调控miR-642a-5p表达对宫颈癌HeLa细胞生物学行为的影响及机制研究

目的:探究调控微小RNA(miR)-642a-5p表达对宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及机制。方法:通过转染不同质粒将Hela细胞分为miR-642a-5p mimic组、miR-642a-5p mimic NC组,以未做任何处理的Hela细胞作为对照组。RT-qPCR法检测miR-642a-5p、NF-κB mRNA的表达水平,Western blot法检测NF-κB p65蛋白的表达水平,MTT法检测细胞增殖活力,Transwell法检测细胞侵袭、迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:与对照组、miR-642a-5p mimic NC组比较,miR-642a-5p mimic组miR-642a-5p的表达量及细胞凋亡率升高,NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白的表达水平及转染24、48 h的细胞增殖活性、侵袭细胞个数、划痕愈合率降低(均P<0.05);对照组与miR-642a-5p mimic NC组miR-642a-5p、NF-κB mRNA、NF-κB p65蛋白的表达水平及转染24、48 h细胞增殖活性、侵袭细胞个数、划痕愈合率、细胞凋亡率比较,...     

模拟失重下miR-138-5p靶向SIRT1负调控成骨细胞分化的研究

背景 机械刺激对于维持骨骼重塑和平衡至关重要,机械卸载引起的骨骼系统损伤是长期航天飞行的主要局限性之一.研究表明微小RNA(miRNA)可通过调控与骨形成相关的基因和信号通路调节成骨细胞功能.目的 探究模拟失重下miR-138-5p/SIRT1信号通路对成骨细胞分化的影响,为失重性骨质丢失的在体靶向干预寻求治疗靶点.方法 利用2D回转器对前成骨细胞MC3T3-E1进行模拟失重处理,验证沉默信息调节因子2相关酶I(SIRT1)及miR-138-5p在模拟失重下的表达发生变化;向MC3T3-E1细胞中转染miR-138-5p mimic、inhibitor、pcDNA3.1(+)-SIRT1及相应的阴性对照进行功能验证;向MC3T3-E1细胞中转染inhibitor-NC、miR-138-5p inhibitor后模拟失重处理48 h进行挽救实验;采用qRT-PCR方法检测miRNA及SIRT1、Runx2、Osx的mRNA表达变化;采用Western blot方法检测SIRT1、Runx2、Osx的蛋白表达变化;采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性检测和ALP染色方法检测成骨细胞分化能力的变化.结果 模拟失重下,MC3T3-E1细胞中Runx2、SIRT1的mRNA及蛋白均表达下降(P<0.01或P<0.05);转染miR-138-5p mimic和inhibitor后,qRT-PCR、Western blot、ALP活性及ALP染色检测均表明过表达miR-138-5p能够显著抑制成骨细胞分化,而抑制miR-138-5p能够促进MC3T3-E1细胞分化(P<0.05或P<0.01).miR-138-5p mimic与pEX-SIRT1共转染实验表明miR-138-5p通过抑制SIRT1负调控成骨细胞分化(P<0.01).此外,抑制miR-138-5p可以降低模拟失重对成骨细胞的分化抑制,表现为促进SIRT1、Runx2、Osx mRNA和蛋白表达(P<0.01).结论 SIRT1表达在模拟失重下下调,而miR-138-5p表达上调;miR-138-5p通过直接靶向SIRT1调控Runx2、Osx的mRNA及蛋白表达,抑制成骨细胞分化;此外,抑制miR-138-5p/SIRT1通路可以部分降低模拟失重对成骨细胞的分化抑制,miR-138-5p可以作为潜在的干预靶点.     

长链非编码RNA Linc00658在结直肠癌中的表达及其与西妥昔单抗抵抗的关系

目的：探究长链非编码RNA（LncRNA）Linc00658 在结直肠癌（CRC）中的表达及其与西妥昔单抗抵抗的关系。方法：采用生物信息学方法预测与miR-19a-3p及PTEN表达密切相关的LncRNA，分别用西妥昔单抗和DMSO诱导处理人CRC细胞CaCo2 作为抵抗组和对照组，并利用细胞转染过表达抵抗组细胞的Linc00658作为过表达组，分别转染miR-19a-3p mimic及NC于CaCo2细胞中，作为mimic组及NC组。qRT-PCR检测Linc00658、miR-19a-3p及PTEN mRNA在对照组、抵抗组和过表达组细胞中的表达水平，Western blot检测PTEN及其下游基因磷酸化AKT（p-AKT）及磷酸化mTOR（p-mTOR）的表达，CCK-8 实验检测各组细胞西妥昔单抗的半数抑制浓度（IC50），荧光素酶报告基因实验验证Linc00658与miR-19a-3p的结合及其对miR-19a-3p与PTEN结合作用的影响。结果：相比对照组，抵抗组细胞Linc00658、PTEN mRNA及蛋白表达显著降低，miR-19a-3p、p-AKT及p-mTOR表达显著升高，西妥昔单抗IC50 显著增高（均P ＜0.01）；相比抵抗组，过表达组细胞Linc00658、PTEN mRNA及蛋白表达显著升高，miR-19a-3p、p-AKT及p-mTOR表达显著降低，西妥昔单抗IC50 显著降低（P ＜0.05）；相比NC组，mimic组西妥昔单抗IC50显著升高（P ＜0.01）；miR-19a-3p mimic可显著抑制pGL3-basic-Linc00658荧光素酶活性，提示miR-19a-3p与Linc00658存在结合作用，过表达Linc00658可使miR-19a-3p mimic对pGL3-basic-PTEN的荧光抑制作用恢复。结论：Linc00658通过吸附miR-19a-3p促进PTEN的重新表达及CRC细胞对西妥昔单抗的敏感性。     

miR-20a-5p通过下调HOXB13基因表达抑制肺癌细胞系A549增殖

目的 探讨miR-20a-5p调控HOXB13基因表达抑制肺癌细胞系A549增殖的分子机制。方法 转染HOXB13过表达质粒与HOXB13 siRNA到肺癌细胞系A549,通过qRT-PCR及Western blot实验检测HOXB13 mRNA及蛋白的表达水平;CCK-8及EdU实验检测HOXB13对肺癌细胞系A549细胞增殖的影响;利用生物信息学分析筛选HOXB13可能结合的miRNA;通过qRT-PCR检测转染miR-20a-5p mimic与miR-20a-5p inhibitor到肺癌细胞系后miR-20a-5p的表达水平;Western blot实验检测HOXB13在肺癌细胞系中的表达情况;CCK-8及EdU实验检测miR-20a-5p肺癌细胞系A549细胞增殖的影响;在A549细胞中共转染miR-20a-5p mimic及HOXB13过表达质粒,CCK-8及EdU实验检测A549细胞增殖能力。结果 HOXB13促进了A549细胞的增殖（P<0.05）;生物信息学筛选出HOXB13可能结合的miRNA为miR-20a-5p;在肺癌细胞系中过表达miR-20a-5p后,HOXB13蛋白表达量降低（P<0.05）;而干扰miR-20a-5p表达后,HOXB13蛋白的表达量升高（P<0.05）;细胞增殖实验结果显示,miR-20a-5p与HOXB13对细胞增殖的影响相反,miR-20a-5p及HOXB13同时过表达,细胞增殖情况介于单独过表达miR-20a-5p及单独过表达HOXB13组之间（P<0.05）。结论 miR-20a-5p调控HOXB13基因表达抑制肺癌细胞系A549的增殖。     

MicroRNA-675-5p对成牙骨质细胞分化的影响

目的:通过过表达或抑制microRNA-675-5p(miR-675-5p),观察miR-675-5p对小鼠成牙骨质细胞OCCM-30分化的影响。方法:用矿化诱导培养基诱导OCCM-30细胞分化,检测各矿化指标及miR-675-5p的含量变化。而后利用Lipofectamine 3000脂质体分别将miR-675-5p的mimic和inhibitor及对应的negative control转染进OCCM-30细胞,采用real-time PCR技术验证转染是否成功,继而采用real-time PCR和Western Blot的方法检测矿化相关指标ALP,OSX,RUNX2,BSP的含量变化,利用ALP活性试剂盒检测碱性磷酸酶活性变化。结果:Real-time PCR结果显示在OCCM-30细胞分化过程中miR-675-5p表达下调,在mimic组miR-675-5p表达上调明显,同时ALP,OSX,RUNX2表达下降,Western Blot证明OSX,RUNX2与BSP在蛋白水平上表达同样明显降低,ALP活性试剂盒检测提示ALP活性被抑制。Inhibitor组结果与mimic组恰好相反。结论:miR-675-5p抑制OCCM-30细胞的分化能力。     

MiR-92a-3p靶向KLF4促进肝细胞癌恶性进程

目的:探究微小RNA-92a-3p(miR-92a-3p)对肝细胞癌(HCC)的影响及其分子机制。方法:qRT-PCR检测人肝细胞癌细胞系SMMC-7721、Bel-7402、HepG2、Hep3B和人正常肝细胞系HL-7702中miR-92a-3p和Krüppel样因子4(KLF4)的表达。将SMMC-7721、Bel-7402细胞分组为Inhibitor NC组、miR-92a-3p Inhibitor组、mimic NC组、miR-92a-3p mimic组、mimic NC+oe-NC组、mimic NC+oe-KLF4组、miR-92a-3p mimic+oe-NC组、miR-92a-3p mimic+oe-KLF4组。qRT-PCR检测细胞中miR-92a-3p和KLF4的mRNA表达水平。Western blot检测KLF4蛋白表达水平。MTT增殖实验检测细胞活力。划痕愈合、Transwell侵袭实验分别检测细胞迁移能力和侵袭能力。通过TargetScan分析miR-92a-3p与KLF4的靶向关系,并通过双荧光素酶实验验证。结果:相比于正常细胞,miR-92a-3p在H...     

miR-30a-5p通过调节靶基因ARG1对急性缺血性脑卒中免疫应答的影响

目的:探讨miR-30a-5p通过调节靶基因精氨酸酶-1(ARG1)对急性缺血性脑卒中免疫应答的影响.方法:选取急性缺血性脑卒中患者60例为病例组,同期体检健康者60例作为对照组.RT-qPCR检测外周血候选miRNAs,miR-30a-5p及靶基因ARG1表达情况;将miR-30a-5p模拟物、阴性对照模拟物及mock转染到HL-60或RAW264.7细胞中,荧光素酶报告基因分析miR-30a-5p与ARG1的作用关系;RT-qPCR和Western blot检测ARG1 mRNA和蛋白的表达情况.结果:miR-30a-5p、miR-579-3p和Let-7e表达水平在病例组和对照组存在统计学差异(P<0.001),生物信息学预测miR-579-3p和Let-7e没有免疫调节相关的靶基因,而ARG1是miR-30a-5p潜在靶基因.荧光素酶报告基因实验证实ARG1是miR-30a-5p直接作用靶点,ARG1 mRNA在缺血性脑卒中外周血中明显上调(P<0.05).miR-30a-5p模拟物转染HL-60和/或RAW 264.7细胞24 h后,ARG1 mRNA和蛋白表达水平较mock和NC组明显降低(P<0.05).miR-30a-5p对LPS处理后的RAW 264.7细胞48 h后,miR-30a-5p模拟物组NO水平较mock和NC组明显升高(P<0.05).结论:miR-30a-5p及其靶基因ARG1是急性缺血性脑卒中重要的分子标志物之一,miR-30a-5p可能通过抑制靶向基因ARG1表达参与缺血性卒中免疫应答的病理生理过程.     

靶向调控miR-21-5p上调TIMP3抑制膀胱癌SCSP-571细胞ECM和EMT的机制研究

目的 探讨靶向调控miR-21-5p上调金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP3)抑制膀胱癌细胞外基质降解(ECM)和上皮间质转化(EMT)的作用效果与机制。 方法 96孔板培养膀胱癌SCSP-571细胞，分对照组、空载质粒组、miR-21-5p沉默组、TIMP3沉默组、miR-21-5p+TIMP3沉默组。对照组常规培养，空载质粒组加空载质粒共培养，miR-21-5p沉默组加入miR-21-5p inhibitor；TIMP3沉默组加入TIMP3-shRNA慢病毒感染质粒；miR-21-5p+TIMP3沉默组同时加入miR-21-5p inhibitor和TIMP3-shRNA慢病毒感染质粒。培养72 h，采用荧光定量PCR实验测定各组miR-21-5p和TIMP3的mRNA表达，WB实验测定各组ECM和EMT标志物的表达，Transwell小室实验测定各组细胞迁移能力和侵袭能力。 结果 与对照组相比，miR-21-5p沉默组E钙粘蛋白和TIMP3蛋白表达水平升高，同时N钙粘蛋白、纤维蛋白、MMP-2、MMP-7、MMP-9蛋白表达水平，细胞迁移与侵袭能力降低；TIMP3沉默组E钙粘蛋白和TIMP3蛋白表达水平降低，同时N钙粘蛋白、纤维蛋白、MMP-2、MMP-7、MMP-9蛋白表达水平，细胞迁移与侵袭能力升高，差异有统计学意义(均P＜0.05)。miR-21-5p+TIMP3沉默组的各项指标介于miR-21-5p沉默组与TIMP3沉默组之间，差异有统计学意义(P＜0.05)。 结论 靶向调控miR-21-5p能够起到抑制膀胱癌细胞侵袭与转移的效果，作用机制可能与提高了TIMP3表达，从而抑制了MMPs介导的ECM与EMT有关。      

ZNF139通过抑制miR-181a-5p增加胃癌细胞耐药性的机制

目的:探讨ZNF139通过抑制miR-181a-5p表达增加胃癌细胞耐药性的机制.方法:检测ZNF139和miR-181a-5p在胃癌组织和细胞系中的表达情况,ZNF139-siRNA、miR-181a-5p模拟物或pcDNA-ZNF139转染MKN45、MKN45/ADR细胞系.MTT法测定细胞活性,Real-time PCR和Western blot分别检测ZNF139、miR-181a-5p和P-gp、GST-π、MRP-1、Bcl-2、TS和Bax等耐药相关基因mRNA和蛋白表达水平.ChIP和双荧光素酶活性试验验证ZNF139、miR-181a-5p之间的调控作用.结果:ZNF139 mRNA和蛋白相对表达量在胃癌组织和细胞系较癌旁组织升高(P<0.05),miR-181a-5p mRNA相对表达量降低(P<0.05).转染ZNF139-siRNA后,MKN45/ADR细胞中miR-181a-5p mRNA表达升高,化疗药物阿霉素(ADR)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、奥沙利铂(L-OHP)处理后,MKN45/ADR细胞存活率降低(P<0.05).MKN45细胞系转染pcDNA-ZNF139后,ZNF139 mRNA和蛋白表达水平升高,miR-181a-5p mRNA表达水平下降,同时细胞对ADR、5-FU、L-OHP的耐药性增强(P<0.05).双荧光素酶活性试验表明,ZNF139抑制了miR-181a-5p启动子的转录活性(P<0.05).抑制ZNF139可降低MKN45/ADR细胞中P-gp、MRP-1、Bcl-2的表达(P<0.05);miR-181a-5p模拟物转染MKN45/ADR细胞后,P-gp、LRP和Bcl-2的表达降低(P<0.05).结论:ZNF139通过抑制-miR-181a-5p诱导胃癌中P-gp、MRP-1和Bcl-2的表达来增加细胞的耐药特性,有望成为防治胃癌细胞耐药的新的策略.     

miR-125a-3p靶向作用P2RX7抑制糖尿病肾病小鼠肾纤维化发展

目的探究miR-125a-3p靶向作用P2RX7对糖尿病肾病(DN)小鼠肾纤维化发展的影响。 方法60只小鼠均分为对照组、模型组、miR-125a-3p NC组和miR-125a-3p mimic组,构建DN小鼠模型,腹腔注射miR-125a-3p NC或mimic。qRT-PCR检测肾组织miR-125a-3p表达,Western blotting检测P2RX7、Col-I、α-SMA蛋白表达,ELISA检测血肌酐(Cr)和血尿素氮(BUN),HE染色和Masson染色检测肾脏病理改变和胶原蛋白体积分数(CVF),双荧光素酶报告检测miR-125a-3p与P2RX7的靶向关系。 结果与对照组比较,模型组和miR-125a-3p NC组P2RX7、Cr、BUN和CVF、Col-I和α-SMA蛋白升高,miR-125a-3p表达降低(P＜0.05);与模型组和miR-125a-3p NC组比较,miR-125a-3p mimic组上述趋势得到逆转(P＜0.05)。miR-125a-3p可与P2RX7靶向结合(P＜0.05)。 结论miR-125a-3p高表达靶向抑制P2RX7蛋白,缓解DN小鼠的肾纤维化,保护肾功能。     

小儿耳鼻喉手术麻醉的新进展

因小儿耳鼻喉手术刺激强,时间短,且常与气道相关,故麻醉的控制有一定难度,现对国内外现阶段小儿耳鼻喉手术麻醉的改良方法及新观点进行评述,以期对临床工作有较好的指导意义。     

2001年我国医药研究的若干进展

随着国内外生命科学和生物技术等的飞速发展,我国医药技术在2001年取得了长足的进步。提前完成了我国所承担的人类基因组汁划中的1％测序任务,到2000年,中国科学家在功能基因研究和基因组多样性领域共完成研究论文1850篇,遍及医药各领域,研究手段和水平可于国际先进水平媲美,中国完全有条件在“后基因时代”成为主角之一。     

Malaria in children in Birmingham in the 1970s

Thirty-two children with malaria were admitted to Dudley Road Hospital, Birmingham, in the 1970s. None was admitted before 1974 and there was a rapid increase after that. All the infections were due to Plasmodium vivax and occurred in children of Asian immigrant families who had been born in or had visited India or Pakistan apart from one infant born in England who acquired the disease transplacentally. All presented within 12 months of entering or re-entering the United Kingdom. The clinical features of the 32 patients have been analysed and it is suggested that more effort should be made to educate travellers about the need for anti-malarial chemoprophylaxis and the necessity to continue it for one month after return.     

成都市属医院1，175例儿童支气管肺炎住院费用分析

为探讨成都市不同级别医疗机构儿童支气管肺炎单病种费用水平以及不同收费项目占总费用的比例特点及控制医疗费用的有效途径,为患者自主选择就诊医疗机构提供参考指导,对成都市卫生局所属不同级别医院儿童支气管肺炎住院医疗费用分析如下。1资料与方法1.1资料来自成都市卫生局2     

2005年广西流动人口疟疾监测结果分析

目的了解广西流动人员疟疾流行现状,进而提出针对性防治措施。方法收集全区网络直报疫情资料和各级疾病预防控制机构疟疾监测数据进行分析。结果2005年广西流动人口发热病人平均疟原虫阳性率为0·33%。80·62%的病人为本地居民外出到疟疾流行区务工感染所致。以从事护林/砍伐比例最高,占44·19%。结论加强返乡流动人口疟疾监测是巩固广西疟疾防治的关键所在。