慢病毒介导的RSK4对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响

目的:观察转染核糖体S6蛋白激酶4(RSK4)慢病毒表达载体对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖能力的影响.方法:构建特异性的RSK4慢病毒表达载体LV-RPS6KA6,稳定转染至乳腺癌MDA-MB-231细胞中,使用荧光定量PCR和蛋白印迹检测RSK4 mRNA和蛋白的表达情况.用Cell Counting Kit-8实验检测转染后细胞的生长增殖情况.结果:稳定转染LV-RPS6KA6至乳腺癌MDA-MB-231细胞后,RSK4 mRNA和蛋白的表达均明显上调(均P=0.000).过表达RSK4的MDA-MB-231细胞生长被明显抑制,转染24,48,72,96 h后,其生长抑制率分别为(10.5±1.8)%、(17.7±2.5)%、(27.1±3.7)%和(13.8±2.1)%.结论:稳定转染RSK4慢病毒表达载体可明显上调RSK4 mRNA和蛋白表达,抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖.     

细胞外信号调节激酶对肝纤维化逆转的影响及其机制

目的:探讨细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated protein kinase, ERK)活化对肝纤维化自发逆转的影响及其作用机制.方法:CCl4注射SD大鼠8周,随后停药6周,建立肝纤维化自发逆转的动物模型.采用Northern杂交、免疫组化染色等检测ERK在纤维化消退过程中的活化状况、表达时序及在肝组织中的定位,并以cDNA微阵列杂交、RT-PCR等检测多种ERK底物在RNA、蛋白质水平的表达变化.结果:肝纤维化自发逆转过程中ERK表达水平显著提高,且由肝星状细胞( HSC)核表达为主转变为肝细胞胞质表达为主,多定位于小叶内、窦周间隙及纤维条索周围.核糖体S6蛋白激酶(RSK1)、c-fos、磷脂酶A2(PLA2)、离子通道及水通道、胃肠激素受体等ERK的下游基因转录也明显上调.结论:ERK与肝纤维化的自发逆转密切相关,可能通过多途径发挥保护肝细胞功能、促进肝细胞增殖、加速HSC凋亡等作用.     

SSTF对大鼠纤维化肝脏转化生长因子β1的影响

目的:研究黄芩茎叶总黄酮(SSTF)对大鼠纤维化肝脏转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响.方法:30只大鼠随机分为正常组、模型组、SSTF保护组,采用CCL4皮下注射制备大鼠慢性肝纤维化模型,SSTF保护组大鼠在造模的同时给予SSTF灌胃.检测各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性和肝组织羟脯氨酸(Hyp)的含量,免疫组化法检测肝组织TGF-β1的表达,HE染色和Van-Gieson染色观察肝组织病理形态学的改变.结果:SSTF保护组肝纤维化程度显著低于模型组,血清ALT活性和肝组织Hyp含量明显减少(P<0.01);肝纤维化模型大鼠肝组织中TGF-β1呈强阳性表达,给予SSTF后肝组织中TGF-β1的表达明显降低.结论:SSTF能有效减轻大鼠肝脏损伤和肝纤维化的形成,其机理可能是通过抑制TGF-β1在肝内的表达,从而抑制了细胞外基质在肝脏的分泌和沉积,达到抗肝纤维化作用.     

肝纤维化逆转中MAPK/ERK信号转导通路的活化及其特征

目的探讨有丝分裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）／细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated protein kinase，ERK）信号转导通路与肝纤维化自发逆转的相关性。方法采用CC14注射SD大鼠8周，随后停药6周建立肝纤维化自发逆转的动物模型。采用cDNA微阵列杂交检测纤维化消退期间MAPK／ERK级联反应中有丝分裂原活化的蛋白激酶激酶激酶（mitogen-activated protein kinase kinase kinase，MAPKKK）、MAPKK、MAPK等上下游激酶的表达变化。并通过Northern杂交加以验证。结果肝纤维化自发逆转过程中，H—raf、A—raf．MAPKK2、ERK1及核糖体S6蛋白激酶（S6 protein kinase，RSK1）等MAPK／ERK信号转导通路中的关键激酶表达水平均显著提高，并呈现顺序激活的时序关系，ras抑制物的转录则明显下调。结论MAPK／ERK信号通路在肝纤维化消退时明显活化，可能与纤维化的自发逆转密切相关。     

纤溶酶原激活物抑制剂-1在大鼠肝纤维化模型及自发逆转肝组织中的动态变化及意义

目的 :探讨纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)在肝纤维化发生、发展及消退过程中的表达变化及意义。方法:采用皮下注射四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)方法制备大鼠肝纤维化模型,在注射及停止注射后不同时间,取组织标本,HE和Van Gieson氏(简称VG)染色。明确纤维化分期后,利用免疫组化及RT-PCR方法,观察PAI-1在肝纤维化进程及逆转中表达变化情况。结果:在正常大鼠肝脏中,PAI-1仅在汇管区细胞浆有少量表达;在纤维化肝脏,PAI-1主要分布于肝血窦壁及细胞浆。随着纤维化的进展,PAI-1表达量进行性增加(正常对照组为0.142±0.030,模型组注射CCl42、6和8周组分别为0.361±0.048、0.757±0.068和0.838±0.048);肝纤维化自然消退过程中又逐渐减弱(自发逆转2、4和6周组分别为0.613±0.054、0.524±0.060和0.210±0.044)。RT-PCR检测,模型组注射CCl42、6和8周后,PAI-1 m RNA在肝脏组织中的表达分别是正常肝组织的(6.83±2.60)倍、(12.43±2.65)倍和(26.32±5.17)倍,停止注射CCl4后,在自发逆转2、4和6周时,PAI-1 m RNA在肝脏组织中的表达只是正常肝组织中的(17.86±4.60)倍、(14.62±5.99)倍和(11.21±1.98)倍。结论:PAI-1在肝纤维化进程中持续上调,在肝纤维化逆转过程中表达下调,可能在肝纤维化发生发展中起重要作用。     

免疫性肝纤维化大鼠肝组织G蛋白偶联受体激酶2的表达

目的 探讨G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)在猪血清诱导的免疫性肝纤维化模型中表达的变化及其意义.方法 Wistar大鼠腹腔注射猪血清建立免疫性肝纤维化模型,在造模的第0、3、6、9、12、16周不同时间点采用Masson染色对肝脏组织作病理检查;免疫组化染色法、蛋白免疫印迹法检测肝脏中GRK2表达水平的变化.结果 大鼠腹腔注射猪血清在16周时可以成功建立免疫性肝纤维化模型.与正常大鼠相比,免疫性肝纤维化大鼠肝脏中GRK2的表达量随造模时间的延长而明显降低.结论 免疫性肝纤维化大鼠肝脏中GRK2表达水平下调,提示GRK2可能在免疫性肝纤维化过程中发挥重要作用.     

轻中度肝纤维化大鼠肝脏3.0TMR表观扩散系数与基质金属蛋白酶-1表达的相关性研究

目的　探讨轻中度肝纤维化大鼠肝脏表观扩散系数(apparent diffusion coefficient,ADC)与基质金属蛋白酶-1(matrixmetalloproteinase-1,MMP-1) 表达的相关性。方法　采用猪血清腹腔注射建立肝纤维化大鼠模型。采用完全随机设计、随机数字表抽样法,于造模第5周开始,第5-12周每周随机抽取实验组大鼠4只,对照组大鼠1只行DWI检查,共32只实验组大鼠及8只对照组大鼠行3.0 T MR DWI检查,b值选取800s/mm_²,计算ADC值。MR检查后处死大鼠灌注固定,行HE、Masson三色染色、网状纤维染色,RT-PCR检测MMP-1 mRNA表达。统计学采用单因素方差分析、SNK法多重比较以及Pearson相关分析。结果 32只模型组大鼠中,其中纳入实验组轻度肝纤维化(S1期)11只、中度肝纤维化(S2期7只、S3期8只)15只;其余肝纤维化S0期3只、S4期1只,图像不符合分析要求2只。对照组、轻、中度肝纤维化组大鼠肝脏ADC值及MMP-1 mRNA表达差异有统计学意义(F值分别为38.66和41.72,P值均＜0.05),对照组与轻度肝纤维化组ADC值及MMP-1 mRNA表达无统计学差异(P值＞0.05),中度肝纤维化组与对照组及轻度肝纤维化组比较均有统计学差异(P值＜0.05)。秩相关分析显示ADC值与MMP-1 mRNA表达呈正相关(r=0.64,P<0.05)。结论 随着肝纤维化进程大鼠肝脏ADC值及MMP-1 mRNA表达均逐渐减低,二者呈正相关。     

肝纤维化病理过程中肝组织蛋白酪氨酸磷酸酶SHP1的动态表达

目的:探讨肝纤维化病理过程中肝组织蛋白酪氨酸磷酸酶SHP1的动态表达.方法:50只SD大鼠随机分为对照组(n=10)和模型组(n=40),大鼠肝纤维化模型采用腹腔注射四氯化碳法构建,Masson三色及HE染色测定大鼠肝脏组织的病理学改变,Western blot、免疫组织化学染色和Real-time PCR测定大鼠肝组...     

大鼠肝纤维化过程中miR-141表达的变化

目的:探讨微小RNA-200家族成员中微小RNA-141(miR-141)在大鼠肝纤维化过程的表达变化及其作用。方法:雄性Wistar大鼠32只,随机分为正常对照组及肝纤维化组。皮下注射60%CCl4制备肝纤维化模型,分别在造模4周、8周末处死大鼠,测定肝脏指数、血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的含量并观察肝组织结构改变。实时荧光定量PCR方法测定各组大鼠肝组织中miR-141的表达水平。结果:造模不同时间肝纤维化组大鼠肝脏指数、血清ALT和AST活性均显著高于相应正常对照组(P<0.01)。病理学观察发现造模4周大鼠肝脏纤维结缔组织明显增多,且随时间增长纤维化病变逐步加重,在肝纤维化8周组大鼠肝脏中有明显假小叶形成。Real time-PCR结果显示,大鼠肝脏miR-141水平肝纤维化4周组较相应对照组明显降低(P<0.01),肝纤维化8周组明显高于相应正常对照组(P<0.01)及肝纤维化4周组(P<0.01)。结论:研究表明CCl4诱导大鼠肝脏miR-141的表达水平有明显的改变,提示肝脏miR-141可能通过某种机制参与了大鼠肝纤维化的发生发展。     

反义TβRI对实验性大鼠肝纤维化的影响

目的:观察反义转化生长因子βⅠ型受体真核表达质粒对实验性大鼠肝纤维化的影响.方法:构建大鼠反义真核细胞表达质粒,导入大鼠肝纤维化模型体内,通过Ⅰ型胶原的免疫组化以及VG染色观察两种反义质粒联合作用对大鼠肝纤维化的影响.结果:反义TβRI表达质粒可减少受损肝脏中Ⅰ型胶原的沉积(P＜0.05),并可使受损肝脏的病理形态有一定改善(P＜0.05).结论:反义TβRI真核表达质粒对肝纤维化的发展有一定的干预作用.     

小分子激酶抑制剂在肝纤维化治疗中的应用

激酶活性异常或过度表达与包括肝纤维化在内的多种疾病的发生密切相关,已成为治疗这些疾病的重要药物靶点。蛋白激酶中的酪氨酸激酶和丝/苏氨酸以及脂类激酶中的磷脂酰肌醇-3激酶等能够通过调节肝星状细胞的活性及肝内血管生成等直接或间接机制参与肝纤维化的发生和发展。近期研究表明,小分子激酶抑制剂能够通过靶向激酶抑制细胞增殖以及血管生成从而发挥抗肝纤维化作用,有望为肝纤维化治疗提供一种新的治疗手段。本文对酪氨酸激酶、丝/苏氨酸激酶和磷脂酰肌醇-3激酶在肝纤维化中的作用和其参与调节肝纤维化发生发展的细胞信号通路,以及小分子激酶抑制剂在肝纤维化临床前动物模型和临床试验中的最新研究进展进行综述,为肝纤维化的治疗研究提供新的策略。     

细胞外信号调节激酶在人纤维化肝组织中的表达

目的:研究细胞外信号调节激酶(ERK)在人纤维化肝组织中的表达及其与肝纤维化发生的相关性。方法:收集肝手术标本(纤维化肝组织和远癌的纤维化肝组织,以正常的肝组织做对照),以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测正常肝和不同程度纤维化肝组织中ERK的表达情况,对结果进行统计分析。结果:人肝纤维化的发生发展过程中,ERK的表达增加。结论:ERK参与并介导其中的RAS/RAF/MEK/ERK信号通路,可能与肝纤维化的发生密切相关。     

锌指结构9、结缔组织生长因子在大鼠肝星状细胞中的表达

目的:通过研究肝纤维化大鼠原代肝星状细胞锌指结构9(ZF9)、结缔组织生长因子(CTGF)的表达及其动态变化,初步探讨CTGF、ZF9在肝星状细胞活化中的作用。方法:32只雄性SD大鼠皮下注射40%植物油CCl4,每周2次,并分别于注射1,4,8周后作大鼠肝原位灌注,分离肝星状细胞,Western blot法检测CTGF蛋白,RT-PCR检测ZF9 mRNA水平。结果:正常大鼠肝星状细胞ZF9基因可见弱表达,注射CCl41周后其表达增强,注射CCl44周后转录明显增强,8周时仍高表达。正常大鼠肝星状细胞CTGF蛋白无明显表达,模型组大鼠皮下注射CCl41周后,蛋白出现少量表达,注射CCl44周后,表达进一步增加,第8周CTGF蛋白表达更强。结论:ZF9、CT-GF基因随着肝损伤的加重,在肝星状细胞中的表达逐渐增加,共同促进肝纤维化的发生。     

红景天甙对肝纤维化大鼠Samds基因表达的影响

目的: 观察红景天甙对肝纤维化大鼠TGFβ-Smad通路的影响.方法: CCl4诱导大鼠肝纤维化,以红景天甙水溶液干预性治疗,Masson染色观察肝组织胶原沉积;ELISA法检测大鼠血清TGFβ1水平;原位杂交(in situ hybridization,ISH)和免疫组化(immunohistochemistry,IH)检测大鼠肝组织Smads表达情况.结果: 红景天甙干预性治疗使肝纤维化大鼠血清TGFβ1水平明显下降[(53.4±19.5) vs (88.7±22.8) mg/L, P<0.05],肝脏胶原占肝组织面积比例减少为(0.041±0.011)[模型组(0.167±0.052),P<0.05];治疗组肝脏Smad 4蛋白表达阳性率降低为(0.023±0.008)[模型组(0.137±0.090),P<0.01],Smad 4 mRNA阳性率降低为(0.233±0.018)[模型组(0.741±0.091),P<0.01];Smad 7蛋白阳性率增加为(0.067±0.010)[模型组(0.019±0.002),P<0.05],Smad 7 mRNA阳性率增加为(0.198±0.011)[模型组(0.074±0.012),P<0.01];肝组织Smads蛋白表达与Smads mRNA水平变化一致.结论: 红景天甙防治可显著降低肝纤维化大鼠血清TGFβ1水平,减少肝脏胶原沉积,抑制肝脏Smad 4表达及促进Smad 7 mRNA表达,从而减弱了由TGFβ1介导的肝纤维化信号,可能是其发挥抗肝纤维化作用的分子机制之一.     

半乳糖凝集素-3在大鼠肝纤维化组织中的表达及意义

目的研究半乳糖凝集素-3(galectin-3,Gal-3)、转化生长因子β1(transforming growth factor beta-1,TGF-β1)、a-平滑肌肌动蛋白(a-smooth muscle actin,a-SMA)在肝纤维化大鼠模型中的动态表达及意义。方法雄性SD大鼠随机分为健康对照组6只,肝纤维化模型组24只,采用二甲基亚硝胺(DMN)腹腔注射制备肝纤维化模型。分别在造模后2、4、6、8周门静脉采血检测血清ALT、AST、Alb,采用HE及Masson染色观察肝组织学变化,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同时间点肝脏galectin-3 mRNA的表达。结果正常肝组织中有galectin-3低表达,2周即升高,4周达高峰,6周下降,差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,galectin-3水平与TGF-β1、a-SMA呈正相关(r=0.882～0.963,P<0.01)。结论 Galectin-3可能与肝纤维化的发生发展过程密切相关。     

保肝宁对肝纤维化大鼠瘦素及瘦素受体的影响

目的 探讨保肝宁抗肝纤维化的作用机制.方法 采用复合因素建立肝纤维化大鼠模型,采用同位素放射免疫分析法检测血清瘦素水平.用免疫组化方法观察保肝宁对肝纤维化大鼠肝组织瘦素、瘦素受体表达的影响.结果 与正常组比较,模型组及各药物组血清瘦素水平均明显升高(P＜0.01).与模型组比较,保肝宁药物组血清瘦素水平明显下降,差异有显著性意义(P＜0.01),保肝宁明显抑制模型大鼠肝组织瘦素、瘦素受体的表达.与模型组比较,差异有显著性意义(P＜0.01).结论 保肝宁可有效防治大鼠肝纤维化,其作用机制可能与通过降低血清瘦素水平,抑制模型大鼠肝组织瘦素、瘦素受体的表达密切相关.