低剂量纳米银暴露致小鼠巨噬细胞RAW264.7的应激反应

目的：探讨纳米银(AgNPs)对小鼠巨噬细胞RAW264.7毒性效应的影响,为AgNPs生物安全性的研究提供依据。方法将不同浓度的AgNPs(0、6.25、12.5、25、50、60、80μg/ml)和RAW264.7共同培养,8、24 h后采用甲基噻唑基四唑比色法(MTT)测定各组细胞的活力,选取2.5、5μg/ml两个无明显细胞毒性的浓度进行后续研究,检测应激相关基因和蛋白表达的变化;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养液中炎症因子TNF-α和IL-6的表达。结果用2.5、5μg/ml的AgNPs处理细胞,24 h后相差显微镜下可见AgNPs进入细胞内,且5μg/ml组的细胞形态有明显改变;8、24 h后ELISA结果显示,IL-6无明显变化,在5μg/ml的24 h处理组TNF-α表达有显著升高,内质网应激相关的基因和蛋白在5μg/ml的24 h处理组表达明显上调。结论 RAW264.7细胞暴露于低剂量的AgNPs后表现出明显的应激反应,并且与暴露剂量和作用时间呈正相关。低剂量AgNPs能够干扰细胞的正常生理功能,长期暴露可能产生不可逆的损伤,应引起高度关注。     

3β-HSD基因高表达细胞株建立及其对DEHP致凋亡影响研究

目的构建3β-HSD高表达细胞株,研究3β-HSD高表达对塑化剂DEHP致凋亡的影响。方法根据GenBank上3β-HSD基因cDNA序列设计引物,PCR扩增该基因并将其克隆到慢病毒载体pLVX-CMV-ZSgreen-PGK-Puro,然后转染至MCF-7细胞中,对细胞株进行鉴定。用不同剂量DEHP对3β-HSD高表达细胞和MCF-7细胞染毒24h,在基因和蛋白表达水平上检测Bax、Caspase-3、Caspase-8的变化。结果基因测序验证本文构建的3β-HSD基因高表达载体基因序列与GenBank中的序列一致,荧光定量PCR结果显示3β-HSD基因表达水平升高105倍,western blot结果显示3β-HSD蛋白表达水平升高80%。DEHP染毒MCF-7细胞后,Bax、Caspase-3、Caspase-8基因表达水平比对照组分别升高28%~54%、13%~49%、21%~70%,BAX、CASPASE-3、CASPASE-8蛋白表达水平比对照组分别升高28%~61%、40%~48%、31%~84%。DEHP染毒3β-HSD高表达细胞后,Bax、Caspase-3、Caspase-8基因表达水平比对照组分别升高39%~75%、22%~30%、32%~45%,BAX、CASPASE-3、CASPASE-8蛋白表达水平比对照组分别升高8%~33%、19%~32%、10%~21%。结论本文成功构建3β-HSD基因高表达细胞株;DEHP可引起MCF-7细胞和3β-HSD高表达细胞凋亡基因及蛋白发生改变,本文结果提示3β-HSD基因在一定程度上促进DEHP的致凋亡作用。     

低剂量辐射对铀矿工健康潜在的影响

目的 探讨低剂量辐射对铀矿工人健康的损害作用。 方法 把某铀矿的工作人员按工种是否接触辐射有害因素,同时考虑年龄、性别的构成分为暴露组81人和对照组81人,对两组人员的血象学、肝肾功能、脂质学及甲状腺功能、微核检出率等指标进行检测并分析其差异。 结果 暴露组与对照组白细胞(white blood cell,WBC)、红细胞(red blood cell,RBC)、血红蛋白(hemoglobin,Hb)、血小板(platelet,PLT)、中性粒细胞百分比、淋巴细胞百分比、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、总蛋白(total protein,TP)、尿酸(uric acid,UA)、胆固醇(cholesterol,CH)、甘油三脂(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)等的异常率之间差异无统计学意义(P＞0.05),总胆红素(total bilirubin,TBIL)(38.27% vs.22.22%)、间接胆红素(indirect bilirubin,IBIL)(38.27% vs.22.22%)差异有统计学意义(χ²=4.945,P=0.040),血清游离三碘原氨酸(serum free triiodothyronine,FT3)(51.85% vs.34.57%)差异有统计学意义(χ²=4.930,P=0.039),血清游离甲状腺素(serum free thyroxine, FT4)、血清促甲状腺激素(serum thyroid stimulating hormone,TSH)差异无统计学意义(P＞0.05);暴露组微核检出率为96.29%。 结论 低剂量辐射对铀矿工可产生肝功能、甲状腺功能损害和DNA损伤。     

三邻甲苯基磷酸酯对人成神经瘤SH-SY5Y细胞分化的影响

目的观察三邻甲苯基磷酸酯（Tri-ortho-cresyl phosphate,TOCP）对人成神经瘤SH-SY5Y细胞形态分化的影响,为更全面的了解TOCP的毒性提供依据。方法选用人成神经瘤细胞SH-SY5Y为细胞模型,以全反式维甲酸（ATRA）为诱导分化工具药物,在诱导中以及诱导后以不同浓度TOCP作用,动态观察SH-SY5Y细胞形态学变化,台盼蓝拒染法检测死亡细胞百分比。结果 ATRA对SH-SY5Y细胞作用7 d可导致细胞出现长出较长突起的分化特征,在诱导分化过程中及诱导分化后以不同剂量TOCP作用于细胞,各剂量组与对照组相比,无论是突起长度还是分化细胞比例差异均有统计学意义（P〈0.05）,其中,0.6 mmol/L组抑制效果最强。结论 TOCP可抑制SH-SY5Y细胞的分化,并呈现一定时间和剂量依赖关系。     

构建预防医学与放射卫生学实验教学新体系的探讨

针对传统的预防医学与放射卫生实验教学之弊端,通过对实验课程体系、实验内容体系、实验考核体系等研究与探索,构建了预防医学与放射卫生实验教学新体系,该体系在提高学生的学习积极性、主动性,培养学生实践能力和科技创新能力方面取得了一定的成效。     

SiO2纳米颗粒对内皮细胞的遗传毒性及其作用机制

目的 观察不同粒径与不同浓度SiO2纳米颗粒对人脐静脉内皮细胞的致微核效应和氧化损伤作用,探讨其遗传毒性及毒作用机制.方法 分别以0、10、25、50 μg/mL的SiO2颗粒(10、25、50、100、500 nm 5个粒径)处理人脐静脉内皮细胞24 h,观察细胞微核率、GSH、GSSG的变化,并观察吐温-80活化SiO2纳米颗粒后其效应的变化.结果 SiO2纳米颗粒人脐静脉内皮细胞微核率和GSSG增高、GSH降低,粒径越小、浓度越高,其效应越强,经表面活性剂活化后其毒效应进一步增强.结论 SiO2纳米颗粒对人脐静脉内皮细胞具有遗传损伤作用,经表明活化后可增加其遗传毒性,氧化损伤可能是其毒作用机制之一.     

三邻甲苯基磷酸酯毒性作用研究进展

三邻甲苯基磷酸酯（TOCP）属有机磷酸酯类化合物,剧毒,具有多器官毒性,主要表现在神经系统、睾丸、肝脏和免疫系统;其中以神经系统为主要靶组织,以产生迟发性神经毒性（OPIDN）为特征,造成机体永久性损伤.TOCP中毒没有特效药治疗,禁用和限量为主要预防措施.全面了解TOCP毒性作用,有助于对机制的进一步研究,为临床治疗TOCP中毒患者提供参考,对其他有机磷毒物研究有重要借鉴意义.     

pLC3-EGFP真核表达载体的构建与表达

目的 构建人微管相关蛋白轻链3(LC3)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合表达的真核表达载体(pLC3-EGFP)并在哺乳动物细胞中表达,为研究自噬的过程及机制提供实验基础.方法 应用RT-PCR从人胚肾细胞系HEK293T细胞中扩增全长LC3基因,将产物LC3 cDNA片段亚克隆入载体pEGFP-N3,筛选阳性克隆,提取质粒测序进行鉴定.将表达质粒pLC3 -EGFP转染HEK293T细胞,荧光显微镜观察融合蛋白在细胞内的表达与定位,westem blot检测LC3-EGFP蛋白的表达.结果 测序结果表明,从人胚肾HEK293T细胞中所获得的LC3 cDNAs含有378个碱基,与Genbank( NM 022818)序列完全一致.构建的重组真核表达载体pLC3-EGFP经鉴定证实LC3基因已完全正确亚克隆到pEGFP--N3;LC3-EGFP融合蛋白能够在HEK293T细胞中表达,并主要定位于细胞质中.结论 成功构建具有报告基因-增强绿色荧光蛋白基因的重组真核表达载体pLC3-EGFP并在HEK293T细胞中很好地表达,实验结果为研究细胞自噬的进程及机制提供了实验基础.     

对—壬基酚对大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响

目的：了解对－壬基酚（p-NP)的体外发育毒性特点，为揭示对－壬基酚的发育毒性作用机制提供实验依据。方法：采用微团培养观察不同浓度的对－壬基酚（0－17.5mg/L)对体外培养的Wistar大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响。结果：对－壬基酚对大鼠胚胎肢芽细胞的增殖和分化均有抑制作用，表现为染毒组肢芽细胞集落形成率降低，细胞毒性试验吸光度值下降，并有明显的剂量－反应关系。对－壬基酚对肢芽细胞的50％增殖抑制浓度（IP50）和50％分化抑制浓度（IP50）分别为15．85mg/L和11.86mg/L,IP50/ID50=1.34。结论：按照Renault等人推荐的体外致畸分类标准，对－壬基酚属于阳性致畸物，对大鼠胚胎肢芽细胞的分化和增殖均有特异性抑制作用。