DD3 mRNA在前列腺癌组织中定量表达分析

目的:探讨DD3基因在前列腺组织中表达的临床意义。方法:用荧光定量RT-PCR方法对21例前列腺癌(PCa)组织、27例非前列腺部位的肿瘤组织、39例良性前列腺增生(BPH)组织和15例正常前列腺组织中的DD3的表达进行了定量分析,用ROC曲线对DD3 mRNA诊断PCa的性能进行了分析。结果:27例非前列腺组织中均未检测到DD3基因的表达。DD3在PCa组、BPH组和正常前列腺组表达量的中位数分别为7.2×106、2.5×104、1.5×104拷贝/mg组织。PCa组较BPH组和正常前列腺组DD3的表达量显著增高(P<0.01),而BPH组和正常前列腺组间则差异无显著性(P>0.05)。DD3表达量与临床分期和分化程度之间均无明显相关性。DD3 mRNA曲线下面积(AUC-ROC)为0.937(95%CI:0.879～0.995)。当临界值为1.4×105拷贝/mg组织时,灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)、阳性拟然比(+LR)、阴性拟然比(-LR)分别为90.5%、85.0%、86.7%、76.0%、94.3%、6.03和0.11。结论:DD3 mRNA的表达仅限于前列腺组织,具有良好的组织特异性。DD3 mRNA表达在PCa组织中显著升高,在正常前列腺和BPH组织中差异无显著性。DD3 mRNA可作为PCa诊断的良好标志物,在PCa早期诊断、微转移诊断、预后判断、指导治疗等方面也具有潜在的应用价值。     

PCA3 mRNA与PSA mRNA的联合检测对前列腺癌早期诊断的临床意义

目的评价外周血前列腺癌抗原基因-3（prostate cancer antigen3,PCA3 mRNA）和前列腺特异性抗原基因（prostate specific antigen,PSA mRNA）联合检测对前列腺癌（PCa）早期诊断的价值,及决定是否进行前列腺穿刺活检。方法纳入41例PCa和69例前列腺增生（BPH）患者的外周血,采用RT—PCR方法对其PCA3mRNA和PSAmRNA进行检测,通过受试者工作特征（ROC）曲线评价其在预测前列腺穿刺活检结果和PCa早期诊断的价值。结果PCa组外周血PCA3mRNA含量明显高于BPH组[2362（〈30～7421）拷贝／ml比〈35拷贝／ml,z=-6．66,P〈0．01],而PSAmRNA含量也明显高于BPH组[3425（908～36639）拷贝／ml比〈220拷贝／ml,z=-6．40,P〈0．01];ROC曲线显示当PCA3mRNA和PSAmRNA临界值分别为846拷贝／ml和280拷贝／ml时,诊断早期PCa结果为73．2％（30／41）、85．4％（35／41）,特异度分别为87．0％（60／69）、78．3％（54／69）;而联合检测时其敏感度可增至90．2％（37／41）,特异度上升为89．9％（62／69）。结论外周血PCA3mRNA和PSAmRNA检测都是PCa诊断的良好指标,而它们的联合检测可弥补PCA3mRNA敏感性低和PSAmRNA特异性低的缺点,更有利于早期PCa诊断。     

尿AMACR mRNA定量检测在前列腺癌诊断中的价值

目的探讨前列腺按摩后尿沉渣中AMACR mRNA含量在前列腺癌诊断中的价值。方法前列腺癌（PCa）患者30例和良性前列腺增生（BPH）患者41例，在前列腺穿刺活检前收集前列腺按摩后的尿液，离心取细胞沉淀物，用实时荧光定量RT-PCR检测AMACR mRNA的含量，并用PSA mRNA进行校正，即用AMACR mRNA表达量／PSA mRNA表达量比值来表示AMACR mRNA的含量。结果AMACR mRNA在PCa组患者尿液中的含量明显高于BPH组，差异具有统计学意义（P〈0．01）。ROC曲线分析结果显示，曲线下面积为0．763，以0．277为截断值时，其诊断PCa的总体灵敏度和特异度分别为66．7％和75．6％。如果血清PSA以10ng／ml为临界值，其总体特异度为58．5％（24／41），尿液AMACR mRNA较血清PSA具有更高的特异性。不同临床分期、不同病理分级之间，AMACR mRNA表达量及检测阳性率均不具有统计学意义（P值均〉0．05）。结论尿液中AMACR mRNA的表达量可以作为前列腺癌诊断的一种非损伤性指标，而且在PCa的早期诊断中也有潜在的临床价值。     

血清／尿PSA比值对血清PSA处于“灰区”中前列腺癌的诊断价值

目的探讨血清前列腺特异性抗原（sPSA）与尿前列腺特异性抗原（uPSA）比值（s／uPSA）对血清PSA处于诊断“灰区”—sPSA于4．0～10．0ng／ml（放射免疫法范围）前列腺癌的诊断价值。方法选择血清PSA（sPSA）于诊断“灰区”的共191例前列腺疾病患者，采用放射免疫方法检测其尿PSA（uPSA）水平，根据前列腺活检结果分为前列腺癌组（PCa组，n=76）和良性前列腺增生症组（BPH组，n=115），比较两组s／uPSA比值以及两组间sPSA和s／uPSA比值的受试者运算特性曲线（ROC）面积。结果BPH组与PCa组的sPSA分别为（5．20±1．09）ng／ml和（6．41±2．12）ng／ml，uPSA分别（3．57±0．97）ng／ml和（2．17±0．61）ng／ml，sPSA和uPSA在BPH组与PCa组两者间差别均无统计学意义（t=0．91，t=1．24，P〉0．05）;BPH组与PCa组的s／uPSA分别为（2．32±0．61）和（4．13±1．09），PCa组s／uPSA比值明显高于BPH组，差别具有统计学意义（t=4．17，P〈O．01）。s／uPSA比值和sPSA的ROC曲线下面积分别为0．836和0．703。在保持95％敏感性时，s／uPSA比值和sPSA的特异性分别为77．1％和39．6％。结论在血清PSA值4．0～10．0ng／ml范围内，s／uPSA比值较sPSA更好地检出前列腺癌：在保持同一敏感性时，s／uPSA较sPSA具有更高的特异性。     

血清游离态前列腺特异抗原水平在前列腺疾病诊断中的应用价值

目的：探讨血清游离态前列腺特异抗原(F—PSA)和总PSA(T—PSA)及F—PSA／T—PSA比值(F／T比值)在前列腺疾病诊断中的应用价值。方法：采用ELISA方法测定30例良性前列腺增生(BPH)患者和45例前列腺癌(PCa)患者血清F—PSA和T—PSA水平，并计算F／T比值。结果：BPH与PCa组患者T—PSA、F—PSA值经t检验差异有显著性意义(P＜0．05)，其F／T比值差异有极显著性意义(P＜0．01)，在PCa的诊断灰区(T—PSA值4.0—10．0μg/L)中，F—PSA及F／T比值能有效区分BPH与PCa(P＜0.05)，单独以T—PSA或F—PSA作为PCa的诊断指标，其敏感度虽高(88．89％，84.44％)，但其特异性较低(仅为53.33％，56．67％)，而以F／T比值作为PCa的诊断指标，在保持较高敏感度的同时，其特异性也可显著提高(P＜0．05)。结论：F—PSA及F／T比值的引入，使PSA作为PCa的诊断指标更为有效，尤其在PCa的诊断灰区，同时F／T比值可显著提高PSA对PCa诊断的特异性。     

ROC曲线分析比较tPSA、fPSA／tPSA和PSAD在PSA灰区前列腺癌诊断中的价值

目的 ROC曲线分析探讨前列腺特异性抗原密度(PSAD)、总PSA(tPSA)和游离PSA/总PSA(fPSA/tPSA)3者在PSA灰区前列腺癌(PCa)中的临床诊断价值.方法 同顾性分析tPSA在4～10ng/ml之间的前列腺增生(BPH)患者75例和前列腺癌患者31例.化学发光法测定血清tPSA和fPSA,经直肠超声(TRUS)测定前列腺体积,计算fPSA/tPSA和PSAD.比较BPH组和PCa组间tPSA、PSAD和fPSA/tPSA各指标的差异,分析各指标在ROC曲线卜的面积、各指标的诊断特异性及敏感性.结果 PCa组与BPH组tPSA差异无统计学意义(P＞0.05),PCa组fPSA/tPSA比值较BPH组降低(P＜0.01),PSAD值较BPH组升高(P＜0.05).ROC曲线下的面积从大到小为fPSA/tPSA＞PSAD＞tPSA.在诊断敏感性相同的情况下,fPSA/tPSA比值诊断特异性高于PSAD的诊断特异性.当fPSA/tPSA临界值取0.16时,诊断前列腺癌的灵敏度和特异性为67.7%和79.7%,PSAD临界值取0.12时,其灵敏度和特异性为61.3%和62.7%.结论 当tPSA在诊断灰区时,PSAD和fPSA/tPSA可以提高前列腺癌的诊断特异性和敏感性,fPSA/tPSA较PSAD有更高的诊断价值.     

uPCA3mRNA及PCA3mRNA/D定量检测对PSA灰区前列腺癌诊断的临床研究

目的:研究前列腺按摩后尿液中PCA3mRNA及PCA3mRNA密度的定量检测在前列腺特异性抗原(PSA)灰区前列腺癌(PCa)临床诊断中的应用价值。方法:选择sPSA在4~10ng/ml的BPH或PCa患者200例,收集其前列腺按摩后尿液,离心取细胞沉淀物,提取总RNA,用实时荧光定量RT-PCR方法检测PSAmRNA、PCA3mRNA的含量,以PSAmRNA来校正尿液中的前列腺癌细胞。以PCA3mRNA/PSAmRNA表示PCA3mRNA的含量,经直肠B超测定前列腺体积,计算PSAD和PCA3mRNA密度(PCA3mRNA/D)。以穿刺活检或术后病理检查结果为金标准,用ROC曲线对PCA3mRNA及PCA3mRNA/D诊断PSA灰区PCa的性能进行评价。结果:PCa组的tPSA、PSAD均较BPH组升高(P0.05或0.01)。PCa组PCA3mRNA(P=0.009)含量及PCA3mRNA/D比值(P=0.005)均高于BPH组;以2.01为截断值时,尿PCA3mRNA/D比值诊断PCa的ROC曲线下面积(AUC)为0.903(95%CI:0.790~0.869),其诊断PCa的敏感度和特异度分别为93.3%和66.7%。尿PCA3mRNA/PSAmRNA比值诊断PCa的ROC曲线下面积(AUC)为0.841(95%CI:0.666~0.997),以0.27为截断值时,其诊断PCa的敏感度和特异度为86.5%和77.5%。结论:PCA3mRNA含量和PCA3mRNA/D两个指标定量检测,可以显著提高检出PSA灰区PCa的敏感度,可用于早期PCa的诊断。其中PCA3mRNA/D具有更好的诊断效能。     

前列腺癌中PIM-1的表达及其临床意义

目的 探讨PIM-1在前列腺癌中的表达及临床意义。方法 逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）半定量分析2例良性前列腺增生（BPH）和5例前列腺癌（PCa）组织标本中PIM-1mRNA表达，免疫组织化学法检测20例BPH、20例高分级前列腺上皮内瘤（HGPIN）和42例PCa组织标本中PIM-1蛋白表达水平，染色结果分为阴性、弱阳性、阳性和强阳性。结果 5例PCa组织PIM-1mRNA表达相对值分别为0．63、0．55、0．42、0．91、0．76，2例BPH中其相对值为0．26、0．27。BPH、HGPIN和PCa组织中PIM-1蛋白阴性表达率分别为60％（12／20）、20％（4／20）和2％（1／42），弱阳性表达率分别为40％（8／12）、20％（4／20）和12％（5／42），阳性列强阳性表达率分别为0（0／20）、60％（12／20）和86％（36／42），PCa中PIM-1蛋白表达水平高于HGPIN和BPH（P值均〈0．05）。PIM-1蛋白表达水平随PCa的临床分期和病理分级增高而增强，在有和没有淋巴结转移PCa组织中PIM-1强阳性表达率分别为70％（7／10）、25％（8／32），差异有统计学意义（P〈0．05）。结论PIM-1高表达可能与PCa发生和发展相关，PIM-1表达水平与PCa分期、Gleason评分呈正相关，可能成为PCa预后判断的肿瘤标志物。     

f-PSA/t-PSA比值在良性前列腺增生和前列腺癌鉴别诊断中的应用

目的：探讨血清总前列腺特异性抗原（t-PSA）及游离前列腺特异性抗原（f-PSA）在BPH和PCa患者中的表达，评价t-PSA与f-PSA／tPSA在BPH和PCa鉴别诊断中的应用价值。方法：对经直肠超声引导下前列腺穿刺活检诊断为BPH和PCa的患者，结合其术前的t-PSA及f-PSA检测结果，进行回顾性分析和统计。结果：在t—PSA％4．0μg／L的患者中，f-PSA／t—PSA〈0．16者共6例（BPH3例；PCa 3例），〉0．16者共20例（BPH13例；PCa例7）；4．0≤t—PsA〈10．0μg／L的患者中，f-PSA／t—PSA〈0．16者共17例（BPH5例；PCa 12例），〉0．16者共24例（BPH21例；PCa3例）；10．0≤t—PSA〈100μg／L的患者中，f-PSA／t-PSA〈0．16者共49例（BPH19例；PCa30例），〉0．16者共31例（BPH22例；PCa9例）；t—PSA≥100μg／L的患者16例，均为PCa，f-PSA／t—PSA比值均〈0．16。结论：BPH患者随年龄增长t—PSA逐渐升高，但f-PsA／t—PSA值差异无统计学意义（P〉0．05），而不同年龄的PCa患者t-PSA、f-PSA及f-PSA／t-PSA值均差异无统计学意义（P〉0．05）；t-PSA水平在4．0～10．0ug／L的PCa患者和t—PSA在10～100μg／L的PCa患者相比，其f-PSA／t—PSA比值差异无统计学意义（P〉0．05）；对于4．0≤t—PSA〈10．0的患者，结合f-PSA／t-PSA〈0．16，能更有效地区别BPH和PCa（P〈0．05），但是，对于t—PSA％4．0μg／L的PCa患者来说，f-PSA/t-PSA比值对其与BPH的鉴别意义不大（P〉0．05）。     

前列腺特异抗原对诊断前列腺癌的价值

目的 :联合检测血清中总 PSA(t- PSA)、游离 PSA(f- PSA)以及 f- PSA/ t- PSA比值 ,探讨其对前列腺癌 (PCa)的诊断价值。方法 :采用微粒子酶免疫法 (MEIA)检测 6 2例正常人、78例前列腺增生症 (BPH)和 2 4例PCa患者血清中 t- PSA、f- PSA,并得出 f- PAS/ t- PSA比值。计算资料以 x± s表示 ,两组均数比较经 t检验。结果 :单独以 t- PSA >4.2μg/ L或 f- PSA >0 .93μg/ L作为对 PCa的诊断指标 ,其特异性分别为 6 1.5 %、42 .3% ,阳性检出率分别为 6 4.5 %、42 .9% ,而以 f- PSA/ t- PSA比值 <0 .11作为对 PCa的诊断指标 ,其特异性和阳性检出率分别为 87.2 % ,83.4% ,显著高于 t- PSA和 f- PSA(P <0 .0 0 1)。结论 :当血清 t- PSA超过正常时 ,f- PSA/ t- PSA的比值对 PCa和 BPH的鉴别诊断具有非常重要的临床应用价值     

弱精子症患者精核蛋白表达的检测及意义

目的研究不育症患者精核蛋白mRNA表达量的变化及意义。方法提取6例不育症患者及5例健康男性精子的总RNA,应用RT-PCR法扩增得到精核蛋白cDNA片段;提取精子总碱性核蛋白并进行SDS-聚丙酰胺凝胶电泳,检测其中精核蛋白及组蛋白的含量。结果精子中存在精核蛋白基因的mRNA;不育症患者精核蛋白的含量及精核蛋白mRNA相对含量均下降。结论精核蛋白mRNA相对含量的变化与其蛋白含量的变化一致,可能反映了精子发生过程中某些基因的表达情况。     

RUNX3基因在肝癌组织的mRNA表达水平及其临床意义

目的 探讨RUNX3基因在肝癌组织和癌旁组织的mRNA表达水平及其与临床病理因素的相关性.方法 采用RT-PCR检测RUNX3基因在51例肝癌组织及其癌旁组织的mRNA表达水平,分析RUNX3基因mRNA表达与临床病理因素的相关性.结果 RUNX3基因在51例肝癌组织的mRNA表达量相对值为0.4509±0.0963;在相应癌旁组织的mRNA表达量相对值为0.9147±0.0222;两者差异有显著统计学意义(t=33.6087,P＜0.001).RUNX3基因mRNA表达水平在分化程度、浸润周围组织、癌栓、肝内转移等病理因素方面的差异有统计学意义(P＜0.05).在性别、肿瘤直径、肿瘤部位、癌肿出血坏死、组织分型方面的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 RUNX3基因在肝癌组织的mRNA表达水平显著低于在癌旁组织.RUNX3基因mRNA低表达与分化程度、浸润周围组织、癌栓、肝内转移等病理因素相关.RUNX3基因可能是肝癌的一种抑癌基因.     

抑癌基因Lumican在胃癌中的表达及其临床意义

目的探讨抑癌基因Lumican mRNA在胃癌组织中的表达及其在胃癌发生、发展中的意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测66例胃癌组织及其相应的近癌旁组织及正常组织中LumicanmRNA的表达,并分析胃癌组织中Lumican mRNA表达与其临床病理特征的关系。结果Lumican mRNA在胃癌组织、近癌旁组织及正常组织中的表达缺失率分别为42.4%(28/66)、15.2%(10/66)及0(0/66)。有淋巴结转移者胃癌组织中Lumican mRNA表达缺失率(61.1%)明显高于无淋巴结转移者(20.0%),差异有统计学意义(χ2=11.323,P=0.001);晚期(Ⅲ、Ⅳ期)胃癌组织中Lumican mRNA表达缺失率(61.5%)明显高于早期(Ⅰ、Ⅱ期,30.0%),差异有统计学意义(χ2=6.417,P=0.011;胃癌组织中Lumican mRNA表达缺失与肿瘤分化程度无关(χ2=1.576,P=0.455)。结论Lumican mRNA表达缺失可能在胃癌的发生和发展过程中起重要作用,并影响其预后。     

重复加热对肝癌HepG2细胞增殖周期及bcl-2的影响

目的探讨多次热疗后残存的肝癌HepG2细胞增殖速度变化及其相关的可能原因。方法HepG2细胞43℃加热，每次80min，2次／d，10个循环，分析细胞倍增时间，检测细胞周期及bcl-2 mRNA及bax mRNA的表达。结果热处理后的HepG2细胞增殖加快，细胞周期中G2期和S期细胞的比率增高，bcl-2 mRNA的表达增强，bcl-2／bax比值增大。结论热处理后的HepG2细胞的增殖加快与其完成DNA复制而进入分裂的细胞比率高、抗凋亡基因bcl-2mRNA的强表达及bcl-2／bax比值的增加有关。     

肺癌组织中p16基因mRNA表达及其临床意义

目的　检测肺癌组织中p16基因mRNA的表达情况 ,探讨p16基因在肺癌发生发展过程中的作用。方法　应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测肺癌组织中p16基因mRNA的表达。结果　肺良性疾病组织、癌周正常肺组织p16基因mRNA表达高于肺癌组织 ,差异有显著性 (P分别 <0 .0 5 ) ;小细胞肺癌p16基因mRNA阳性率 (10 0 %)高于非小细胞肺癌 (4 6.0 %)P <0 .0 5 ;临床Ⅰ、Ⅱ期p16基因mRNA阳性率 (75 .0 %)高于临床Ⅲ、Ⅳ期 (3 4.1%) ,P <0 .0 5 ;无淋巴结转移的病例p16基因mRNA阳性率 (73 .3 %)高于有淋巴结转移的病例 (3 3 .3 %) ,P <0 .0 5 ;高、中分化病例组p16基因mRNA表达阳性率 (5 4.5 %)与低分化病例组 (4 4 .0 %)之间差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　p16基因的异常改变可能参与了非小细胞肺癌发生发展过程 ,p16基因mRNA的表达检测作为一种辅助指标。     

结肠腺癌及正常黏膜mRNA表达谱的构建

目的构建结肠腺癌和正常黏膜基因的mRNA表达谱,探讨其表达差异,为进一步研究提供线索。方法用SAGE（Serialanalysisofgeneexpression）方法构建两者的mRNA表达文库,挑选一定数量克隆进行测序,结果用SAGE2000软件分析并进行比较。结果构建了同一患者结肠正常黏膜和腺癌的SAGE表达文库,软件分析分别获得标签7926和7672个。癌组织与正常黏膜组织及与国外先期构建的结肠腺癌SAGE文库相比较其高表达基因之间均存在明显的表达差异。结论SAGE技术是构建mRNA表达谱的有效方法;结肠腺癌与正常黏膜高表达基因之间存在明显差别;中国人结肠腺癌的基因表达可能具有自身的特点。     

谷氨酰胺诱导大鼠热休克蛋白70mRNA的表达

热休克蛋白(heat shock protein,HSP)是感染或非感染(如创伤、休克)等致病因素作用于机体后,诱发机体细胞合成的一组高度保守的蛋白质,谷氨酰胺(Glu-tam ine,Gln)作为体液中最丰富的氨基酸之一,对机体多个脏器有保护作用。一些研究表明,Gln在体外可促进果蝇Kc细胞HSP的表达[1];Gln诱导的HSP表达对肠道上皮细胞有保护[2]。但Gln是否能在动物的各个脏器引起HSP的表达及时间和量效关系如何,尚未见明确报道。本研究对此进行了实验观察,拟为临床应用提供理论依据。1材料和方法1.1主要试剂力太(批号J20020081,Fresennius Kabi公司,德国),…     

Comparison of Glomerular and Podocyte mRNA Profiles in Streptozotocin-Induced Diabetes

Evaluating the mRNA profile of podocytes in the diabetic kidney may indicate genes involved in the pathogenesis of diabetic nephropathy. To determine if the podocyte-specific gene information contained in mRNA profiles of the whole glomerulus of the diabetic kidney accurately reflects gene expression in the isolated podocytes, we crossed Nos3^−/− IRG mice with podocin-rtTA and TetON-Cre mice for enhanced green fluorescent protein labeling of podocytes before diabetic injury. Diabetes was induced by streptozotocin, and mRNA profiles of isolated glomeruli and sorted podocytes from diabetic and control mice were examined 10 weeks later. Expression of podocyte-specific markers in glomeruli was downregulated in diabetic mice compared with controls. However, expression of these markers was not altered in sorted podocytes from diabetic mice. When mRNA levels of glomeruli were corrected for podocyte number per glomerulus, the differences in podocyte marker expression disappeared. Analysis of the differentially expressed genes in diabetic mice also revealed distinct upregulated pathways in the glomeruli (mitochondrial function, oxidative stress) and in podocytes (actin organization). In conclusion, our data suggest reduced expression of podocyte markers in glomeruli is a secondary effect of reduced podocyte number, thus podocyte-specific gene expression detected in the whole glomerulus may not represent that in podocytes in the diabetic kidney.     

前列腺增生组织中白细胞介素-6受体基因表达水平的检测及其意义

应用逆转录聚合酶链反应方法定量检测了10例正常人前列腺、20例前列腺增生（BPH）组织及前列腺癌细胞系PC－3m中80ku白细胞介素－6受体（IL－6R）基因表达水平。结果发现正常前列腺组织中IL－6RmRNA呈低水平表达，而43PH组织中表达增强，明显高于正常组（P＜0．01），表明BPH发生与IL－6及其受体有关。此外，还发现55．0％（11／20）BPH组织中IL－6RmRNA含量高于前列腺癌细胞系PC－3m，提示IL－6所介导的融合毒素可能成为治疗BPH新的有效途径。