雄黄对K562细胞端粒酶活性和凋亡的作用

目的 :探讨雄黄对慢性粒细胞白血病细胞株K5 6 2细胞端粒酶活性及凋亡的调节作用和机制 .方法 :MTT法检测细胞增殖力 ;PCR ELISA法测定端粒酶活性 ;流式细胞仪测量细胞周期和细胞凋亡 .结果 :0 .3,0 .6 ,1.5和 3.0mg·L-1雄黄 (72h)在诱导K5 6 2细胞凋亡的同时可显著抑制细胞端粒酶活性和细胞增殖 ,并呈剂量相关 ;1.5 ,3.0mg·L-1雄黄 (72h)可诱导K5 6 2细胞G2 /M期阻滞 .结论 :雄黄诱导K5 6 2细胞凋亡达到抑制细胞生长的作用 ,端粒酶活性下降是雄黄诱导K5 6 2细胞凋亡的机制之一 .由大剂量雄黄诱导的K5 6 2细胞G2 /M期阻滞可能与端粒酶活性显著下降有关     

蟾蜍灵对K562细胞生长抑制及凋亡诱导作用

目的：研究中药蟾酥有效成分蟾蜍灵(bufalin)对人白血病细胞的作用。方法：应用MTT比色法观察bufalin对细胞的抑制作用，用荧光双染观察细胞结构的改变，DNA凝胶电泳分析细胞的凋亡。结果：bufalin明显抑制K562细胞的生长，半数抑制浓度(IC50)约为0．0125μmol／L；0．10μmol／L的bufalin作用24h即可明显诱导白血病细胞的凋亡，凋亡率呈剂量和时间依赖性；琼脂糖凝胶电泳检测到DNA梯带。结论：bufalin对白血病细胞有极强的生长抑制和诱导凋亡作用。     

土贝母诱导K562细胞凋亡

目的:探讨土贝母诱导分化K562细胞的作用机制.方法:将土贝母制剂加入到在体外培养的K562细胞中,观察K562细胞增殖水平,并检测土贝母制剂作用前后细胞对噻唑蓝还原能力,同时应用流式细胞仪测定K562细胞增殖周期.结果:土贝母制剂对K562细胞增殖有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性;K562细胞增殖G0/G1期细胞比率明显增加,S期细胞比率明显减少.结论:土贝母制剂能阻止K562细从G0、G1期向S期转化,抑制K562细胞增殖,促进K562细胞凋亡.     

Chk1基因在二烯丙基二硫诱导的乳腺癌细胞MCF-7凋亡中的作用

目的:探讨Chk1基因在二烯丙基二硫诱导的乳腺癌细胞MCF-7凋亡和细胞周期中的作用。方法:采用siRNA转染MCF-7细胞靶向干扰Chk1基因,采用Western blot检测Chk1蛋白表达;采用流式细胞术检测Chk1基因沉默对二烯丙基二硫诱导乳腺癌细胞凋亡及细胞周期的影响。结果:转染Chkl siRNA后,乳腺癌细胞MCF-7中Chkl蛋白表达水平降低,明显低于对照组(P<0.05)。FCM检测结果显示,转染Chkl siRNA后,G2/M期乳腺癌细胞数量有所降低(P<0.05),并且si-Chkl+DADS组G2/M期比率明显低于NC siRNA+DADS组(P<0.05)。Chk1基因沉默后,二烯丙基二硫诱导的细胞凋亡率由(14.7±1.0)%上升到(29.8±1.7)%。结论:siRNA抑制Chk1基因表达可明显消除G2/M期阻滞,并显著增强二烯丙基二硫诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡的敏感性。     

基因芯片技术分析二氢青蒿素抑制K562细胞增殖的作用机制

[目的]利用基因芯片检测二氢青蒿素作用于K562细胞后的基因表达情况,从基因水平探讨二氢青蒿素抑制K562细胞增殖的作用机制。[方法]K562细胞经不同浓度二氢青蒿素处理24h,倒置光显微镜和荧光显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测细胞周期变化。提取总RNA,逆转录生成cDNA,同时Cy3标记。标记好的cDNA与基因芯片杂交,用扫描仪检测杂交结果。[结果]倒置光显微镜可见细胞出现不同程度的皱缩,核分裂相减少,细胞密度下降,漂浮细胞增多。荧光显微镜下可观察到染色质高度浓缩、边缘化,凝聚成明亮的团块,即凋亡小体,同时有死亡细胞。流式细胞仪检测显示G2期细胞的比例明显增加。扫描杂交结果数据显示其中13条基因表达有差异。表达上调的基因有chk1,表达下调的基因有：PCNA、cyclinB1、cyclinD1、cyclinE1、cdk4、cdk2、E2F1、DNA-PK、DNA-TopoⅠ、mcl-1、jnk、VEGF。[结论]二氢青蒿素可以抑制K562细胞增殖,作用机制与改变细胞周期某些调控物质的基因表达、诱导K562细胞凋亡等有关。     

二烯丙基二硫对人胃癌MGC803细胞作用的研究

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人胃癌MGC803细胞的作用机制。方法采用MTT法和流式细胞仪检测不同浓度的DADS对MGC803细胞的生长抑制作用和细胞周期分布影响。结果随着DADS浓度的增加,MGC803细胞的生长抑制率逐渐上升;细胞的G0/G1期比率下降,G2/M期比率逐渐上升。结论抑制癌细胞生长和诱导癌细胞周期阻滞于G2/M期是DADS的抗肿瘤机制之一。     

二烯丙基三硫诱导人胃癌细胞凋亡的作用

目的 探讨二烯丙基三硫（diallyl trisulfede，DAlS）诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的作用。方法 采用倒置显微镜、光学显微镜、透射电镜分别观察DATS诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的形态学改变以及用流式细胞术观察亚G1峰。结果 MGC-803细胞经DATS处理24h后，光镜可见细胞胞浆浓缩、核固缩深染等早期凋亡细胞；电镜可见到不同时期凋亡细胞；流式细胞术检测有亚G1峰的出现。结论 DATS具有诱导胃癌MGC-803细胞凋亡的作用。     

α干扰素对K562细胞凋亡和端粒酶活性的影响

目的观察IFN—α对慢性粒细胞白血病细胞株K562端粒酶活性和凋亡的作用和机制。方法将IFN-α按100,1000,10000U／ml三种不同浓度作用于K562细胞72h,采用PCR—ELISA法测定端粒酶活性;流式细胞仪分析细胞周期和细胞凋亡及CD11b表达。结果100,1000,10000U／ml的IFN-α（72h）可以引起K562细胞S期阻滞,同时诱导细胞凋亡,但细胞粒酶活性和CD11b表达无明显改变。结论IFN-α诱导K562细胞凋亡可能不通过端粒酶活性的调控;细胞S期阻滞可能与IFN—α作用K562细胞的机制有一定相关性。     

氨茶碱对K562细胞增殖与凋亡的影响

目的 为探讨磷酸二酯酶抑制剂在慢性粒细胞白血病细胞系增殖与凋亡中的作用,研究了非选择性磷酸二酯酶抑制剂氨茶碱对K562细胞系的影响.方法 采用MTT检测观察细胞增殖变化,膜联蛋白V染色观察细胞凋亡率.结果 MTT显示氨茶碱对K562细胞系增殖呈浓度依赖性抑制作用,膜联蛋白V染色显示氨茶碱诱导细胞凋亡率增加.结论 氨茶碱可诱导K562细胞凋亡.     

二烯丙基二硫对人鼻咽癌CNE2细胞G1期的阻滞作用

目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)对人鼻咽癌CNE2细胞G1期的阻滞作用及可能机制.方法 体外培养人鼻咽癌CNE2,采用MTT比色实验、流式细胞术和免疫细胞化学的方法分析DADS对CNE2细胞增殖的押制作用、细胞周期分布的影响及细胞周期相关蛋白的表达.结果 MTT法显示,不同浓度(30μmol/L、60μmol/L、120μmol/L、240μmol/L)DADS处理CNE2细胞48h后,CNE2细胞的生长有明显的抑制作用,其增殖抑制率分别为6.59%、14.06%、26.50%和62.37%,呈明显的剂量依赖关系(P<0.05).流式细胞仪分析结果显示,DADS明显地将CNE2细胞阻滞在G1期.免疫细胞化学分析表明,在G1期阻滞同时有p21WAF1砌蛋白表达上调,CycliN-E、C-myc蛋白表达下降.结论 对人鼻咽癌CNE2细胞的抑制增殖作用与G1期阻滞有关,其机制可能与上调p21WAF1蛋白表达,下调Cyclin-E、C-myc蛋白表达有关.     

二烯丙基二硫化物诱导G2/M期阻滞对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨二烯丙基二硫化物(DADS)诱导G2/M期阻滞对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能的分子机制。方法 将不同浓度的DADS分别处理卵巢癌SK-OV-3和OVCAR-3细胞,采用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,裸鼠移植模型观察体内抑瘤效果。进而应用流式细胞术检测细胞周期分布的变化,Western blot检测细胞中G2/M检验点相关信号通路、增殖和凋亡相关蛋白的表达。结果 MTT法检测显示,不同浓度的DADS作用SK-OV-3(F=247.86,P=0.000)和OVCAR-3细胞(F=302.54,P=0.000)后,随着DADS浓度增高,细胞增殖抑制率明显升高,呈浓度依赖性。DADS处理24 h时SK-OV-3(F=335.12,P=0.000)和OVCAR-3细胞(F=347.43,P=0.000)的增殖抑制率明显高于处理12 h和48 h时的细胞抑制率,呈明显的时间依赖性。流式细胞术检测结果显示,不同浓度的DADS作用SK-OV-3、OVCAR-3细胞后,随着DADS浓度的增高,细胞凋亡率明显升高,呈明显的浓度依赖性(P<0.05)。DADS处理24 h时SK-OV-3和OVCAR-3细胞的凋亡率明显高于处理12 和48 h时,呈明显的时间依赖性(P<0.05)。与空白处理组相比,腹腔注射DADS溶液可明显抑制卵巢癌细胞的裸鼠移植瘤体积(F=548.23,P=0.000;F=311.84,P=0.000)。将30 mg/L的DADS作用于SK-OV-3和OVCAR-3细胞24 h后,与空白处理细胞相比,DADS处理后的SK-OV-3和OVCAR-3细胞中处于G2期的细胞百分率明显增加(F=375.11,P=0.000;F=256.48,P=0.000)。将30 mg/L DADS分别作用于SK-OV-3和OVCAR-3细胞24 h后,p-Chk1(ser345)(F=108.89,P=0.013;F=97.58,P=0.018)、p-CDC25C(ser216)(F=87.25,P=0.025;F=114.25,P=0.009)、p-P53(ser15)(F=112.41,P=0.011;F=255.87,P=0.000)、P21WAF1(F=246.38,P=0.001;F=141.36,P=0.005)和p-CDK1(Thr14/Tyr15)蛋白(F=298.12,P=0.000;F=233.15,P=0.000)的表达明显增加,CDK1(F=308.24,P=0.000;F=257.55,P=0.000)和CyclinB1蛋白(F=223.15,P=0.001;F=241.28,P=0.000)的表达明显减少,增殖和凋亡相关蛋白PCNA(F=77.36,P=0.031;F=157.28,P=0.001)、Ki-67(F=205.64,P=0.007;F=315.22,P=0.000)和Survivin蛋白(F=122.13,P=0.013;F=188.24,P=0.000)表达明显减少,Cleaved-caspase3蛋白表达明显增加(F=86.46,P=0.023;F=99.11,P=0.009)。结论 DADS可抑制卵巢癌细胞增殖,诱导其凋亡;其分子机制可能与G2/M检验点Chk1-CDC25C和P53-P21WAF1通路激活、CDK1活性降低、CDK1和CyclinB1蛋白表达减少,最终导致卵巢癌细胞G2/M期阻滞有关。     

二烯丙基二硫诱导HL-60细胞系凋亡及其与Caspase-3的关系

目的研究二烯丙基二硫（DADS）诱导白血病细胞凋亡及其机制。方法实验分对照组、DADS处理组、Ae—DEVD—CHO预处理组，进行体外细胞培养，采用形态学观察、MTT法、流式细胞术、DNA凝胶电泳等方法，进行细胞形态学观察、细胞增殖抑制作用研究，检测细胞凋亡率、Caspase-3活性以及DNALadder检测。结果DADS诱导前后，HL-60细胞形态学发生明显改变，DADS以剂量依赖的方式抑制细胞的生长，在DADS诱导HL-60细胞凋亡过程中有Caspase-3的活化，且与剂量和作用时间呈依赖关系，Caspase-3抑制剂Ac—DEVD—CHO能抑制DADS诱导HL-60细胞凋亡。结论DADS能有效地诱导HL-60细胞凋亡，其过程与Caspase-3活化相关。     

Arsenic Trioxide Inhibits Proliferation in K562 Cells by Changing Cell Cycle and Survivin Expression

To study the mechanisms involved in the inhibition of chronic myeloid leukemic cells (K562) proliferation induced by arsenic trioxide (As2O3) and to explore the potential role of Survivin, an inhibitor of apoptosis protein, in the regulation of As203 induced cell apoptosis, K562 cells were cultured with As203 of different concentrations. Cells were collected for proliferation analysis by MTT assay. Cell cycle distribution and cell apoptosis were analyzed by flow cytometry. Expression of Survivin protein and mRNA were detected by flow cytometry and RT-PCR, respectively. Our results showed that As2O3 (2-10/μmol/L) inhibited K562 cells growth effectively, but it did not induce cells apoptosis significantly. The percentage of K562 cells at G2/M phase increased in proportion to As2O3 concentrations, and the expression of Survivin mRNA and content of Survivin protein was up-regulated accordingly. It is concluded that As2O3 inhibited K562 cells growth by inducing cell cycle arrest mainly at G2/M phase. Over-expression of Survivin gene and protein might be one of the possible mechanisms contributing to K562 cells‘ resistance to As2O3-induced apoptosis.     

三氧化二砷诱导K562细胞凋亡的初步研究

目的：探讨三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３） 治疗慢性粒细胞性白血病（ＣＭＬ） 的机制。方法：以ＣＭＬ细胞系Ｋ５６２ 为模型,通过细胞增殖、活力检测、形态学观察、肿瘤集落形成的琼脂糖凝胶电泳等检验。结果：经≥２．５μｍｏｌ／ＬＡｓ２Ｏ３ 处理的Ｋ５６２ 细胞可出现增殖受抑和凋亡的形态学改变及ＤＮＡ片段化。结论：Ａｓ２Ｏ３ 能有效地诱导Ｋ５６２ 细胞凋亡。     

干扰素-ε诱导K562细胞凋亡的研究

目的：研究应用不同浓度的干扰素（IFN-ε）对K562细胞中野生型p53mRNA和Survivin mRNA表达影响及诱导凋亡作用。方法：应用RT—PCR法检测野生型p53 mRNA和Survivin mRNA的表达。结果：不同浓度的IFN-ε均可抑制Survivin基因的表达，并存在剂量与时间依赖性；可促进野生型p53mRNA的表达上调，但无剂量与时间依赖性。结论：IFN-ε可诱导K562细胞发生凋亡，促进野生型p53 mRNA表达上调和抑制Survivin mRNA的表达可能是其机制之一。     

半枝莲提取物诱导白血病K562细胞凋亡

目的 :探讨中药半枝莲诱导人类慢性髓性白血病K5 6 2细胞株的凋亡作用。方法 :采用MTT法检测半枝莲乙醇提取物对K5 6 2细胞的增殖抑制作用 ;HT荧光染色观察细胞形态变化 ;琼脂糖凝胶电泳测定凋亡细胞DNA的片段化 ;caspase 3单克隆抗体检测半枝莲提取物作用后K5 6 2细胞内caspase 3的表达。结果 :半枝莲提取物能明显抑制K5 6 2细胞增殖 ,使K5 6 2细胞出现凋亡所具有的形态学及生物化学特征 ,同时对K5 6 2细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用具有一定的浓度依赖性 ,经半枝莲提取物作用后的K5 6 2细胞内caspase 3表达增加。结论 :中药半枝莲提取物能诱导K5 6 2细胞凋亡 ,抑制肿瘤细胞增殖呈一定的浓度依赖关系 ,其作用机制可能与caspase 3的表达升高和活化有关。     

干扰素和小剂量阿糖胞苷联合作用诱导K562细胞凋亡

目的 研究干扰素（IFN）和小剂量阿糖胞苷（Ara-C）联合应用对K562细胞的诱导凋亡作用，并探讨其机制。方法 以IFN-α 2b和小剂量Ara-C单独和联合作用后，MTT法检测K562细胞的生长抑制率，流式细胞仪检测细胞凋亡水平，RT-PCR检测野生型p53基因的表达，免疫细胞化学法检测野生型P53蛋白的表达。结果 IFN-α 2b和小剂量Ara-C联合作用可以有效抑制K562细胞的增殖，联合作用后K562细胞的抑制率可达42．85％，与对照组及单用IFN-α 2b和单用Ara-C相比，差异均有显著性意义（均P〈0．05）。IFN-α 2b和小剂量Ara-C联合作用72h后，可以使K562细胞凋亡率提高到39．03％，与对照组及单用IFN-α 2b和单用Ara-C相比，差异均有显著性意义（均P〈0．05）。两药联合作用可以促进野生型p53基因mRNA和蛋白的表达上调。结论 联合使用IFN和小剂量Ara-C可以协同诱导K562白血病细胞的凋亡，促进野生型p53基因和蛋白表达上调可能是其机制之一。     

维生素K2对K562细胞生长抑制作用的实验研究

目的:研究维生素K2(VK2)对慢性粒细胞白血病急性变细胞株K562细胞的生长抑制作用及其机制。方法:采用形态学检测VK2作用后的细胞形态改变,MTT方法检测VK2对K562细胞的生长抑制作用,流式细胞仪Annexin-VFITC/PI分析细胞凋亡,PI染色分析细胞周期变化,RT-PCR技术检测抗凋亡基因bcl-2、促凋亡基因bax的表达。结果:经VK2作用后细胞出现明显的形态学改变:细胞变小,核固缩,核染色质聚集边挤于核膜内侧呈新月形以及典型凋亡小体形成等;MTT结果显示VK2对K562细胞有明显的抑制作用,作用72 h半数抑制浓度为25.1μmol.L-1;流式细胞仪检测结果显示随着VK2浓度的增加凋亡率逐渐增高(P<0.05),随着作用时间的延长凋亡率也逐渐增高(P<0.05);VK2作用72 h,S期细胞逐渐减少(r=-0.99,P<0.05),G0/G1期细胞逐渐增加(r=1.00),细胞被阻滞在G0/G1期;随着VK2浓度的增高抗凋亡基因bcl-2表达明显下调,而促凋亡基因bax表达无明显差异。结论:VK2通过诱导K562细胞凋亡抑制其增殖,并呈浓度和时间依赖性;抗凋亡基因bcl-2下调可能是VK2诱导K562细胞发生凋亡的机制之一。     

Caspase8、3蛋白在PUVA诱导K562细胞凋亡时的变化

目的研究Caspase8、3蛋白在补骨脂素（PSO）加长波紫外线（UVA）光化学疗法（PUVA）诱导人白血病K562细胞凋亡时的变化。方法用不同浓度的中药补骨脂中提取的PSO和（或）不同照射时间、波长为360nm的UVA作用于K562细胞,检测细胞凋亡率、在电镜下细胞超微结构改变及Caspase8、3蛋白的表达,用多因素方差分析法对定量资料进行统计分析。结果PSO、UVA照射及PUVA均可使细胞凋亡率增加,后两者上调Caspase8、3蛋白的表达,PUVA的作用显著强于前两者;PUVA处理后的K562细胞超微结构出现明显的凋亡形态学改变。结论PUVA可通过激活Caspase8、3基因诱导K562细胞凋亡。