大黄素诱导白血病K562细胞凋亡的实验研究

目的:探讨大黄素对人白血病K562细胞的增殖抑制与诱导凋亡作用.方法:采用MTT法检测大黄素对K562细胞的增殖抑制作用;通过Wight-Giemsa染色(W-G染色),在普通光镜下观察细胞的形态学变化;运用Annexin V/PI双标记法检测大黄素对K562细胞的凋亡效应;采用流式细胞技术检测细胞周期变化与凋亡情况;通过比色法检测Caspase-3、8、9的相对活性,分析大黄素诱导K562细胞凋亡的信号途径.结果:大黄素能显著抑制K562细胞的增殖,作用24、48、72 h后的半数抑制率浓度分别为80、50、40 μmol/L;处理组细胞在普通光镜下可见典型的凋亡形态学改变;Annexin V/PI双标记法检测到K562细胞在大黄索的诱导下出现早期凋亡并呈剂量依赖性(P<0.01);流式细胞仪结果分析发现,处理组的K562细胞被阻滞于G0/G1期,与对照组相比,凋亡率明显升高并呈现剂量依赖性(P<0.01);大黄素可触发caspase-3、8、9的活性增高(P<0.01).结论:大黄素能有效地抑制K562细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制和Caspase信号途径的活化有关.     

大黄素诱导白血病K562细胞凋亡及对Caspase-3基因表达的影响

目的：探讨大黄素对人白血病K562细胞的增殖抑制与诱导凋亡作用．方法：采用四唑蓝比色试验（MTT）检测大黄素对K562细胞的增殖抑制作用;通过电子显微镜观察细胞的形态学变化;运用原位缺口末端标记技术检测大黄素对K562细胞的凋亡效应;采用流式细胞技术检测细胞周期变化与凋亡情况;通过比色法检测Caspase-3的相对活性,RT—PCR检测细胞内凋亡相关基因Caspase-3的转录水平．结果：大黄素能显著抑制K562细胞的增殖,作用24,72h后的半数抑制率浓度分别为80,40μmol／L;处理组细胞可见典型的凋亡形态学改变;TUNEL法检测到K562细胞在大黄素的诱导下出现凋亡;流式细胞仪结果分析发现,处理组的K562细胞被阻滞于G0／G1期,与对照组相比,凋亡率明显升高并呈现时间-剂量依赖性（P〈0．01）;大黄素可触发Caspase-3的活性增高（P〈0．01）,并呈现剂量依赖性;RT—PCR结果显示,Caspase-3 mRNA表达上调．结论：大黄素能有效地抑制K562细胞的增殖并诱导其凋亡,可能与Caspase-3活化有关．     

太白楤木总皂苷对K562细胞增殖抑制及其作用机制的研究

目的 以人慢性髓系白血病细胞株K562细胞为模型,研究太白楤木的体外抗肿瘤活性及其作用机制.方法 MTT法检测太白楤木总皂苷对K562细胞的增殖抑制作用;单细胞凝胶电泳检测K562细胞DNA损伤;流式细胞术检测K562细胞细胞周期的改变.结果 太白楤木总皂苷对K562细胞增殖具有抑制作用,并呈时间-剂量依赖性;能显著诱导K562细胞DNA损伤;促进凋亡的发生;细胞周期阻滞于S期.结论 太白楤木总皂苷能抑制K562细胞的增殖,诱导凋亡发生,其机制可能与通过诱导K562细胞DNA损伤来改变细胞周期时相的分布有关.     

肝素对人髓性白血病细胞系K562生长的影响

目的：探讨肝素对髓性白血病细胞系K562增殖及凋亡的影响。方法：采用细胞直接计数法和MTT法检测肝素对K562细胞增殖的影响，应用流式细胞术和Hoechst 33342荧光染色法检测肝素对长春新碱诱导的K562细胞凋亡的影响。结果：5—200U／ml的肝素既不促进也不抑制K562细胞的增殖，且能抑制长春新碱诱导的K562细胞凋亡。抑制长春新碱诱导的K562细胞凋亡作用，并与肝素呈量效关系。结论：肝素对K562细胞增殖无影响，但具有抑制长春新碱诱导的K562细胞凋亡的作用。     

桂皮醛影响K562细胞生长的机理研究

目的:探讨桂皮醛对慢性髓细胞白血病细胞株K562生长的影响及其机制.方法:以不同浓度的桂皮醛作用于体外培养的K562细胞,CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期、凋亡率和Caspase 3表达.结果:桂皮醛呈时间和剂量依赖性影响K562细胞增殖,使细胞周期受阻于G2/M期,并诱导K562细胞凋亡.K562细胞凋亡过程中,活化的Caspase 3表达明显增加.结论:桂皮醛使K562细胞周期受阻,并使Caspase-3活化诱导细胞凋亡,从而实现对K562细胞的生长抑制.     

哌唑嗪对K562白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究α1受体拮抗剂哌唑嗪在体外对K562白血病细胞系增殖及凋亡的影响。方法：采用四唑盐（MTT）比色实验、集落形成实验为指标观察哌唑嗪对K562细胞增殖作用的影响;采用细胞形态学、Hochset33258荧光染色实验、流式细胞术检测细胞凋亡。结果：哌唑嗪能抑制K562细胞的增殖,这种增殖抑制作用呈剂量依赖关系。在5×10-6mol/L哌唑嗪作用下,K562细胞在形态学上可以看见凋亡细胞;流式细胞术也可检测到凋亡峰。结论：哌唑嗪能抑制K562白血病细胞的增殖,并能诱导其凋亡。     

槲皮素诱导人白血病细胞K562的凋亡

目的:研究槲皮素对人白血病细胞株K562增殖抑制和诱导凋亡作用. 方法:四氮甲唑蓝(MTT)观察细胞的生长状况,应用彗星分析法、TUNEL技术和流式细胞仪检测细胞凋亡. 结果:槲皮素在(1～8)×10-5 mol/L浓度范围内能明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度依赖性,8×10-5 mol/L槲皮素作用72 h的K562细胞株A值最低;彗星分析法显示经槲皮素作用的K562细胞出现长的彗尾条带;原位细胞凋亡可见细胞变小,核固缩为一个或多个染色质团块;流式细胞仪检测细胞凋亡主要发生在G1/S期. 结论:槲皮素在体外一定浓度范围内能抑制K562细胞增殖,诱导凋亡.     

川楝素提取物诱导 K562 细胞凋亡的实验研究

目的 探讨川楝素提取物对人白血病 K562 细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及其机制。方法 采用 MTT 法检测川楝素提取物对 K562 细胞增殖的影响;Wright′s染色观察细胞的形态学改变;流式细胞技术检测细胞周期与凋亡率的变化;Annexin V/PI 双标记法检测细胞的早期凋亡变化;DNA 琼脂糖凝胶电泳观察 DNA 片段化;比色法检测 Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9 相对活性的改变;RT-PCR 检测凋亡相关基因 p21、bcr/abl、H-ras mRNA 表达水平的改变。结果 川楝素提取物显著抑制 K562 细胞的增殖,并呈剂量-时间依赖性,作用 72 h 的 IC50值为 20 nmol/L;处理组细胞可见典型的凋亡形态学改变;细胞周期和 Annexin V/PI 双标记检测表明川楝素提取物可诱导 K562 细胞凋亡,并呈剂量-时间依赖性;处理组细胞 DNA 琼脂糖凝胶电泳出现明显的 DNA ladder;处理组细胞 Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9 的活性均显著增加;p21、H-ras mRNA 表达上调,bcr/abl mRNA 表达下调。结论 川楝素提取物对 K562 细胞具有增殖抑制和诱导凋亡的作用,其机制与 Caspase 信号途径的活化有关。     

雷公藤内酯醇对红白血病K562细胞株增殖和凋亡的影响

目的探讨雷公藤内酯醇对人类红白血病K562细胞株增殖和凋亡的影响。方法运用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞术(FCM)等检测雷公藤内酯醇对K562细胞株增殖和凋亡的影响。结果雷公藤内酯醇能明显抑制K562细胞的增殖,呈时间与剂量依赖性,作用24h时其半数抑制浓度IC50为25nmol/L。且经雷公藤内酯醇处理后K562细胞G1/S期所占的百分比较对照组上升(P<0.05)。雷公藤内酯醇作用48h,其浓度的变化与K562细胞凋亡率具有相关性(r=0.97,P<0.05),而作用24h时,则无明显诱导凋亡的作用。结论雷公藤内酯醇有明确的抗白血病细胞增殖的能力,干扰K562细胞周期,上调细胞G/S期检测点,并具有促进细胞凋亡的作用。     

线粒体膜电位在三氧化二砷诱导 K562 细胞凋亡中的作用

目的 探讨三氧化二砷 (As2O3) 诱导 K562 细胞凋亡的发生机制。方法 分别以 1、2、4、8、16 μmol/L As2O3 诱导 K562 细胞凋亡,MTT法检测不同时间点细胞增殖抑制率,DNA Ladder 法检测细胞凋亡,Annexin V/PI 染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率,Rhodamine 123 染色流式细胞术检测线粒体膜电位 (ΔΨm) 变化,ELISA 法检测胞浆细胞色素C (CYTC) 水平,分光光度法检测 Caspase-3 活性,流式细胞术检测 Bcl-2 和 Bax 表达。结果MTT结果显示 As2O3 能抑制 K562 细胞生长,且呈现时间剂量依赖性;4～16 μmol/L 的 As2O3 作用 24 h 均可诱导 K562 细胞凋亡,同时伴有ΔΨm下降,胞浆内 CYTC 蛋白浓度及 Caspase-3 活性增高,胞浆 Bcl-2/Bax 值下降,且均呈剂量依赖性。结论 As2O3 诱导 K562 细胞凋亡可能是通过降低ΔΨm,激活线粒体凋亡途径实现的,Bcl-2/Bax 值下降可能与其有关。     

人参皂甙单体Rh2对K562细胞增殖和凋亡作用的实验研究

目的 研究人参皂甙单体-Rh2(GS-Rh2)对人K562细胞增殖和凋亡作用的影响.方法 采用MTT比色法观察GS-Rh2对体外培养的K562细胞生长的抑制作用;在光学显微镜下观察不同浓度GS-Rh2对K562细胞的凋亡作用及计数凋亡率(AR).结果 MTT比色法测定显示,细胞经GS-Rh2作用后生长受抑制,呈剂量依赖性和时间依赖性,半数抑制浓度(IC50)为25.8 μg/ml.结论 GS-Rh2能抑制体外培养的K562细胞增殖并诱导其凋亡.     

抑制Src激酶对慢性粒细胞白血病细胞的抑制作用

目的 探讨抑制Src激酶对K562及其衍生的imatinib耐药K562/G细胞体外和体内抗肿瘤作用及分子机制.方法 先在体外检测ZD6474直接抑制Src激酶对细胞凋亡的影响;然后建立裸鼠皮下移植瘤模型,利用灌胃给药的方式给予ZD6474,剂量为25～100 mg/(kg*d),连续给药18 d,观察移植瘤生长情况,并用免疫组化方法分析肿瘤组织的增殖和Src激酶表达情况.结果 ZD6474在体外呈剂量依赖性直接抑制Src激酶活性;特异性抑制Src可以诱导K562和K562/G细胞凋亡,并上调Bax/Bcl-2的比例,但不影响STAT3的活性.口服给予ZD6474可以显著抑制K562、K562/G裸鼠移植瘤的生长(P<0.05);并抑制肿瘤组织中增殖细胞核抗原和Src激酶的表达.结论 ZD6474直接抑制Src激酶,从而抑制imatinib耐药的K562/G和亲本K562细胞增殖,诱导凋亡,并以剂量依赖方式显著抑制K562、K562/G裸鼠移植瘤生长,其机制与ZD6474显著抑制Src激酶活性有关.     

中药安迪注射剂对白血病K562细胞株增殖和凋亡的影响

目的:探讨安迪(Adi)注射剂对人白血病K562细胞株增殖和凋亡的影响.方法:MTT法测定K562在Adi作用后的细胞活力(A值);流式细胞技术检测细胞凋亡变化;电镜观察细胞的形态学改变等;综合评价Adi对K562细胞株增殖和凋亡的影响.结果:①MTT法测得Adi在(2.5～20.0)μg/mL浓度范围内能明显抑制K562细胞的增殖,并具有浓度依赖性,20.0 μg/mL Adi作用36 h的K562细胞株A值最低;②流式细胞仪检测结果显示10.0,20.0 μg/mL Adi处理组K562细胞的凋亡率分别为50%和39%,明显高于对照组的10%(P＜0.05);③电镜下可见K562细胞呈典型凋亡样改变.结论:Adi能明显抑制K562细胞增殖,并具有显著促进细胞凋亡的作用.     

白山毛桃根提取物对人红白血病K562细胞作用研究

目的研究白山毛桃根提取物对人红白血病K562细胞增殖的抑制作用及其可能的作用机制。方法 MTT法检测白山毛桃根提取物对K562细胞增殖抑制的影响;Hoechst33258染色实验观察白山毛桃根提取物诱导K562细胞凋亡情况;流式细胞仪检测该药物诱导K562细胞凋亡的情况。结果白山毛桃根提取物可以抑制K562细胞增殖,且呈时间和浓度依赖性,对K562细胞的半数抑制率(IC_(50))在24 h、48 h、72 h时分别为31、28、10 mg/ml,形态学观察表明白山毛桃根提取物能诱导K562细胞的凋亡。结论白山毛桃根提取物能抑制K562细胞增殖和诱导细胞凋亡。     

中药厚朴提取物对人白血病细胞作用初探

目的:研究中药厚朴提取物和厚朴酚与厚朴酚对白血病细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法:用MTT、Annex-inV、凋亡DNA Ladder等实验,观察和厚朴酚与厚朴酚对白血病K562、HL-60和U937细胞抑制增殖和诱导凋亡的作用。结果:和厚朴酚实验组对K562、HL-60和U937有增殖抑制作用,呈剂量-时间依赖性,且对K562、HL-60和U937有诱导凋亡作用;厚朴酚对HL-60有增殖抑制作用,并呈剂量-时间依赖性,但与和厚朴酚联合用药无协同作用。结论:和厚朴酚与厚朴酚对白血病细胞株均有增殖抑制作用,且呈剂量-时间依赖性,但二者之间无联合协同作用。     

塞来昔布对K562白血病细胞的细胞毒作用及与伊马替尼的协同效应

目的 研究塞来昔布（Celecoxib）对K562细胞增殖、早期凋亡的影响及Rb蛋白质（PRb）、P27^Kip蛋白质表达变化,观察Celecoxib和伊马替尼联用对K562细胞增殖抑制和凋亡诱导是否具有协同效应.方法将K562细胞用不同浓度的Celecoxib（0、10、20、40、80及160μmol/L）作用36 h,四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）测定细胞活力;磷脂结合蛋白Ⅴ分析检测K562细胞早期凋亡;Western印迹检测不同浓度Celecoxib对K562细胞PRb和P27^Kip蛋白质表达的影响;用40 μmol/L Celecoxib、0.2μmol/L伊马替尼分别或联合作用K562细胞,观察药物对细胞活力和凋亡诱导是否具有协同作用.结果Celecoxib能明显抑制细胞活力,并呈药物剂量依赖性：随着Celecoxib浓度增高,K562细胞凋亡百分率相应增高,在160μmol/L浓度,凋亡率达25.92%,蛋白质印迹结果显示,Celecoxib可使K562细胞PRb蛋白质表达呈浓度依赖性下调;P27^Kip蛋白质呈浓度依赖性上调.Celecoxib与伊马替尼联用,抑制K562细胞活力为对照组的27.68%.结论Celecoxib能以浓度依赖性方式抑制K562细胞增殖,诱导细胞凋亡;其抗增殖效应可能与PRb表达下调及P27^Kip表达上调有关.Celecoxib与伊马替尼联用,在抗白血病细胞增殖作用上具有显著的协同效应.     

附子中的新乌头碱对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的研究附子中的成分新乌头碱作用于白血病K562细胞株对其生物学特性的影响。方法采用高效液相色谱法(HPLC)检测附子中是否含有新乌头碱和苯甲酰新乌头原碱。用新乌头碱标准品作用白血病K562细胞,电子显微镜下观察白血病细胞形态变化。流式细胞仪检测白血病细胞的细胞周期状态、凋亡的情况。结果高效液相色谱法检测出附子中含有新乌头碱。25~50 mg/L的新乌头碱对K562细胞增殖有明显的抑制作用,并呈剂量和时间依赖性(P0.05)。K562细胞在形态学上有明显的凋亡变化。流式细胞仪检测白血病细胞的细胞周期和凋亡状态,S期比例上升,G1期比例降低(P0.05)。25~50 mg/L的新乌头碱能不同程度地诱导K562细胞发生凋亡(P0.05)。结论附子中的新乌头碱具有抑制白血病K562细胞增殖、诱导其细胞凋亡的作用。     

人参皂甙单体Rg3对人红白血病细胞株K562细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨人参皂甙单体Rg3对人红白血病细胞株K562细胞增殖及凋亡的影响.方法 将人红白血病细胞株K562细胞传代培养至对数生长期,分组加入不同浓度的人参皂甙单体Rg3,并设置空白对照组.用MTT比色法观察Rg3对体外培养的K562细胞生长的抑制作用;在光学显微镜下观察不同浓度人参皂甙单体Rg3对K562细胞的凋亡作用及计数凋亡率(AR);硝基四氮唑(nitroblue tetrazolium,NBT)还原能力测定试验检测分化指标;DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型的DNA梯形条带图谱.结果 MTT比色法测定显示,人参皂甙单体Rg3作用于K562细胞后可以抑制其增殖并诱导其凋亡,且呈剂量依赖性.结论 人参皂甙单体Rg3能抑制体外培养的K562细胞增殖并诱导其凋亡.     

二烯丙基二硫对K562细胞生长抑制和促凋亡的作用

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）对人白血病K562细胞增殖、诱导凋亡和细胞周期的影响。方法采用CCK-8技术检测细胞存活率,进行细胞形态学观察,DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测DADS对细胞凋亡及周期的影响。结果 DADS能有效地抑制人白血病K562细胞增殖,15、30、60、120和240μmol/L DADS作用于K562细胞48h后,抑制率分别为26.3%、58.2%、44.7%、62.6%和75.6%。Hoechst形态学观察呈现典型的凋亡形态学改变,琼脂糖凝胶电泳上呈现出凋亡特征性的梯状条带,流式细胞仪检测可见亚二倍体峰并阻滞细胞于G2/M期,30、60和120μmol/L DADS作用于K562细胞12h后,Annexin V/PI双标记法检测早期凋亡细胞率分别为18.59%±0.81%、20.85%±0.65%、23.5%±1.1%（P〈0.05）。结论 DADS呈浓度依赖性抑制K562细胞生长,其机制与诱导细胞凋亡并阻滞细胞于G2/M期有关。     

曲古菌素A对K562细胞中HDAC1表达的影响

目的研究表明组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC1)在多种肿瘤中高表达,曲古菌素A(trichostatin A,TSA)可以抑制肿瘤细胞的生长.该实验研究HDAC1在K562细胞的表达及TSA对其增殖的影响.方法50～400 nmol/L的TSA分别处理K562细胞8～48 h后用四甲基偶氮唑蓝(MTT法)比色检测K562细胞的生长活性;应用流式细胞仪法观察细胞凋亡.RT-PCR和蛋白印迹法(western blot)方法检测K562细胞在24 h不同浓度(50～400 nmol/L)的条件下HDAC1的mRNA和蛋白的表达以及TSA对其作用.结果TSA可显著抑制K562细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈时间及剂量依赖性.HDAC1的mRNA A值的半定量表达以及蛋白表达明显增强(P＜0.05),但随着浓度的增加而表达下调.结论TSA对K562细胞具有明显的增生抑制及诱导凋亡作用,抑制HDAC1的表达,可能是其重要作用机制之一.