小鼠成纤维细胞激活蛋白多克隆抗体的制备及应用简

目的：表达和纯化小鼠成纤维细胞激活蛋白α（FAPα）二肽基肽酶催化核心序列（FAPαc）融合蛋白（His-FAPαc）,制备兔抗小鼠FAPα多克隆抗体,并用此抗体检测FAPα在肿瘤细胞和成纤维细胞以及肿瘤间质中的表达情况。方法：将本实验室构建好的原核表达质粒pET28a（＋）-FAPαc转化大肠杆菌BL21,IPTG 诱导表达目的蛋白His-FAPαc;用纯化的目的蛋白免疫新西兰大白兔,获得兔抗小鼠FAPα多克隆抗体;用免疫印迹法和酶联免疫吸附试验检测该多克隆抗体与重组蛋白His-FAPαc 的反应性及检测该多克隆抗体的效价,并用该抗体检测FAPα在肿瘤细胞和成纤维细胞以及肿瘤间质中的表达情况。结果：His-FAPαc融合蛋白可与兔抗小鼠FAPα多克隆抗体特异性结合;该多克隆抗体的效价高,特异性好,并且能检测小鼠胚胎成纤维细胞（mouse embryo fibroblast cells,MEF）及结肠癌和乳腺癌的间质细胞高表达FAPα的全长序列蛋白。结论：制备的兔抗小鼠FAPα多克隆抗体能够有效地识别小鼠胚胎成纤维细胞和肿瘤间质细胞表达的FAPα蛋白,为研究FAPα在肿瘤的发生、发展及转移中的作用和以FAPα为靶点而开展的的抗肿瘤研究奠定基础。     

IDO启动序列GAS和ISRE荧光素酶报告基因载体构建及其活性检测

目的构建pGL3-Enhancer-ISRE4和pGL3-Enhancer-GAS两个荧光素酶报告基因载体,并对其进行生物活性鉴定。方法通过人工合成调控吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）表达的启动序列ISRE4（4个串联的ISRE序列）和GAS7（7个串联的GAS序列）,与pGL3-Enhancer连接成重组体pGL3-Enhancer-ISRE4和pGL3-Enhancer-GAS7,通过转化扩增,筛选出阳性克隆,并通过酶切、测序及生物学活性检测鉴定构建好的荧光素酶报告基因载体。结果成功地构建了pGL3-Enhancer-ISRE4和pGL3-Enhancer-GAS7两个荧光素酶报告基因载体,在IFN-γ的诱导下,能启动细胞内荧光素酶的表达。结论 pGL3-Enhancer-ISRE4和pGL3-Enhancer-GAS7的荧光素酶报告基因载体的成功构建为研究IDO蛋白的表达调控机制和以IDO为靶标的抗肿瘤免疫耐受药物快速高通量的筛选提供了重要的研究工具。     

小分子酪氨酸激酶抑制剂安罗替尼对鼻咽癌细胞的抗肿瘤活性及其机制

目的 探索小分子酪氨酸激酶抑制剂安罗替尼对鼻咽癌细胞的抗肿瘤作用及其潜在机制,为临床应用安罗替尼治疗鼻咽癌提供可靠的实验证据.方法 通过CCK-8实验和克隆形成实验检测不同剂量梯度安罗替尼对鼻咽癌细胞6-10B和SUNE-1的细胞活性、增殖能力的影响;通过Transwell和划痕实验分析安罗替尼对鼻咽癌细胞侵袭及迁移能...     

ERCP训练模型的现况与问题及未来发展设想

内镜逆行胰胆管造影术（ERCP）是临床上常用的胆胰系统疾病的诊断方法和治疗手段。为了缩短训练期限和减少因操作问题产生的手术并发症的发生,操作者需要通过训练模型大量训练才能达到能够独立完成1次手术的水平。在此,笔者总结分析了目前国内外投入使用的模型类型的现状与存在的问题：机械模拟操作模型和计算机模拟模型具有灵活性、可视性等特点,适合初学者了解操作流程,但真实性不如其他模型;活体动物模型具有可以进行完整的操作训练和并发症的处理的优点,但价格相对昂贵,且没有完全匹配人体结构适合训练的动物品种;离体动物模型价格低廉,具有较好真实性,适用于进阶学习与初步开展并发症的应对训练。最后,笔者根据不同模型的特点,创新性提出一种阶段性联合ERCP训练方案—五阶段法,并提出ERCP训练模型发展迭代的新方向。     

辅助生殖技术后致异位妊娠的临床分析

异位妊娠(EP)是最常见的妇科急腹症,也是孕产妇死亡的重要原因,自然妊娠中其发生率约为1%[1]。研究认为,辅助生殖技术(ART)周期中异位妊娠的发生率为2.1%~8.6%,高于自然妊娠,而因输卵管因素不孕的女性通过ART妊娠的异位妊娠发生率可能高达11%[2]。宫内外同时妊娠(HP)在自然受孕条件下很少发生[1/(4000~10000)],但在诱发排卵或体外受精(IVF)治疗中发生率要高得多[3]。本研究对我院近12年来ART后致EP并行手术治疗的49例患者进行回顾性分     

丁酸钠下调CNE2鼻咽癌细胞IFN-γ诱导的吲哚胺2,3双加氧酶表达并促进其乙酰化和泛素化

目的探讨丁酸钠(NaB)对CNE2鼻咽癌细胞γ干扰素(IFN-γ)诱导的吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)表达调控及分子机制。方法采用Western blot法、免疫共沉淀等方法检测鼻咽癌细胞内IDO的表达及乙酰化、泛素化修饰情况。结果与单独加IFN-γ对照组相比,Western blot结果显示,IFN-γ和Na B联合处理的CNE2细胞IDO蛋白表达增加;免疫共沉淀实验结果表明,联合处理CNE2细胞乙酰化IDO水平和泛素化IDO水平均明显增高;与NaB和IFN-γ联合处理的CNE2细胞相比,NaB、IFN-γ和硼替佐米(bortezomib)联合处理的CNE2细胞的IDO表达量增加。结论 NaB能以剂量依赖性的方式下调鼻咽癌细胞内IFN-γ诱导的IDO表达,IFN-γ和Na B联合处理促进IDO的乙酰化和泛素化。     

姜黄素下调结直肠癌细胞Notch1信号通路研究

目的 检测Notch1信号通路中Notch intracellular domain蛋白(NICD1蛋白)在大肠腺癌组织中表达的情况;探讨姜黄素对人结肠癌细胞SW480及HT29细胞中Notch1信号通路的影响.方法 二步法免疫组化检测40例结直肠癌、31例癌旁肠组织石蜡切片中Notch1 intracellular domain蛋白(NICD1)的表达情况,通过对比人结肠直肠癌与癌旁正常肠黏膜细胞中蛋白阳性表达率判断NICD1蛋白与人结直肠癌的关系;不同浓度姜黄素(0、7.5、15、30、60 μmol/L)分别处理结肠腺癌细胞SW480和HT29细胞24 h和48 h后,Western blot法检测细胞内NICD1、Notch1及HES-1蛋白的表达情况.结果 NICD1在人结直肠癌组织中均表达,阳性率100％,癌旁肠组织中部分表达,阳性率为90.3％,但癌组织表达强度明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P＜0.05);Western blot结果示姜黄素能下调人结肠腺癌细胞SW480及HT29细胞中NICD1、Notch1及HES-1蛋白的表达,有时间和剂量依赖.结论 Notch1信号通路中NICD1蛋白在结直肠癌组织中的过度表达可能与肿瘤的发生发展相关,其阳性表达的部位可能与癌组织的病理分期有关;姜黄素可能通过调控Notch1信号通路抑制结直肠癌细胞增殖.     

两性畸形的诊断及治疗(附38例报告)

目的探讨最近30年两性畸形诊治的变化,以减少此类疾病的误诊和误治。方法收集两性畸形患者38例,其中1999年4月～2012年2月收治的7例为实验组,1979年1月～1999年3月收治的31例为对照组。两性畸形的诊断,对照组采用口腔黏膜染色质、尿17-酮类固醇和17-羟类固醇检测,实验组采用外周血染色体、雄激素及皮质醇检测。两性畸形的治疗,对照组采用开腹探查术、切除发育不良性腺、行植皮法阴道成型,实验组采用腹腔镜诊断及治疗。比较两组确诊年龄、诊治方法及治疗效果的差异。结果两性畸形确诊年龄,实验组为(10.71±8.46)岁,对照组为(14.10±5.63)岁,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。先天性肾上腺皮质增生实验组3例,仅1例行阴蒂切除术,对照组10例均行阴蒂切除术,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。实验组镜下切除发育不良性腺腹膜法阴道成形术的疗效优于对照组开腹探查植皮法阴道成型术。结论外周血雄激素和染色体检测方法的改进,使两性畸形确诊年龄提前,阴蒂切除术病例减少。腹腔镜治疗两性畸形较传统开腹手术有明显优势。     

姜黄素抗黑色素瘤分子机制研究进展

黑色素瘤是源于皮肤,粘膜,眼和中枢神经系统色素沉着区域的黑色素细胞的恶性肿瘤,虽然其发病率不高,但恶性程度极高,并且瘤细胞很早就能发生侵袭与转移,从而使患者预后很差。目前黑色素瘤的治疗方式仍以外科手术治疗为主,联合放疗、化疗、中药的综合治疗方案,然而有关黑色素瘤的中医中药治疗方面的研究尚处于起步阶段。最新研究表明,姜科植物属姜黄、郁金、莪术等的活性成分之一姜黄素具有广泛的抗癌、抗炎、抗氧化等药理特性,特别是姜黄素在黑色瘤的预防和治疗中起到不容忽视的作用,姜黄素主要通过抑制黑色素瘤细胞的增殖,促进其凋亡等途径参与黑色素瘤细胞的消亡。本文主要针对姜黄素抗黑色素瘤及其分子机制研究进展作一综述。     

qRT-PCR检测结核分枝杆菌毒素-抗毒素系统mazE F的表达

目的探讨结核分枝杆菌毒素基因mazF3,6,9及抗毒素基因mazE3,6,9的表达差异。方法运用实时定量PCR检测结核分枝杆菌单耐药株20株,耐多药株20株和标准株H37Rv毒素基因mazF3,6,9及抗毒素基因mazE3,6,9的表达水平;组间基因表达水平的差异用one-way ANOVA进行统计分析。结果与对照株相比较,毒素基因mazF6,9在单耐药组(11.151 9±22.317 21;8.430 6±17.978 97)及耐多药组(4.601 6±1.290 18;6.962 7±6.929 48)表达均上调且差异有统计学意义(P0.01),mazF3基因在单耐药组及耐多药组差异无统计学意义(P0.05),抗毒素基因mazE3在单耐药(0.360 6±0.125 27)及耐多药组(0.201 6±0.165 42)中表达均下调,差异有统计学意义(P0.01),mazE6均无统计学意义,mazE9只有在耐多药组(0.398 9±0.376 79)中表达下调,差异有统计学意义,(P0.01)。结论毒素基因mazF6,9抗毒素基因mazE3,9可能参与了结核分枝杆菌的耐药形成,具体机制尚待进一步的研究。