反义P38cDNA抑制胆红素诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡

目的：观察P38激酶特异性抑制剂SB203580及反义P38激酶cDNA对胆红素诱导人神经母细囊瘤SH—SY5Y细胞凋亡的影响，探讨P38激酶信号转导通路在胆红素诱导SH—SY5Y细胞凋亡中的作用及高胆红素血症损伤中枢神经细胞的分子机制及在听神经病发病中的作用。方法：分别经SB203580和二甲基亚砜预处理的SH—SY5Y细胞在胆红素作用3h和5h后，在倒置光显微镜下观察细胞形态的变化及存活情况；流式细胞仪检测凋亡细胞百分率。采用脂质体法将含人反义P38cDNA的真核表达载体pcDNA3．O—antiP38导入SH—SYSY细胞，建立稳定低表达P38蛋白的细胞株，经Western blotting鉴定后命名为SH—SY5Y—antiP38，而转染空载体pcDNA3．0的SH—SY5Y细胞株则命名为SH—SY5Y细胞株则命名为SH-SY5Y-pcDNA3.0；SH—SY5Y—antiP38细胞和SH-SY5Y-pcDNA3．O细胞分别经胆红素作用3h和5h，在倒置光显微镜下观察细胞形态的变化及存活情况；流式细胞仪检测凋亡细胞百分率。结果：在0．02g／L胆红素作用下，流式细胞仪显示与对照相比SB203580预处理的SH—SY5Y细胞在胆红素作用3h后，其凋亡细胞由19．4％下降到12．1％，5h后由66．2％降到39．3％；与SH—SY5Y—pcDNA3．O细胞相比，SH—SY5Y—antiP38细胞在胆红素作用3h后，其凋亡细胞由11．1％降到8．02％，5h后67％降到23．4％。结论：P38激酶参与了胆红素诱导SH—SY5Y细胞凋亡的信号转导。P38通路的激活可能在高胆红素血症导致的神经细胞损伤中(包括听神经细胞)发挥重要作用。     

水飞蓟宾对H2O2诱导SH⁃SY5Y细胞损伤的保护作用及机制

目的：探究水飞蓟宾对过氧化氢（H2O2）诱导SH?SY5Y细胞损伤的保护作用及可能机制。方法：采用体外培养方法,建立SH?SY5Y细胞的H2O2损伤模型。用水飞蓟宾预处理细胞后MTT法测定细胞的存活率;流式细胞术检测活性氧（reactive oxygen species,ROS）、细胞凋亡和线粒体膜电位的变化;Western blot法检测Cleaved?Caspase?9、Cleaved?Caspase?3蛋白表达情况。结果：与模型组比较,用50和100 μmol/L水飞蓟宾预处理SH?SY5Y细胞3 h能明显减轻H2O2诱导的SH?SY5Y损伤,显著提高细胞存活率（P < 0.01）和减少凋亡（P < 0.05）,减少细胞内ROS水平,稳定线粒体膜电位（P < 0.05）,使Cleaved?Caspase?9和Cleaved?Caspase?3的表达量下降。结论：水飞蓟宾可以保护SH?SY5Y细胞免受H2O2的损伤,其机制可能与水飞蓟宾的抗氧化性、保护线粒体膜电位和降低Cleaved?Caspase?9和Cleaved?Caspase?3的表达量有关。     

2,3-吲哚醌对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖影响

目的 研究2，3-吲哚醌对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖的影响。方法 应用MTT比色法观察2，3-吲哚醌对SH—SY5Y细胞生长的抑制情况；流式细胞仪检测2，3-吲哚醌对SH—SY5Y细胞周期分布的影响；Western blot方法观察其对细胞信号传导通路蛋白有丝分裂原激活的蛋白激酶（ERK）的作用，同时结合免疫细胞化学方法检测2，3-吲哚醌对SH-SY5Y细胞caspase-3的影响。结果 2，3-吲哚醌能显著抑制SH—SY5Y细胞增殖，并使细胞周期阻滞于G0／G1期；caspase-3蛋白表达随着药物浓度的升高逐渐增加；加2，3-吲哚醌后磷酸化的有丝分裂原激活的蛋白激酶蛋白（ERK1／2）相对表达量降低。结论 2，3-吲哚醌对SH—SY5Y细胞具有抗增殖作用，其作用可能是通过诱导细胞凋亡、改变细胞周期以及作用于细胞通路而实现的。     

冈田酸诱导SH-SY5Y细胞tau蛋白的过度磷酸化

目的 观察冈田酸（0A）对SH—SY5Y细胞tau蛋白磷酸化的影响。方法 MTT比色法观察OA对SH—SY5Y细胞代谢率的影响，免疫细胞化学法和蛋白免疫印迹法观察OA对SH—SY5Y细胞磷酸化tau蛋白水平的影响。结果 40nmol／LOA孵育SH—SY5Y细胞24h可显著降低细胞代谢率，其效应随着OA浓度的增加和孵育时间的延长而增强。OA作用于细胞3～48h，蛋白免疫印迹显示Ser-396位点磷酸化tau蛋白水平逐步升高，24h达高峰，之后下降。免疫细胞化学法显示，OA作用于细胞24h，Ser-396位点磷酸化tau蛋白水平较对照组细胞增强。结论 OA增强SH—SY5Y细胞tau蛋白Ser-396位点磷酸化水平。     

ATRA对NB细胞增殖抑制及诱导分化作用的研究

目的；通过对神经母细胞瘤（NB）细胞系SH－SYT6和SMS－KCNR的体外实验，探讨全反式维甲酸（ATRA）对NB细胞增殖抑制的可能分子机制及脑源性神经营养因子（BDNF）－TrkB信号转导途径在NB细胞分化中的作用。方法：通过台盼蓝拒染计数活细胞，用倒置相差显微镜观察加药处理前后细胞形态学变化。结果：5μmol/L ATRA抑制NB细胞系SMS－KCNR和SH－SY5Y细胞增殖，而5nmol/L ATRA无此作用；ATRA可诱导SMS－KCNR细胞分化成熟，对SH－SY5Y细胞诱导分化作用极弱；BDNF可使经ATRA处理的SY5Y细胞发生显著形态学分化。结论：5μmol/L ATRA对人NB细胞系SMS－KCNR和SH－SY5Y细胞的体外增殖有抑制作用；ATRA能诱导人NB细胞系SMS－KCNR细胞分化成熟，ATRA与BDNF共同作用可使1SH－SY5Y发生显著形态学分化；BDNF－TrkB信号转导途径的激活可能是ATRA体外诱导NB细胞分化逆转的分子生物学机制之一。     

Caspase8在实验性神经母细胞瘤细胞凋亡中作用的研究

目的探讨Caspase8表达对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（rumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand，TRAIL）诱导神经母细胞瘤（neuroblastoma，NB）细胞株SH—SY5Y（SY5Y）细胞凋亡的影响及其发生机制。方法应用RT—PCR方法和免疫组化法检测IFN-γ作用前后SY5Y细胞Caspase8的表达：应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法及流式细胞仪（FCM）检测IFN-γ、TRAIL、IFN-γ＋TRAIL及IFN-γ＋Caspase8抑制剂＋TRAIL对SY5Y细胞生长及凋亡的影响。结果SY5Y细胞不表达Caspase8，IFN-γ作用48h后的SYSY细胞Caspase8表达明显增加；SY5Y细胞对TRAIL不敏感，经IFN-γ诱导表达Caspase8的SY5Y细胞对TRAIL敏感，且与TRAIL浓度有关，Caspase8抑制剂可明显降低TRAIL对表达Caspase8的SY5Y细胞的杀伤作用。结论IFN-γ通过诱导Caspase8表达而逆转SY5Y细胞对TRAIL诱导凋亡的耐受。     

脑心清及其黄酮成分对海马神经元L型钙通道电流的影响

目的研究脑心清及其黄酮成分对海马神经元细胞L-型Ca^2＋通道活性的影响。方法采用全细胞记录式（whole—cell model）的膜片钳技术记录海马神经细胞L-型Ca^2＋通道电流变化。结果槲皮素、柿叶黄酮、脑心清在5．0～25．0μg／mL浓度下,均能增加海马锥体神经元全细胞L-型钙通道电流（ICa,L）峰值（P〈0．01）,增加最大值分别为61．6％,55．3％,52．0％,可使ICa,L的Ⅰ-Ⅴ相关曲线下移,但没有电压依赖性特征,也不改变钙通道的电学特征。结论脑心清及其黄酮成分对海马神经细胞L-型Ca^2＋通道活性有激活增强作用,有利于神经元细胞内钙稳定,发挥抗缺血再灌注损伤的作用。     

甘氨双唑钠对人神经母细胞瘤细胞株SH—SY5Y放射敏感性的影响

目的探讨甘氨双唑钠（CMNa）在常氧和缺氧条件下对人神经母细胞瘤细胞株（SH—SY5Y）放射敏感性的影响。方法在常氧和缺氧条件下,以不同浓度的CMNa处理SH—SY5Y,CCK-8法检测细胞存活率为50％时的药物浓度（IC50）及其95％可信区间Ic,。（95％CI）。在常氧和缺氧条件下,分别给予0、1、2Gy单次吸收剂量照射经1mmol／LCMNa处理的SH—SY5Y（CMNa组）和未经CMNa处理的SH—SY5Y（对照组）,观察克隆形成情况,流式细胞术检测细胞周期变化和细胞凋亡率,Westernblotting分析细胞周期和凋亡相关蛋白的表达变化。结果常氧和缺氧条件下,SH·SY5Y的IC50（95％CI）分别为3．62（3．07—4．26）和1．59（1．20—2．12）mmol／L。在常氧状态下,CMNa组克隆形成数量显著少于对照组;与常氧状态比较,缺氧状态下的克隆形成数量明显减少。在缺氧条件下,与对照组比较,CMNa组细胞凋亡率和细胞G,期比例升高,S期比例降低;促凋亡蛋白Caspase3／8／9和Bax表达增加,抑制凋亡蛋白Bcl-2表达减少;细胞周期相关蛋白CyclinD1表达减少,p16表达增加。结论CMNa对缺氧状态下的SH—SY5Y有特异的放疗增敏作用。     

敌百虫对人成神经瘤细胞SH-SY5Y增殖与分化的影响

目的观察敌百虫（trichlorfon,TCL）的对神经细胞增殖与分化的影响。方法用敌百虫（0～500μmol／L）染毒SH-SY5Y细胞,分别作用24h和48h,MTT法测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期;采用维甲酸（ATRA）诱导SH-SY5Y细胞分化,并用100μmol／L敌百虫染毒处理,观察细胞神经突起长出的长度及其与细胞体的大小之比,来判定神经元分化程度。结果敌百虫对细胞的增殖有显著的抑制作用,且显现剂量依赖相关和时间依赖相关。染毒24h和48h测得TCL对SH—SY5Y细胞的半数抑制浓度（IC50）分别是225μmol／L和177μmol／L。细胞诱导分化实验结果显示,对照细胞突起较长较多,而敌百虫处理神经细胞的突起则较少较短,提示敌百虫具有抑制神经突起生长的作用。流式细胞术分析表明,100μmol／L和200μmol／L敌百虫染毒24h或48h对SH-SY5Y细胞的运行周期产生显著影响,使细胞周期阻滞在G2／M期,但并没有使细胞产生凋亡。结论敌百虫可抑制神经突起的生长;敌百虫对SH—SY5Y细胞的增殖抑制与其对细胞周期的影响（阻滞细胞周期于G2／M期）有关。     

洛士辛对豚鼠心室肌细胞L型钙通道的作用

采用膜片钳技术 ,研究Lot对单个豚鼠心室细胞L型钙通道电流 (ICa -L)的影响。Lot1～ 2 0 0 μmol/L浓度依赖性地增加ICa -L幅值 ,EC50 为 38μmol/L ,Lot30 μmol/L使最大峰值电流增加 6 0 %。其促钙作用无明显使用依赖性 ,略促进钙通道电流激活 ,显著地减少钙电流的稳态失活。表明Lot增加L型钙电流作用主要与减少钙电流的稳态失活有关。     

钙稳态失衡在1-甲基-4-苯基吡啶离子诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡中的作用

目的研究钙稳态失衡在1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP+）诱导SH-SY5Y细胞凋亡中的作用。方法MTT法检测细胞存活
率;Hoechst 33342 和Annexin V+PI 染色检测MPP+诱导人神经神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的凋亡作用;Western blot 检测
PARP蛋白表达的变化;罗丹明123 染色检测MPP+对SH-SY5Y细胞线粒体膜电位的影响;激光共聚焦显微镜检测MPP+对
SH-SY5Y细胞胞质钙、线粒体钙和内质网钙浓度的影响以及线粒体钙通道抑制剂钌红与MPP+联合应用对线粒体游离钙浓度、
胞质游离钙浓度的影响。结果MPP+导致SH-SY5Y细胞存活率下降且具有剂量-反应关系、MPP+能导致SH-SY5Y细胞凋亡、
MPP+导致SH-SY5Y细胞线粒体膜电位下降、MPP+使SH-SY5Y细胞胞质和内质网游离钙离子浓度下降而使线粒体游离钙离子
浓度上升。钌红可对抗MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡、阻止线粒体膜电位下降,减少PARP的切割片段以及阻断线粒体游离
钙浓度的上升。结论线粒体钙超载在MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡中起重要作用。MPP+诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细
胞的凋亡可能与细胞质、线粒体及内质网的钙稳态失衡有关。
     

谷氨酸对人交感神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系超极化激活的阳离子通道的影响

目的 观察谷氨酸(Glu)对交感神经细胞超极化激活的阳离子通道(I_h通道)活动的影响。 方法 采用人交感神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系作为交感神经细胞模型,用全细胞电压箝方式记录I_h通道电流。 结果 SH-SY5Y细胞存在I_h通道电流;Glu(1mmol/L)可抑制SH-SY5Y细胞I_h电流的K⁺电流成分,但增强I_h电流的Ca²⁺电流和Na⁺电流成分,综合效应是使I_h电流增大。 结论 Glu可增大SH-SY5Y细胞的I_h电流。这一效应提示,Glu可能通过诱发交感神经元去极化并促进其传出冲动增加。     

蝙蝠葛碱拮抗缓激肽诱导人成神经细胞瘤细胞胞内钙升高的作用

目的 胞内钙离子浓度升高是Alzheimer病(AD)显著的病理生理学变化之一，本研究讨论蝙蝠葛碱对缓激肽诱导人成神经细胞瘤细胞胞内钙升高的影响。方法 采用钙荧光探针Fura-2／AM定量测试了蝙蝠葛碱(Dau)对缓激肽诱导的人成神经细胞瘤细胞(SH-SY5Y)胞内钙升高作用的影响。结果 Dau可显著抑制缓激肽所致胞内钙离子浓度([Ca^2 ]i)升高，并存在剂量-效应关系。结论 Dau有抑制AD样[Ca^2 ]i升高的作用，为AD的发病机制和防治提供了新的线索。     

银杏内酯对过氧化氢损伤的皮层神经元和SH—SY5Y细胞亲环蛋白A（CypA）表达的影响

目的：研究银杏内酯（ginkgolides,Gin）对过氧化氢（H2O2）诱导的皮层神经元及SH-SY5Y细胞（神经母细胞瘤细胞）损伤的保护作用及其机制。方法：在培养1周的小鼠皮层神经元培养基中加入H2O2,建立神经元氧化损伤模型,用同样方法建立SH-SY5Y细胞氧化损伤模型。采用MTT比色法检测细胞活力,Western Blot技术分析亲环蛋白A的表达变化。结果：H2O2可诱导神经元和SH-SY5Y细胞损伤,使细胞活力降低,可下调亲环蛋白A的表达;Gin预处理12 h可提高细胞活力,可使亲环蛋白A表达增加。结论：Gin可抑制H2O2引起的神经元及SH-SY5Y细胞损伤,该保护作用与其上调亲环蛋白A的表达有关。     

缺血再灌注致心律失常大鼠模型钙调蛋白介导的L型离子通道电流的变化

目的：探讨缺血再灌注致心律失常大鼠钙调蛋白（CaM）的变化及其对L型离子通道电流的影响。方法：选取健康SD大鼠48只,以单盲法随机分为4组（n=12）;空白组不做任何处理,模型组以左冠状动脉前降支结扎法制备缺血再灌注致心律失常模型,干预组在制备缺血再灌注致心律失常模型前肌注钙调蛋白抑制剂W-7（100μmol／kg）,假手术组仅进行开胸手术和动脉套线,无结扎。模型制备成功后,取大鼠心脏组织,以免疫印迹法检测L型钙离子通道主要亚型CaV1．2功能决定性亚单位α1C和CaM的表达水平;同时分离大鼠心肌细胞,以膜片钳技术进行L型离子通道电流（ICa,L）测定。结果：模型组大鼠心肌组织的a1C、CaM的表达水平,以及ICa,L均高于空白组和假手术组,差异具有统计学意义（P〈0．05）;较模型组相比,干预组CaM的表达水平和ICa,L均有降低,差异具有统计学意义（P〈0．05）;I—V曲线有所上移,a1C的表达水平比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：ICa,L过激所致Ca抖内流和细胞超载为缺血再灌注后心肌损伤和心律失常的重要因素之一,CaM在该病理过程中能够发挥不依赖于L型离子通道表达水平的调节作用,可作为其临床治疗的新靶点。     

Ionic mechanisms of a novel neurotoxin from the sea anemone Anthopleura sp. in rat ventricular myocytes.

OBJECTIVE: To determine the ionic mechanisms of a novel neurotoxin rhk2a obtained from the sea anemone Anthopleura sp. in rat ventricular myocytes. METHODS: Whole-cell patch-clamp recording technique was used to record the sodium, calcium, and sodium-calcium exchange currents (I(Na), I(Ca, L), and I(Na-Ca), respectively) in the isolated single rat ventricular myocytes with or without rhk2a treatment. RESULTS: The current-voltage (I-V) relationship for whole-cell I(Na) in the non-treated and rhk2a-treated (at the dose of 1 micromol/L) myocytes showed no significant difference (P>0.05), but the time constants for inactivation (tau(h)) were significantly greater (P<0.05) for the treated cells over the entire course of the experiment, while the time constants for activation (tau(m)) exhibited no significant difference between the two cells. The inactivation curve of I(Na) of rhk2a-treated cells was similar to that of the non-treated cells, as with the I-V relationship for whole-cell L-type calcium current (I(Ca, L) and I(Na-Ca)). CONCLUSIONS: Delayed inactivation of Na(+) channel plays an important role in the positive inotropic effect of rhk2a, possibly resulting from the alteration in Na(+) channel kinetics induced by rhk2a. rhk2a does not directly affect I(Ca, L), or I(Na-Ca).     

氯化钾对神经母细胞瘤细胞系谷氨酸释放的影响

利用高效液相方法观察了氯化钾对培养人神经母细胞瘤细胞系（ＳＨ ＳＹ５Ｙ）细胞谷氨酸释放的影响。发现：当培养液中存在钙离子时，一定浓度的氯化钾（１０～３０ｍｍｏｌ／Ｌ）可使ＳＨ ＳＹ５Ｙ细胞谷氨酸释放增加，但氯化钾浓度超过４０ｍｍｏｌ／Ｌ时，谷氨酸释放增加不明显；当培养液中没有钙离子时，氯化钾不能使ＳＨ ＳＹ５Ｙ细胞谷氨酸释放明显增加。结果表明氯化钾对ＳＨ ＳＹ５Ｙ细胞释放谷氨酸的作用与钙离子相关     

5一羟色胺对人胎盘滋养细胞L-型钙通道的影响

目的探讨5一羟色胺对胎盘滋养细胞钙通道的影响。方法将体外培养的胎盘滋养细胞分为对照组和低（1．01xmol／L）、高（10．0μmol／L）浓度5一羟色胺组。采用全细胞膜片钳实验方法,在待测胎盘滋养细胞外液中分别加入Nimodpine（10μmol／L）、Flunarizne（10μmol／L）和替曲朵辛（Trxl01．Lmol／L）,进行电流检测;同样的实验条件和方法,在待测胎盘滋养细胞外液中分别加入5-TH（1μmol／L和101xmol／L）,测试电流值;在细胞外液中分别加入5-TH（μmol／L）和Nimodpine（10μmol／L）、5-TH（10μmol／L）和Nimodpine（10μmol／L）后再检测电流。结果胎盘滋养细胞L-型钙通道开放在一60--50mV之间,最大峰值电流在一40～30mV为82．31±6．46（pA）。加入Nimodpine（10μmol／L）。可阻断此电流大部分成份。Flunarizne（10Ixmol／L）和’兀X（10肛m0ⅣL）不能抑制该电流成份。加入5-TH（1μmol/L和10μmol／L）峰值电流明分别为104．77±10．84（pA）和117．16±9．67（pA）,与对照组相比有显著差异（P〈0．05）;加入5-TH（1μmo]／L）和Nimodpine（101xmol／L）、5一TH（10μmol／L）和Nimodpine（10μmol／L）后;峰值电流分别为85．35±6．54（pA）、89．42±7．62（pA）,与对照组相比无显著差异（P〉0．05）。结论5-TH可激动胎盘滋养细胞L-型钙通道,促使钙电流值增加。     

Characteristics of single Ca2+channel kinetics in feline hypertrophied ventricular myocytes

目的　慢性压力负荷导致的心肌肥厚所伴有的动作电位时程的延长可能与L型钙流失活延迟有关。本文的目的是探索左室高血压所致的家猫肥厚心肌的单通道L型钙流的特征 ,以及在动作电位延长中的作用。方法　应用膜片钳技术研究正常和压力负荷所致的肥厚家猫心肌单通道L型钙流的特征。左室高血压模型用部分结扎降主动脉的方法。结果　从 - 40mV去极化到 0mV时 ,正常心肌和肥厚心肌的单通道L型钙流的振幅分别为 1 0 2± 0 0 3pA和1 0 5± 0 0 3pA ,斜率电道分别为 2 6 2± 1 0pS和 2 5 8± 0 9pS ,两者相比均无差别。但脉冲终末部分的平均振幅 ,肥厚心肌明显大于正常心肌。通道开放时间直方图分析表明 ,正常心肌细胞的开放时间分布呈单指数曲线 ,而肥大心肌细胞为双指数曲线。肥大心肌的平均开放时间明显长于正常心肌细胞。结论　左室压力负荷所致的肥大细胞的动作电位时程延长与L型钙流的失活时间延迟有关。     

全反式维甲酸诱导分化对SH-SY5Y细胞拮抗细胞毒性研究的影响

[目的]观察全反式维甲酸(RA)诱导分化对以人神经母细胞瘤SH-SY5Y作为体外神经毒性研究模型的影响。[方法]RA诱导SH-SY5Y细胞分化并于相差显微镜观察细胞形态学变化;采用MTT法检测细胞活力;通过测定细胞内乳酸脱氢酶(LDH)的释放量观察毒性物质对SH-SY5Y细胞的作用;硝基蓝四氮唑(NBT)还原法检测细胞的还原能力;荧光探针(DCFH-DA)测定细胞内活性氧(ROS)荧光强度。[结果]MTT检测和LDH测定发现,RA诱导SH-SY5Y细胞分化,提高了细胞活力,使SH-SY5Y细胞拮抗其对毒性物质的反应。NBT还原实验和DCFH-DA测定显示,RA诱导分化可降低H2O2诱导的细胞内ROS的水平。[结论]RA通过提高细胞活力而拮抗毒性物质对SH-SY5Y细胞的毒性作用,其作用机制可能与细胞内ROS水平有关。未分化型SH-SY5Y细胞是进行PD疾病的神经毒性实验和神经保护研究的良好细胞模型。