非小细胞肺癌GATA4启动子甲基化检测及其对细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨GATA4启动子甲基化对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）细胞系A549的增殖和凋亡的影响。方法采用甲基化特异性PCR（MSP）法检测人正常肺上皮细胞系BEAS-2B和人NSCLC细胞系A549中GATA4启动子的DNA甲基化水平;采用Real-time PCR检测细胞GATA4的mRNA水平。采用DNA甲基化抑制剂5-Aza-2′deoxycytidine处理细胞,观察细胞GATA4 mRNA的表达水平;采用CCK-8检测细胞增殖率;采用Western blot检测细胞增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen, PCNA）、cleaved-caspase 3和caspase 3;用流式细胞术检测细胞凋亡。结果 A549细胞GATA4启动子甲基化率显著高于BEAS-2B细胞[（3.383±0.614）%比（35.53±1.89）%,t=16.14,P<0.01];A549细胞GATA4 mRNA水平明显低于BEAS-2B细胞（1.000±0.000比0.358±0.027,t=23.98,P<0.01）;抑制A549细胞GATA4的DNA甲基化后,其GATA4 mRNA水平升高（1.000±0.000比3.100±0.188,t=11.17,P<0.01）;DNA甲基化抑制剂5-Aza-2′deoxycytidine抑制A549细胞的增殖,且PCNA的表达降低（0.998±0.003比0.721±0.020,t=13.74,P<0.01）、cleaved-caspase 3/caspase 3的比值增高（0.998±0.003比1.682±0.051,t=13.50,P<0.01）、细胞的凋亡率增加[（6.222±0.399）%比（14.990±0.690）%,t=11.00,P<0.01]。结论 NSCLCGATA4启动子甲基化水平增高,导致GATA4 mRNA表达降低,诱导细胞增殖并抑制其凋亡。     

LncRNA-BLACAT1调节CyclinD1/CDKN2B轴对非小细胞肺癌细胞增殖的影响及其机制

目的：探讨非小细胞肺癌（NSCLC）患者癌组织和癌细胞中长链非编码RNA（LncRNAs）BLACAT1的表达特征及其调控机制,阐明BLACAT1在NSCLC发生发展中的作用和临床意义。方法：高通量基因表达数据库（GEO数据库）分析BLACAT1在NSCLC组织的表达特征,Kmplot网站分析BLACAT1表达与NSCLC患者生存预后的联系。qRT-PCR法检测BLACAT1在25例NSCLC患者癌组织和癌旁组织及NSCLC细胞系中的表达情况。将si-NC（阴性对照）和si-BLACAT1（抑制物）转染入NSCLC A549细胞作为si-NC组和si-BLACAT1组,qRT-PCR法分别检测各组A549细胞中BLACAT1 mRNA表达水平,流式细胞术检测各组细胞不同细胞周期细胞百分率,细胞集落生成实验检测各组细胞克隆形成能力,CCK8实验检测各组细胞增殖活性,qRT-PCR和Western blotting法检测各组A549细胞中细胞周期蛋白D1（CyclinD1）和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B（CDKN2B）mRNA和蛋白表达水平。结果：GEO数据库的NSCLC数据集GSE18842和GSE19804、qRT-PCR法检测以及Kmplot分析,与癌旁组织比较,NSCLC患者癌组织中BLACAT1表达水平明显升高（P< 0.01）;NSCLC患者癌组织中BLACAT1低表达患者的存活时间明显高于BLACAT1高表达患者（P=0.011）。与si-NC组比较,si-BLACAT1组A549细胞中BLACAT1 mRNA表达水平明显降低（P< 0.05）;与si-NC组比较,si-BLACAT1组A549细胞周期G₁期细胞百分率增加（P< 0.05）,S期细胞百分率降低（P< 0.05）,细胞克隆形成能力和细胞增殖活性均降低（P< 0.05或P<0.01）;与si-NC组比较,si-BLACAT1组A549细胞中CyclinD1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低（P< 0.05）,而CDKN2B mRNA和蛋白表达水平均明显升高（P< 0.05或P<0.01）。结论：LncRNA-BLACAT1在NSCLC患者癌组织和癌细胞中表达升高,下调BLACAT1表达可通过调节CyclinD1/CDKN2B轴从而抑制NSCLC A549细胞增殖,BLACAT1可作为NSCLC患者的潜在治疗靶点。     

LRIG1和 EGFR mRNA在非小细胞肺癌患者外周血中的表达及其临床意义

目的：观察非小细胞肺癌（NSCLC）患者外周血中LRIG1和EGFR mRNA表达水平,并分析其与患者临床病理特征的关系,为NSCLC的治疗提供依据。方法：采用实时荧光定量PCR法分析69例NSCLC患者外周血单个核细胞中LRIG1和EGFR mRNA表达水平,并分析其与患者的肿瘤临床分期、性别、年龄及生存期的关系。结果：与正常人比较,NSCLC患者外周血中LRIG1 mRNA的表达水平降低, EGFR mRNA的表达水平增高,差异具有统计学意义（P<0.001）;LRIG1和EGFR mRNA的表达水平与患者性别、年龄及组织来源无关联(P>0.01 ),与患者肿瘤临床分期及生存期有密切关联(P<0.001);Cox回归分析,肿瘤临床分期、LRIG1和EGFR mRNA的表达水平可作为独立的预后因子;肿瘤临床分期越晚,患者预后越差（P=0.028）,相对风险度（RR）= 1.548,95%可信区间(95% CI)为1.074～2.283;LRIG1 mRNA的表达水平越高,患者预后越好（P= 0.026）,RR=0.242,95%可信区间为0.069－0.843;EGFR mRNA表达水平越高,患者预后越差（P=0.027）,RR= 3.732,95%CI为1.165～11.956。高表达LRIG1患者的生存时间长于低表达者（χ2 =56.560,P<0.001）;高表达EGFR mRNA患者生存时间短于低表达者（χ2 =51.962,P<0.001）。同一患者血液标本中LRIG1和EGFR 在mRNA表达水平呈负相关关系( r=－0.307,P=0.016)。结论：LRIG1通过负向调节EGFR的表达影响NSCLC患者的肿瘤临床分期和生存时间。LRIG1可能通过调节EGFR的表达影响NSCLC患者的疗效和预后。     

WASF3反义寡核苷酸对非小细胞肺癌细胞增殖和迁移的影响及其机制

目的探讨Wiskott-Aldrich综合征蛋白家族成员3的反义寡核苷酸（WASF3-AS）对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖和迁移的影响及其作用机制。方法RT-qPCR法检测人NSCLC细胞株A549细胞和人正常肺细胞MRC-5中WASF3的表达水平。将A549细胞分为空白对照组、WASF3-NC组（阴性对照组）、WASF3-AS组（反义寡核苷酸WASF3组）,应用RT-qPCR法检测WASF3-AS对A549细胞中WASF3表达的影响;应用CCK-8法检测细胞增殖能力,克隆实验检测细胞克隆能力,Transwell法检测细胞迁移能力;RT-qPCR和Western blotting法分别检测WASF3-AS对A549细胞中磷酸酶和张力蛋白同源基因（PTEN）、磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（p-Akt）mRNA和蛋白表达水平。结果与人正常肺细胞MRC-5比较,A549细胞各组中WASF3的mRNA相对表达量均增加（P < 0.05~P < 0.01）;空白对照组和WASF3-NC组的WASF3的mRNA相对表达量差异无统计学意义（P>0.05）,但均高于WASF3-AS组（P < 0.05和P < 0.01）。与WASF3-NC组比较,转染后48、72、96 h WASF3-AS组细胞增殖水平明显降低（P < 0.05）。细胞转染14 d后,与空白对照组和WASF3-NC组比较,WASF3-AS组细胞克隆形成率和细胞迁移数目均明显降低（P < 0.05）。与WASF3-NC组比较,WASF3-AS组细胞的PTEN mRNA和蛋白相对表达量明显增加,PI3K、p-Akt mRNA和蛋白相对表达量明显减少（P < 0.05）。结论人NSCLC细胞的WASF3表达水平明显高于正常肺细胞;WASF3-AS可能通过调控PTEN-PI3K/Akt信号通路,抑制NSCLC的增殖、克隆和迁移。     

PBEF对缺氧/复氧处理的非小细胞肺癌细胞生长及AQP1和ENaCα表达的影响

目的研究前B细胞克隆增强因子（PBEF）对缺氧/复氧（H/R）处理的非小细胞肺癌（NSCLC）细胞生长及水通道蛋白1（AQP1）和钠通道蛋白α（ENaCα）表达的影响。方法将NSCLC A549细胞分为4组:对照组（C组）、H/R处理模型组（M组）、H/R处理+pCAGGS空载组（pCAGGS NC组）、H/R处理+pCAGGS PBEF组（pCAGGS PBEF组）;通过构建pCAGGS PBEF质粒并转染到细胞中建立H/R A549细胞培养实验模型。采用qPCR和Western blot（WB）检测PBEF的表达;采用WB检测AQP1和ENaCα的表达;采用流式细胞术检测细胞凋亡。结果 M组细胞凋亡率显著高于C组（P<0.05）,pCAGGS PBEF组细胞凋亡率显著高于pCAGGS NC组（P<0.05）,M组和pCAGGS NC组细胞凋亡率比较差异无统计学意义（P>0.05）。pCAGGS PBEF组细胞中AQP1和ENaCα的蛋白表达水平显着低于pCAGGS NC组（P<0.05）,而C组、M组、pCAGGS NC组3组细胞中AQP1和ENaCα的蛋白表达水平比较差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 PBEF过表达促进了H/R处理的NSCLC A549细胞凋亡,并抑制AQP1和ENaCα蛋白的表达,提示PBEF在低氧环境中可能具有辅助治疗作用。     

非小细胞肺癌患者外周血上皮细胞黏附分子和黏蛋白的诊断价值

目的: 研究非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)患者外周血中上皮细胞黏附分子(epithelial cell adhesion molecule, EpCAM) mRNA和黏蛋白1（MUC1） mRNA表达水平及临床意义。方法： 应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测NSCLC患者(n=45)与肺部良性疾病患者(n=21)外周血中EpCAM mRNA和MUC1 mRNA的表达情况;分析NSCLC患者EpCAM mRNA和MUC1 mRNA阳性表达率与临床病理特征的相关性。结果： NSCLC患者外周血中EpCAM mRNA和MUC1 mRNA的表达水平分别为4.42±0.56,2.30±0.32;肺部良性疾病患者外周血中EpCAM mRNA和MUC1 mRNA的表达水平分别为2.48±0.26,1.61±0.06;两者相比,差异均有统计学意义（EpCAM mRNA, P=0.025;MUC1 mRNA, P=0.018）。NSCLC患者外周血中EpCAM mRNA和MUC1 mRNA阳性表达率分别与肺部良性疾病患者比较,差异均有统计学意义(P均=0.001)。NSCLC患者外周血中这两种基因表达的阳性率与其年龄、性别及病理类型无明显相关性;而与TNM分期显著相关,Ⅲ+Ⅳ期NSCLC患者外周血中EpCAM mRNA和MUC1 mRNA阳性表达率明显高于Ⅰ+Ⅱ期患者(EpCAM mRNA,P=0.021;MUC1 mRNA,P=0.005)。结论： 检测外周血中EpCAM mRNA和MUC1 mRNA的表达有助于NSCLC的诊断,尤其对血液微转移的检出具有重要的临床参考价值。     

核干细胞因子在诊断非小细胞肺癌中的应用研究

目的:探讨核干细胞因子(Nucleostemin,NS)在诊断非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的应用价值。方法:采用半定量RT-PCR法检测NS mRNA在NSCLC和癌旁正常组织中的表达情况,采用Westernbolt方法检测NS蛋白在NSCLC和癌旁正常组织中的表达情况,并分析病理特征对NSCLC中NS表达率的影响。结果:NSCLC标本中NS mRNA表达水平(0.850±0.262)显著高于癌旁正常组织(0.151±0.041),差异有统计学意义(t=0.102,P<0.05);NSCLC标本中NS蛋白表达阳性率59.38%(19/32)显著高于癌旁正常组织0.00%(0/32),差异有统计学意义(χ~2=27.022,P<0.05);腺癌患者NS表达率明显高于鳞癌,差异有统计学意义(P<0.05);低分化癌患者NS表达率明显高于中、高分化,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:NS与NSCLC的发生和疾病进展有紧密联系,NS mRNA和NS蛋白均在NSCLC中有高表达,且细胞分化度越低,NS表达水平越高,可作为诊断NSCLC的重要参考指标。     

非小细胞肺癌中血管内皮生长因子C表达与淋巴结转移关系的研究

目的 探讨血管内皮生长因子C(VEGF-C)与非小细胞肺癌(NSCLC)淋巴管生成和淋巴结转移的关系.方法 52例NSCLC患者分为淋巴结转移阳性组(25例)和淋巴结转移阴性组(27例),采用半定量反转录PCR及免疫组织化学方法 检测2组患者手术切除癌组织及196枚淋巴结组织(2组各98枚,淋巴结转移阳性组98枚中病理阳性淋巴结72枚,阴性26枚)中VEGF-C mRNA及蛋白的表达.结果 淋巴结转移阳性组患者癌组织VEGF-C mRNA表达水平(0.273±0.179)明显高于淋巴结转移阴性组(0.089±0.087,P<0.01);阳性淋巴结组织VEGF.C mRNA表达水平(0.207±0.174)明显高于淋巴结转移阴性组的淋巴结组织(0.114±0.107,P<0.01).在淋巴结转移阳性组中,阳性与阴性淋巴结组织VEGF-C mRNA表达水平分别为0.207±0.174、0.196±0.186,差异无统计学意义(P>0.05).淋巴结转移阳性组15例患者中14例(93.3%)肺癌组织VEGF-C蛋白表达阳性,46枚阳性淋巴结组织中37枚(80.4%)VEGF-c蛋白表达阳性;而淋巴结转移阴性组15例患者中仅1例(6.7%)肺癌组织VEGF-C蛋白表达阳性,52枚淋巴结组织VEGF-C蛋白表达均为阴性,组间差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 VEGF-C mRNA与蛋白的表达水平与NSCLC淋巴结转移关系密切,在淋巴结转移的早期诊断中有潜在的应用价值.     

外泌体lncRNA干扰素诱导GTP酶假基因1在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探讨外泌体长链非编码RNA（lncRNA）干扰素诱导GTP酶假基因1（GVINP1）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及临床意义。方法收集2016年10月至2018年2月在湖州师范学院附属第一医院经病理组织学确诊为NSCLC的51例患者外周血51份以及健康体检者45例外周血45份;培养人正常肺上皮细胞（BEAS-2B）和NSCLC细胞（A549、H1299）,收集选择性培养基;提取血浆外泌体,采用电镜和纳米颗粒跟踪分析法进行鉴定;采用RT-PCR法检测GVINP1mRNA表达水平,并分析患者血浆外泌体GVINP1mRNA表达水平与其临床特征之间的关系;利用NSCLC细胞选择性培养基和外泌体处理巨噬细胞（RAW264.7）,采用RT-PCR法检测炎症因子mRNA表达水平。结果在电镜下可见NSCLC患者外周血中含有丰富的外泌体,大小为26.7~136.1nm。NSCLC患者和健康体检者血浆外泌体中存在CD9、CD81和Alix蛋白表达;NSCLC患者血浆外泌体GVINP1mRNA表达水平明显高于健康体检者（P＜0.05）,其中有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期的NSCLC患者血浆外泌体GVINP1mRNA表达水平较低（均P＜0.05）。与人正常肺上皮细胞（BEAS-2B）选择性培养基外泌体比较,NSCLC细胞（A549、H1299）选择性培养基外泌体中GVINP1mRNA表达水平均明显升高（均P＜0.05）。与空白对照组（DMEM培养基）相比,BEAS-2B组和NSCLC细胞组选择性培养基中IL-1β、TNF-α、IL-6mRNA表达水平均明显升高（均P＜0.05）,而NSCLC细胞组中IL-10mRNA表达水平明显降低（P＜0.05）。与去除外泌体的细胞选择性培养基比较,BEAS-2B和NSCLC细胞选择性培养基外泌体中IL-1β、TNF-α、IL-6mRNA表达水平均明显升高（均P＜0.05）,而NSCLC细胞中IL-10mRNA表达水平明显降低（P＜0.05）。结论NSCLC可能通过选择性释放携带GVINP1的外泌体进而影响巨噬细胞表型转化,从而促进肿瘤进展,这为NSCLC治疗提供了新的靶点。     

检测非小细胞肺癌患者外周血CK19 mRNA微转移的临床意义

目的检测非小细胞肺癌（NSCLC）患者外周血CK19 mRNA的表达情况,探讨其作为分子标志物检测NSCLC微转移的可行性。方法应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术检测48例NSCLC患者,15例肺良性疾病（BLD）患者和10例健康人外周血CK19 mRNA的表达。结果NSCLC患者CK19 mRNA的阳性表达率明显高于BLD患者和健康对照者,差异有统计学意义（Х^2=24．735,P=0．000）。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期NSCLC患者外周血中CK19 mRNA阳性表达率分别为44．4％（8／18）,75．0％（9／12）,92．3％（12／13）,4／5,不同临床分期NSCLC患者外周血CK19 mRNA阳性表达率比较差异有统计学意义（Х^2=8．820,P=0．032）;有无淋巴结转移NSCLC患者外周血CK19 mRNA阳性表达率比较差异亦有统计学意义（Х^2=6．813,P=0．009）;而不同病理类型、不同分化程度NSCLC患者外周血CK19 mRNA阳性表达率比较差异无统计学意义（Х^2=4．655,P=0．459;Х^2=1．204,P=0．548）。结论检测外周血CK19 mRNA表达可作为诊断NSCLC患者微转移的一个有价值的参考指标。     

PTEN与非小细胞肺癌临床病理特征及预后的相关性

目的探讨磷酸酶基因（PTEN）与非小细胞肺癌（NSCLC）临床病理特征及预后的相关性。方法选择2007年3月～2008年6月65例NSCLC患者及23例正常肺组织石蜡标本,采用免疫组化检测各标本中PTEN蛋白表达,比较NSCLC组及正常肺组织组PTEN蛋白表达水平,分析PTEN蛋白表达与NSCLC患者性别、年龄、肿瘤大小、病理类型、淋巴结转移,病理分期及分化程度等临床病理特征的关系,并比较PTEN蛋白表达阳性及PTEN蛋白表达阴性NSCLC患者的平均生存时间和5年生存率。结果 NSCLC组PTEN蛋白阳性表达率（53.85%）显著低于正常肺组织组（91.30%）,差异有高度统计学意义（P〈0.01）;NSCLC组织中PTEN蛋白阳性表达与肿瘤分化程度、病理分期及有无淋巴结转移有关,差异有统计学意义（P〈0.05）,而与患者性别、年龄、肿瘤大小及病理类型无关,差异无统计学意义（P〉0.05）;PTEN蛋白表达阳性的NSCLC患者平均生存时间[（54.80±10.07）个月]较PTEN蛋白表达阴性患者[（27.56±7.33）个月]显著延长,差异有高度统计学意义（P〈0.01）,其5年生存率（49.32%）亦显著高于PTEN蛋白表达阴性患者（17.40%）,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。结论 PTEN蛋白在NSCLC组织中出现表达缺失,恶性程度越高、病理晚期（Ⅲ＋Ⅳ期）及发生淋巴结转移的NSCLC组织PTEN蛋白表达越少,其预后越差。     

siRNA靶向沉默HIF-1α基因对肺癌A549细胞转移和侵袭的影响

目的:探讨质粒介导RNA干扰抑制HIF-1α基因对肺癌A549细胞转移和侵袭能力的影响。方法:利用基因工程方法构建HIF-1α的干扰表达载体,并将其转染至肺腺癌A549细胞;分别用RT-PCR方法、Western blot方法检测细胞转染前后HIF-1α以及MMP-2的mRNA及蛋白表达的变化。细胞划痕试验和Transwell实验检测转染前后肺腺癌A549细胞迁移及侵袭能力的改变。结果:转染后肺腺癌A549细胞中HIF-1α和MMP-2的mRNA表达分别下降86%和64%(P<0.05)。转染后细胞蛋白表达明显下降。转染前后穿膜细胞数分别为(135.2±13.2)、(63.7±10.5),差异具有统计学意义(P<0.05)。转染前后划痕宽度分别为(0.48±0.14)、(1.04±0.15)mm,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:RNAi可有效抑制HIF-1α的表达,同时可结合MMP-2启动子下调MMP-2基因和蛋白的表达,降低肺癌A549细胞的转移和侵袭能力。     

通补消积饮对人肺腺癌A549细胞PCNA蛋白表达的影响

目的研究通补消积饮对A549细胞PCNA蛋白表达的影响,探讨通补消积饮治疗肺癌的作用机制。方法用Western-blot法检测通补消积饮对A549细胞PCNA蛋白表达的影响。结果通补消积饮低、中、高剂量组含药血清作用于A549细胞48 h后,PCNA蛋白相对表达量分别为（0.749±0.083）,（0.534±0.052）,（0.402±0.048）,通补消积饮各剂量组与空白血清组比较,差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）,并表现出明显剂量依赖性。结论通补消积饮能明显抑制A549细胞PCNA蛋白的表达。     

miRNA-155表达对人肺癌细胞A549增殖的影响

【目的】探讨miRNA-155在正常肺组织和非小细胞肺癌组织中的表达及miRNA-155对人肺癌细胞A549增殖的影响。【方法】采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）技术检测15例非小细胞肺癌组织及其癌旁组织中miRNA-155的表达;A549细胞分别转染miR-NC和miRNA-155 mimic ,采用Real-time PCR技术检测转染后A549细胞中的miRNA-155表达水平,同时采用MTT 技术和流式细胞技术检测转染后A549细胞增殖情况,Western印迹法检测转染后A549细胞中Akt、p-Akt（Ser473）、p27、bcl-2、bax的表达。【结果】miRNA-155在非小细胞肺癌组织中的表达情况明显高于癌旁组织（ P ＜0．05）;与转染 miR-NC 组相比, A549细胞转染miRNA-155 mimic后miRNA-155表达水平明显增高（ P ＜0．001）,MTT实验和流式细胞技术显示miRNA-155促进A549细胞的增殖;Western印迹法结果显示：转染miRNA-155的A549细胞p-Akt （Ser473）,bcl-2的表达水平增高,p27、bax的表达水平降低。【结论】miRNA-155可能通过促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,上调p-Akt（Ser473）、bcl-2表达,同时抑制p27、bax的表达来促进非小细胞肺癌的发生发展。     

POU4F3表达对118例肺腺癌患者预后评估及对肺腺癌细胞株迁移的影响

目的 揭示POU结构域第4类转录因子3(POU4F3)在肺腺癌组织的表达及其与肺腺癌患者预后的关系,并探索POU4F3对肺腺癌细胞迁移的作用。 方法 免疫组织化学染色检测人肺腺癌及其癌旁组织(样本量均为118)中POU4F3的表达水平。利用Log-rank(Mantel-Cox)检验POU4F3表达水平与总生存期的关联性。以肺腺癌株为实验对象,构建稳定过表达(Lv-POU4F3)及其对照(Lv-control)或敲低POU4F3(shPOU4F3)及其对照(control shRNA)的慢病毒载体并分别转染至SPCA1和A549细胞系,Western blotting验证POU4F3过表达或敲低转染效率。运用划痕实验、Transwell迁移实验和鬼笔环肽荧光实验检测细胞迁移能力。 结果 免疫组化分析显示,118例肺腺癌组织中POU4F3的表达评分低于118例癌旁组织评分(1.5 vs 4.0),差异有统计学意义(P<0.001)。与POU4F3低表达肺腺癌患者相比,POU4F3高表达患者的总生存期延长(HR=2.04,95%CI:1.158~3.607,P=0.028)。细胞实验结果显示,有效构建了过表达或敲低POU4F3的稳定转染肺腺癌细胞株。过表达POU4F3后,划痕实验表明,Lv-POU4F3组细胞划痕愈合率低于Lv-control组,差异有统计学意义(F_SPCA1处理=69.86,P_SPCA1=0.001;F_A549处理=492.10,P_A549<0.001);Transwell迁移实验表明,SPCA1-Lv-POU4F3组穿膜细胞数少于SPCA1-Lv-control组(599.0±11.36 vs 806.3±18.72,t=16.40,P<0.001),A549-Lv-POU4F3组穿膜细胞数少于A549-Lv-control组(181.0±18.68 vs 314.7±23.46,t=7.72,P=0.002);鬼笔环肽荧光实验表明,过表达POU4F3后,SPCA1细胞微丝变细、伪足较少,Lv-POU4F3组的平均荧光强度低于Lv-control组(23.30±1.34 vs 33.45±1.85),差异有统计学意义(t=7.67,P=0.002)。敲低POU4F3后,划痕实验表明,shPOU4F3组细胞划痕愈合率高于control shRNA组,差异有统计学意义(F_SPCA1处理=114.60,P_SPCA1<0.001;F_A549处理=1 710.00,P_A549<0.001)。Transwell迁移实验表明,SPCA1-shPOU4F3组穿膜细胞数多于SPCA1-control shRNA组(970.00±14.53 vs 585.00±25.53,t=22.70,P<0.001),A549-shPOU4F3组穿膜细胞数多于A549-control shRNA组(528.00±29.14 vs 185.30±9.50,t=19.37,P<0.001);鬼笔环肽荧光实验表明,敲低POU4F3后,SPCA1细胞微丝变粗、伪足增多,shPOU4F3组的平均荧光强度高于control shRNA组(48.53±3.30 vs 31.07±2.32),差异有统计学意义(t=7.50,P=0.002)。 结论 POU4F3在人肺腺癌患者癌组织中表达低于癌旁组织,POU4F3高表达者预后较佳,且POU4F3能够抑制肺腺癌细胞迁移。POU4F3可能是LUAD的抑癌基因并有望成为诊断和治疗LUAD的新靶标。     

依达拉奉对肺泡Ⅱ型上皮细胞NF-κB和IL-6,IL-8表达及凋亡的影响

目的探讨依达拉奉对肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的影响及NF-κB和白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)表达。方法体外培养肺泡Ⅱ型上皮细胞,用过氧化氢氧化应激建立肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡细胞模型,将细胞分为对照组、过氧化氢组、依达拉奉-过氧化氢组。用MTT法检测依达拉奉对肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖能力的影响,流式细胞仪检测依达拉奉对氧化应激肺泡Ⅱ型上皮细胞细胞凋亡的影响,采用ELISA试剂盒及谷胱甘肽(GSH)、脂质过氧化物(MDA)试剂盒检测IL-6、IL-8及GSH、MDA含量,用Western-blot方法检测氧化应激肺泡Ⅱ型上皮细胞中的NF-κB蛋白表达。结果依达拉奉-过氧化氢组细胞生长抑制率为(22.3±3.1)%,明显低于过氧化氢组[(37.5±2.4)%],差异有统计学意义(P<0.05)。依达拉奉-过氧化氢组MDA含量低于过氧化氢组,GSH含量高于过氧化氢组,差异均有统计学意义(P<0.05)。依达拉奉-过氧化氢组IL-6、IL-8含量低于过氧化氢组,差异均有统计学意义(P<0.05)。依达拉奉-过氧化氢组细胞凋亡率[(14.67±0.50)%]明显低于过氧化氢组[(38.88±0.80)%],差异有统计学意义(P<0.05)。过氧化氢+依达拉奉组NF-κB蛋白水平(2.106±0.012)低于过氧化氢组(4.216±0.127),差异有统计学意义(P<0.05)。结论依达拉奉具有抑制氧化应激后所诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡、下调NF-kB和IL-6、IL-8表达的作用。     

2型糖尿病患者睑板腺形态与功能的改变及其对眼表的影响

目的:探讨2型糖尿病患者睑板腺形态与功能的改变及其对眼表的影响。方法:收集自2016年9月-2017年9月就诊于我院门诊已确诊的2型糖尿病患者128例作为试验组,于同一时间段在我院就诊的白内障患者130例作为对照组,分别比较试验组与对照组间的眼表症状评分、非侵入式泪膜破裂时间、睑板腺缺失面积评分分级、睑板腺开口堵塞程度评分及睑板腺分泌物性状评分。结果:试验组患者OSDI评分为（25.12±12.24）,明显高于对照组（11.12±8.48）,差异有统计学意义（Z=-6.018,P<0.001）;试验组NI-BUT（3.86±2.60 s）明显短于对照组（8.96±4.74 s）,差异具有统计学意义（Z=-7.632,P<0.001）;试验组中59.37%的患者存在睑板腺缺失,明显多于对照组38.46%;试验组患者睑板腺缺失面积评分明显高于对照组,差异具有统计学意义（Z=-3.865,P<0.001）;睑板腺开口堵塞评分试验组（1.89±0.87）明显高于对照组（0.84±0.72）,差异均具有统计学意义（Z=-8.413,P<0.001)。试验组睑板腺分泌物评分为（1.46±0.68）,明显高于对照组（0.82±0.63）,差异具有统计学意义（Z=-8.761,P<0.001）。结论:2型糖尿病患者出现眼表功能改变及眼部不适症状的概率远远高于非糖尿病人群,且与非糖尿病患者相比,糖尿病患者中干眼的症状程度较重,睑板腺形态及功能出现异常的比例以及异常的程度也较非糖尿病患者明显升高。     

β重型地中海贫血儿童NK细胞频率及杀伤活性

目的分析β重型地中海贫血儿童NK细胞频率及杀伤活性与输血诱导的免疫抑制的相关性。方法收集2011年1月～2013年12月在广州市妇女儿童医疗中心及中山大学附属第三医院进行输血治疗长达3年的β重型地中海贫血儿童20例（β重型地中海贫血组）及健康儿童20例（对照组）,通过流式细胞技术检测其外周血NK细胞（CD3-CD56＋）的频率及NK细胞杀伤活性（CD107a表达）。结果与对照组比较,长期输血的β重型地中海贫血组儿童外周血NK细胞频率显著降低[（4.5±2.8）%比（12.0±4.0）%],差异有统高度计学意义（P=0.000）。外周血CD107a表达（NK细胞的杀伤活性）显著下调[（23.9±7.4）%比（51.4±11.9）%],差异有统高度计学意义（P=0.000）。结论β重型地中海贫血组儿童外周血NK细胞频率的减少及NK细胞杀伤活性（CD107a表达）的减弱,可能与输血诱导的免疫抑制相关。     

小分子 NEK2 干扰 RNA 对肺癌细胞耐药的研 究简

目的 探讨小分子NEK2干扰RNA （siRNA-NEK2）逆转人肺癌耐药细胞（A549/DDP）耐药性的研究.方法 应用Real-time PCR法及Western blot法验证NEK2基因在人肺腺癌耐药细胞系（A549/DDP）细胞系呈现高表达;并采用脂质体为转染介质,将NEK2小片段RNA导入A549/DDP细胞沉默NEK2基因;应用MTT法观察顺铂、阿霉素对沉默NEK2基因后的A549/DDP细胞的细胞毒活性变化.结果 NEK2-mRNA、NEK2蛋白在A549/DDP细胞系表达水平均显著高于A549细胞系,差异有统计学意义（P＜0.05）;顺铂、阿霉素对A549/DDP细胞的半数抑制浓度（IC50）分别是（53.08±0.56）、（8.09±0.31） μg/mL,对siRNA-control A549/DDP细胞的IC50分别是（53.09±0.78）、（8.10±0.98） μg/mL,而对siRNA-NEK2 A549/DDP细胞的1C50有显著下降,其值分别是（18.59±0.10）、（2.30±0.14） μg/mL,两组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 小分子NEK2干扰RNA沉默NEK2可以提高耐药的肺癌细胞对化疗药物的敏感性.NEK2可能成为逆转肺癌耐药的一个新的靶点.