m iR －503在结直肠癌组织细胞中的表达及其对增殖和诱导细胞凋亡的影响

目的：探讨miR－503在结直肠癌中的表达与功能。方法通过实时定量聚合酶链反应检测结直肠癌组织、癌旁组织及细胞系（ CaCo2、SW480、HCT－116、HT29、SW620）中miR－503的表达水平。用MTT比色法评估细胞增殖情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡及周期分布情况。结果与癌旁组织相比,miR－503在结直肠癌组织及细胞系中表达显著降低（P＜0.05）。 miR－503在结直肠癌细胞中的过表达明显抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡（P＜0.05）。结论 miR－503在结直肠癌组织及细胞系中的表达明显降低。此外,miR－503对结直肠癌细胞起到抑制增殖、诱导凋亡的作用。     

CaMKⅡ_γ通过上调NF-κB信号通路促进结直肠癌细胞的增殖

目的研究钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱγ(CaMKⅡγ)体内外促进结直肠癌细胞增殖的作用并探讨其机制。方法半定量RT-PCR法测定5种结直肠癌细胞系及20对结直肠癌组织及其配对癌旁组织中CaMKⅡγmRNA表达水平。用慢病毒载体pLenti6.3-MCS-IRES2-eGFP制备慢病毒颗粒Lenti-CaMKⅡγ,转染SW620细胞,建立稳定表达CaMKⅡγ结直肠癌细胞系SW620-CaMKⅡγ。测定SW620-CaMKⅡγ细胞的生长曲线及克隆形成能力。Western blotting检测SW620-CaMKⅡγ细胞IKKα、IKKβ、IKKγ、p-IKKα/β、P-IκB和IκB表达水平。免疫荧光检测SW620-CaMKⅡγ细胞NF-κB p65核浆及核内的表达情况。检测裸鼠移植瘤的瘤体积。结果 CaMKⅡγ在5种结直肠癌细胞系中的mRNA水平均高,在20对组织中有18对癌组织mRNA水平比癌旁组织高。慢病毒转染的CaMKⅡγ过表达细胞系增殖能力增强(P<0.05)。CaMKⅡγ能够激活细胞内的NF-κB信号通路,促进NF-κ3 p65进核。CaMKⅡγ过表达细胞的裸鼠移植瘤瘤体积大于阴性对照(P<0.05)。结论 CaMKⅡγ体内外均能促进结直肠癌细胞的增殖,并激活NF-κB通路。     

非对称RNA干扰抑制CDCA5基因表达对结直肠癌细胞增殖的影响

【摘要】 目的 探讨非对称抑制CDCA5基因的表达对人结直肠癌细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 收集2016年～2017年南充市中心医院行根治性手术的20例结直肠癌患者的癌组织标本及匹配的癌旁正常组织, Western blot检测结直肠癌组织和癌旁正常组织中CDCA5蛋白的表达。同时,Western blot检测结直肠癌细胞系HT29、HCT116及SW480细胞中CDCA5蛋白的表达,选择表达水平最高的细胞系进行后续研究。设计针对CDCA5基因的siRNA,阴性对照siRNA NC及三条长短不同的非对称小干扰RNA,即aiRNA（15/21）、aiRNA（16/21）和aiRNA（17/21）。PCR检测各组对CDCA5基因的沉默效果。MTT检测siRNA、siRNA NC和aiRNA（15/21）组的细胞增殖能力,流式细胞仪检测各组细胞周期的变化。结果 CDCA5在结直肠癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织（P＜005）。人结直肠癌细胞系HCT116中CDCA5蛋白的表达明显高于HT29和SW480细胞系（P＜005）。aiRNA（15/21）在各组中有最强的基因沉默效果（P＜005）。与siRNA和siRNA NC组相比,aiRNA（15/21）组细胞增殖能力低于其他两组,处于细胞周期G2/M期的细胞数量显著多于其他两组（均P＜005）。结论 CDCA5可能是治疗结直肠癌的一个重要靶点,基于CDCA5基因的特异性非对称aiRNA（15/21）干扰在沉默效率上优于传统siRNA。     

Galectin-3在结直肠癌中的表达及其对肠癌细胞株增殖和凋亡的影响

目的:探讨半乳糖凝集素-3(Galectin-3)在结直肠癌中的表达及其对肠癌细胞株SW480增殖和凋亡的影响。方法:采用Semi-quantitative RT-PCR和组织芯片免疫组化染色技术检测结直肠癌组织、淋巴结转移癌组织和邻近正常肠粘膜组织中Galectin-3 mRNA和蛋白的表达情况。构建Lv-Galectin-3-EGFP表达载体和psi Lv-U6-Galectin-3 RNA干扰载体,分别转染SW480细胞,分别利用CCK-8试剂盒和Hoechst染色法观察Galectin-3的表达状态对肠癌细胞株增殖和凋亡的影响。结果:Galectin-3在结直肠癌组织和淋巴结转移癌组织中的表达水平显著高于邻近正常肠粘膜组织(P<0.01)。Galectin-3与结直肠癌患者的临床分期、肿瘤分化程度及淋巴结转移等参数相关。体外细胞实验显示,上调Galectin-3表达可以促进肠癌细胞株的增殖,抑制其凋亡。结论:Galectin-3的表达上调参与结直肠癌的进展。     

Lnc-CRCMSL在结直肠癌中的表达及对癌细胞生长的影响

目的探讨长链非编码RNA-CRCMSL(Lnc-CRCMSL)在结直肠癌组织和癌细胞中的表达及对癌细胞生长的影响。方法采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测Lnc-CRCMSL在结肠癌组织和癌旁正常组织、正常结肠上皮细胞及结直肠癌细胞中的表达特点。建立SW480耐药株SW480/DDP,并通过基因干扰实验过表达其Lnc-CRCMSL水平,采用流式细胞术测定细胞的凋亡率,CCK-8测定细胞的增殖活力,划痕愈合实验测定细胞的迁移能力,Transwell测定细胞的侵袭能力,免疫蛋白印迹实验测定基质金属蛋白酶2(MMP2)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的蛋白表达。结果Lnc-CRCMSL在结直肠癌组织的表达低于癌旁正常组织,在Ⅱ期、Ⅲ期结直肠癌组织中的表达低于Ⅰ期,且在结直肠癌细胞中的表达量低于正常结肠上皮细胞(P＜0.05)。过表达Lnc-CRCMSL提高了SW480/DDP的凋亡率,抑制了SW480/DDP的增殖、迁移和侵袭活力(P＜0.05)。同时,过表达Lnc-CRCMSL降低了SW480/DDP的MMP2和MMP9表达水平(P＜0.05)。结论Lnc-CRCMSL在结直肠癌中表达异常,对结直肠癌细胞的增殖、凋亡、迁移及侵袭行为具有调控作用。     

NRAGE对结直肠癌细胞增殖和侵袭能力的作用机制

目的 研究神经营养蛋白受体相互作用的同源物(NRAGE)对结直肠癌(CRC)细胞增殖和侵袭能力的作用机制。方法 选取84例CRC患者的临床病理材料,应用荧光定量PCR(qPCR)及免疫印迹实验检测CRC组织及癌旁正常组织中NRAGE的表达,分析癌组织中NRAGE的表达与临床病理特征的关系。RT-PCR及免疫印迹实验检测CRC肿瘤细胞系HT29、SW480、SW620、LOVO及结直肠正常细胞系FHC中NRAGE mRNA及蛋白表达。MTT实验、Transwell迁移实验观察NC组、过表达NRAGE组及NRAGE敲低组肿瘤细胞增殖及迁移能力。qPCR及免疫印迹实验检测各组AKT、p-AKT、ERK1/2、p-ERK1/2、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的表达差异。结果 与癌旁组织相比,CRC癌组织中NRAGE的mRNA及蛋白表达明显升高。癌组织中NRAGE的表达与肿瘤分期、远处转移及淋巴结转移有关(P<0.05)。与FHC细胞相比,CRC肿瘤细胞系HT29、SW480、SW620、LOVO细胞中NRAGE的mRNA及蛋白表达较高(P<0.05)。...     

干扰FUT8的表达抑制结直肠癌细胞增殖和侵袭能力的作用及机制

目的研究岩藻糖基转移酶8 (fucosyltransferase 8,FUT8)对结直肠癌细胞增殖和转移能力的影响,并探讨其发挥作用的分子机制。方法采用基因表达谱数据动态分析(GEPIA)数据库分析FUT8在结直肠癌组织中的表达水平;常规培养结直肠癌细胞系SW480,分为si-NC组和si-FUT8组,分别转染NC si RNA和FUT8 si RNA;Western blot检测FUT8 si RNA干扰效果; CCK8检测干扰FUT8对SW480细胞增殖能力的影响; Boyden小室检测干扰FUT8对SW480细胞侵袭能力的影响; Akt信号通路激活剂SC79分别处理si-NC组和si-FUT8组SW480细胞,分为si-NC组、si-FUT8组、si-NC+SC79组和si-FUT8+SC79组,CCK8和Boyden小室分别检测各组细胞的增殖和侵袭能力; Western blot检测各组细胞中AKT、p AKT和β-catenin蛋白的表达。结果 GEPIA数据库分析结果显示FUT8在结直肠癌组织中的表达显著高于在正常结直肠组织中的表达。与si-NC组相比,si-FUT8组细胞中FUT8的表达降低(P0.05)。与si-NC组和si-NC+SC79组相比,si-FUT8组和si-NC+SC79组细胞的增殖和侵袭能力均降低,细胞中p AKT和β-catenin蛋白的表达减少;与si-FUT8组相比,si-NC+SC79组细胞的增殖和侵袭能力均增加,细胞中p AKT和β-catenin蛋白的表达增加。结论干扰FUT8可能通过调控AKT/β-catenin信号通路抑制结直肠癌细胞增殖和侵袭能力。     

miR-106a对人结直肠癌SW480细胞增殖和侵袭能力的影响

目的：：研究 microRNA-106a(miR-106a)对低转移性人结直肠癌 SW480细胞增殖和侵袭等恶性生物学行为的影响。方法：采用实时荧光定量 PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测20对结直肠癌组织及其癌旁组织中 miR-106a的表达,将 miR-106a mimics 转染到 SW480细胞中,用 qRT-PCR法检测 miR-106a的表达水平,并用CCK8实验、克隆形成实验和划痕法检测 SW480细胞的增殖、克隆形成以及体外迁移能力。结果：与癌旁组织相比较,结直肠癌组织中 miR-106 a 的表达水平升高(t=2.05,P=0.047);与mimics control转染组相比,miR-106a mimcs转染组miR-106a的表达水平显著升高(t=13.25,P=0.000),且细胞活力(72 h,t=4.52,P=0.000;96 h,t=6.17,P=0.000)和细胞克隆数明显升高(t=5.69,P=0.005),以及伤口愈合能力升高(48 h,t=5.44,P=0.032)。结论：过表达 miR-106a可显著促进低转移的人结直肠癌SW480细胞增殖和迁移能力,为结直肠癌的治疗提供了潜在的策略。     

抑制USP22基因对人结直肠癌细胞增殖的影响

目的 利用RNA干扰技术探讨泛素特异性肽酶22（USP22）对人结直肠癌细胞增殖的影响。方法 免疫荧光检测结直肠癌组织中USP22的表达;Western blotting检测体外培养的HCT-116、SW480、HC-29结直肠癌细胞株中USP22的表达,筛选出表达量最高的细胞作为研究细胞。设计、合成针对USP22特异性siRNA,同时设置阴性对照siRNA,利用脂质体转染结直肠癌细胞后,Western blotting检测siRNA抑制效率;通过MTT法检测细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞的周期及凋亡;Western blotting检测周期相关蛋白CyclinB1、p21、p53、CDK2的表达。结果 结直肠癌组织中USP22表达量与癌旁组织比较,差异有统计学意义（P?<0.05）,结直肠癌组织中USP22表达量升高。SW480细胞中USP22的表达量最高,因此作为靶细胞进行后续研究。与对照组比较,USP22 siRNA能够降低USP22的表达（P?<0.05）。USP22抑制后,与对照组比较,能够抑制SW480细胞的增殖,促使SW480细胞停滞于G0/G1期,抑制细胞周期进程,增加细胞凋亡率（P?<0.05）,进而抑制细胞增殖（P?<0.05）;同时,与对照组比较,CyclinB1、CDK2的表达量降低（P?<0.05）,p53和p21的表达量升高（P?<0.05）。结论 USP22抑制后,能够抑制结直肠癌细胞的增殖,其机制可能与抑制细胞周期进程、促进细胞凋亡有关。     

长链非编码RNAH19促进结直肠癌细胞株增殖的研究

目的 研究长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA) 家族分子母源性印迹基因19 转录因子(H19 )在结直肠癌组织及细胞株中的表达情况及其对人结直肠癌SW620细胞增殖的影响。方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测20例结直肠癌组织及其癌旁组织,以及结直肠癌细胞株SW480、HCT116、SW620和正常结直肠上皮NCM460细胞中H19的表达。结直肠癌SW620细胞分别转染H19 siRNA(si-H19 组) 和阴性对照序列(si-NC组) ,分别采用流式细胞技术、细胞克隆形成实验和CCK8检测两组细胞的增殖情况。qRT-PCR和Western blot检测两组细胞G₁/S-特异性周期蛋白-D1(CyclinD1)和细胞周期素依赖激酶（cyclin dependent kinase 4, CDK4）的表达情况。结果 与癌旁组织和正常结直肠上皮NCM460细胞相比较,结直肠癌组织和细胞株中H19的表达水平升高（ P＜0.05);si-H19组细胞H19表达水平低于si-NC组,且细胞活力和细胞克隆数均低于si-NC组,以上差异均有统计学意义（ P＜0.05);同时,相较于si-NC组,si-H19组CyclinD1和CDK4基因和蛋白的表达受到了明显抑制（ P＜0.05)。结论 结直肠癌组织及细胞株中H19 呈高表达,沉默H19 表达能明显抑制结直肠癌细胞的增殖能力,为结直肠癌的靶向治疗提供了潜在策略。     

Rictor和mTOR在结直肠癌中的表达及意义

目的探讨Rictor蛋白和mTOR蛋白在结直肠癌中的表达及临床意义。方法采用免疫荧光和Western blotting技术检测 HCT116、SW480、LoVo、HCoEpiC这4种细胞中Rictor和mTOR的表达情况。采用免疫组织化学法检测62例手术切除结直肠 癌及癌旁正常组织中Rictor蛋白的表达情况,比较Rictor蛋白在癌及癌旁正常组织间表达水平的差异性与临床病理特征之间的 关系;Kaplan-Meier法分析Rictor表达与结直肠癌患者总生存率的关系。结果大肠癌细胞中Rictor和mTOR的表达水平高于 人正常结肠上皮细胞HCoEpiC;大肠癌组织中Rictor的表达水平显著高于癌旁正常组织（P<0.05）;Rictor蛋白的表达与结直肠 癌组织Dukes分期及淋巴结转移有关（P<0.05）,与其他临床病理参数尚不能认为有相关性（P>0.05）;Rictor表达阳性患者的总 体生存期低于阴性患者。结论Rictor蛋白在大肠癌中的过表达与结直肠癌的发生发展有关,且Rictor蛋白的表达水平与患者 的预后密切相关,可作为判断大肠癌预后的潜在指标。     

姜黄素下调结直肠癌细胞Notch1信号通路研究

目的 检测Notch1信号通路中Notch intracellular domain蛋白(NICD1蛋白)在大肠腺癌组织中表达的情况;探讨姜黄素对人结肠癌细胞SW480及HT29细胞中Notch1信号通路的影响.方法 二步法免疫组化检测40例结直肠癌、31例癌旁肠组织石蜡切片中Notch1 intracellular domain蛋白(NICD1)的表达情况,通过对比人结肠直肠癌与癌旁正常肠黏膜细胞中蛋白阳性表达率判断NICD1蛋白与人结直肠癌的关系;不同浓度姜黄素(0、7.5、15、30、60 μmol/L)分别处理结肠腺癌细胞SW480和HT29细胞24 h和48 h后,Western blot法检测细胞内NICD1、Notch1及HES-1蛋白的表达情况.结果 NICD1在人结直肠癌组织中均表达,阳性率100％,癌旁肠组织中部分表达,阳性率为90.3％,但癌组织表达强度明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P＜0.05);Western blot结果示姜黄素能下调人结肠腺癌细胞SW480及HT29细胞中NICD1、Notch1及HES-1蛋白的表达,有时间和剂量依赖.结论 Notch1信号通路中NICD1蛋白在结直肠癌组织中的过度表达可能与肿瘤的发生发展相关,其阳性表达的部位可能与癌组织的病理分期有关;姜黄素可能通过调控Notch1信号通路抑制结直肠癌细胞增殖.     

泛素结合酶UBE2T在结直肠癌中的表达及其生物学作用

目的 探索泛素结合酶UBE2T在结直肠癌的表达及其生物学作用。 方法 运用免疫组化法检测78对结直肠癌和对应癌旁正常组织中UBE2T的蛋白表达水平。脂质体转染法将UBE2T-siRNA及对照NC-siRNA转染结直肠癌细胞SW480后，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)及平板克隆实验分析增殖情况；流式细胞仪检测细胞周期情况；Western blotting检测细胞中UBE2T、cyclin D1、cyclin E等蛋白表达情况。 结果 与正常结直肠组织相比，结直肠癌组织中UBE2T表达水平增高(P<0.001)。癌组织中UBE2T异常高表达与不良病理指标相关:肿瘤大小(P=0.014)、组织分化程度(P=0.005)、浸润深度(P=0.033)和TNM分期(P=0.014)。CCK-8增殖实验和平板克隆形成实验都提示沉默UBE2T表达能显著抑制结直肠癌细胞的增殖。沉默UBE2T抑制周期蛋白cyclin D1和cyclin E的表达，促进结直肠癌细胞发生G₁/S期细胞周期阻滞。 结论 UBE2T在结直肠癌组织中异常高表达，并与不良病理指标相关。沉默UBE2T通过促进G₁/S期细胞周期阻滞抑制结直肠癌细胞的增殖。      

结直肠癌中同源盒基因B9的表达及临床意义

目的通过检测结直肠癌组织中同源盒基因B9(HOXB9)基因的表达模式,探讨HOXB9基因的表达与结直肠癌患者临床病理特征的相关联系。方法应用RT-PCR、Real-time PCR及Western blot方法分别检测HOXB9在不同转移潜能的结直肠癌细胞系、8例结直肠癌及相应癌旁组织中mRNA和蛋白表达水平的表达差异;采用免疫组化方法检测HOXB9在136例结直肠癌石蜡组织标本中的表达特点,分析其与结直肠癌临床病理特征的相关联系及意义。结果 HOXB9基因在具有较高转移潜能的结直肠癌细胞系SW620、Lovo及M5中表达明显上调;在8例结直肠癌组织中HOXB9基因在mRNA及蛋白的表达明显高于相应癌旁正常组织;免疫组化的检测结果则显示在结直肠癌组织中HOXB9蛋白表达的阳性率为83.1%(113/136),强阳性率约为58.8%(80/136),HOXB9蛋白在结直肠癌组织中的表达水平高于相应癌旁组织;统计学分析结果表明,HOXB9蛋白的高表达与结直肠癌临床分期、T分期、淋巴结转移及远处转移密切相关,而与性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小及分化程度无显著相关性。结论 HOXB9在结直肠癌组织中的表达明显上调,其上调表达与结直肠癌的临床进展关系密切,提示HOXB9在肿瘤发生和转移中可能承担着关键作用。     

敲低lncRNA FOXCUT调控FOXC1基因对结直肠癌细胞增殖的影响

目的研究敲低长链非编码RNA(lncRNA)FOXCUT调控叉头框C1(FOXC1)基因对结直肠癌细胞增殖的影响。方法培养结肠癌细胞株HT29、SW480、LoVo及正常肠上皮细胞HIEC并检测lncRNA FOXCUT、FOXC1的表达水平;培养SW480细胞并转染lncRNA FOXCUT的siRNA、FOXC1质粒,检测细胞增殖活力OD490及lncRNA FOXCUT、FOXC1、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、c-myc基因(c-myc)的表达水平。结果 HT29、SW480、LoVo细胞中lncRNA FOXCUT、FOXC1的表达水平均高于HIEC细胞(P0.05),其中SW480细胞中lncRNA FOXCUT、FOXC1表达上调最显著;敲低lncRNA FOXCUT后,SW480细胞的OD490水平、lncRNA FOXCUT、FOXC1、cyclinD1、c-myc的表达水平均降低(P0.05);过表达FOXC1后,敲低lncRNA FOXCUT降低SW480细胞OD490水平及FOXC1、cyclinD1、c-myc表达的作用被逆转。结论敲低lncRNA FOXCUT抑制结直肠癌细胞增殖,该作用与抑制FOXC1表达有关。     

趋化因子CCL19在结直肠癌中的表达和作用

目的 观察趋化因子CCL19在结直肠癌组织中的表达,探讨其对结直肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力的影响。 方法 收集确诊为结直肠恶性肿瘤并手术切除患者（n=85）的肿瘤组织及癌旁正常组织,运用实时定量PCR和组织微阵列免疫组化技术检测CCL19的表达水平;以实时定量PCR、蛋白质印迹技术筛选高表达CCL19受体CCR7的人结直肠癌细胞株SW620细胞作为研究对象,并给予重组人CCL19（rh-CCL19）刺激,通过细胞增殖实验、划痕实验、Transwell实验来检测SW620细胞的增殖、迁移和侵袭能力的变化。 结果 结直肠癌组织中的CCL19表达要明显低于癌旁正常组织（P<0.05）,且CCL19表达量与肿瘤大小和浸润深度有关（P<0.01）。在CCR7高表达的SW620细胞中,加入rh-CCL19后,其细胞增殖、迁移及侵袭能力下降（P<0.05）。 结论 CCL19在结直肠癌组织中的表达量低于癌旁正常组织,且与肿瘤大小和浸润深度有关;CCL19可抑制人结直肠癌细胞株SW620细胞增殖、迁移和侵袭能力,提示CCL19具有抑制结直肠癌的作用。     

miR-30b-5p抑制胆固醇合成和结直肠癌细胞增殖

目的 探索 miR-30b-5p 在结直肠癌中的作用及机制.方法 收集结直肠癌患者的癌及癌旁组织、患者及正常人血清,提取RNA,实时荧光定量 PCR检测 miR-30b-5p表达.将miR-30b-5p的inhibitors转入HT-29 细胞中;将miR-30b-5p的mimics转入 HCT-116 细胞中;CCK-8 试剂盒检测细胞活力;胆固醇试剂盒检测细胞中胆固醇含量;实时荧光定量PCR检测低密度脂蛋白受体( LDLR)的表达,Western blot检测 LDLR 蛋白表达;在转入 miR-30b-5p inhibitors 的HT-29细胞中应用siRNA敲低LDLR,检测LDLR蛋白表达、细胞胆固醇含量及细胞增殖.结果 与正常人相比,miR-30b-5p在结直肠癌患者组织及血清中表达降低,且其在结直肠癌细胞系HT-29、Caco-2及HCT-116中的表达量低于正常结直肠细胞系NCM460;在HT-29细胞中转入miR-30b-5p的inhibitors,细胞增殖加快,胆固醇含量增加,LDLR表达上调;在HCT-116细胞中转入miR-30b-5p的mimics,细胞增殖减慢,胆固醇降低,LDLR表达被抑制;此外,在miR-30b-5p沉默的HT-29细胞中敲低LDLR,胆固醇含量减少,细胞增殖减慢.结论 miR-30b-5p在结直肠癌中是一种抑癌microRNA,它通过抑制LDLR和胆固醇合成抑制结直肠癌细胞增殖.     

SOCS3对结肠癌增殖和侵袭的调控机制

目的探讨细胞因子信号抑制子3（SOCS3）对结肠癌增殖与侵袭能力的调控机制。方法收集我院2014年7月~2017年5 月进行肿瘤治疗并经确诊的80例结肠癌患者的癌组织（n=80）和癌旁组织标本（n=80）。通过Western blot分析SOCS3在组织中 表达情况。复苏结肠癌细胞系SW480,利用lipo3000转染建SOCS3的过表达质粒;利用小干扰RNA（siRNA）技术转染结肠癌 细胞株敲低SOCS3表达。应用CCK-8检测SOCS3基因对结肠癌细胞增殖的影响;采用Transwell试验测定SOCS3基因对于 SW480侵袭能力的作用。通过去甲基化及IL-6处理SW480观察对于SOCS3表达的影响,并检测处理之后对SW480增殖、侵袭 的作用。结果结肠癌组织中SOCS3表达量均低于癌旁组织;过表达SOCS3后抑制SW480细胞增殖和侵袭,而敲减SOCS3后 促进其增殖和侵袭;去甲基化处理SW480上调了SOCS3的表达,SW480增殖和侵袭能力受到抑制;IL-6处理SW480后降低了 SOCS3的表达,SW480细胞增殖和侵袭能力得以增强。结论SOCS3参与结肠癌的发生发展,是结肠癌治疗的潜在靶点。在结 肠癌患者中,SOCS3低表达可能与甲基化有关。     

Wnt拮抗因子SFRP1在结直肠癌发病机制中的作用

目的 检测结直肠癌中Wnt拮抗因子分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)基因的甲基化及表达状态,探讨SFRP1在结直肠癌发病中的作用.方法 选自中国医科大学盛京医院的结直肠癌组织标本及相应的癌旁组织标本各35例,利用逆转录聚合酶链反应( RT-PCR)和即时定量聚合酶链反应(real-time PCR)技术检测在结直肠癌组织和相应的癌旁组织中SFRP1的表达状态.利用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP-PCR)技术检测结直肠癌组织和相应的癌旁组织中SFRP1的甲基化状态.利用RT-PCR和Western blot技术检测结直肠癌细胞中SFRP1的表达状态.结果 SFRP1 mRNA的表达水平在结直肠癌组织中明显低于癌旁组织(P＜0.01).SFRP1的甲基化频率结直肠癌组织(68.6％)明显高于癌旁组织(11.4％)( x2=21.49,P＜0.01).在结肠癌细胞HCT116、SW480和SW620中SFRP1未见表达,SFRP1存在甲基化,而在HT-29中SFRP1有表达,SFRP1无甲基化.对HCT116、SW480和SW620使用去甲基化试剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(DAC)处理后,SFRP1出现表达.结论 SFRP1甲基化是引起SFRP1在结直肠癌中表达下调的重要原因之一.SFRP1甲基化及其所致表达下调可能在部分结直肠癌的发病过程中起重要作用.     

环氧合酶-2抑制剂调控Stat5信号转导通路抑制结肠癌细胞增殖的分子机制

目的观察选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂NS-398对结肠癌细胞系SW480中Stats与PPAR8信号转导通路的影响,以期初步阐明选择性COX-2抑制剂抗结直肠癌非COX-2依赖性的作用机制。方法应用RT—PCR检测结肠癌细胞系SW480中COX-2 mRNA表达水平,用选择性COX-2抑制剂NS-398处理结肠癌细胞系SW480,Western印迹检测Stats与PPAR8信号转导通路成员表达,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖状态,流式细胞技术检测细胞周期与凋亡情况。结果结肠癌细胞系SW480中未检测到COX-2 mRNA表达,NS-398（75μmol／L）作用于SW480细胞72h后,G1期细胞比率由31．2％上升至40．6％,S期细胞比率由52．8％下降至41．2％,细胞增殖受抑制。Stats、PPAR8、细胞周期蛋白D1与Bcl—x1表达水平随NS-398作用时间延长而下降。结论选择性COX-2抑制剂NS-398可能通过非COX-2依赖途径影响结肠癌细胞的增殖。