金黄色葡萄球菌临床分离株肠毒素基因的调查分析

摘要：目的检测临床分离的金黄色葡萄球菌（SA）肠毒素基因,了解肠毒素基因的携带情况与SA耐药的关系。方法采用聚合
酶链反应检测SA mecA基因和肠毒素基因,了解肠毒素基因在SA中分布的状况,并对其进行耐药性分析。结果67株甲氧西
林耐药的SA（MRSA）和57株甲氧西林敏感的SA（MSSA）肠毒素基因携带率（100% vs 83.5%）无明显差异（χ2=0.203,P>0.05）。
肠毒素基因检出率为93.5%（116株）,其中SEA、SEB、SEC、SED和SEF的检出率分别为90.5%、6.9%、61.3%、5.2%和25.9%,未
检测出SEE基因。同时检出2种及2种以上的肠毒素基因的菌株有78株（67.2%）,以携带SEA+SEC、SEA+SEF和SEA+SEC+
SEF基因为主,检出率分别为33.6%、7.8%和13.8%。与携带一种肠毒素基因的菌株耐药率相比,携带多种肠毒素基因的菌株耐
药率呈上升趋势,其中携带SEA+SEC+SEF的菌株对复方新诺明的耐药率为75.0%,高于单独携带SEA（28.6%）、SEA+SEC
（38.7%）的耐药率,具有统计学差异（P<0.05）。携带SEA+SEC+SEF、SEA+SEF、SEA的菌株对阿米卡星耐药率分别为75.0%、
77.0%和21.5%,前两者与携带SEA的菌株相比有显著差异（P<0.05）。结论临床分离的SA中携带多种肠毒素基因的菌株在耐
药率上高于只携带一种肠毒素基因的菌株,提示肠毒素在SA耐药中起重要作用。
     

单克隆抗体标志乳胶凝集试验快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的探讨快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的实验方法。方法目标菌株采用SlidexMRSA Detection乳胶快速检测金黄色葡萄球菌(SA)菌株青霉素结合蛋白2 a(PBP2 a),确认MR-SA;设立SA耐苯唑西林筛选试验对照,两组不符合菌株经PCR方法检测M ecA基因确认。结果Sli-dexMRSA Detection乳胶快速检测247株SA的PBP2 a,阳性93株(37.65%);247株SA经苯唑西林筛选试验及PCR测定M ecA基因确定MRSA102株(41.30%),93株PBP2 a阳性菌株都为MRSA;PBP2 a阴性耐苯唑西林22株中,经PCR法检测M ceA基因,9株确认为MRSA,13株为甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)。乳胶凝集法快速检测SA的PBP2 a确定MRSA,敏感性91.2%,特异性100%,阳性预测值为1,阴性预测值0.94。结论单克隆抗体乳胶凝集法快速检测鉴定MRSA具有较高敏感性和特异性。     

婴幼儿耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染状况和耐药基因的研究

目的了解感染婴幼儿的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药性和耐药基因,明确检测青霉素结合蛋白2a(PBP2a)和甲氧西林耐药基因(mecA)的临床价值。方法用金黄色葡萄球菌乳胶凝集试验和梅里埃鉴定金黄色葡萄球菌,同时用纸片扩散法完成12种常用抗生素的药敏试验。对头孢西丁的结果,按当年CLSI标准执行,用于判断菌株甲氧西林的耐药性。采用PBP2检测试剂盒检测PBP2a蛋白,PCR检测mecA基因。结果 2007-2009年婴幼儿共检出245株金黄色葡萄球菌,其中MRSA检出率为17.6%(43/245)。MRSA对庆大霉素、复方新诺明、克林霉素、红霉素、氯霉素的耐药性均显著高于甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(P<0.05),其余抗生素的差异无统计学意义(P>0.05),43株MRSA的PBP2a蛋白和mecA基因的检测结果全为阳性,阳性率为100%。结论用头孢西丁(30μg)能有效地筛查MRSA,检测PBP2a蛋白和mecA基因均能正确地确认MRSA。且检测PBP2a蛋白方便快捷,特异性好,值得临床推广。     

金黄色葡萄球菌临床分离株肠毒素基因的检测

[摘要]目的 检测临床分离的金黄色葡萄球菌肠毒素基因,了解肠毒素基因的携带情况。方法 根据Genbank的序列设计合成金黄色葡萄球菌肠毒素基因A-F的引物,采用聚合酶链反应方法对随机收集的124株金黄色葡萄球菌肠毒素基因进行检测,并进行序列分析。结果 在124株受检的金黄色葡萄球菌中,116株检出肠毒素基因,检出率为93.5%,其中SEA、SEB、SEC、SED和SEF的检出率分别为90.5%、6.9%、61.3%、5.2%和25.9%,未检测出SEE基因。同时检出2种及2种以上的肠毒素基因的菌株有78株（67.2%）,以携带SEA+SEC、SEA+SEF和SEA+SEC+SEF基因为主,检出率分别为33.6%,7.8%,13.8%。序列分析显示所检出的肠毒素基因与Genbank上登陆的参考序列的同源性为97%～100%。结论 金黄色葡萄球菌临床分离株肠毒素基因携带率高,其中以携带SEA、SEC、SEF基因为主。     

MALDI-TOF MS快速鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的应用研究

目的 探讨基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的快速鉴定价值。方法 收集2020年7月至2021年9月蚌埠医学院第一附属医院临床分离的285株金黄色葡萄球菌(SA),并进行种属的确认。采用头孢西丁纸片扩散法和PCR法检测mecA基因筛选MRSA。根据建库要求,选取部分耐药和敏感菌株图谱,分别建立耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)的超级质谱数据库(SuperSpectra),获得两组的特征峰,并选择建库外的SA菌株进行验证,所得结果与纸片扩散法和PCR法比较,判断验证是否准确。结果 MALDI-TOF MS技术确认285株菌株均为SA,采用纸片扩散法筛选MRSA和PCR法检测mecA基因,结果285株SA中有153株携带mecA基因的MRSA菌株和132株不携带mecA基因的MSSA菌株。通过比较发现质荷比为3036.0、3875.3Da为MRSA的主要特征峰,而质荷比为5054.0Da为MSSA的主要特征峰。选取除建库以外的SA进行验证,MRSA鉴定正确率为89.8%(79/88),MSSA正确率为87.5%(63/72)。结论 MALDI-TOF MS可快速鉴别MRSA和MSSA,有助于提高临床快速鉴定耐药菌的能力。     

临床标本金黄色葡萄球菌肠毒素基因分布及耐药性

目的 了解临床分离的金黄色葡萄球菌肠毒素基因分布及耐药情况。 方法 对金黄色葡萄球菌进行分离鉴定。采用聚合酶链反应检测肠毒素基因 (SEA~SEE),采用K-B法进行药敏试验。 结果 共收集到138株金黄色葡萄球菌,其中74株分离自痰液标本,占53.62%;从年龄≥50岁患者中分离得到102株菌株,占73.91%;金黄色葡萄球菌中肠毒素阳性为120株,检出率为86.96%,SEA、SEB、SEC和SEE阳性率分别为63.33%、46.67%、45.00%和37.50%,未检测出SED基因,分离自痰液标本菌株以携带SEA和SEC为主,而分离自创面分泌物菌株则以携带SEB和SEE为主;药敏 结果 显示金黄色葡萄球菌对青霉素（96.67%）、红霉素（81.67%）、氯霉素（74.17%）、四环素（71.67%）耐药较为严重,对呋喃妥因（6.67%）、复方磺胺甲恶唑（16.67%）、阿莫西林/克拉维酸钾（4.17%）则比较敏感,所有菌株对万古霉素、替考拉宁均敏感。 结论 临床分离的金黄色葡萄球菌肠毒素基因携带率较高;不同标本来源的金黄色葡萄球菌携带肠毒素基因型存在差异,对于临床金黄色葡萄球菌的感染治疗应根据药敏结果选择合理的抗生素。     

头孢西丁替代苯唑西林检测"耐甲氧西林"的金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌

目的探讨头孢西丁纸片扩散法替代苯唑西林检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的准确率。方法临床标本培养鉴定出的金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性的葡萄球菌同时用苯唑西林和头孢西丁筛选(K-B法)耐药菌株,再用PBP2a胶乳法进一步检测耐药菌株的mecA基因。结果121株的葡萄球菌,对苯唑西林的耐药率为97.5%,其中金黄色葡萄球菌31株,表皮葡萄球菌67株,腐生葡萄球菌18株,溶血葡萄球菌5株,用PBP2a胶乳试剂和头孢西丁纸片检测金葡菌中MRSA发生率均为77.4%(24/31),凝固酶阴性葡萄球菌中MRCNS发生率96.6%(87/90)和94.4%(85/90)。头孢西丁纸片扩散法的符合率为99%(109/111)。结论苯唑西林纸片扩散法检测MRSA假阳性率较高,而头孢西丁纸片法(K-B法)与PBP2a胶乳凝集法检测MRSA和MRCNS的结果相近,适合实验室推广使用。     

金黄色葡萄球菌耐药性监测分析

目的分析临床分离金黄色葡萄球菌的科室分布情况及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）检出率,比较MRSA和甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌（MSSA）的抗生素耐药情况。方法收集2010年7—2010年9月临床分离的80株金黄色葡萄球菌菌株,分别通过头孢西丁纸片法及聚合酶链反应（PCR）扩增macA基因筛选MRSA,用琼脂稀释法检测MRSA和MSSA对11种抗生素的最低抑菌浓度（MIC）,比较两者耐药性的差异。结果 80株金黄色葡萄球菌经头孢西丁纸片法检测,筛选出46株MRSA,检出率为57.50%;经PCR检测mecA基因,筛选出45株MRSA,检出率为56.25%。MRSA检出率前3位科室是神经外科（17/45,37.78%）、普外科（7/45,15.56%）和留院观察室（5/45,11.11%）。80株金黄色葡萄球菌对替考拉宁、万古霉素和利奈唑胺的敏感率均为100%,MRSA与MSSA对其余8种抗生素的耐药性差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 MRSA检出率及耐药率均较高,应引起临床各科室和微生物实验室的高度重视,以避免由其引发的大规模院内感染和流行。     

Vitek-2药敏卡片检测MRSA的准确性评价

目的:评价Vitek 2 AST P535药敏卡片测定金黄色葡萄球菌对苯唑西林敏感性的准确性.方法:对临床分离的菌株采用AST P535药敏卡片和头孢西丁纸片测定对苯唑西林的耐药性,以PCR测定MecA基因为金标准,评价两种方法的准确性.结果:采用PCR共检测125株金黄色葡萄球菌,其中MecA基因阳性的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin resistant Staphy lococcus aureus,MRSA)89株,mecA基因阴性的甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(Methicillin susceptive Staphylococcus aureus,MSSA)36株,以此为标准,在89株MRSA中用Vitek-2 AST P535药敏卡片检测出81株,敏感度为91%,在36株MSSA中采用Vitek-2 AST P535药敏卡片检测出35株,特异性为97.2%;而采用头孢西丁纸片法检测出MRSA 87株,敏感度为97.8%,检出MSSA 36株,特异性为100%.结论:AST P535药敏卡片测定金黄色葡萄球菌对苯唑西林的敏感性具有良好的灵敏度和特异性,准确性能满足临床需要,同时采用头孢西丁纸片法检测可进一步提高检测的准确性.     

金黄色葡萄球菌医院感染的临床分布及耐药性分析

目的:掌握我院住院患者金黄色葡萄球菌(SA)引起医院感染的临床分布及耐药特征,为临床医师合理用药提供依据。方法:158株SA分离培养鉴定严格按照《全国临床检验操作规程》进行,采用HX-21全自动细菌鉴定系统进行菌株鉴定和药物敏感试验。统计分析耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)和甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(MSSA)的耐药性。结果:医院感染SA分离率较高的临床科室是肿瘤传染病科占33.5%、呼吸内科占21.5%、神经外科占18.4%;临床标本以呼吸道标本占36.7%和脓液及分泌物占24.1%为主;其中MRSA为64株(40.5%),SA对万古霉素100.0%敏感,对其他21种抗菌药物出现了不同程度的耐药,MRSA对多种抗生素的耐药率明显高于MSSA。结论:我院SA对抗菌药物具有多药耐药性,MRSA、MSSA对抗菌药物的耐药性存在显著性差异,临床医生应加强对SA耐药性的监测,并根据药敏试验结果合理使用抗菌药物。     

替考拉宁对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和敏感菌药敏实验的研究

目的 探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA )和敏感葡萄球菌(MSSA)临床分离株对替考拉宁药物的敏感性.方法 金黄色葡萄球菌临床分离株18株,采用PCR检测耐药 mecA基因,琼脂稀释法测定替考拉宁对金黄色葡萄球菌体外MIC值.结果 9/18株为MRSA,9/18株为MSSA对替考拉宁均为敏感.替考拉宁对MRSA和...     

无菌部位金黄色葡萄球菌耐药性及分子流行病学特征

目的:了解无菌部位分离的金黄色葡萄球菌对常用抗菌药物的耐药性及分子流行病学特征,为临床预防和控制其感染以及合理使用抗菌药物提供实验依据。方法:收集2011年8月至2012年6月某三甲医院无菌部位分离的非重复金黄色葡萄球菌50株。VITEK-2微生物分析系统进行菌株鉴定,PCR检测耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)杀白细胞毒素(PVL)基因,多重PCR对MRSA进行SCCmec基因分型。结果:在18种抗菌药物中,青霉素和红霉素的耐药率最高,分别为90.0%和62.0%;尚无对万古霉素、替加环素、替考拉宁、利奈唑胺、达托霉素的耐药菌株。50株金葡菌中,MRSA 15株(30.0%),MSSA35株(70.0%),MRSA对12种抗菌药物的敏感率明显低于MSSA。15株MRSA中,SCCmecⅢ型11株(73.3%),SCCmecⅣ型4株(26.7%),PVL基因扩增均为阴性。结论:该院无菌部位分离的金黄色葡萄球菌以MSSA为主;MRSA对抗菌药物呈多重耐药性,且以SCCmecⅢ型为主。     

一起由金黄色葡萄球菌和路邓葡萄球菌引发食物中毒病原分析

目的 通过一起疑似葡萄球菌引发食物中毒进行葡萄球菌肠毒素检测,并结合检测出致病性葡萄球菌病原学分析,为下一步食物中毒处置提供诊断依据。方法 根据流行病学调查和国家标准《食品微生物学检验》GB4789,对可疑食物及患者呕吐物、肛拭子等进行了几种常见致病原菌分离培养,并直接采用实时荧光PCR方法对金黄色葡萄球菌肠毒素A~E基因进行分型,用全自动微生物鉴定分析仪进行系统生化鉴定,并做血浆凝固酶试验。结果 在食用剩余汉堡中分离出1株金黄色葡萄球菌、2名患者肛拭子中分离出2株金黄色葡萄球菌,1名患者呕吐物中分离1株血浆凝固酶阴性路邓葡萄球菌,利用PCR方法分别对其进行了肠毒素基因分型,结果显示,食用剩余汉堡中1株和2株患者肛拭子的金黄色葡萄球菌肠毒素均为SEA型,为同一型;1株患者呕吐物的路邓葡萄球菌的肠毒素为SEC型。 结论 该起食物中毒主要是由金黄色葡萄球菌产生SEA型肠毒素所导致,血浆凝固阴性路邓葡萄球菌跟金黄色葡萄球菌一样,也能产生肠毒素同样具有致病性作用,提示路邓葡萄球菌不单纯只是人类皮肤共生菌,或许还跟金黄色葡萄球菌同样具有侵袭性、产肠毒素等致病性,在进行公共卫生流行调查诊断时不能被忽视。     

Community-acquired methicillin-resistant Staphylococcus aureus in a rural American Indian community

CONTEXT: Until recently, methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) infections have been acquired primarily in nosocomial settings. Four recent deaths due to MRSA infection in previously healthy children in the Midwest suggest that serious MRSA infections can be acquired in the community in rural as well as urban locations. OBJECTIVES: To document the occurrence of community-acquired MRSA infections and evaluate risk factors for community-acquired MRSA infection compared with methicillin-susceptible S aureus (MSSA) infection. DESIGN: Retrospective cohort study with medical record review. SETTING: Indian Health Service facility in a rural midwestern American Indian community. PATIENTS: Patients whose medical records indicated laboratory-confirmed S aureus infection diagnosed during 1997. MAIN OUTCOME MEASURES: Proportion of MRSA infections classified as community acquired based on standardized criteria; risk factors for community-acquired MRSA infection compared with those for community-acquired MSSA infection; and relatedness of MRSA strains, determined by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). RESULTS: Of 112 S aureus isolates, 62 (55%) were MRSA and 50 (45%) were MSSA. Forty-six (74%) of the 62 MRSA infections were classified as community acquired. Risk factors for community-acquired MRSA infections were not significantly different from those for community-acquired MSSA. Pulsed-field gel electrophoresis subtyping indicated that 34 (89%) of 38 community-acquired MRSA isolates were clonally related and distinct from nosocomial MRSA isolates found in the region. CONCLUSIONS: Community-acquired MRSA may have replaced community-acquired MSSA as the dominant strain in this community. Antimicrobial susceptibility patterns and PFGE subtyping support the finding that MRSA is circulating beyond nosocomial settings in this and possibly other rural US communities.     

Methicillin resistant Staphylococcus aureus.

Out of 308 isolates of Staphylococcus aureus isolated from specimens processed at the Department of Microbiology, Faculty of Medicine, Colombo 66 (21.5%) were resistant to methicillin. A significantly higher proportion of methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA) were isolated from special care units, namely the Premature Baby Unit (PBU) and the Plastic Surgery Unit (PSU) when compared with other general medical and surgical units. Most of these strains were also resistant to many other antibiotics. The patients with MRSA infections had a longer mean hospital stay when compared to patients with methicillin sensitive Staphylococcus aureus (MSSA) infections. MRSA strains are as virulent as MSSA strains and these infections are mainly nosocomial.     

金黄色葡萄球菌肠毒素基因定位研究

对40株产1种或1种以上肠毒素的金黄色葡萄球菌（以下简称金葡菌）进行分析，结果全部金葡菌肠毒素A（SEA，12/12）、金葡菌肠毒素C（SEC，19／19）、大部分金葡菌肠毒素B（SEB，23／28）的产生不因质粒的消除而消失，说明SEA、SEC的基因位点在染色体上。有5株金葡菌因质粒消除而失去产SEB的能力，其基因位点，可能在质粒或染色体上。4株金葡菌亦均因质粒消除失去产金葡菌肠毒素D的能力，其基因位点可能在质粒上。     

金黄色葡萄球菌耐药机制的研究

目的探讨金黄色葡萄球菌的耐药性及耐药机制。方法按NCCLS推荐的琼脂平皿对倍稀释法测定分离鉴定的198株金黄色葡萄球菌对苯唑西林的耐药性（MIC值）；用Nitroeephin纸片法测定各菌株产酶情况，统计对苯唑西林不同耐药水平的金黄色葡萄球菌产酶率并分析其耐药水平和产酶率的相关关系；PCR测定各菌株含mecA基因情况。结果198株金黄色葡萄球菌对苯唑西林的耐药率为64．65％;128株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）中，高耐菌株为118株（92．19oA），低耐株为10株（7．81%）。敏感株产酶率为58．57％（41株），高耐株产酶率53．39％（63株），低耐株产酶率40．00％（4株），苯唑西林敏感株与高耐株之间产β-内酰胺酶的差别有统计学意义，前者高于后者；含mecA基因的高耐株占95．76％（113／118）、低耐株占60．00％（6／10）、敏感株占10．00％（7／70），高耐株与敏感株含mecA基因的差别有统计学意义，前者高于后者。结论金黄色葡萄球菌耐药机制主要是产β-内酰胺酶和mecA基因的表达。