Ca2+在紫外线诱导成纤维细胞凋亡中的作用

目的了解细胞内外钙离子浓度对紫外线(UVB)辐射诱导成纤维细胞(NIH3T3)凋亡作用的影响.方法 UVB照射成纤维细胞10 min,培养12 h后,用流式细胞仪测定凋亡率. 结果 UVB照射组比UVB不照射组凋亡率有明显增加;UVB照射组内各组间凋亡率因细胞内外Ca2+浓度不同存在明显差异. 结论 UVB辐射诱导成纤维细胞发生凋亡与胞内外Ca2+浓度有关,Ca2+参与了凋亡的信号转导.UVB诱导成纤维细胞发生的凋亡,主要通过Ca2+转导凋亡信号这一途径,还反映出胞浆Ca2+升高既来源于胞内钙池,又来源于胞外游离Ca2+.     

HAART治疗与心理干预对HIV感染者外周血CD4~+T细胞凋亡的影响

目的观察高效抗逆转录病毒疗法(HAART)与心理干预对HIV感染者外周血CD4+T细胞内Ca2+浓度、细胞凋亡率、细胞线粒体膜电位的改变,探讨其对HIV感染者外周血CD4+T细胞凋亡的影响。方法应用免疫磁珠分离外周血CD4+T细胞,流式细胞术检测细胞内Ca2+浓度,线粒体膜电位,细胞凋亡率。结果 HAART治疗心理干预对HIV感染者外周血CD4+T细胞凋亡百分率明显低于对照组,降低细胞内Ca2+浓度,提高线粒体膜电位,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 HAART治疗可抑制HIV感染者外周血CD4+T细胞凋亡的发生,可能与其稳定线粒体膜电位,抑制细胞内钙超载作用相关。     

HAART治疗与心理干预对HIV感染者外周血CD4+T细胞凋亡的影响

目的 观察高效抗逆转录病毒疗法(HAART)与心理干预对HIV感染者外周血CD4+T细胞内Ca2+浓度、细胞凋亡率、细胞线粒体膜电位的改变,探讨其对HIV感染者外周血CD4+T细胞凋亡的影响.方法 应用免疫磁珠分离外周血CD4+T细胞,流式细胞术检测细胞内Ca2+浓度,线粒体膜电位,细胞凋亡率.结果 HAART治疗心理...     

As2O3引起LoVo细胞内钙离子浓度增高及意义

目的　观察LoVo细胞株经As2 O3 作用后细胞内钙离子浓度的改变并探讨其意义。方法　应用流式细胞仪观察亚二倍体细胞峰并检测LoVo细胞内的钙离子浓度。应用光镜、电镜观察As2 O3 对LoVo细胞生长的抑制作用、凋亡细胞形态和线粒体形态。结果　①As2 O3 引起细胞内Ca2 +浓度升高 (P <0 .0 1) ,呈剂量依赖关系 (P<0 .0 1或 0 .0 5 ) ,在 2 .0 μmol/L组Ca2 +浓度最高 ;②在各时间段 ,对照组的Ca2 +浓度无变化 (P >0 .0 5 ) ,而经As2 O3 作用后Ca2 +浓度出现变化 (P <0 .0 1或 0 .0 5 ) ,在 2 0min时Ca2 +浓度均已增高 ,10h时增高最明显 ,至 2 4h ,0 .5 μmol/LCa2 +浓度回复到 2 0min时的水平 ,1.0和 2 .0 μmol/L组则低于 2 0min时的浓度 ;③As2 O3 抑制LoVo细胞生长 ;④LoVo细胞经As2 O3 作用后在光镜、电镜下出现细胞凋亡的形态学改变 ,并见线粒体肿大、嵴破坏或消失。流式细胞仪检测发现高浓度组凋亡细胞数高于对照组和低浓度组 (P <0 .0 1或 0 .0 5 )。结论　As2 O3 作用于LoVo细胞引起细胞内钙离子浓度增高 ,可能通过引起线粒体功能的改变而诱导细胞凋亡。     

钙敏感受体通过调控线粒体内钙参与心肌细胞缺氧-复氧损伤所致的凋亡

目的 探究在心肌缺血-再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)过程中,钙敏感受体(calcium sensing receptor,CaR)参与IP3通路引起肌浆网的内钙耗竭,从而导致线粒体凋亡通路活化的机制.方法 在培养的乳鼠心肌细胞模拟缺氧-复氧,应用IP3信号通路不同抑制剂激动CaR后观察线粒体内钙的变化,检测对线粒体势能的影响.结果 Hoechst 33342染色法分析发现凋亡细胞呈现典型的染色质浓缩成团块状.细胞凋亡率在H-Re组(33±6)％、Ca+Ni+Cd+ H-Re组(31±5)％和Gd+ Ni+ Cd+H-Re 组(34±3)％明显高于NPS-2390+ Ca+ Ni+ Cd+H-Re组(20±4)％、2-APB+ Ca+ Ni+ Cd+ H-Re组(18±4)％和Ru+Ca+Ni+Cd+H-Re组(23±5)％.线粒体内钙浓度和线粒体膜电位的检测结果显示:在Ca+Ni+Cd+H-Re组,线粒体内钙浓度显著升高,线粒体膜电位明显下降;在2-APB+ Ca+Ni+Cd+H-Re组,线粒体内钙浓度维持在较低水平,线粒体膜电位维持在较高水平.应用Ruthenium red(线粒体钙单向转运体的抑制剂),观察线粒体内钙浓度变化.结果发现,在Ru+ Ca+Ni+Cd+H-Re组,线粒体内钙维持在较低的水平,而线粒体膜电位维持在较高的水平.结论 钙敏感受体通过线粒体-肌浆网膜引起线粒体内钙增加,激活线粒体凋亡途径而导致心肌细胞凋亡.     

四氯化碳对非洲绿猴肾细胞损伤机理的研究

目的　实验研究四氯化碳染毒 2 4h对非洲绿猴肾细胞的损伤及其机理。方法　运用显微荧光术测定非洲绿猴肾细胞 (Vero细胞 )内活性氧 (ROS)含量及游离Ca2 + 浓度 ,同时 ,测定Vero细胞培养上清液乳酸脱氢酶(LDH)活力用于检查Vero细胞受损情况。结果　接触浓度为 1 0mmol L四氯化碳的Vero细胞内ROS含量及游离Ca2 + 浓度与对照组比较差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,同时 ,表示Vero细胞受损指标 (LDH活力 )差异也无显著性 (P >0 .0 5 ) ;而接触浓度为 4 0、8.0mmol L四氯化碳的Vero细胞内ROS含量及游离Ca2 + 浓度均显著性高于对照组 (P <0 .0 1) ,其Vero细胞受损也均显著性增加 (P <0 .0 1)。结论　较高浓度的四氯化碳能损伤Vero细胞 ,其损伤的可能途径是通过提高Vero细胞内ROS含量及游离Ca2 + 浓度。     

中波紫外线诱导人真皮成纤维细胞凋亡的研究

①目的　探讨中波紫外线 (UVB)辐射所致人真皮成纤维细胞凋亡的机制。②方法　建立UVB(辐射强度为 1 .1 76× 1 0 - 4 J/cm2 )对体外培养人真皮成纤维细胞氧化损伤模型。用MTT法检测细胞增殖活性 ,酶法测定胞浆中超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH px)活性和活性氧 (ROS)的含量 ,流式细胞仪An nexinV FITC法检测细胞的凋亡率和死亡率。③结果　在离体条件下 ,UVB可显著抑制成纤维细胞的增殖活性 ;UVB可降低细胞内SOD ,GSH px活性 ,显著提高ROS的含量 (t =3.87～ 2 4 .4 1 ,P <0 .0 1 ) ;同时可显著提高细胞的凋亡率 (t =57.4 7,P <0 .0 1 )和死亡率 (t =1 3.2 7,P <0 .0 1 )。④结论　UVB所致人真皮成纤维细胞凋亡与其产生氧自由基、抑制细胞清除自由基能力有关。     

长波紫外线对人真皮成纤维细胞线粒体损伤的研究

①目的　观察长波紫外线 (UVA)对人真皮成纤维细胞线粒体的损伤作用及其机制。②方法　用辐射强度 1.90 5× 10 -3 J/m2 UVA辐射人真皮成纤维细胞后 ,检测胞浆内活性氧 (ROS)含量、超氧化物歧化酶 (SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH px)活性、线粒体膜电位 (ΔΦM) ,同时观察成纤维细胞的超微结构。③结果　UVA辐射成纤维细胞后 ,细胞浆内ROS含量升高 (t=5 1.71,P <0 .0 1) ,SOD和GSH px活性降低 (t=93.0 0 ,3.87,P <0 .0 1) ,线粒体膜电位降低 ,与未辐射组相比差异有显著性 (t =14 .6 7,P <0 .0 1)。④结论　UVA对线粒体的损伤作用与氧自由基生成及其抑制细胞抗氧化能力有关     

姜黄素对中波紫外线照射HaCaT细胞凋亡的影响

目的研究姜黄素对中波紫外线（UVB）照射HaCaT细胞凋亡的影响。方法使用MTT法测定不同浓度姜黄素对UVB照射HaCaT细胞增殖的影响;流式细胞仪测定细胞凋亡率;分光光度法检测反映出细胞内caspase-3及cas-pase-9活性的改变。结果 UVB照射HaCaT细胞后细胞增殖较未接受UVB照射组明显下降（P〈0.05）,细胞凋亡率可增加5%以上;对姜黄素做预处理后,UVB照射可在一定程度上抑制HaCaT细胞增殖,尤其是当浓度在10.0μmol/L时,细胞凋亡明显,caspase-3及caspase-9的活性也明显增加。结论姜黄素能增强中波紫外线诱导HaCaT细胞的凋亡,这一过程可能是通过激活caspase-3及caspase-9而实现的。     

紫外线诱导成纤维细胞凋亡时胞浆pH值的变化

研究紫外线诱导成纤维细胞凋亡时胞浆ＰＨ值的变化。方法利用粘附式细胞仪测定ＵＶＢ诱导ＮＨ３Ｔ３细胞凋亡时，胞浆ＰＨ值的变化。结果ＮＨ３Ｔ３细胞经ＵＶＢ照射后，胞内ＰＨ值会逐渐升高，并在１．６ｈ左右达到最大值，２５ｍｉｎ后恢复正常，在细胞内外钙被螯合后，不管ＵＶＢ照射与否，胞内ＰＨ值无变化。     

姜黄素对中波紫外线照射后HaCaT细胞氧化致癌的预防作用

目的：探讨姜黄素(Cur)对中波紫外线（UVB）照射后人类角质形成细胞(HaCaT)氧化致癌的预防作用及其机制。方法：细胞经UVB照射后,立即加入浓度分别为1.25、2.50和5.00 mg•L^-1的Cur继续培养,用酶化学法测定氧化和抗氧化物含量;由罗丹明123和Fluo-3/AM荧光强度计算细胞Δψ和［Ca²⁺］i,用流式细胞术检测凋亡相关因子蛋白表达。结果：与对照组比较,UVB照射组HaCaT细胞Δψ、SOD和GSH-Px含量及Bcl-2蛋白表达均显著下降（P<0.01）,而细胞［Ca²⁺］i、ROS、NO和MDA含量以及caspase-3、cytochrom c和Bax蛋白表达均明显升高（P<0.01）;与UVB照射组比较,UVB照射后加入Cur各组细胞Δψ和Bcl-2蛋白表达以及2.50和5.00 mg•L^-1组的SOD和GSH-Px含量均明显升高（P<0.01）,而各加药组的ROS、NO和MDA含量以及caspase-3、cytochrom c和Bax蛋白表达和2.50和5.00 mg•L^-1组的［Ca²⁺］i均显著降低（P<0.01）,Bcl-2/Bax比值为0.58~2.50,并显示Cur剂量-效应关系。结论：Cur可能通过提高线粒体膜电位和抗氧化酶活性,降低［Ca²⁺］i、氧化物含量及凋亡相关诱导因子蛋白表达,从而达到其抗UVB辐射细胞致癌的预防作用。     

丹参素对缺氧/缺糖损伤神经细胞线粒体的保护作用

目的观察丹参素对SH-SY5Y细胞缺氧/缺糖损伤时胞浆内[Ca2 ]i、细胞凋亡率、细胞活性和线粒体膜电位的变化,探讨其对神经细胞线粒体的保护作用及其可能的机理.方法应用细胞培养、四唑盐比色实验(MTT)检测细胞活力,流式细胞术检测细胞内[Ca2 ]i、细胞凋亡百分率和线粒体膜电位.结果 SH-SY5Y细胞缺氧/缺糖损伤2 h时,细胞内[Ca2 ]i明显增加,为8.46 nmol/L(P<0.01),细胞凋亡率明显增高,为18.59% (P<0.01),细胞内[Ca2 ]i的浓度4 h时达到高峰,为9.89 nmol/L(P<0.01),而后呈下降趋势,细胞凋亡率随缺氧/缺糖损伤时间的延长而明显增高12 h时达到45.91%,细胞经缺氧/缺糖处理2 h后,线粒体膜电位和细胞活性分别降低29.17%(P<0.01)、38.80%(P<0.01),随着缺氧/缺糖时间的延长线粒体膜电位和细胞活性进一步下降, 12 h时分别降低56.72%(P<0.01)、63.58%(P<0.01),丹参素能显著降低细胞内[Ca2 ]i,抑制细胞凋亡的发生,提高细胞活性和线粒体膜电位,与缺氧/缺糖组相比均有显著性差异(P<0.05,P<0.01).结论丹参素可抑制缺氧/缺糖损伤所致的线粒体膜电位的降低,从而具有稳定线粒体膜电位的作用,抑制细胞凋亡的发生,这种作用可能与其能抑制神经细胞内钙超载有关.     

足月新生儿T淋巴细胞凋亡特性及影响因素的初步观察

目的　探讨足月新生儿T淋巴细胞凋亡特性及其影响因素。②方法　以健康成人为对照 ,采用凋亡细胞计数和片段DNA电泳观察足月新生儿T淋巴细胞凋亡特性 ;用免疫荧光法、ELISA法分别检测足月新生儿CD2 5,CD3 8表达率和IL 2 ,IL 6产生能力 ,并分析其与凋亡率的相关性。③结果　经PHA刺激培养 2 4,48h足月新生儿T淋巴细胞凋亡率明显高于成人组 (t=32 .2 5 8,2 1.6 80 ,P <0 .0 1) ;足月儿组培养 0 ,48h的CD3 8表达率与T淋巴细胞凋亡率呈正相关 (r=0 .894,0 .774,P <0 .0 1) ,而培养 48h的CD2 5表达率与T淋巴细胞凋亡率呈负相关 (r =- 0 .886 ,P <0 .0 1) ;足月儿组IL 6产生水平明显低于成人组 (t=6 .741,P <0 .0 1) ,而T淋巴细胞凋亡率与IL 2 ,IL 6产生水平皆无相关性。④结论　凋亡过剩是新生儿T淋巴细胞功能不成熟的重要特征之一。     

系统性红斑狼疮儿童外周血淋巴细胞凋亡的初步研究

①目的　探讨系统性红斑狼疮 (SLE)儿童外周血淋巴细胞凋亡特性及其与病情和部分免疫指标的相关性。②方法　应用形态法、间接免疫荧光法和免疫金斑法 ,检测 1 8例SLE病儿和 1 5名健康儿童外周血淋巴细胞凋亡率、T淋巴细胞亚群、CD+2 5细胞百分率和抗ds DNA抗体。③结果　培养前及培养 48h ,SLE病儿组外周血淋巴细胞凋亡率均显著低于正常对照组 (t=2 .363 ,2 .954 ,P <0 .0 5 ,0 .0 1 ) ;培养 48h ,活动期病儿外周血淋巴细胞凋亡率明显低于稳定期病儿 (t=2 .2 94,P <0 .0 5) ,抗ds DNA抗体阳性组外周血淋巴细胞凋亡率显著低于抗ds DNA抗体阴性组 (t=2 .92 8,P <0 .0 1 ) ,SLE病儿外周血淋巴细胞凋亡率与CD+4 细胞百分率、CD+4 CD+8细胞比值和CD+2 5细胞百分率皆呈负相关 (r=- 0 .49～ - 0 .59,P <0 .0 1 )。④结论　SLE病儿外周血淋巴细胞凋亡减少 ,此与病儿细胞和体液免疫功能紊乱关系密切     

选择性环氧化酶-2抑制剂对紫外线照射诱导的HaCaT细胞凋亡的影响

目的 研究选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂NS398对长波紫外线/中波紫外线(UVA/UVB)联合照射诱导的HaCaT细胞凋亡的影响.方法 人永生化角质形成细胞株HaCaT 细胞传代培养,以含不同浓度NS398的培养液孵育2 h 后接受UVA/UVB 照射,流式细胞术PI单染法检测细胞凋亡率.结果 紫外线照射能显著诱导HaCaT细胞凋亡(P<0.01), NS398预处理则能有效抵抗紫外线诱导的HaCaT细胞凋亡,且呈浓度依赖性(P<0.05).结论 NS398能抑制紫外线照射诱导的HaCaT细胞凋亡,从而发挥防护紫外线损伤的作用.     

20(S)-人参皂苷Rg3诱导肺癌细胞NCI-H460凋亡的机制

目的：探讨20(S)-人参皂苷Rg3(SPG-Rg3)诱导人大细胞肺癌细胞NCI-H460凋亡及其机制。方法：MTT法测定NCI-H460细胞的增殖,依据其半数抑制浓度（IC₅₀）将SPG-Rg3实验组分为25、50及100 mg•L^-1组,并设空白对照组。采用AO/EB荧光双染、 免疫细胞化学染色、Rhodamine 123摄取法及Fluo-3/AM染色分别观察NCI-H460细胞的凋亡、Bcl-2及Bax蛋白的表达量、线粒体跨膜电位及细胞内游离钙离子浓度。结果：SPG-Rg3能抑制NCI-H460的生长,抑制率与浓度呈正相关 (r=0.764,P<0.05),其IC₅₀值为47.97 mg•L^-1;SPG-Rg3组NCI-H460细胞呈现明显凋亡改变;SPG-Rg3 100 mg•L^-1组细胞内Bcl-2蛋白的表达量明显低于空白对照组（P<0.01）;SPG-Rg3各浓度组细胞Bax蛋白的表达量均明显高于对照组（P<0.001）,并随浓度的增大而增加（P<0.01）;各浓度组细胞内Bax/Bcl-2比值均高于对照组,细胞内线粒体跨膜电位则均低于对照组(P<0.01),并随药物作用浓度的增加而减少,组间比较差异有显著性(P<0.01);各组细胞内游离钙离子浓度明显高于对照组 (P<0.01)。结论：SPG-Rg3能够明显抑制细胞的增殖,诱导细胞凋亡。其作用机制可能是SPG-Rg3促进细胞内Bax蛋白的表达并增加Bax/Bcl-2比值,降低线粒体跨膜电位,提高细胞内游离钙离子浓度,最终经线粒体通路诱导细胞凋亡。     

中波紫外线辐射角质形成细胞核因子κB和P53信号通路的交互作用

目的 研究中波紫外线（UVB）辐射对表皮角质形成细胞核因子κB（NF—κB）和P53信号通路的影响以及NF-κB和P53信号通路的交互作用。方法 正常人表皮角质形成细胞（NHEK）（含野生型p53）和永生化人角质形成细胞株HaCaT（含突变型p53）各分2组于37℃、5％CO2环境培养。当细胞融合达85％时进行UVB（60mJ／cm^2）辐射,其中1组于辐射前1h加入终浓度为5μmol／L具有抗NF-κB活化作用的BAY11-7082。分别提取辐射前后NHEK和HaCaT细胞蛋白和核蛋白,应用Western印迹检测NF-KB、P53和P21蛋白的表达水平,应用电泳迁移变更分析（EMSA）检测NF-κB的转录情况。结果 UVB辐射可激活NHEK和HaCaT的NF-κB、P53和P21的蛋白表达和NF-κB的转录活性。BAY11-7082对NHEK和HaCaT的NF-κB的转录活性均具有显著的抑制作用。作为NF-κB的抑制剂,BAY11-7082还显著抑制了NHEK的P53和P21的蛋白表达（P53：0．08±0．07vs0．78±0．32,P〈0．01;P21：0．65±0．22vs1．58±0．77,P〈0．05）,但不影响HaCaT的P53和P21的蛋白表达。结论 UVB辐射激活表皮角质形成细胞的NF—κB和P53信号通路存在交互作用,这种交互作用与P53功能状况相关。