妊娠高血压综合征孕妇所生新生儿血清TNF-α水平与循环内皮祖细胞状态的相关性研究

目的分析妊娠高血压综合征患者所生新生儿血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与循环内皮祖细胞(EPC)水平的相关性。方法 2014年9月—2015年8月于华北石油总医院产科住院妊娠高血压综合征患者所生新生儿12例作为研究对象(观察组),同期入院的12例正常孕妇所生新生儿作为对照组。分别检测2组血清TNF-α水平及循环EPC数量;同时,分离外周血单个核细胞在体外进行诱导培养获得EPC,对其增殖、黏附和迁移能力进行检测。结果观察组新生儿血清TNF-α水平较对照组增高,而循环EPC数量则显著降低(t=2.68、1.68,P<0.05),并且TNF-α与EPC存在显著的负相关(r=-0.78,P<0.05);同时,观察组新生儿循环EPC的体外增殖、黏附和迁移能力较对照组均存在不同程度的下调(t=5.23、2.58、3.59,P<0.05),循环EPC的体外增殖、黏附和迁移能力均与其血清TNF-α水平呈现出明显的负相关(r=-0.76、-0.81、-0.73,P均<0.05)。结论妊娠高血压综合征患者体内高水平的TNF-α等炎性细胞因子能够进入胎儿体内,造成其循环EPC数量和功能的下调,从而影响其血管内皮的正常功能。     

自发性高血压大鼠骨髓来源内皮祖细胞生物学特性研究

目的:观察14周龄自发性高血压大鼠(SHR)体外培养骨髓来源内皮祖细胞(EPCs)数量及功能的变化。方法:随机将自发性高血压大鼠及正常血压WKY大鼠分为2组,每组各12只。以密度梯度离心法分离骨髓来源单个核细胞体外培养,差速贴壁法培养后收集二次贴壁细胞并行鉴定为骨髓来源内皮祖细胞,测定EPCs数量、增殖活力(CCK8法)、迁移、黏附能力和NO分泌功能。结果:14周龄SHR骨髓来源EPC数量与14周龄WKY大鼠比较明显减少(P<0.01),细胞增殖、迁移、黏附能力和NO分泌能力受损(P<0.01)。结论:14周龄SHR大鼠比Wistar大鼠骨髓来源内皮祖细胞数量减少,功能减退。     

脑出血急性期内皮祖细胞形态学和功能变化及其意义

目的 探讨高血压脑出血急性期患者外周血来源的内皮祖细胞动态形态学和功能变化及其意义.方法 分离、诱导分化高血压脑出血急性期患者和高血压患者外周血内皮祖细胞,动态观察两组内皮祖细胞形态学变化,检测两组患者内皮祖细胞集落和计数、黏附、增殖及迁移能力并进行对比研究.结果 高血压脑出血组内皮祖细胞集落计数为(5.87±0.55),细胞计数为(74.73±11.38),黏附能力为(26.13±5.13),增殖能力为(0.273±0.060),迁移能力为(15.83±2.02);高血压组内皮祖细胞集落计数为(1.73±0.24),细胞计数为(56.70±9.72),黏附能力为(19.97±3.07),增殖能力(0.192±0.058)而迁移能力为(10.33±2.30).两组相比,脑出血组内皮组细胞功能明显增强,具有显著性统计学差异(P<0.05或P<0.01).与高血压组相比,脑出血组内皮祖细胞和集落出现较早,集落体积较大和典型,细胞密度较大.结论 高血压脑出血急性期患者内皮祖细胞数目增多,黏附、增殖和迁移功能增强.这可能有助于血管损伤的修复和再生.     

普伐他汀对培养人内皮祖细胞药理作用的影响

目的观察普伐他汀对培养人内皮祖细胞（EPC）数量、增殖、迁移、黏附及一氧化氮（NO）合成能力的影响。方法采用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,贴壁筛选法培养内皮祖细胞,培养7d后收集细胞并分别加入普伐他汀10μmol／L及100μmol／L,干预48h,免疫组化、荧光显微镜和流式细胞仪鉴定内皮祖细胞,分别观察内皮祖细胞的数量、增殖迁移黏附能力、细胞内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、mRNA的表达以及培养液中NO的水平。结果普伐他汀组促进外周血内皮祖细胞扩增,并显著改善外周血内皮祖细胞的黏附、迁移、增殖以及eNOSmRNA表达和NO合成的能力。结论他汀类药物可增加培养人内皮祖细胞数量并改善其功能。     

肺动脉高压大鼠骨髓内皮祖细胞功能的研究

目的检测实验性肺动脉高压大鼠骨髓内皮祖细胞（EPC）的功能,探讨肺动脉高压发病机制。方法利用野百合碱诱导大鼠发生肺动脉高压,分离骨髓单个核细胞进行体外诱导培养以获得EPC集落,并对其骨髓内皮祖细胞的集落形成能力、增殖、黏附、迁移能力进行检测。结果骨髓单个核细胞在体外培养下能够获得EPC集落,与对照组比较,肺动脉高压实验组诱导生成的EPC数量少（P〈0.05）,CD34和FLK-1阴性比例下降（分别为19.33%±3.27%vs 31.17%±4.40%和33.67%±3.50%vs 44.50%±3.78%,P均〈0.01）,细胞增殖能力下降（0.43±0.08 vs 0.64±0.07,P〈0.01）,贴壁细胞减少（6.835个±1.605个vs 10.175个±1.945个,P〈0.01）,细胞迁移能力下降（7.83个±1.94个vs 11.83个±2.48个,P〈0.05）。结论肺动脉高压的发生与骨髓内皮祖细胞功能的异常存在明显的相关性。     

冠脉介入治疗对不稳定性心绞痛内皮功能及内皮祖细胞的影响

目的:探讨不稳定性心绞痛患者行冠脉介入治疗前后循环内皮祖细胞(EPCs)数量及功能与血管内皮功能的关系。方法:将入选患者分为二组,第一组为不稳定性心绞痛患者行冠脉介入治疗组,另一组为不稳定性心绞痛患者单纯药物组,均在入院时、术后6个月采用流式细胞仪测定外周血中CD34+/KDR+单个核细胞的水平;采取外周血分离单个核细胞体外诱导培养2周,FITC-UEA-1和DiI-acLDL免疫荧光染色双阳性细胞为正在分化的内皮祖细胞,分别观察其集落形成、增殖及迁移能力;采用高分辨率二维超声检测肱动脉血流介导的内皮依赖性血管舒张功能(FMD)。结果:与术前及对照组相比,术后6个月实验组FMD有明显改善,外周血内皮祖细胞的数量及功能亦有明显增加(P<0.05);直线相关分析显示PCI术后FMD与外周血内皮祖细胞的数量呈正相关(r=0.759)。结论:冠脉介入治疗后不稳定性心绞痛患者的内皮功能及内皮祖细胞数量及功能在术后6个月均较术前及对照组增加,说明冠脉介入治疗通过内皮祖细胞的动员有助于改善动脉血管内皮功能。     

冠状动脉慢血流患者外周血内皮祖细胞功能的改变

目的:观察冠状动脉慢血流患者外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)功能的改变。方法:选择30例冠状动脉造影证实为慢血流的患者为CSF组,冠脉造影血流正常的患者30例为NCF组。以校正TIMI帧数>27,诊断为冠状动脉慢血流。采取外周血分离单个核细胞体外诱导培养1周,在显微镜下计数,并观察EPCs增殖能力、迁移能力、黏附能力。结果:CSF组外周血EPCs数量及增殖、迁移、黏附能力均显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:CSF患者外周血EPCs功能降低可能参与CSF现象发生的病理生理过程中。     

内皮祖细胞增殖、迁移和黏附能力与端粒酶活性的关系

目的 观察体外培养外周血内皮祖细胞(EPCs)增殖、迁移和黏附能力与EPCs端粒酶活性之间的关系.方法 密度梯度离心法获取人外周血单个核细胞(MNCs),接种至明胶包被的培养板上,培养7 d后进行细胞免疫组化鉴定EPCs,采用MTT比色法、Transwell小室和黏附能力测定实验,观察EPCs的增殖、迁移和黏附能力.TRAP-PCR银染法检测EPCs端粒酶活性.结果 从人外周血能成功分离EPCs细胞.从冠心病患者分离的EPCs增殖、迁移、黏附能力较非冠心病患者下降.冠心病患者EPCs端粒酶活性较非冠心病患者低.结论 冠心病患者EPCs功能显著减弱.可能与EPCs端粒酶活性降低有关.     

辛伐他汀治疗激素性股骨头坏死患者的效果观察及对循环内皮祖细胞功能的影响

目的探讨辛伐他汀治疗激素性股骨头坏死的临床疗效及其对循环内皮祖细胞功能的影响。方法选择华北油田总医院骨科2010年2月～2012年10月诊治的激素性股骨头坏死患者24例,随机分为治疗组及对照组,每组各12例,同时设立12例正常组。所有患者均予常规治疗,治疗组在常规治疗基础上加用辛伐他汀治疗。采用Harris评分对其临床疗效进行评估,同时对各组患者治疗前后循环内皮祖细胞的体外增殖、黏附、迁移能力进行检测。结果治疗组及对照组循环内皮祖细胞的体外增殖能力[（0.52±0.14）和（0.53±0.17）]、黏附能力[（5.93±1.67）个/HPF和（5.67±1.58）个/HPF]、迁移能力[（6.28±1.53）个/HPF和（6.64±1.75）个/HPF]均较正常组[（0.76±0.13）、（13.42±3.15）个/HPF、（13.62±3.73）个/HPF]显著下调,差异均有高度统计学意义（均P〈0.01）。治疗组经辛伐他汀治疗12周后其循环内皮祖细胞的体外增殖能力（0.72±0.15）、黏附能力[（11.93±3.45）个/HPF]、迁移能力[（10.56±3.09）个/HPF]较对照组[（0.62±0.11）、（8.51±3.63）个/HPF、（7.48±3.13）个/HPF]显著上调,差异均有高度统计学意义（均P〈0.01）;同时治疗组Harris评分[（93.47±4.06）分]也明显高于对照组[（87.63±3.59）分],差异有统计学意义（P〈0.05）。结论辛伐他汀能够通过显著改善激素性股骨头坏死患者循环内皮祖细胞的功能状态,从而实现对该疾病的有效治疗。     

大鼠脾脏与骨髓源内皮祖细胞生物学特性的对比研究

目的 体外分离培养Sprague Dawley(SD)大鼠脾脏和骨髓来源内皮祖细胞(EPCs),并比较其生物学特性.方法 采用密度梯度离心法,从健康4周龄SD大鼠脾脏和骨髓中分离出单个核细胞,体外诱导分化为EPCs,对比分析两种EPCs的形态、增殖、迁移、黏附和一氧化氮(NO)分泌能力.结果 从脾脏和骨髓均可分离获得大量单个核细胞,但骨髓组织可获得的细胞数量更多,两种来源的细胞在体外诱导培养均可形成类似于血岛样集落,绝大部分细胞吞噬DiI荧光标记的乙酰化低密度脂蛋白和绿色荧光标记的荆豆凝集素双染为阳性;骨髓来源的EPCs在细胞增殖、迁移、黏附扣NO分泌能力等方面均显著高于脾脏来源的EPCs.结论 骨髓较脾脏更适宜作为体外培养EPCs的组织来源.     

中重度阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者外周血内皮祖细胞数量和功能的变化

目的〖KG*2〗探讨中重度阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（obstructive sleep apnea hypopnea syndrome,OSAHS）患者外周血中内皮祖细胞数量和功能的变化。 〖HTH〗方法〖KG*2〗采用前瞻性研究方法,收集中重度OSAHS成人患者30例为OSAHS组,同时选择健康人30例为对照组,无菌空腹采集10 mL 新鲜静脉全血,采用淋巴分离液分离及密度梯度离心法提取单核细胞,以内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）培养基培养,使用荧光显微镜鉴定内皮祖细胞;评估2组人群内皮祖细胞数目、迁移能力、增殖能力、黏附能力。 〖HTH〗结果〖KG*2〗OSAHS组EPCs数量、吸光度值、迁移细胞数及黏附率显著低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)。 〖HTH〗结论〖KG*2〗和正常人群比较,中重度OSAHS患者外周血内皮祖细胞数目减少,增殖能力、迁移能力和黏附能力下降。     

高血压患者循环内皮祖细胞改变与Ang-1／Tie-2表达的关系研究

目的研究Ang-1／Tie-2在高血压患者外周血中内皮祖细胞的表达及其调控意义。方法选择医院2012年原发性高血压患者30例为观察组,正常体检人群30例为对照组。测定外周血中内皮祖细胞数量和增殖活性,RT—PCR法和Western-blot法检测Ang-1／Tie-2表达。结果观察组内皮祖细胞数量和增殖活性为（6．17±0．89）×103／L和0．784-0．25,低于对照组（6．94±1．12）×103／L和1．14±0．36（P〈0．05）。观察组内皮祖细胞Ang-1和Tie-2的OD值分别为1．65±0．97和4．32±0．84,均低于对照组2．37±1．52和5．02±1．18（P〈0．05）;观察组内皮祖细胞Ang-1和Tie-2的蛋白表达分别为0．06±0．02和0．09±0．04,均低于对照组0．21±0．05和0．20±0．03（P〈0．05）。结论高血压患者内皮祖细胞数量减少,活性减弱,且内皮祖细胞上Ang-1／Tie-2表达下降,提示Ang-1／Tie-2通路的下调可能影响内皮祖细胞的修复功能。     

原发性高血压对循环内皮祖细胞的影响

目的探讨原发性高血压和循环内皮祖细胞(CEPCs)的关系及血压控制对CEPCs的影响。方法选取原发性高血压患者30例,包括血压未控制者和血压控制达标者各15例,并选取15例健康成人为正常对照。采集外周血进行CEPCs的分离、培养,测定CEPCs的数量、增殖能力、黏附能力及凋亡率,并进行比较分析。结果血压控制达标组和血压未控制组的CEPCs数量、凋亡率、增殖能力和黏附能力与正常对照组间差异均有统计学意义(P<0.01);血压未控制组与血压控制达标组的CEPCs数量、凋亡率、增殖能力间差异均有统计学意义(P<0.01),黏附能力间差异无统计学意义(P>0.05)。结论原发性高血压患者CEPCs受损;在规范服用降压药物控制血压达标的基础上,联合应用能够增加CEPCs数目、改善其功能的药物,可能会使原发性高血压患者获取降压外的效益。     

C反应蛋白对人外周血来源内皮祖细胞Notch信号通路表达影响的实验研究

目的观察C反应蛋白(cRP)对内皮祖细胞(EPC)中Notch信号通路表达的影响。方法密度梯度离心法获取人外周血单个核细胞并培养,FITC-荆豆凝集素I、DiI-乙酰化低密度脂蛋白荧光双染进行鉴定。取生长7～14 d EPC,分为对照组、10和20 mg/L CRP干预组,培养48 h后分别采用四氮唑溴盐比色法、改良的Boyden小室和黏附能力检测各组EPC增殖、迁移和粘附能力。采用RT-PCR检测不同浓度CRP对EPC中Notch信号通路mRNA的影响,Western blot检测各组Notch-1及其配体Jagged-1的蛋白基因表达。结果外周血分离获取的单个核细胞经体外培养后形成了典型的EPC集落,经荧光双染证实为EPC。CRP(10、20 mg/L)组EPC数量分别为(61±3)、(54±3)个,对照组EPC数量为(71±4)个。CRP各组EPC在490 nm吸光度值分别为0.287±0.046、0.211±0.042,对照组为0.386±0.044。与对照组相比,CRP各组EPC黏附数量和迁移数量均显著减少(P<0.05)。CRP处理48 h后EPC中Jagged-1和Notch-1 mRNA含量明显增加,其中10和20 mg/L组Jagged-1 mRNA分别升高了3.84和10.70倍,Notch-1 mRNA分别升高了2.97和3.58倍;差异均具有统计学意义(P<0.05)。10和20 mg/LCRP处理组Jagged-1和Notch-1蛋白表达均高于对照组(P<0.05)。结论 CRP处理后EPC的Notch信号通路表达发生了显著的改变,提示该通路可能是CRP影响EPC生物学功能的机制之一。     

循环中内皮祖细胞与原发性高血压的关系

目的探讨循环内皮祖细胞(EPCs)数量和功能与原发性高血压的关系。方法对34例初诊原发性高血压患者以及30例健康人采用密度梯度离心法获取外周血单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板,培养7天后,收集贴壁细胞,多波长激光共聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-Ⅰ和DiI-acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPCs,流式细胞仪检测其表面标志进一步鉴定EPCs,倒置荧光显微镜下计数。采用MTT比色法、改良的Boyden小室、粘附能力测定实验分别观察EPCs的增殖能力、迁移能力、粘附能力。结果原发性高血压患者循环中EPCs数量比治疗前明显减少(P<0.01),降压达标后原发性高血压患者EPCs数量增加,但与对照组相比,达标后原发性高血压患者EPCs数量仍然少(P<0.05)。原发性高血压患者EPCs的增殖、迁移、贴壁能力受损(P均<0.01);降压达标后的原发性高血压患者EPCs的增殖、迁移、贴壁能力受损没有完全恢复(P均<0.01)。结论原发性高血压患者循环EPCs数量减少,功能受损;血压增高是循环EPCs数量和功能改变的原因之一,循环EPCs数量和功能的改变可能还参与原发性高血压的发生和发展。     

粒细胞集落刺激因子动员骨髓内皮祖细胞对急性肾损伤的修复作用

目的急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)影响肾内皮细胞的结构和功能,所以内皮的修复是AKI治疗的重要靶点。观察应用粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor,G-CSF)对由内毒素诱导的AKI小鼠外周血中内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的数量、骨髓源性EPCs的增殖能力,以及向肾组织中归巢的影响。并观察由骨髓动员的EPCs对肾损伤的修复作用。方法健康CD-1雄性小鼠30只,随机分为假手术组(A组)、肾损伤对照组(B组)和G-CSF预处理肾损伤组(C组),每组10只。观察各组小鼠肾功能以及肾组织形态学变化、炎性因子水平、外周血中EPCs数量、肾组织细胞凋亡指数、CD34+和胎肝激酶-1(fetla liver kinase 1,FLK-1+)阳性细胞的表达。并获取小鼠骨髓,分离、培养EPCs,检测EPCs的增殖、迁移和黏附能力。结果 B组和C组小鼠肾功能受损,炎性反应、肾组织学改变前者比后者重(P<0.05);外周血EPCs含量B组比A组多,明显比C组少,肾组织CD34和FLK阳性细胞的表达B组比A组多,但少于C组(P<0.05);肾细胞凋亡指数B组最高(P<0.05);B组骨髓来源的EPCs数量比A组多,但增殖能力和迁移能力与A组比较差异无统计学意义,各指标均明显低于C组(P<0.05)。结论 G-CSF可降低AKI小鼠炎性反应的水平,有效动员骨髓来源的EPCs,并促进其增殖和迁移,增加外周血EPCs含量,对AKI小鼠肾功能起到保护作用。     

Carbon Monoxide Releasing Molecule Accelerates Reendothelialization after Carotid Artery Balloon Injury in Rat

Objective This study was aimed to investigate the effects of carbon monoxide releasing molecule (CORM-2), a novel carbon monoxide carrier, on the reendothelialization of carotid artery in rat endothelial denudation model.
Methods Male rats subjected to carotid artery balloon injury were treated with CORM-2, inactive CORM-2 (iCORM-2) or dimethyl sulfoxide (DMSO). The reendothelialization capacity was evaluated by Evans Blue dye and the immunostaining with anti-CD31 antibody. The number of circulating endothelial progenitor cells (EPCs) was detected by flow cytometry. The proliferation, migration, and adhesion of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) were assessed by using [3H]thymidine, Boyden chamber and human fibronectin respectively. The expressions of protein were detected by using western blot analysis.
Results CORM-2 remarkably accelerated the re-endothelialization 5 d later and inhibited neointima formation 28 d later. In addition, the number of peripheral EPCs significantly increased in CORM-2-treated rats than that in iCORM-2 or DMSO-treated rats after 5 d later. In vitro experiments, CORM-2 significantly enhanced the proliferation, migration and adhesion of HUVECs. The levels of Akt, eNOS phosphorylation, and NO generation in HUVECs were also much higher in CORM-2 treated group. Blocking of PI3K/Akt/eNOS signaling pathway markedly suppressed the enhanced migration and adhesion of HUVECs induced by CORM-2.
Conclusion CORM-2 could promote endothelial repair, and inhibit neointima formation after carotid artery balloon injury, which might be associated with the function changes of HUVECs regulated by PI3K/Akt/eNOS pathway.