双色FISH检测21号染色体及DSCR Cosmid克隆制图

应用Ｂｉｏｔｉｎ－１６－ｄＵＴＰ和Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－１１－ｄＵＴＰ分别标记人２１／１３号染色体着丝粒区ＤＮＡ探针（Ｄ１３ＺＩ／Ｄ２１ＺＩ）和Ｄｏｗｎ综合征核心区（ＤＳＣＲ）ＣｏｓｍｉｄＤＮＡ探针，与人类正常二倍体染色体进行原位杂交（ＩＳＨ），并用相应的免疫荧光系统检测杂交信号，在两条１３号和两条２１号染色体着丝粒区显示绿色（ＦＩＴＣ）信号；在两条２１号染色体长臂（２１ｑ２２）显示红色（Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ）信号。双色ＦＩＳＨ为检测２１号染色体数目和结构异常提供了可靠的手段，为基因在染色体上制图提供了有效的方法。     

用PCR技术标记双链DNA探针

利用ＰＣＲ技术制备生物素或地高辛标记的ＤＮＡ探针，经原位杂交试验及敏感性和特异性检测，均取得满意效果，ＰＣＲ标记法具有经济，快速，简易和标记量大等优点，实践中发现Ｂｉｏ／Ｄｉｇ－１１－ＵＴＰ的质量，ｄＴＴＰ和Ｄ－１１－ｄＵＴＰ的比例及起始ＤＮＡ模板浓度是标记成败的关键。     

含尿嘧啶DNA糖基化酶的聚合酶链反应检测血清HBV DNA

为探讨含ｄＵＴＰ／尿嘧啶ＤＮＡ糖基化酶（ｄＵＴＰ／ＵＤＧ）ＰＣＲ试剂（抗污染ＰＣＲ试剂，ＰＣＲ－ｄＵＴＰ／ＵＤＧ）抗ＰＣＲ产物污染的能力及其在临床检测中的应用，采用该试剂检测２０４份病毒性肝炎患者血清中ＨＢＶ ＤＮＡ，并与普通ＰＣＲ试剂比较。结果显示：抗污染ＰＣＲ试剂有较强的抗污染能力，至少可阻止１００ｎｇ的ＰＣＲ产物的污染。该试剂与地伐辛素探针分子杂交所测结果的符合率（８９．３２％）高于普通ＰＣ     

人bcl-2基因反义cDNA探针的制备和地高辛标记

制备地高辛标记的人ｂｃｌ－２基因的反义链ｃＤＮＡ探针。方法：首先从Ｕ９３７细胞总ＲＮＡ经逆转录－聚合酶链反应得到ｂｃｌ－２特异的ｃＤＮＡ片段，然后以此为模板利用ＤＩＧ－１１－ｄＵＴＰ作另一轮非对称ＰＣＲ扩增。结果：合成了灵敏、特异的ＤＩＧ－标记的ｂｃｌ－２反义单链ｃＤＮＡ探针。结论：本文报道的方法是制备ＤＩＧ－标记的单链反义ｃＤＮＡ探针的一个有效手段。     

随机扩增多态DNA技术在地高辛标记HCMV DNA探针中的应用研究

应用ＲＥＡＰＤ－ＰＣＲ技术结合地高辛非放射生标记制备了人巨细胞病毒ＤＮＡ探针，并与常规随机引物法进行对照。ＲＡＰＤ－ＰＣＲ制备的ＨＣＭＶ ＤＮＡ探针长度呈多态性，扩增过程中不需合成特异引物，探针特异性强，产量高，用５０ｍｇ ＨＣＭＶ ＤＮＡ模板即可制备８．０μｇ探针；标记体系中ＲＡＰＤ－ＰＣＲ方法Ｄｉｇ－ｄＵＴＰ浓度为５．２％。     

人bcl—2基因反义cDNA探针的制备和地高辛标记

目的：制备地高辛标记的ｂｃｌ－２基因的反义链ｃＤＮＡ探针。方法首先从Ｕ９３７细胞总ＲＮＡ经逆转录－聚合酶链反应得到ｂｃｌ－２特异的ｃＤＮＡ片段，然后以此模板利用ＤＩＧ－ｄＵＴＰ作另一轮非对称ＰＣＲ扩增。结果：合成了灵敏，特异的ＤＩＧ－标记的ｂｃｌ－２反义单链探针。结论：本文报道的方法是制备ＤＩＧ－标记的单链的ｃＤＮＡ探针的一个有效手段。     

人胃癌细胞株Rb抗癌基因缺失的研究

以Ｒｂ基因ｃＤＮＡ３．８Ｋｂ片段做探针，经非放射性地高辛—ｄＵＴＰ及放射性同位素α－３２Ｐ－ｄｃＴＰ两种标记方法标记，对６株人胃癌细胞株的ＤＮＡ进行点杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，显示５株细胞Ｒｂ基因完全缺失，１株不全缺失伴突变。     

用尿嘧啶－DNA－糖基化酶控制聚合酶链反应的产物污染

聚合酶链反应（ＰＣＲ）灵敏度极高，痕量的ＰＣＲ产物能污染新的ＰＣＲ体系（称为产物污染）导致假阳性结果，我们通过在所有的ＰＣＲ扩增中掺入ｄＵＴＰ使ＰＣＲ产物含“ｄＵ”，在以后的ＰＣＲ扩增前用尿嘧啶－ＤＮＡ糖基化酶（Ｕｒａｃｉｌ－ＤＮＡ－Ｇｌｙｃｏｌａｓｅ，ＵＤＧ）处理，然后加热去除ＵＤＧ活性防止了产物污染。ＵＤＧ切割磷酸糖骨架上的尿嘧啶，可阴止ＤＮＡ聚合酶对它的复制，而对普通ＤＮＡ（即含”ｄＴ”）无影响。因为ＵＤＧ不与ｄＵＴＰ反应，而且在ＰＣＲ扩增前加热变性失活，使含尿嘧啶的污染物的污染得到很好控制。     

随机扩增多态DNA技术在地高辛标记HCMV DNA探针中的应用研究

应用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ技术结合地高辛非放射性标记系统制备了人巨细胞病毒ＤＮＡ探针，并与常规随机引物法进行对照。ＲＡＰＤ－ＰＣＲ制备的ＨＣＭＶＤＮＡ探针长度呈多态性，扩增过程中不需合成特异引物，探针特异性强，产量高，用５０ｎｇＨＣＭＶＤＮＡ模板即可制备８．０μｇ探针；标记体系中ＲＡＰＤ－ＰＣＲ方法Ｄｉｇ－ｄＵＴＰ浓度为５．２％。表明ＲＡＰＤ－ΡＣＲ技术可用于少量ＤＮＡ模板制备大量ＤＮＡ探针，适用于原位杂交等需高浓度探针的核酸杂交及临床大量标本的测试，是一种经济方便的探针制备技术     

含尿嘧啶DNA糖基化酶的聚合酶链反应检测血清HBV DNA

为探讨含ｄＵＴＰ／尿嘧啶ＤＮＡ糖基化酶（ｄＵＴＰ／ＵＤＧ）ＰＣＲ试剂（抗污染ＰＣＲ试剂，ＰＣＲ－ｄＵＴＰ／ＵＤＧ）抗ＰＣＲ产物污染的能力及其在临床检测中的应用，采用该试剂检测２０４份病毒性肝炎患者血清中ＨＢＶＤＮＡ，并与普通ＰＣＲ试剂比较。结果显示：抗污染ＰＣＲ试剂有较强的抗污染能力，至少可阻止１００ｎｇ的ＰＣＲ产物的污染。该试剂与地戈辛素探针分子杂交所测结果的符合率（８９．３２％）高于普通ＰＣＲ与分子杂交所测的符合率（８１．４５％）。表明抗污染ＰＣＲ试剂的应用有利于防止ＰＣＲ产物的污染，提高ＰＣＲ的准确性和特异性。     

一种从总RNA制备非放射性cDNA探针的方法

目的介绍一种从总ＲＮＡ制备ＤＩＧ标记的非放射性ｃＤＮＡ探针的方法。方法以总ＲＮＡ的反转录产物为模板,用随机引物延伸法掺入ＤＩＧ－１１－ｄＵＴＰ来制备ｃＤＮＡ探针。结果该方法标记的探针灵敏度较高,可达０．０１ｇｐ。结论这种ｃＤＮＡ探针可用于差异筛选的反向杂交及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交。     

地高辛标记核酸探针的应用

本工作中以肿瘤多药耐受基因ＭＤＲ－１的ｃＤＮＡ的限制片段（５Ａ）为模板ＤＮＡ，把模板ＤＮＡ用随机引物法标记上地高辛标记的脱氧尿苷三磷酸ＤＩＧ－ｄＵＴＰ。将此地高辛标记的核酸探针与变性的同源质粒及部分头颈肿瘤组织ＲＮＡ进行点杂交后，用抗地高辛－碱性磷酸酶及其底物进行酶联免疫分析，探讨了应用这种非放射性地高辛标记的ＤＮＡ探针及其检测系统的敏感性以及应用价值。     

人IL—3cDNA探针制备及应用

采用多聚酶连反应（ＰＣＲ）扩增人ＩＬ—３ｃＤＮＡ片段,以地高辛（Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ—１１—ｄＵＴＰ）为标记物,随机引物法标记ＩＬ—３ｃＤＮＡ探针。探针经斑点杂交和核酸原位杂交证明：用制备ＩＬ—３ｃＤＮＡ探针检测细胞ＩＬ－－３ｍＲＮＡ表达具有特异性强,灵敏度高,使用简便,杂交结果直观,探针可较长时间保存和无放射性污染等优点。     

人胃癌细胞株Rb抗癌基因缺失的研究

以Ｒｂ基因ｃＤＮＡ３．８Ｋｂ片段做探针，经非放射性地高辛－ｄＵＴＰ及放射性同位素α－＾３２Ｐ－ｄＣＴＰ两种标记方法标记，对６株人胃癌细胞株的ＤＮＡ进行点杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，显示５株细胞Ｒｂ基因完全缺失，１株不全缺失伴突变。     

地高辛标记核酸探针的应用

本工作中以肿瘤多药耐受基因ＭＤＲ－１的ｃＤＮＡ的限制片段（５Ａ）为模板ＤＮＡ，把模板ＤＮＡ用随机引物法标记上地高辛标记的脱氧尿苷三磷酸ＤＩＧ－ｄＵＴＰ。将此地高辛标记的核酸探针与变性的同源质粒及部分头颈肿瘤组织ＲＮＡ进行点杂交后，用抗地高辛－碱性磷酸酶及其底物进行酶联免疫分析，探讨了应用这种非放射性地高辛标记的ＤＮＡ探针及其检测系统的敏感性以及应用价值。     

种植前人胚胎细胞荧光原位杂交检测染色体非整倍体

目的：建立应用１３／２１染色体特异性探针荧光原位杂交技术检测种植前人类胚胎１３／２１染色体非整倍体的方法。方法：应用ＦＩＴＣ标记的１３／２１染色体着丝粒部位杂交的α卫星重复序列探针对２７个未受精卵母细胞和３６个多精受精胚胎的卵裂球进行原位杂交。结果：单倍体卵母细胞核呈现２个杂交信号，固定率８０％，杂交效率６７％；多精受精胚胎的卵裂球核呈现６个杂交信号，固定率７２％，杂交效率６５％。     

新染色体8q24.1带特异性微卫星DNA的筛选和分析

运用人类高分辨染色体显微切割、ＰＣＲ和微克隆技术构建的８ｑ２４．１带特异性ｐＵＣ１９文库，筛选出一个含ＣＡ重复的新的多态微卫星ＤＮＡ［（ＣＡ）ｎ］。经ＰＣＲ检测人鼠杂种细胞板，证实其来源于人８号染色体；在正常人群中检出１１个等位片段，杂合度为０．８４；在１１个家系中进行连锁分析。结果显示，此多态标记与三个已知的位于８ｑ２３－２４．１区域的微卫星ＤＮＡ（Ｄ８Ｓ８５，Ｄ８Ｓ１９９，Ｄ８Ｓ２８１）紧密连锁，其在８号染色体遗传图谱上的相对位置为：着丝粒－Ｄ８Ｓ８５－新（ＣＡ）ｎ－Ｄ８Ｓ１９９－长臂末端。     

用尿嘧啶—DNA—糖基化酶控制聚合酶链反应的产物污染

聚合酶链反应灵敏度极高，痕量的ＰＣＲ产物能污染新的ＰＣＲ体系导致假阳性结果。我们通过在所有的ＰＣＲ扩增中渗入ｄＵＴＰ使ＰＣＲ产物含“ｄＵ”，在以后的ＰＣＲ扩增前用尿嘧啶－ＤＮＡ糖基化酶处理，然后加热去除ＵＤＧ活性防止了产物污染。     

小鼠α2(Ⅰ)胶原基因DNA结合蛋白研究

目的：初步分析小鼠α２（Ⅰ）胶原基因上游５‘－ＵＴＲ近端８００ｂｐ（－７８０￣５４ｂｐ）序列的ＤＮＡ结合蛋白。方法：ＰＣＲ扩增小鼠α２（Ⅰ）胶原基因－２５８￣＋５４ｂｐ,－５１９￣－２４８ｂｐ,－７４１￣－５０１ｂｐ片段,Ｄｉｇ－ｄＵＴＰ末端标记ＰＣＲ产物,与经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ并转印至膜上的胶原产生细胞的核抽提物进行ＤＮＡ－蛋白质结合反应,以抗Ｄｉｇ抗体检测结合反应信号。结果：Ⅰ型胶原基因上游５’     

实验性犬早期心肌梗塞磁共振成象与病理的相关性研究

将１６只结扎冠状动脉左前降支的犬分为两组。分别进行手术前及术后３０ｍｉｎ至３ｈ的ＭＲＩ平扫和Ｇｄ－ＤＴＰＡ增强扫描。观察其磁共振征象，并与病理改变对照。结果表明：平扫组部分犬出现心前壁高信号和腔内流动信号，而增强扫描组犬在注射Ｇｄ－ＤＴＰＡ后３ｍｉｎ～３０ｍｉｎ均有增强，其增强区与相对在的心肌大切片ＴＴＣ染色所示梗塞区大小形态相一致。