNA expression levels in A549DDP were significant higher than those in A549 (P< 0 .025 ). VEGF and bFGF protein expressions were all strong positive in A549 and A549DDP. Conclusion There are certain differences between VEGF and bFGF expressions in A549 and A549DDP . Drug-resistance of lung cancer is associated with those above genes over-expressions. Over-expression of vascular growth factors are related to drug resistance of lung cancer.     

海嘧啶对肺腺癌多药耐药细胞A549/T及其亲代细胞的作用观察和机制的初步研究

目的:探讨海嘧啶对肺腺癌多药耐药细胞A549/T及其亲代细胞的生长抑制作用及其抗肿瘤作用机制。方法:应用(mincroculturetetrazolium assay,MTT)比色法和光镜观察等方法,观察A549/T及其亲代细胞在海嘧啶作用后,细胞生长曲线、生长抑制率及形态学等方面的变化。结果:MTT比色结果表明,海嘧啶对A549/T细胞及其亲代细胞具有明显的生长抑制作用,并且在10~100μg/ml剂量范围内存在剂量及时间依赖关系。A549/T细胞在海嘧啶作用12~24 h较亲代细胞敏感(P<0.01),在48 h开始表现出其药物耐受性(P<0.01),在72 h则与亲代细胞间无显著性差异(P>0.05);光镜观察结果发现,A549/T细胞及其亲代细胞的胞质内空泡均明显增多,出现细胞核固缩,或碎裂形成大小不等的核碎片,最后可见细胞死亡后的残骸。结论:海嘧啶对肺腺癌多药物耐药细胞及其亲代细胞均具有明显的生长抑制作用,并可能通过透导肿瘤细胞坏死,从而发挥其细胞毒作用。     

氯氨顺铂诱导耐药后肺腺癌细胞株生物学特性及染色体核型分析

目的建立肺腺癌氯氨顺铂诱导耐药细胞株,分析耐药细胞株生物学特性及染色体核型,为肺腺癌的治疗提供实验依据.方法采用氯氨顺铂(cis-diaminodichloroplatin, CDDP)大剂量冲击 逐步诱导法建立肺腺癌耐药细胞株A549/CDDP和SPC-A-1/CDDP,MTT法检测细胞耐药指数,生物发光法测定细胞能量代谢,流式细胞仪测试细胞周期,染色体G显带技术和光谱核型分析(spectral karyotyping, SKY)技术分析染色体变化. 结果 MTT检测结果显示,A549/CDDP和SPC-A-1/CDDP耐药指数为 14.0 和 12.0,其ATP、ADP、AMP含量较A549和SPC-A-1显著降低,细胞周期无明显变化.G显带结果表明A549/CDDP和SPC-A-1/CDDP染色体均为亚三倍体,SKY分析见两株耐药细胞均出现数条衍生染色体.结论 CDDP可以成功诱导肺腺癌耐药细胞株,衍生染色体,包括der(21)t(21;22)等可能与肺腺癌耐药有关.     

CIK逆转耐顺铂人肺腺癌细胞对顺铂耐药与ERCC1的相关性

目的观察脐血来源的CIK细胞对A549/DDP细胞的耐药逆转作用。并探讨CIK逆转耐药机制是否与核苷酸切除修复交叉互补基因1（excision repair cross complementation group 1,ERCC1）的表达存在相关性。方法采集脐血单个核细胞经细胞因子体外诱导获得CIK细胞（cytokine induced killer cells,CIK）,MTT法检测顺铂（cisplatin,DDP）对A549细胞和A549/DDP细胞的体外杀伤作用,以及CIK细胞与A549/DDP细胞共培养前后对DDP敏感性的变化。Real-time RT-PCR法检测A549细胞、A549/DDP细胞以及CIK干预后的A549/DDP细胞中ERCC1 mRNA的表达情况。Western blot法检测A549细胞、A549/DDP细胞以及CIK干预后的A549/DDP细胞中ERCC1蛋白的表达情况。结果 A549/DDP细胞对DDP耐药,耐药指数为2.391。CIK细胞能逆转A549/DDP细胞对DDP的耐药性,逆转倍数为3.967。Real-time RT-PCR、Western blot测得A549/DDP细胞中ERCC1 mRNA和蛋白表达量比A549细胞高（P〈0.05）,CIK细胞共培养前后A549/DDP细胞中ERCC1 mRNA和蛋白表达量无明显变化。结论 CIK细胞能逆转A549/DDP细胞对DDP的耐药性,其逆转耐药的机制与ERCC1的表达无明显相关性。