TiC/Ti复合泡沫材料对细胞增殖和分化的影响

目的评价TiC/Ti复合泡沫材料(TiC/Ti)、表面氧化处理的TiC/Ti复合泡沫材料(TiO2/TiC/Ti)及表面ZSM-5分子筛修饰的TiC/Ti复合泡沫材料(ZSM-5/TiC/Ti)对细胞增殖和分化的影响。方法在3种实验材料浸提液、阴性对照组泡沫碳化硅(SiC)浸提液和阳性对照组含0.64%苯酚的培养液中培养小鼠成纤维细胞L929,采用噻唑蓝(MTT)比色法比较材料浸提液中L929的细胞量。应用扫描电镜,以SiC为对照,观察小鼠成骨细胞MC3T3在3种实验材料上的生长状况,并在1、3、5 d分析比较各组材料上MC3T3细胞的碱性磷酸酶(ALP)含量。结果随着时间延长,3种材料浸提液中L929的细胞量均增殖,且L929细胞含量TiC/Ti>TiO2/TiC/T(i P<0.05)、TiO2/TiC/Ti>SiC(P<0.05)、SiC>ZSM-5/TiC/T(i P<0.05)。扫描电镜下,MC3T3细胞在3种实验材料表面均能贴壁黏附,形态正常,随着时间延长,数量增多,基质分泌增加。与对照组SiC比较,MC3T3细胞ALP的含量TiC/Ti>SiC(P<0.05)、SiC>ZSM-5/TiC/Ti(P<0.05)、TiO2/TiC/Ti稍高于SiC,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 3种实验材料均能促进细胞增殖和分化,与对照组SiC比较,促进细胞增殖的能力依次为TiO2/TiC/Ti>TiC/Ti>SiC>ZSM-5/TiC/Ti,而促进细胞分化的能力依次为TiC/Ti>TiO2/TiC/Ti>SiC>ZSM-5/TiC/Ti。     

转染人GL50基因细胞株的建立及其对T细胞体外增殖与活化的促进作用

目的：建立稳定表达人协同刺激分子GL50的转基因细胞,探讨其体外对T细胞活化与增殖的协同刺激效应。方法：RT-PCR法从人B淋巴瘤Daudi细胞中克隆人GL50编码区全长基因,经EcoR I和BamH I双酶切后插入pIRES2-EGFP真核表达载体,构建pIRES2-EGFP-GL50重组子。用脂质体法转染小鼠成纤维L929细胞株,经G418长期加压筛选,免疫荧光标记和流式细胞术分析GL50分子在L929/GL50细胞膜上的表达,CCK-8法和酶联免疫吸附测定法（ELISA）分析L929/GL50转基因细胞对T淋巴细胞体外增殖与活化的影响。结果：成功建立稳定表达GL50分子的L929/GL50转基因细胞。该转基因细胞在体外能显著地促进T细胞增殖;促进T细胞的活化及其对IL-4、IL-10和IL-17等细胞因子的分泌。结论：ICOS/GL50信号在机体免疫应答过程中发挥了重要作用,GL50转基因细胞的成功构建为进一步研究ICOS/GL50分子的生物学功能奠定了物质基础。     

人4-1BBL转基因细胞株的构建及其生物学功能的研究

目的为探讨人4-1BBL分子的生物学功能，构建人4-1BBI。转基因细胞株。方法利用RT-PCR方法克隆人4-1BBI。全长基因，继而重组入逆转录病毒表达载体pEGZ．Term。重组逆转录病毒载体pEGZ．Term／4-1BBI。与两个辅助病毒载体用脂质体法共转染包装细胞293T，用含有完整重组逆转录病毒颗粒的293T细胞培养上清感染L929细胞，筛选获得Zeocin抗性的转基因细胞。^3H-TdR掺入实验分析4-1BBL转基因细胞对T细胞增殖的影响，ELISA法分析细胞因子的分泌。结果流式细胞仪表型分析结果表明，L929／4．1BBL转基因细胞稳定表达人4-1BBL分子。体外实验表明，L929／4-1BBL细胞能够促进T细胞活化、增殖及IL-2、IL-6和IFN-γ的分泌。结论该研究成功克隆了人4-1BBL基因，构建了能稳定表达4-1BBL分子的转基因细胞株L929／4-1BBL，该株转基因细胞能提供有效的4-1BBL共刺激信号，促进T细胞活化、增殖及细胞因子的分泌。     

胶体金对MC3T3-E1增殖、分化及RUNX2基因表达的影响

目的研究30nm胶体金对小鼠成骨细胞系MC3T3-E1增殖、分化及成骨相关基因RUNX2表达的影响。方法体外培养小鼠成骨细胞MC3T3-E1,在仪-MEM培养液中加入不同体积的胶体金处理细胞,利用M1Tr法检测胶体金对成骨细胞增殖活性的影响,碱性磷酸酶活性测定及RT—PCR法分别检测其对成骨细胞分化及成骨相关基因RUNX2表达的影响。结果浓度为10^（-10）、10^（-11）、10^（-12）mg／L的胶体金均促进成骨细胞的增殖,且ALP相对活性及RUNX2基因表达也均高于阳性对照组。结论30nm胶体金能促进小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1增殖、分化及成骨相关基因RUNX2的表达,进而促进成骨。     

木犀草素对小鼠体外培养前成骨细胞MC3 T3-E1增殖、分化、矿化和Wnt通路的影响

目的:探讨木犀草素对小鼠体外培养前成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化及Wnt通路的影响.方法:在体外培养的MC3T3-E1s培养基中加入木犀草素0.25~8.00μmol/L培养12、24和48 h,以洛伐他汀0.04μmol/L作为阳性对照,采用细胞计数试剂盒法检测细胞增殖情况;用碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测细胞内ALP的活性;茜素红S染色法检测细胞矿化能力;采用实时荧光定量反转录PCR法检测细胞Ⅰ型胶原、骨钙素、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(Lrp5)、β-连环素、护骨素/细胞核因子κB受体活化因子配体mRNA表达水平.结果:木犀草素可以剂量依赖性和时间依赖性地促进成骨细胞MC3T3-E1增殖(P<0.05~P<0.01);木犀草素(2.00、4.00和8.00μmol/L)可以剂量依赖性地促进MC3T3-E1成骨细胞ALP活性,增强MC3T3-E1成骨细胞矿化能力并上调MC3T3-E1成骨细胞中Ⅰ型胶原、骨钙素、Lrp5、β-连环素和护骨素/细胞核因子κB受体活化因子配体mRNA表达.结论:木犀草素2.00、4.00和8.00μmol/L可以促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化与矿化及Wnt通路中Lrp5和β-连环素mRNA的表达.     

聚醚醚酮/碳纳米管/生物活性玻璃复合材料的成骨细胞相容性研究

目的:探讨新型聚醚醚酮/碳纳米管/生物活性玻璃(PEEK/CNTs/BGs)复合材料的体外成骨细胞相容性。方法:体外培养小鼠成骨细胞MC3T3-E1,通过噻唑蓝法、吖啶橙荧光染色法研究PEEK/CNTs/BGs复合材料对成骨细胞增殖的影响。应用扫描电镜(SEM)观察MC3T3-E1细胞在PEEK/CNTs/BGs复合材料表面的黏附生长情况。结果:MC3T3-E1细胞在PEEK/CNTs/BGs复合材料表面的增殖能力较聚醚醚酮和聚醚醚酮/碳纳米管(PEEK/CNTs)复合材料强。SEM实验结果表明,PEEK/CNTs/BGs复合材料表面有利于MC3T3-E1细胞黏附、铺展和生长。结论:PEEK/CNTs/BGs复合材料具有良好的成骨细胞相容性,有望作为新型骨科材料。     

多聚赖氨酸与 EDTA 交联物对小鼠成纤维细胞的毒性研究

目的：观察多聚赖氨酸与乙二胺四乙酸（EDTA）的交联物（PLE）对体外培养的小鼠成纤维细胞L929的毒性程度。方法：小鼠成纤维细胞 L929分为正常组、对照组、多聚赖氨酸组、PLE 组和 EDTA 组,采用MTT 法比较相同浓度下,EDTA、多聚赖氨酸与 EDTA 交联物对小鼠成纤维细胞 L929相对增殖率的影响。结果：以正常组作为标准（100％）,多聚赖氨酸组、EDTA 组、PLE 组和对照组对小鼠成纤维细胞 L929的相对增殖度（RGR）分别为79．87％、69．35％、81．47％和20．12％,均较正常组下降,差异有统计学意义（P ＜0．05）;在质量浓度达为1000μmoL／L 时,EDTA 对小鼠成纤维细胞 L929的毒性为2级,PLE 和多聚赖氨酸对小鼠成纤维细胞L929的毒性为1级。结论：实验浓度的 PLE 和 EDTA 对小鼠成纤维细胞 L929毒性较低,具有一定的安全性。     

自制软组织皮瓣扩张器的有效性及生物相容性试验

采用溶血试验，细胞毒性试验和短期植入试验，对自制软组织皮瓣扩张器的有效性和生物相容性进行评价。结果表明：自制扩张器平均溶血率为1．42％，且对体外培养的L929细胞的生长，附着和增殖无明显抑制作用；将该扩张器短期植入兔背部皮下，动物未出现局部及全身毒性症状，生长发育未受到不良影响。     

玉米紫色植株色素对染氟MC3T3-E1成骨细胞增殖的影响

目的：观察不同浓度的玉米紫色植株色素（Maize Purple Plant Pigment,MPPP）对体外染氟的MC3T3-E1成骨细胞的增殖作用。方法：通过MTT法分别观察浓度范围均为10-10~10-2mol/L的MPPP和NaF对细胞增殖情况的影响,根据上述结果选择两者适宜浓度,再进行联合培养,最终观察MPPP对染氟的MC3T3-E1细胞增殖的影响。结果：氟对MC3T3-E1细胞增殖无促进作用,较高浓度的氟可抑制细胞增殖（P〈0.05）;培养48 h,终浓度为10-5mol/L的MPPP可促进染氟（10-3mol/L）MC3T3-E1细胞增殖（P〈0.05）。结论：MPPP可增强染氟MC3T3-E1细胞的增殖能力。     

骨碎补、续断、西洋参对成骨细胞MC3T3-E1细胞增殖的影响

骨碎补、续断是中医骨伤科中常用药物，具有促进骨折愈合、强骨补肾的功效，但其作用机制不明。西洋参为补气血常用药，对骨细胞增殖也有一定的促进作用，但对此研究较少。本文以小鼠成骨细胞MC3T3-E1为细胞模型，用体外实验方法，研究了骨碎补、续断、西洋参水提液对成骨细胞增殖的作用，同时了解骨碎补、续断联合用药对成骨细胞增殖的影响，报道如下。     

茶多酚对成纤维细胞L929中鸟氨酸脱羧酶的抑制作用

目的:探讨茶多酚对成纤维细胞L929的增殖抑制作用及其作用机制。方法:体外培养小鼠成纤维细胞L929,加入茶多酚、二氟甲基鸟氨酸(DFMO)作用于细胞。用MTT法观察茶多酚对细胞增殖抑制作用,利用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞技术检测细胞的调亡,RT鄄PCR技术检测鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因的表达。结果:20μmol/L的茶多酚即能明显抑制L929细胞的增殖,促进细胞的调亡,其半数有效浓度为200μmol/L。RT鄄PCR显示细胞中ODCmRNA表达明显下降(P<0.05)。200μmol/L的茶多酚的抑制效果与5mmol/L的DFMO的作用效果相似。二者共同作用于细胞时,对ODC的活性抑制作用更强,抑制效果更佳。结论:茶多酚能通过抑制细胞中ODC的表达来抑制细胞的增殖。     

基于虚拟筛选的丹参促成骨化合物筛选及活性验证

目的: 借助虚拟筛选技术对丹参促成骨化合物进行筛选并通过体外实验对其活性进行验证。方法: TCMSP数据库查询丹参的活性成分;通过Autodock vina进行分子对接,CCK-8实验考察对细胞的增殖作用,碱性磷酸酶（ALP）活性实验、DAPI-鬼笔环肽双染以及茜素红染色观察促成骨作用。结果: 根据分子对接及文献检索最终筛选得到丹参素、丹酚酸B、丹参酮ⅡA和隐丹参酮4种活性成分。CCK-8实验结果显示,丹酚酸B能够促进MC3T3 E1小鼠前成骨细胞的增殖。ALP活性实验发现,丹参素和丹酚酸B能显著增加MC3T3-E1细胞的ALP活性。DAPI-鬼笔环肽双染及茜素红染色实验进一步证明了丹酚酸B对MC3T3 E1细胞具有一定的促成骨作用。结论:通过分子对接技术筛选出来的丹酚酸B在经过活性验证后,证明其具有一定的促成骨作用。     

磷酸肌酸对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化及矿化的影响

目的 探讨磷酸肌酸(phosphocreatine,PCr)对体外培养的小鼠前成骨细胞MC3T3-E1的增殖、成骨分化及矿化的影响.方法 在体外培养的MC3T3-E1细胞中,分别加入含不同浓度(5,10,20 mmol·L-1)的PCr进行培养,并以不给予PCr药物处理的组为空白对照组.采用MTT法检测MC3T3-E1细胞的增殖情况;使用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性试剂盒检测MC3T3-E1细胞内ALP的活性;采用Western Blot法检测MC3T3-E1细胞内ALP、骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)的蛋白表达情况;利用茜素红染色法检测MC3T3-E1细胞形成矿化的能力.结果 PCr可以促进MC3T3-E1细胞的增殖且具时间依赖性,当处理12 h时,PCr对细胞无明显促增殖作用(P＞0.05);然而当处理48 h时,PCr(5,10,20mmol·L-1)对细胞的促增殖作用可分别达到137％、146％、153％.PCr(10,20 mmol·L-1)使MC3T3-E1细胞内ALP的活性分别增加到空白对照组的1.37和2.14倍(P ＜0.05,P＜0.01),并且显著上调ALP蛋白表达(P＜0.01,P＜0.01).PCr(5,10,20 mmol·L-1)还可明显上调MC3T3-E1细胞内BMP-2的蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01),并使MC3T3-E1细胞形成的矿化结节数增加(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001).结论 PCr可以促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化与矿化,具有促成骨作用.     

猪皮活性小肽对L929细胞增殖的研究

目的 通过大孔吸附树脂DA201-C对猪皮活性小肽溶液的精制分离,研究猪皮活性小肽不同洗脱部位对小鼠成纤维细胞(简称L929细胞)增殖作用的影响.方法 采用仿生酶解法得到猪皮活性小肽溶液;采用超滤法得到分子量<3KDa的猪皮活性小肽超滤液;以大孔吸附树脂DA201-C对猪皮活性小肽超滤液进行分离纯化;以体外培养L929细胞为研究对象,探究猪皮活性小肽不同洗脱部位对L929细胞增殖的作用,用MTT比色法检测细胞增殖活性.结果 猪皮活性小肽不同洗脱部位对L929细胞均具有极显著的增殖作用,其中水洗脱组的活性最强.结论 猪皮活性小肽对L929细胞具有显著的增殖作用,可作为活性原料在皮肤创伤等领域广泛应用.     

Plat铸造陶瓷的生物相容性试验

采用溶血试验、细胞毒性试验和急性短期口服毒性试验，对新型牙科材料ｐｌａｔ铸造陶瓷的生物相容性进行评价，结果表明：Ｐｌａｔ铸造陶瓷平均溶血率为３．９３％，按ＩＳＯ标准属于正常范围（＜５％）；Ｐｌａｔ铸造陶瓷对体外培养的Ｌ９２９细胞的生长、附着和增殖无明显抑制作用；将Ｐｌａｔ铸造陶瓷生理盐水悬浮液给小白鼠灌胃，动物未出现全身毒性症状，生长发育未受到不良影响。     

人工气管材料体外细胞毒性和生物相容性研究

目的 :对自行研制的人工气管材料进行体外细胞毒性和生物相容性研究 ,以便为该植入材料应用于临床提供实验依据。方法 :参照 ISO10 993- 1:1992医疗器械生物学评价标准和要求 ,对人工气管材料进行了体外细胞与材料共培养试验、细胞毒性试验、溶血试验、急性全身毒性试验、致敏和热源试验。 结果 :(1)人工气管材料表面的细胞黏附生长良好 ,该材料对体外培养的细胞形态不构成损害 ,对细胞的生长和增殖均无明显抑制作用 ,细胞增殖指数和增殖指数百分率与空白对照组比较无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ,而与阳性参照材料组比较差异具有显著性 (P<0 .0 1) ;(2 )溶血率均低于 5 %的国家标准 ,在体外不引起溶血反应 ;(3)该组分材料也无急性全身毒性反应、致敏和热源作用。结论 :该人工气管材料无细胞毒性和热源作用 ,不引起溶血反应和急性全身毒性反应 ,对细胞形态、生长和增殖不构成损害 ,具有良好的生物相容性。     

负载DMOG的光交联明胶水凝胶的骨组织工程研究

目的：探讨负载DMOG(Dimethyloxallyl Glycine)的光交联明胶(Gelatin Methacryloyl,GelMA)水凝胶的促成骨分化的作用以及对大鼠颅骨骨缺损修复的效果。方法：制备GelMA-DMOG水凝胶后,扫描电镜下观察其表面特征,体外检测其降解时间;将小鼠成骨前体细胞(MC3T3-E1)培养于GelMA和GelMA-DMOG水凝胶表面,荧光观察细胞骨架形态,CCK-8法检测其细胞毒性;成骨诱导后,ALP,茜素红染色和qRT-PCR检测其对MC3T3-E1细胞成骨向分化的影响;构建大鼠颅骨骨缺损模型,4周和8周后观察GelMA和GelMA-DMOG水凝胶对骨缺损修复的效果。结果：与GelMA水凝胶相比,GelMA-DMOG水凝胶孔径大小、分布及降解时间并没有明显差异;两组水凝胶对MC3T3-E1细胞增殖无明显影响;与培养在96孔板上的对照组相比,GelMA组略微促进MC3T3-E1细胞成骨向分化,而GelMA-DMOG组明显增强了细胞的成骨向分化和成骨相关基因Runx2、ALP和OCN的表达;大鼠颅骨骨缺损体内实验发现与GelMA组相比,GelMA-DMOG水凝胶处理组具有明显的促成骨成血管作用和较好的骨缺损修复效果。结论：GelMA-DMOG水凝胶相对于GelMA材料自身的理化性能没有改变,且体外和体内实验显示该材料对于骨缺损修复具有较好的促进作用,为骨组织工程治疗骨缺损的临床应用开辟了新途径。     

全反式维甲酸对小鼠黑色素瘤B16F10细胞生物学行为的影响

目的 探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对小鼠黑色素瘤B16F10细胞体外增殖、迁移、凋亡、致瘤性的影响及其初步作用机制.方法 采用MTT法检测ATRA对小鼠黑色素瘤细胞B16F10和小鼠成纤维细胞L929增殖能力的影响.显微镜下观察给药后两种细胞的形态变化,应用划痕实验和Transwell实验检测ATRA对B16F10细胞迁移能力的影响,分别采用DAPI染色和Annexin V-FITC/PI染色观察B16F10细胞凋亡情况,JC-1染色实验检测B16F10细胞线粒体膜电位,荧光分光光度计检测B16F10细胞中Caspase-9、Caspase-3的活化情况,利用体内成瘤实验观察ATRA对B16F10细胞致瘤性的影响.结果 MTT结果显示ATRA呈浓度依赖性地抑制B16F10细胞和L929细胞增殖,但B16F10细胞的存活率明显低于L929细胞的存活率(P＜0.05);分别以低、中、高3个浓度(6.25、16、40 μmol/L)的ATRA处理细胞24 h后,显微镜下可见B16F10细胞在中浓度时呈凋亡样改变,高浓度时细胞基本死亡,丧失正常形态;而L929细胞形态仅在高浓度时发生显著变化;划痕实验和Transwell实验提示B16F10细胞的体外迁移能力在中浓度即受到明显抑制(P＜0.05);继续以中浓度(16 μmol/L)的ATRA作用B16F10细胞24 h,DAPI染色可见细胞核裂解,甚至可见凋亡小体;AnnexinV-FITC/PI染色结合流式细胞仪测得细胞凋亡率为(37.27±4.42)％;JC-1染色实验提示线粒体膜电位明显降低;荧光分光光度计测得给药后Caspase-9、Caspase-3显著被活化,活性分别增加了(1.54±0.00)、(3.09 ±0.01)倍(P＜0.05);成瘤实验结果显示ATRA处理后的B16F10细胞致瘤性显著降低(P＜0.01),甚至消失.结论 ATRA能显著抑制B16F10细胞体外增殖、迁移能力,并能通过降低线粒体膜电位,活化Caspase-9、Caspase-3蛋白诱导细胞凋亡,进而抑制B16F10致瘤性.