大鼠心肌再灌注不同时相Fas表达和半胱胺酸蛋白酶-3活性变化规律

目的:探讨大鼠心肌缺血再灌注(ischemiareperfusion,IR)不同时相Fas表达、心肌细胞凋亡指数、天冬氨酸特异的半胱胺酸蛋白酶3(caspase-3)活性变化规律,探讨对其进行干预的可能性。方法:实验选用Wistar大鼠116只,随机设立IR组、治疗组和对照组并分设缺血30min后再灌注1,3,6,12及24h5个时相点。治疗组于再灌注开始时尾静脉注射caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO。分别检测Fas表达、心肌细胞凋亡指数、caspase-3活性和心肌梗死范围。结果:Fas表达、心肌细胞凋亡指数与caspase-3活性随心肌再灌注不同时相而变化,Fas表达于再灌注6h最高(1.72±0.16),心肌细胞凋亡指数与caspase-3活性犤(34.83±9.35)%,(22.34±4.50)nkat〗于再灌注12h最高,其后基本维持在平台状态;心肌梗死范围随IR时间逐渐增加,至24h仍未见下降趋势。治疗组上述指标虽也明显增高,除Fas表达外均比IR组明显减小(t=2.990～9.596,P<0.05～0.01)。结论:Fas表达增高激活caspase-3导致心肌细胞凋亡是心肌缺血再灌注损伤形成的机制之一,Ac-DEVD-CHO减轻再灌注损伤的机制可能是其抑制心肌细胞凋亡。     

胰岛素对缺血再灌注心肌超微结构和细胞凋亡的影响

目的：探讨极化液(胰岛素)对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法：选择健康雄性家兔48只，按随机抽签法分为3组：对照组，胰岛素组，葡萄糖-钾-胰岛素(gluecose-insulin-potassmm，GIK)组，每组16只。制备兔心肌缺血再灌注损伤模型，分别用GIK、胰岛素、生理盐水干预分组。再灌注结束后检测心肌梗死面积，在电镜下观察心肌细胞的超微结构，原位末端标记(TUNEL)法测定凋亡心肌细胞，免疫组化SP法测定原癌基因蛋白(Bcl-2)，Fas的含量。结果：与对照组比较，GIK及胰岛素组家兔心肌细胞超微结构表现为损伤减轻，心肌梗死面积明显减少[GIK组(38.9&;#177;4．33)％，胰岛素组(40．8&;#177;5．22)％，对照组(54．42&;#177;4．27)％](q=4．32，3．95．P&;lt;0.05)，凋亡指数[GIK组(1．38&;#177;0，82)，胰岛素组(1．28&;#177;0．54)，对照组(2．15&;#177;0，19)](q=0，65，0．72，P&;lt;0．05)和Fas含量显著减少(q=0.07，0．06，P&;lt;0．05)，Bcl-2含量增加(q=0．14，0．11．P&;lt;0．05)。GIK组和胰岛素组心肌细胞凋亡指数及Fas，Bcl-2蛋白含量比较，差异无显著性意义(P&;gt;0．05)。结论：GIK具有抗缺血再灌注损伤的作用，其机制可能是通过胰岛素调节Bcl-2和Fas介导的心肌缺血再灌注细胞凋亡而实现。     

高氧液对家兔心肌缺血／再灌注细胞凋亡的影响

目的 观察高氧液对心肌缺血／再灌注心肌梗死面积、心肌结构和细胞凋亡参数的影响，探讨高氧液抗心肌缺血／再灌注损伤的保护作用机制。方法 家兔心脏左冠状动脉前降支缺血／再灌注动物模型，缺血30min，再灌注2h，60只家兔随机数字表法分成3组：对照组(Ⅰ组，n=20)只暴露左冠状动脉前降支，不结扎；缺血／再灌注组(Ⅱ组，I／R组，n=20)，在缺血再灌注前10min静脉注射生理盐水(20ml／kg)；高氧液治疗组(Ⅲ组，n=20)，在缺血前10min静脉注射高氧液(20ml／kg)。分别按TCC法染色，用图像分析系统计算梗死面积；原位末端TUNEL法检测细胞凋亡指数；免疫组化ABE法检测Fas、Bel-2的含量，同时电镜观察心肌细胞的超徽结构。结果 Ⅲ组心肌梗死细胞面积为(2．29&;#177;0．02)cm，与Ⅱ组的(3．38&;#177;0．07)cm比较，梗死面积明显缩小。Ⅱ组的AI(20．8&;#177;0．36)，明显高于Ⅰ组(4．1&;#177;0．25)，P&;lt;0．01，t=170．4，Ⅲ组的AI(13．3&;#177;0．35)显著低于Ⅱ组，P&;lt;0．01，t=66．8，但仍高于Ⅰ组，P&;lt;0．01，t=92．8。Ⅰ组Fas的OD值为2．80&;#177;0．07，Ⅱ组3．70&;#177;0．05，Ⅲ组3．10&;#177;0．04。Ⅰ组Bcl—2的OD值为2．7&;#177;0．02，Ⅱ组0．60&;#177;0．03，Ⅲ组2．90&;#177;0．02。结论 高氧液具有抗心肌缺血／再灌注损伤的作用，其作用机制可能是通过调节Fas和Bcl—2介导的心肌缺血/再灌注细胞凋亡而实现。     

钙预适应对缺血再灌注心肌细胞的保护作用

目的：从细胞水平研究钙预适应对培养心肌细胞的缺血再灌注损伤是否具有保护作用。方法：实验选用3日龄健康清洁级SD乳鼠15只，雌雄不限，体质量10～15g。体外分离培养SD乳鼠心肌细胞，以模拟缺血溶液和模拟再灌注溶液模拟体内缺血再灌注过程，将培养心肌细胞随机分别用正常对照组、缺血再灌注组、钙适应缺血再灌注组，实验结束后检测心肌细胞活性、培养基乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)水平和心肌细胞凋亡。结果：模拟缺血再灌注可引起明显的心肌细胞损伤，无钙复钙可明显减少模拟缺血再灌注对心肌细胞的损伤，钙适应缺血再灌注组细胞的台盼蓝摄取率、LDH活性、凋亡指数[(6．2&;#177;1．2)％，(1592．0&;#177;111．7)μkat／L，(6．2&;#177;0．4)％]均明显低于缺血再灌注组[(24．6&;#177;1．8)％，(2873．9&;#177;43．3)μkat／L，(10．6&;#177;0．6)％](t=19．02，23．92，13．64，P&;lt;0．01)。结论：在细胞水平上证实了无钙复钙预适应对缺血再灌注心肌细胞有明显的保护作用。     

葛根素对大鼠脑复苏后海马CA1区神经细胞凋亡相关基因的影响

背景：Fan及P53是重要的促进凋亡的调控基因，属于肿瘤坏死因子／神经生长因子受体家族，其表达产物具有传递凋亡信号的作用，可调控脑缺血再灌注损伤时细胞的凋亡，而葛根素则能够减轻细胞的凋亡程度。 目的：观察葛根素对大鼠脑复苏后海马CA1区神经细胞凋亡相关基因Fas及P53的影响。 设计：随机对照实验。 单位：华中科技大学同济医学院附属同济医院急诊科。 材料：实验于2001-09／2002-02在华中科技大学同济医学院附属同济医院急诊科实验室完成。选取清洁级3个月龄Wistar大鼠45只。随机分为假手术组、模型对照组、葛根素治疗组，15只／组。 方法：葛根素治疗组及模型对照组建立大鼠急性全脑缺血再灌注模型。假手术组只分离第一颈椎两侧翼小孔，但不电凝两侧椎动脉，只分离两侧颈总动脉，但不夹闭之。葛根素治疗组于缺血前1h给予葛根索注射液100mg／kg，模型对照组给予等量生理盐水，假手术组不给药。各组大鼠分别于脑缺血再灌注后3，6，12，24，48h即速处死，每次每组3只。分离海马组织，制备组织切片，利用免疫组化法、原位末端标记法检测各组大鼠脑缺血再灌注后不同时间点Fas及P53蛋白表达的水平及凋亡细胞数的变化。 主要观察指标：①各组脑缺血再灌注后不同时间点海马CA1区Fas及P53蛋白表达的阳性细胞数。②各组脑缺血再灌注后不同时间点海马CA1区凋亡细胞数的比较。 结果：实验纳入大鼠45只，全部进入结果分析。①各组脑缺血再灌注后不同时间点海马CA1区Fas蛋白表达的阳性细胞数：假手术组未见明显Fas基因表达。与模型对照组比较，葛根素治疗组于脑缺血再灌注后各时间点均明显降低：6，12，24，48h时差异显著[（15．0&;#177;4．3）。（13．5&;#177;4．9）；（40．7&;#177;3.4），（27．2&;#177;3．1）；（37&;#177;4．8），（22.0&;#177;2．1）；（24．7&;#177;4．1）。（18．9&;#177;5．3）个／mm；P〈0．05，P〈0．01]。②各组脑缺血再灌注后不同时间点海马CA1区P53蛋白表达的阳性细胞数：假手术组未见明显P53基因表达。与模型对照组比较，葛根索治疗组于脑缺血再灌注后24，48h均明显降低[（25．3&;#177;4．4），（12．8&;#177;2．7）；（24．3&;#177;3．6），（10．9&;#177;3．0）个／mm；P〈0．01]。④各组脑缺血再灌注后不同时间点海马CA1区凋亡细胞数的比较：与模型对照组比较，葛根素治疗组于脑缺血再灌注后12，24，48h均明显降低[（34．0&;#177;3．7），（21．0&;#177;3．7）；（41．0&;#177;4．2），（33．0&;#177;4．8）；（71．0&;#177;5.5），（41．0&;#177;3．4）个／mm；P〈0．01]。 结论：给予葛根紊治疗的大鼠缺血再灌注6-48h时Fas的表达显著降低，缺血再灌注24—48h时P53的表达亦明显减少，且凋亡细胞数也呈下降趋势，进一步证实葛根紊的脑保护作用，提示葛根素抑制脑复苏后的细胞凋亡可能与其减少促凋亡基因Fas及P53蛋白表达有关。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后fas基因和fasL基因表达变化的规律

目的：探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后Fas mRNA和FasL mRNA的表达变化。方法：实验于2004-03-01／06-30在哈尔滨医科大学附属第二医院科研中心进行。取健康Wister大鼠48只随机分为6组，即假手术组，缺血2h再灌注6，12，24，48和72h组，每组8只鼠。线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)及再通模型，应用RT-PCR技术检测MCAO及再通后缺血半暗带皮质Fas mRNA和FasL mRNA表达。结果：假手术组Fas mRNA，FasL mRNA均未见表达，再灌注6h起二者开始有少量表达(分别为0．23&;#177;0．02和0．06&;#177;0．01)，Fas mRNA的表达高峰在再灌注24h(0．94&;#177;0．06)，FasL mRNA的表达高峰在再灌注48h(0．35&;#177;0．02)，再灌注72h二者的表达均明显下降(分别为0．45&;#177;0．03和0．22&;#177;0．03)。结论：脑缺血再灌注可诱导Fas mRNA和FasL mRNA表达。     

蛋白激酶C活化对大鼠缺血再灌注心肌细胞核三磷酸肌醇受体结合活性的影响

目的：观察具有抑制心肌细胞凋亡作用的蛋白激酶C活化对缺血再灌注心肌细胞核三磷酸肌醇受体结合活性的影响，以探讨其对心肌的保护作用。方法：实验于2003—04／07在解放军第三军医大学药理教研室完成。选用SD健康大鼠12只。随机分为2组，缺血再灌注组及假手术对照组，每组6只。缺血再灌注组：冠状动脉结扎30min，再灌注3h。假手术对照组：只埋线不结扎冠状动脉。采用蔗糖密度梯度离心法提纯心肌细胞核，将分离纯化的两组心肌细胞核分别平等进行2个亚组：磷酸化组和非磷酸化组，磷酸化组进行蛋白激酶C激动剂12—o-十四烷酰佛波醋酸酯-13磷酸化干预后，与非磷酸化组同时进行氚-1，4，5三磷酸肌醇的放射受体分析，比较两组细胞核经磷酸化后细胞核三磷酸肌醇受体结合活性变化。结果：进入结果分析大鼠12只。①心肌细胞凋亡指数：缺血再灌注组明显高于假手术对照组(9．88&;#177;0．33，0．6&;#177;0．0，P(0．01)。②大鼠心肌细胞核膜三磷酸肌醇受体的结合活性：缺血再灌注组与磷酸化组明显低于非磷酸化组【(88．27&;#177;0．08)，(136．05&;#177;0．05)pmol／g,P&;lt;0．05】。③大鼠心肌细胞核膜三磷酸肌醇受体的结合力：磷酸化组和非磷酸化组无明显差异【(102．83&;#177;0．09)，(106．24&;#177;0．26)pmol／g，P&;gt;0．05】。结论：大鼠心肌缺血再灌注时，蛋白激酶C可能是通过抑制心肌细胞核膜三磷酸肌醇受体的结合活性，进而参与了抑制缺血再灌注性心肌细胞凋亡的发生与发展。     

人参对大鼠缺血再灌注后心肌细胞凋亡的抑制作用

背景：心肌细胞凋亡与缺血再灌注损伤直接相关，心肌细胞凋亡数的多寡可以作为判断再灌注损伤程度的指标之一。人参及其提取物人参皂甙被证实能改善心肌缺血、缩小梗死面积，对缺血再灌注损伤有明显的保护作用。目的：探讨人参对大鼠心脏缺血再灌注后心肌细胞凋亡及bcl-2基因表达的作用。设计：随机对照的实验研究。地点、材料和干预：本实验在湖北省武汉市同济医院动物实验中心完成。实验共用Wistar大鼠15只，雌雄不分。Wistar鼠的左冠状动脉前降支(Left descending coronary artery,LAD)被结扎30min后再松开建立缺血再灌注心脏模型。应用原位末端标记法检测心肌凋亡细胞，并进行细胞计数；原位杂交和免疫组化检测bcl-2 mRNA和基因表达产物的蛋白质，通过图像分析系统测量阳性染色区域的平均吸光度进行量化分析，以观察人参对大鼠心肌缺血再灌心肌细胞凋亡的影响及基因表达。主要观察指标：大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡情况及bcl-2 mRNA，Bcl-2蛋白的表达。结果：人参治疗组bcl-2 mRNA吸光度为0．11&;#177;0．02，较单纯结扎组(0．07&;#177;0．02)和假手术组(0．06&;#177;0，01)明显升高(t=8.72，P&;lt;0．001)；人参治疗组Bcl-2蛋白吸光度为0．15&;#177;0.02，与单纯结扎组(0.09+0.02)比较，差异有非常显著性意义(t=8.631，P&;lt;0．001)，但与假手术组(0.14&;#177;0．01)比较，差异无显著性意义(P&;gt;0.05)。结论：心肌缺血再灌注可使心肌细胞凋亡数显著增加，人参治疗可明显地抑制缺血再灌注损伤诱导的心肌细胞凋亡，其机制可能是通过增强bcl-2基因表达而实现的。     

大剂量硝酸甘油对大鼠离体缺血再灌注心肌细胞凋亡和Bax及Bcl-2的影响

目的：研究硝酸甘油是否对大鼠离体缺血再灌注心肌细胞凋亡和Bcl-2／Bax水平存在直接的影响。方法：实验选用SD大鼠30只，随机分为硝酸甘油组和对照组，每组15只。制备大鼠离体心肌缺血再灌注模型(缺血30min，再灌注120min)在再灌注开始时分别给以大剂量硝酸甘油(15μg／h，以950mL／L乙醇为溶剂)或950mL／L乙醇(3μL／h)。再灌注结束后，将缺血区剪下，制备石蜡切片，采用TUNEL技术检测心肌凋亡，免疫组化技术检测心肌组织的Bcl-2和Bax水平。结果：硝酸甘油组细胞发生凋亡数[(35．2&;#177;6．7)％]明显多于对照组细胞[(5.2&;#177;0．8)％](t=28.1，P&;lt;0.01)。对照组Bcl-2表达(5.7&;#177;1.3)明显强于硝酸甘油组(1．8&;#177;0.8)(t=11．9、P&;lt;0．01)。对照组Bax表达(5.9&;#177;1．3)明显弱于硝酸甘油组(9.1&;#177;1.3)(t=9．2，P&;lt;0．01)。结论：大剂量的硝酸甘油促进了大鼠离体缺血／再灌注心肌细胞凋亡，提高了Bax蛋白的水平，降低了Bcl-2蛋白水平；大剂量硝酸甘油对Bcl-2／Bax的调节可能是其促凋亡的主要机制之一。     

肿瘤坏死因子-α在大鼠脑缺血再灌注中的表达及对神经细胞凋亡的影响

目的：观察大鼠脑缺血再灌注损伤后肿瘤坏死因子-α(tumor necmsis factor-alpha，TNF-α)表达及细胞凋亡情况，探讨TNF-α在脑缺血再灌注损伤中的作用。方法：采用大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，分为3组：脑缺血再灌注组大鼠大脑中动脉阻塞2h，再灌注2，6，12，24，48，72，96h、假手术组及永久缺血组，分别测定TNF-α表达(用免疫组织化学法)及细胞凋亡数(原位凋亡检测试剂盒)。结果：脑缺血再灌注组TNF-α表达水平[6h：(15．0&;#177;3．21)个／mm^2，12h：(47．0&;#177;0．87)个／mm^2，24h：(49．0&;#177;10．3)个／mm^2，48h：(44．8&;#177;6．9)个／mm^2，96h:(37．9&;#177;6.4)个／mm^2、细胞凋亡数[2h：(33．3&;#177;0．8)个／mm^2，6h:(56．6&;#177;1．6)个／mm^2，12h:(72．3&;#177;4.2)个／mm^2．24h：(86．6&;#177;5．5)个／mm^2，48h：(96．8&;#177;0．9)个／mm^2]明显高于假手术组(P&;lt;0.01)及永久缺血组(P&;lt;0.05)；且TNF-α表达与细胞凋亡数关系密切(r=0．567．P&;lt;0，01)。结论：大鼠脑缺血再灌注损伤后TNF-α在神经元迟发性坏死中起着重要作用。     

粉防己碱对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制

目的：建立大鼠心肌缺血／再灌注损伤模型，观察粉防己碱对缺血再灌注损伤过程中心肌细胞凋亡的干预，初步探讨其保护缺血再灌注损伤心肌的作用机制。 方法：实验于2005-03／2006-04在华中科技大学同济医学院附属协和医院心内科及心血管病研究所完成。①选择健康雄性SD大鼠48只，随机数字表法分为假手术组、缺血／再灌注损伤组、粉防己碱组，各16只。粉防己碱由华中科技大学同济医学院药理学系提供，纯度〉98％。②造模前20min，粉防己碱组腹腔注射粉防己碱3mg／kg（约1．2mL）。缺血／再灌注损伤组、假手术组均腹腔注入生理盐水1．2mL。③缺血／再灌注损伤组、粉防己碱组大鼠建立缺血／再灌注损伤模型。当结扎点远端心前壁变紫、心电图显示ST段抬高为冠状动脉结扎成功，松扎后抬高的ST段回落1／2以上为再灌注成功的标志。实施30min缺血，再灌注24h。假手术组不造模，在肺动脉圆锥与左心耳间穿线，不结扎，30min关胸，24h后处死。④再灌注结束后检测血清中乳酸脱氢酶活性、心肌组织丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性和心肌梗死范围，并应用DNA琼脂糖凝胶电泳及原位末端标记法检测各组凋亡细胞及凋亡指数。 结果：48只大鼠全部进入结果分析。粉防己碱对大鼠缺血／再灌注损伤的心肌保护作用；①生化指标测定值：心肌细胞受损后，与缺血／再灌注损伤组比较，粉防己碱组乳酸脱氢酶活性、丙二醛含量均显著降低（t=4．337-10．810，P〈0．01），超氧化物歧化酶活性显著增高（t=4．352，P〈0．01）。②梗死范围：粉防己碱组可明显减少心肌梗死范围，与缺血／再灌注损伤组比较差异有显著性意义[（23．28&;#177;4．38）％，（43．76&;#177;6．30）％，t=7．552，P〈0．01]。粉防己碱对大鼠心肌缺血／再灌注损伤细胞凋亡的影响：①琼脂糖凝胶电泳：假手术组心肌细胞DNA电泳呈一条大分子DNA片段，为正常DNA带型；缺血／再灌注损伤组DNA电泳呈“梯形结构”，可见形似云梯状的DNA片段。为凋亡的典型表现；粉防己碱组的DNA琼脂糖凝胶电泳显示DNA梯形条带明显减弱。②原位末端标记：假手术组偶见凋亡心肌细胞；缺血／再灌注损伤组可见大量胞核呈深浅不一棕褐色的凋亡心肌细胞；粉防己碱组凋亡心肌细胞较缺血／再灌注损伤组明显减少，但较假手术组有所增加。③凋亡指数：与假手术组比较。缺血／再灌注损伤组、粉防己碱组凋亡指数均显著增高[（0．65&;#177;0．39）％，（19．36&;#177;5．28）％．（8．62&;#177;2．45）％，t=9．096～10．006，P〈0．01]；但粉防己碱组凋亡指数明显低于缺血／再灌注损伤组（t=5．224，P〈0．01）。 结论：粉防己碱预处理可明显减轻心肌再灌注损伤、抑制细胞凋亡及抗氧自由基，为保护濒死心肌提供了机会窗口。     

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3对缺血再灌注大鼠脑海马神经元凋亡的影响

背景：半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在正常细胞中以酶原形式存在，受凋亡刺激因素作用后能够被激活从而引起细胞凋亡。 目的：通过检测脑海马组织胞质S-100中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的活性及海马区神经元凋亡情况，探讨全脑缺血再灌注后脑海马神经元凋亡与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的关系。 设计：随机对照实验。 单位：解放军第三军医大学西南医院急救部。 材料：实验于1999-01／04在解放军第三军医大学西南医院完成。选取雄性Wistar大鼠182只，随机分为3组：假手术组14只，脑缺血再灌注组84只，乙酰天冬氨酰谷氨酰缬氨酰天冬氨酸乙醛（acetyl-asp-glu-valasp．aldehyde，AC-DEVD-CHO）治疗组84只，后两组均设立缺血再灌注8，24。48，72，120，168h 6个时相点，每个时相点14只大鼠。 方法：脑缺血再灌注组、AC-DEVD-CHO治疗组建立大鼠全脑缺血20min再灌注模型，分别于再灌注后8，24，48，72，120，168h处死取海马组织；假手术组施行麻醉及手术，但不夹闭颈总动脉和烧灼椎动脉，术后观察72h后处死取海马组织备检。以单位质量标本于单位时间内裂解产生的氨甲基香豆素量表示标本中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的活性。各组不同时相点脑组织切片封固后在荧光显微镜下于330～350nm处观察脑海马细胞凋亡情况。 主要观察指标：①各组脑缺血再灌注后不同时相点海马组织S-100中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性变化。②各组脑缺血再灌注后不同时相点海马细胞凋亡的情况。③半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性与海马区神经元凋亡的关系。 结果：实验纳入182只大鼠，脱落14只，共168只大鼠进入结果分析。①各组脑缺血再灌注后不同时相点海马组织S-100中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性变化：假手术组术后观察72时为0。与脑缺血再灌注组比较，AC-DEVD-CHO治疗组于再灌注24，48，72，120，168h均明显降低[（1．71&;#177;0．03），（1．22&;#177;0．03）；（2．77&;#177;0．09），（1．59&;#177;0．7）；（5．54&;#177;0．51），（2．3&;#177;0．19）；（6．28&;#177;1．71），（3.43&;#177;0．46）；（3．11&;#177;1．21），（1．73&;#177;0．14）nkat／kg；P〈0．05或0．01]。②各组脑缺血再灌注后不同时相点海马细胞凋亡的情况：每400倍视野下，假手术组术后观察72h为（1．2&;#177;0．4）个。与脑缺血再灌注组比较，AC-DEVD-CHO治疗组于再灌注24，48，72，120，168h均明显降低[（6．4&;#177;1．7），（2．8&;#177;0．8）；（11．8&;#177;1．3），（5．8&;#177;1．9）；（19．8&;#177;3．1），（10．0&;#177;1．9）；（31．2&;#177;5．9），（16．4&;#177;2．4）；（19．8&;#177;2．3），（9．0&;#177;2．3）个／400倍视野；P〈均0．011。③半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性与海马区神经元凋亡的关系：脑缺血再稽注组、AC-DEVD-CHO治疗组均行直线相关分析，二者的变化呈显著正相关（r分别为0．9356及0．9800，P均〈0．01）。 结论：半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的激活是引起海马神经元调亡的主要因素之一，在缺血再灌注大鼠脑海马神经元凋亡中起着重要作用。     

通心络对再灌注心肌细胞凋亡的影响

背景：传统中药对心肌缺血-再灌注的治疗作用日益受到重视,以虫类药物为主的中成药通心络在临床抗心肌缺血的治疗中取得了明显的疗效.目的：探讨中药通心络对抗缺血再灌注诱发的心肌细胞凋亡的作用.设计：随机对照观察.单位：中山大学附属第一医院中医科.材料：各项实验于2002-11/12在中山大学分子医学研究中心进行,选择72只雄性昆明种小鼠.方法：72只昆明小鼠随机分成6组,每组12只.通心络2g/kg组、通心络1.5g/kg组、通心络1.0g/kg组（每天灌胃1次,第5天灌药1 h后用垂体后叶素和硝酸甘油联用复制心肌缺血再灌注模型方法进行造模）、消心痛组（剂量为3.9 g/kg,余处理办法同上）、模型组和空白对照组（用生理盐水代替各药物）.实验结束时取小鼠的心肌,观察小鼠缺血再灌注模型心肌组织超氧化物歧化酶活性、丙二醛水平,分析心肌细胞凋亡指数和凋亡相关蛋白bcl-2,bax表达水平.主要观察指标：[1]各组小鼠超氧化物歧化酶活性、丙二醛水平比较.[2]各组小鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白的比较.结果：72只小鼠实验过程中状态符合实验要求,无死亡.[1]超氧化物歧化酶活性、丙二醛水平：与模型组和消心痛组比较,通心络1 g/kg组、通心络1.5g/kg组、通心络2 g/kg组的超氧化物歧化酶活性升高（1.37928&;#177;140.03）,（1 223.91&;#177;109.02）,（1 789.19&;#177;155.20）,（2 267.79&;#177;216.04）,（2 387.55&;#177;229.71）nkat/L、丙二醛的水平降低（16.58&;#177;2.59）,（20.40&;#177;2.66）,（12.73&;#177;1.98）,（9.65&;#177;2.03）,（7.56&;#177;1.67）nmol/L,而且随着剂量的增大其效率进一步增强.[2]心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白：与模型组和消心痛组比较,通心络1 g/kg组、通心络1.5 g/kg组、通心络2 g/kg组的心肌细胞凋亡指数和Bax蛋白表达指数明显降低[（13.84&;#177;1.97）%,（11.56&;#177;1.43）%,（3.34&;#177;0.96）%,（0.82&;#177;0.12）%,（0.42&;#177;0.06）%;（17.44&;#177;6.18）%,（15.45&;#177;3.72）%,（10.85&;#177;2.73）%,（6.46&;#177;1.88）%,（5.57&;#177;1.49）%],Bcl-2蛋白表达指数明显升高[（6.22&;#177;0.50）%,（8.73&;#177;0.63）%,（11.38&;#177;1.38）%,（16.22&;#177;2.36）%,（19.45&;#177;2.92）%],且呈量效关系.结论：通心络胶囊具有抗氧自由基损伤、抗细胞凋亡保护缺血后再灌注心肌细胞的作用,而且呈剂量依赖性.     

低氧预处理对大鼠缺血一再灌注性脑损伤中凋亡及Fas和Fas-L蛋白表达的影响

目的：观察分析低氧预处理对大鼠缺血-再灌注性脑损伤凋亡及Fas、Fas-L蛋白表达的影响。 方法：实验于2004-09／2006-04在新乡医学院神经生物学实验室完成。选择成年SD大鼠24只，随机抽签法分为假手术组、缺血-再灌注模型组、低氧预处理组，每组8只。参照Zea-Longa改良的动脉线栓法制备脑缺血-再灌注模型，以动物缺血侧上下肢体瘫痪，围绕缺血对侧呈逆时针绕圈（追尾现象）为模型制备成功表现。缺血-再灌注模型组大鼠缺血3h后再灌注24h。低氧预处理组的大鼠在以300mL／min流量灌入N2和O2混合气体的密闭容器中处理3h恢复12h后，采用动脉线栓法缺血3h再灌注24h后取材，经处理后制备切片；假手术组仅切开一侧皮肤暴露颈总动脉。各组切片标本采用苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色及TUNEL染色，观察神经组织学特征，Fas、Fas-L蛋白表达和细胞凋亡情况。并在不同时间（缺血1，2，3h再灌注1，4，8，24h）观察大鼠神经功能缺失情况。 结果：纳入大鼠24只，均进入结果分析，无脱失值。①缺血3h再灌注8h后低氧预处理组神经行为缺失计分低于缺血-再灌注模型组[（0．6&;#177;0．5），（1．3&;#177;0．5）分，t=2．546，P=0．023]；再灌注24h后低氧预处理组神经功能缺失计分显著低于各缺血-再灌注模型组[（1．1&;#177;0．6），（0．4&;#177;0．5）分，t=2．376，P〈0．051。②神经组织学特征：缺血-再灌注模型组缺血区中心神经组织结构完全破坏。神经元大部分坏死，细胞间隙明显增宽。缺血边缘区神经元肿胀、形态变为角形或扇形，神经元周神经纤维呈空泡状或海绵状，神经胶质细胞肿胀。低氧预处理组损伤程度轻于缺血-再灌注模型组。③低氧预处理组在缺血半球亦可监测到凋亡细胞，右侧均为阴性，凋亡细胞形态与缺血-再灌注模型组相似，但数量少于缺血-再灌注模型组[（23．1&;#177;4．4），（39．4&;#177;2．4），P〈0．05]。④假手术组及非缺血侧大脑半球Fas、Fas-L蛋白表达微弱。缺血-再灌注模型组和低氧预处理组缺血侧Fas、Fas-L蛋白有明显表达，与假手术组比较差异有显著性意义[（27．3&;#177;2．8），（11．1&;#177;2．2），（0．8&;#177;1．2）个／视野，P〈0．05]，[（24．6&;#177;3．6），（9．6&;#177;1．7），（0．5&;#177;0．8）个／视野，P〈0．05]。低氧预处理组Fas、Fas-L蛋白表达水平显著低于缺血-再灌注模型组（P〈0．05）。 结论：低氧预处理可减轻局灶性缺血再灌注脑损伤，减少大鼠脑缺血-再灌注后的脑细胞凋亡和神经功能缺失。抑制Fas、Fas-L蛋白表达可能是其发挥保护作用的分子机制之一。     

碱性成纤维细胞生长因子及WTp53在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的作用

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)在大鼠视网膜缺血冉灌注损伤中的作用及其机制。方法：随机将28只大鼠分为正常组和手术组．其中手术组夫鼠左眼为缺血再灌注组，右眼为治疗组(玻璃体腔内注射bFCF]，观察再灌注后不同时间段1，6，12，24，48，72h视网膜组织中细胞凋亡情况及WTp53的表达变化。前房加压法制作大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型。应用末端脱氧核酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记(TUNEL)法检测视网膜组织中凋亡细胞数，免疫组织化学SABC法检测视网膜组织中WTp53蛋白的表达。结果：视网膜神经细胞的凋亡出现于再灌注后6h，并逐渐递增，24h达到高峰，48h开始下降，72h组不明显、WTp53蛋白表达改变与凋亡的神经细胞改变基本致。治疗组各观察指标表达变化规律与缺血再灌注组基本一致，但凋亡细胞数目在6～48h[6，12，14，48h分别为(358.3&;#177;43．4)．(859．5&;#177;12.0)，(1006．5&;#177;49．4)，(695．7&;#177;71.2）个／mm^2]明显低于缺血再灌注组[(444．8&;#177;89．7)，(1053.0&;#177;96．1)，(1254．0&;#177;164．8)，(891.0&;#177;87．2)个／mm^2](t=2．9131～4.299．P均&;lt;0.05)；WTp53表达在6～48h缺血再灌注组显著下降(t=3.342～4.781，P&;lt;0.05；t=52．586，P&;lt;0．01)。结论：WTp53参与视网膜缺血-灌注损伤，促进神经静细胞的凋亡；bFGF可抑制WTp53的表达，减少神经节细胞凋亡，对视网膜缺血再灌注损伤有治疗作用。     

兔心脏缺血再灌注损伤后重组水蛭素的保护作用及其机制

背景：重组水蛭素能否通过抑制白细胞浸润来拮抗心肌缺血／再灌注(ischemia／reperfusion，IR)损伤，从而起到对心肌的保护作用?目的：观察重组水蛭素对缺血心肌内白细胞浸润的影响，进一步探讨重组水蛭素对心肌保护的作用机制。设计：随机对照的实验研究。地点、材料和干预：本实验在第四军医大学唐都医院心血管病实验室完成。选取24只日本大耳白兔随机分为2组，每组12只。IR组：心脏左冠状动脉前降支IR动物模型，缺血45min、再灌注120min，再灌注前后静脉应用生理盐水；重组水蛭素组：缺血45min、再灌注120min，再灌注前15min静注重组水蛭素(1mg／kg)，再灌注时继以持续静滴重组水蛭素[1mg／(kg&;#183;h]120min。主要观察指标：心肌梗死范围及缺血心肌内白细胞浸润的变化。结果重组水蛭素组的心肌梗死范围为(11．7&;#177;2．4)％，与缺血再灌注组的(21．2&;#177;5．3)％比较，梗死范围明显缩小(t=7．436，P&;lt;0．01)。缺血再灌注组的髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)活性为(56．01&;#177;3．83)nkat／g，重组水蛭素组(35．51&;#177;1．67)nkat／g。重组水蛭素组缺血心肌内白细胞聚集较缺血再灌注组显著减少(t=3．935，P&;lt;0．05)。结论：重组水蛭素能够抑制再灌注期缺血心肌内白细胞浸润，拮抗心肌IR损伤。     

大鼠心肌缺血再灌注损伤与心肌肽素的保护作用

目的：探讨心肌肽素对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及作用途径。方法：实验于2004-04/06在阜外心血管病医院麻醉研究室完成。选择健康雄性SD大鼠24只，随机分为3组，每组8只，分别为假手术组、缺血再灌注组、心肌肽素用药组。大鼠冠状动脉左前降支结扎30min造成心肌缺血模型，复灌24h造成心肌缺血再灌注损伤模型。①再灌注结束后大鼠血清肌酸激酶同工酶、乳酸脱氢酶水平采用全自动生化仪检测。②检测大鼠心肌细胞凋亡指数应用原位末端标记法。③心肌肌动蛋白表达采用特异性免疫组化二步法检测。④大鼠心肌病理学改变光镜下半定量评分以10倍物镜下，随机选取若干视野观察整个左室心肌切面，从心肌变性坏死、出血、间质水肿和中性粒细胞浸润四方面观察心肌病变分布情况并计分，计算每种病变的视野比例(有心肌病变的视野数/镜下观察的总视野数)，正常心肌计0分；病变灶性，病变视野比例≤1／4计1分；病变视野比例为1／4～1／2计2分；病变弥散性，病变视野比例≥1／2计3分。每方面的得分求和即为最后计分。⑤大鼠心肌病理学电镜下半定量评分：从心肌纤维、线粒体、核染色质、细胞水肿和小血管内皮五方面观察其超微结构改变并计分，结构正常为0分；轻度改变且病变灶性，小于全部视野面积的1／4为1分；中度改变，病变占全部视野面积的1／4～1／2计2分；重度改变且病变弥散性，大于全部视野面积的1／2为3分。每方面的得分求和即为最后计分。结果：进入结果分析大鼠24只，每组8只。①大鼠血清肌酸激酶同工酶、乳酸脱氢酶水平、心肌细胞凋亡指数：心肌肽素用药组明显低于缺血再灌注组[(5．59&;#177;0．52)μ kat/L，(1．06&;#177;0．09)μkat／L，(4．34&;#177;1．15)％；(10．52&;#177;0.32)μ kat/L，(1．97&;#177;0.21)μ kat／L，(11．16&;#177;1．09)％，P&;lt;0．05]，缺血再灌注组、心肌肽素用药组明显高于假手术组[(2．58&;#177;0．32)μ kat／L，(0．57&;#177;0．15)μ kat／L，（0．85&;#177;0．42)％，P&;lt;0．05]。②大鼠心肌肌动蛋白含量和电镜、光镜评分组间差异性与血清酶学检测心肌细胞凋亡指数组间差异相同。结论：心肌肽素通过抑制心肌细胞凋亡，减轻心肌细胞结构损伤发挥对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。     

经颈动脉直接注入外源性降钙素基因相关肽对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马区Fas蛋白表达的影响

目的：探讨经颈动脉直接注入外源性降钙素基因相关肽对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马细胞表面死亡受体Fas蛋白表达的影响。方法：实验于2004-01／12在中国医科大学基础医学院神经生物实验室进行，取雄性SD大鼠90只，随机分为3组，每组30只：①假手术组：分离血管，不插线栓。②缺血再灌注组：用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型，在脑缺血2h后拔出栓线再灌注，再灌注即刻经颈动脉注入生理盐水1mL。③降钙素基因相关肽组：同前造模，再灌注即刻经颈动脉注入降钙素基因相关肽0.5mL。后两组动物再灌注后6，12，24，48，72h麻醉后断头处死。假手术组同时处死，每个时间点各6只。应用免疫组化和显微图像分析方法检测局灶性脑缺血再灌注大鼠海马Fas蛋白的表达。结果：经补充后90只动物进入结果分析。假手术组大鼠海马未见Fas阳性细胞表达，24h平均吸光度值为0．1910&;#177;0．0142；缺血再灌注组于再灌注6h后在海马区可见Fas阳性细胞，随着再灌注时间的延长，大鼠脑皮质及海马Fas表达进一步增加，于再灌注24h时达高峰，平均吸光度值为0．3607&;#177;0．0388，以后开始逐渐下降；降钙素基因相关肽组：各相应时间点大鼠脑皮质及海马区Fas阳性细胞平均吸光度值明显低于缺血再灌注组，其再灌注24h平均吸光度值为0．3030&;#177;0．0011。结论：经颈动脉直接注入外源性降钙素基因相关肽可下调缺血神经元Fas蛋白的表达，对缺血神经元有保护作用。经颈动脉直接注药，保持了脑组织较高的药物浓度，且减少了药物通过静脉、腹腔内给药经体循环而造成的损失。     

大鼠急性心肌梗死后的心肌细胞凋亡

目的：研究大鼠急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)后心肌细胞凋亡的发生情况。方法：实验选用105只雌性SD大鼠，随机抽取78只以结扎左冠状动脉前降支的方法制备AMI模型，术后24h存活的43只作为心肌梗死组；另设假手术组(n=27)；各组再按观察时点随机分为48h和4周两亚组，即：心肌梗死48h(n=11)和心肌梗死4周(n=13)组，假手术48h(n=10)和假手术4周(n=10)组。末端脱氧核糖核酸转移酶介导的dUTP切口末端标记技术(TUNEL)和DNA凝胶电泳检测心肌细胞凋亡。结果：AMI大鼠梗死区心肌细胞坏死和瘢痕形成的同时，梗死／瘢痕区、梗死边缘区和非梗死区的心肌细胞凋亡指数均显著升高[心肌梗死48h组分别为(212．86&;#177;155．75)／1000，(198．16&;#177;120．0)／1000和(63．23&;#177;45.43)／1000，心肌梗死4周组分别为(235．14&;#177;130．43)／1000，(80．33&;#177;44．29)／1000和(31．61&;#177;16．39)／1000，P&;lt;0．05～0．01]。结论：大鼠发生AMI后，梗死区心肌细胞坏死和瘢痕形成的同时，梗死／瘢痕区、梗死边缘区和非梗死区均有心肌细胞发生凋亡。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注早期DNA修复功能的研究

目的：探讨大鼠脑缺血再灌注不同时相DNA修复酶Ku70的表达变化及其意义。方法：采用免疫组织化学方法检测大鼠大脑中动脉阻塞（MCAO)2h再灌注不同时间点缺血脑组织区Ku70的表达情况。结果：正常对照组、假手术组、手术组非缺血侧大脑半球Ku70广泛表达，定位于细胞核；手术组缺血侧尾壳核于再灌注0．5h，额顶叶皮质于再灌注2hKu70阳性细胞数开始减少[分别为(83.3&;#177;5.3)及(105．5&;#177;5．1)个／视野，t=2．561及14．934，P均&;lt;0．05]，于再灌注6h，上述区域Ku70表达水平显著降低[分别为(23．8&;#177;3．8)及(37．8&;#177;4．3)个／视野，t=3．149及20．771，P均&;lt;0．01]，并持续至再灌注48h。结论：大鼠局灶性脑缺血再灌注早期，DNA修复酶Ku70在损伤区域的表达水平降低，提示再灌注早期DNA修复功能降低，在促进缺血再灌注区域细胞损伤中可能起有重要作用。