阻塞性胆汁淤积大鼠肝脏胆固醇7α-羟化酶和核受体FXR、SHP表达变化

目的:通过建立梗阻性黄疸动物模型,观察胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7alpha-hydroxylase,CYP7A1)、类法尼醇X受体(farnesoid Xreceptor,FXR)及小异源二聚体伴侣受体(small heterodi mer partner,SHP)的表达变化,并分析CYP7A1和FXR、SHP之间的关系。方法:采用胆总管结扎术制备大鼠梗阻性黄疸模型,分别于术后1、3、14 d麻醉后放血处死。取大鼠肝脏,抽提总RNA,采用实时定量RT-PCR检测CYP7A1 mRNA表达;提取肝细胞核蛋白,采用蛋白质印迹技术检测FXR和SHP蛋白表达。结果:与假手术对照组相比,梗阻性黄疸组大鼠肝细胞CYP7A1 mRNA表达明显增强,FXR和SHP蛋白表达同步降低,差异均有统计学意义(P<0.001,P<0.05)。结论:CYP7A1表达增强可能与FXR、SHP表达减弱有关。     

复方降脂3号对高胆固醇血症新西兰白兔胆固醇-胆汁酸代谢的影响

目的：探讨复方降脂3号对胆固醇-胆汁酸代谢的影响。方法：24只新西兰白兔分为正常对照组、模型组和复方降脂3号组,每组8只。模型组和复方降脂3号组予高胆固醇饮食诱导高血脂,并给予相应药物灌胃。治疗4周后,检测白兔外周血清总胆固醇、胆汁酸水平,酶联免疫吸附测定法检测肝脏胆固醇7α-羟化酶（cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1）活性,实时荧光定量聚合酶链式反应法检测CYP7A1、法尼酯X受体（farnesoid X receptor,FXR）靶基因胆盐输出泵（bile saltexport pump,BSEP）和短异源二聚体伴侣（small heterodimer partner,SHP）受体mRNA表达情况。结果：模型组胆固醇和胆汁酸水平较正常对照组明显升高（P〈0.01）;肝脏CYP7A1活性降低,mRNA表达下降（P〈0.01）;BSEP和SHP mRNA表达明显增加（P〈0.01）。与模型组比较,复方降脂3号组胆固醇水平明显下降（P〈0.01）;肝脏CYP7A1活性升高,mRNA表达增加（P〈0.01）;BSEP和SHP mRNA表达明显下降（P〈0.01）。复方降脂3号组胆汁酸含量与模型组比较,差异无统计学意义。结论：复方降脂3号可能通过上调CYP7A1表达和抑制BSEP、SHP mRNA表达,促进肝脏内胆固醇合成胆汁酸,继而降低血清胆固醇水平。     

T细胞受体保守域α链基因-575A/G多态性与终末期肾病微炎症状态的相关性研究

目的探讨T细胞受体保守域α链基因(TCRCα)-575A/G多态性与终末期肾病微炎症状态的相关关系。方法利用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析法(PCR-RFLP)来鉴定基因型,以检测终末期肾病患者和正常对照组TCRCα基因-575A/G多态性分布规律。并收集临床指标,进行病例对照研究及临床资料分析。结果 1在终末期肾病组和对照组,均检测出A、G两种TCRCα基因-575A/G等位基因,三种基因型AA型、AG型、GG型;2终末期肾病组和正常人对照组相比,基因型和等位基因分布频率均无统计学意义(P>0.05);3临床资料显示:终末期肾病患者的CRP、Lp(a)与AngⅡ的水平均比健康对照组高(P<0.05),差异有统计学意义。终末期肾病组,三种基因型在年龄、性别、Lp(a)、AngⅡ水平方面相比,差异无统计学意义(P>0.05),GG基因型的终末期肾病患者的CRP水平较AG和AA基因型明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。正常对照组中,三种基因型在年龄、性别、CRP、Lp(a)和AngⅡ水平方面相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论终末期肾病普遍存在微炎症状态,TCRCα-575A/G基因多态性可能与CRP的水平相关,与终末期肾病的发病易感性不相关。     

枸杞多糖对高脂血症小鼠血脂及肝脏氧化应激的影响

目的探讨枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides,LBP)对高脂血症小鼠肝脏胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7-alpha hydroxylase,CYP7A1)mRNA表达及氧化应激功能的影响。方法选取健康雄性昆明种小鼠26只,随机分为正常对照组、高脂血症组、高脂血症+LBP组;除正常对照组给予正常饮食,高脂血症组、高脂血症+LBP组采用高脂饲料喂养法建立小鼠高脂血症模型;模型建立成功后,高脂血症+LBP组于每天上午9:00按80mg·(kg·d)-1LBP灌胃;正常对照组、高脂血症组在同样时间以同样容量生理盐水灌胃,持续灌胃30d。采用酶联免疫法测定血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP 70)水平;采用吸光光度法测定肝脏超氧化物歧化酶(super oxide dismutase,SOD)、肝脏丙二醛(malondialdehyde,MDA)表达水平;采用实时荧光定量PCR技术测定肝脏CYP7A1mRNA表达水平。结果与正常对照组比较,高脂血症组小鼠血清TC、TG、肝脏MDA均升高(P<0.01),肝脏SOD、肝脏CYP7A1 mRNA表达水平均下降(P<0.01),高脂饮食+LBP组血清TC、TG、HSP70升高(P<0.01),而肝脏CYP7A1 mRNA表达水平则降低(P<0.05);与高脂血症组比较,高脂血症+LBP组小鼠血清TC、肝脏MDA均下降(P<0.01),肝脏SOD、肝脏CYP7A1 mRNA表达水平、HSP 70升高(P<0.05或P<0.01)。结论 LBP可提高高脂血症小鼠抗氧化应激能力,并可能通过上调高脂血症小鼠肝脏CYP7A1 mRNA的表达降低胆固醇。     

血管紧张素Ⅱ受体2型基因及醛固酮合酶基因多态性与高血压左室肥厚相关性研究

目的观察血管紧张素Ⅱ受体2型(AT2-R)基因 1675A/G多态性及醛固酮合酶(CYP11B2)基因-344C/T多态性与高血压左室肥厚(LVH)的相关性。方法按心脏超声特点将314例原发性高血压患者分为左室肥厚〔LVH( )〕组156例(男61例,女95例),无左室肥厚〔LVH(-)〕组158例(男96例,女62例)。使用常规方法提取白细胞DNA,采用多聚酶链式反应(PCR),限制性内切酶方法测定AT2-R基因多态性及CYP11B2基因多态性。结果(1)在LVH( )组与LVH(-)组,男性和女性AT2-R基因 1675A/G多态性各基因型构成及等位基因频率间差别均无显著性意义(P>0.05);(2)CYP11B2基因-344C/T多态性显示LVH( )组TT基因型频率显著高于LVH(-)组(P<0.05),而CT基因型频率LVH( )组显著低于LVH(-)组(P<0.05);T等位基因频率LVH( )组显著高于LVH(-)组(P<0.05)。结论(1)AT2-R基因 1675A/G多态性与高血压LVH的发生无关;(2)CYP11B2基因-344TT基因型及T等位基因频率与高血压LVH的发生有关。     

基于FXR通路探讨鸡血藤对ANIT诱导的肝内胆汁淤积模型大鼠的作用及机制

目的观察鸡血藤对α-萘异硫氰酸盐[ANIT)诱导的肝内胆汁淤积SD大鼠的治疗作用并从调控法尼醇X受体(FXR)相关通路方面进行机制研究。方法将40只雄性SD大鼠随机分为空白对照组(对照组)、ANIT造模组(模型组)、熊去氧胆酸60mg/kg组、鸡血藤150mg/kg组(鸡血藤低剂量组)、鸡血藤300mg/kg组(鸡血藤高剂量组)5组,每组8只。空白对照组和模型组大鼠灌胃生理盐水其余各组灌胃相应药物连续灌胃7d并在第5天除对照组外灌胃ANIT诱导肝内胆汁淤积模型。给药7d后麻醉大鼠取血清检测谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST),总胆红素(TBIL),总胆汁酸(TBA)的水平。并通过RT-PCR检测比较各组大鼠肝组织内FXR、小异源二聚体伴侣受体(SHP)、葡萄糖醛酸转移酶2B4(UGT2B4)、胆盐输出泵(BSEP)mRNA的表达水平。结果与对照组比较,模型组血清中ALT、AST、TBIL、TBA水平明显升高;与模型组比较,鸡血藤高、低剂量组血清中ALT、AST、TBIL、TBA水平均有不同程度降低。与对照组比较模型组大鼠肝小叶结构被破坏;与模型组比较,鸡血藤高、低剂量组则有不同程度改善。与对照组比较,模型组肝组织中FXR、SHP、UGT2B4、BSEP的mRNA表达均有明显降低;与模型组比较鸡血藤高、低剂量组mRNA表达则有不同程度升高。结论鸡血藤可改善ANIT诱导的肝内胆汁淤积SD大鼠的生存状况、肝功能和肝组织结构的病理状态其治疗作用可能与上调FXR及其相关下游的SHP、UGT2B4、BSEP的表达从而抑制肝内胆汁酸的合成和重吸收,促进胆汁酸的解毒和转运有关。     

补肾中药对大剂量氢化可的松诱导的Y1细胞皮质酮合成的作用

  目的：探讨常用补肾中药对大剂量氢化可的松诱导的Y1细胞皮质酮合成的作用。  方法：采用水提醇沉法制备淫羊藿、仙茅、巴戟天、肉苁蓉、杜仲、菟丝子、补骨脂、知母、黄柏、生地黄、六味地黄丸和金匮肾气丸等常用补肾中药和复方的提取物。①分别以不同浓度(0、2、4、8、16、31、63、125、250、500、1 000 μg/ml)的补肾中药或复方干预细胞48 h,MTT法检测Y1细胞增殖的情况,筛选各单味中药和复方的适宜浓度。②将细胞分为对照组、模型组和中药(复方)组。除对照组外,其他各组Y1细胞给予10 μmol/L氢化可的松和5 μmol/L H89(促肾上腺皮质激素信号阻断剂)诱导模型;造模同时,各中药(复方)组给予相应提取物。药物干预48 h后,PCR检测类固醇合成急性调节蛋白(Star)、胆固醇侧链裂解酶(Cyp11a1)、21α-羟化酶1(Cyp21a1)、11β-羟化酶1(Cyp11b1)、3β-羟基类固醇脱氢酶1(Hsd3b1)、3β-羟基类固醇脱氢酶2(Hsd3b2)等mRNA表达;Western blot检测StAR、CYP11A1、CYP11B1、3β-HSD1、3β-HSD2的蛋白表达;ELISA检测细胞培养液皮质酮含量。  结果：①MTT检测结果显示,黄柏对Y1细胞增殖具有明显的抑制作用。筛选出的适宜药物浓度分别为黄柏10 μg/ml、知母100 μg/ml、其他中药(复方)200 μg/ml。②各单味中药和复方干预模型细胞48 h后,PCR检测结果显示,淫羊藿、仙茅、黄柏和生地黄对皮质酮合成的相关基因影响较显著。③与对照组相比,模型组Star、Cyp21a1的mRNA表达显著降低(P<0.05,P<0.01),Cyp11a1、Cyp11b1和Hsd3b1的mRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组相比,生地黄组Cyp21a1和Hsd3b1的mRNA表达显著降低(P<0.01);仙茅组Cyp21a1、Cyp11a1和Hsd3b1的mRNA表达显著降低(P<0.01);淫羊藿组Star和Hsd3b1的mRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.01),Cyp21a1 mRNA表达显著降低(P<0.01);黄柏组Cyp21a1、Cyp11a1、Cyp11b1和Hsd3b1的mRNA表达显著降低(P<0.01)。④与模型组相比,仙茅组3β-HSD2蛋白表达显著降低(P<0.01),黄柏组StAR、CYP11A1和3β-HSD2蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01),3β-HSD1蛋白表达显著升高(P<0.01)。⑤与模型组相比,仙茅、淫羊藿、黄柏作用后皮质酮含量显著降低(P<0.01)。  结论：大剂量氢化可的松可诱导Y1细胞培养液皮质酮含量显著升高。补肾中药淫羊藿对模型细胞的皮质酮合成具有促进作用,可上调Star和Hsd3b1基因表达;而黄柏则具有抑制作用,可下调StAR、CYP11A1和3β-HSD2蛋白表达,降低皮质酮含量。     

穿心莲内酯联合氨苄青霉素对奈瑟球菌感染脑膜炎大鼠治疗作用的研究

目的 探讨穿心莲内酯(AG)联合氨苄青霉素(AMP)对奈瑟球菌感染脑膜炎大鼠的治疗作用及其机制。方法将100只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、AG组(50mg/kg)、AMP组(200mg/kg)和联合组(AG 50mg/kg+AMP 200mg/kg)共5组,每组各20只。除正常对照组外,其余各组大鼠通过小延髓池注射奈瑟球菌悬液复制脑膜炎大鼠模型。造模后,各组均1次/12小时给药,共给药5次。统计各组大鼠存活率,行症状评分,检测脑组织含水量,ELISA法检测血浆脂多糖和脑组织TNF-α、IL-1β、IL-6含量,Western blot法检测脑组织p65、IκBα蛋白表达。结果 与模型组比较,AG组、AMP组、联合组大鼠存活率显著升高(P<0.01),症状评分、脑组织含水量显著降低(P<0.05),血浆脂多糖和脑组织TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著降低(P<0.01),p65表达显著下调而IκBα表达显著上调(P<0.01)。与AG组和AMP组比较,联合组大鼠存活率显著升高(P<0.01),症状评分和脑组织含水量显著降低(P<0.05)。与AMP组比较,AG组和联合组血浆脂多糖和脑组织TNF-α、IL-6含量显著降低(P<0.05),p65表达显著下调而IκBα表达显著上调(P<0.05)。结论 AG联合AMP能够降低奈瑟球菌感染脑膜炎大鼠病死率,改善神经症状,抑制脑组织水肿。其机制可能与抑制内毒素血症和NF-κB炎性通路,进而抑制炎性反应有关。     

急性冠脉综合征抗血小板治疗药物抵抗及与COX-1基因多态性的相关性

目的:研究急性冠脉综合征(ACS)患者对阿司匹林联合氯吡格雷双重抗血小板治疗的反应并探讨药物抵抗与血小板COX-1基因A842G位点的相关性。方法:154例ACS患者,以花生四烯酸(AA)作为诱导剂测定血小板聚集率(PAG)。ELISA法测定尿11-脱氢-血栓素B2(11-DH-TXB2)水平。分析血小板COX-1基因A842G位点的基因型。计算患者2周内主要临床心脏事件(MACE)发生率。结果:①154例ACS患者PAG及尿11-DH-TXB2水平均明显升高,且急性心肿梗死(AMI)患者高于不稳定性心绞痛(UAP)患者,组间比较存在统计学差异(t=2.994,P<0.01;t=2.053,P<0.01);②双重抗血小板药物抵抗(AR)6例,抵抗发生率为3.90%;③COX-1基因A842G位点基因型AA型150例(97.40%),AG型4例(2.60%)。AR患者6例,其中AA型患者5例(83.33%),AG型患者1例(16.67%),组间比较存在统计学差异(χ2=43.560,P<0.01);④2周内AR组MACE率33.33%(2例),AS组4.05%(6例),组间比较存在统计学差异(χ2=22.73,P<0.01)。结论:①ACS患者存在不同程度的血小板活化状态,且AMI患者高于UAP患者,高血小板活化状态能引起更为严重的急性心脏事件;②COX-1基因A842G位点单核苷酸多态性可能与AR的发生有关,含有G突变基因患者更易发生AR;③AR患者更易发生心脏临床事件。     

高胆固醇摄入对新西兰兔胆汁酸代谢的影响

 目的 观察2周高胆固醇食物摄入对新西兰兔胆汁酸经典合成途径基因调节的影响。方法 20只新西兰兔随机分为对照组和高胆固醇组,分别喂饲普通兔粮及高胆固醇兔粮2周,测定实验前后血清总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL）、胆汁酸（bile acid,BA）及肝脏胆固醇7α羟化酶（cholesteral 7α-hydroxylase,CYP7A1）活性及mRNA、小分子异源二聚体伴侣（short heterodimer partner,SHP）mRNA、胆盐输出泵（bile salt export pump,BSEP）mRNA和三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1（ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1）mRNA、胆固醇酯转移蛋白（cholesteryl-ester transfer protein,CETP）mRNA。结果 高胆固醇组TC、LDL、BA均较对照组升高（P<0.05）;高胆固醇组CYP7A1活性及mRNA均较对照组降低（P<0.05）;高胆固醇组SHP mRNA、BSEP mRNA均较对照组升高（P<0.05）;胆固醇组ABCA1 mRNA、CETP mRNA均较对照组升高。结论 高胆固醇摄入后肝脏FXR、LXR受体均被激活,CYP7A1活性下降,胆汁酸经典合成减少。     

外源性NO对脂肪干细胞成软骨分化的影响

目的 通过观察不同浓度外源性一氧化氮（nitric oxide ,NO）供体硝普钠（SNP）对脂肪干细胞（adipose-derived stem cells,ADSCs）增殖状况及相关基因表达的影响,探讨外源性NO在ADSCs成软骨分化中的作用。方法 获取并培养ADSCs,分别进行成骨和成脂诱导,采用茜素红染色和油红O染色进行多向分化鉴定。NO检测试剂盒检测ADSCs成软骨分化过程中NO的变化;采用细胞计数试剂盒-8(CCK8)法检测不同浓度SNP（0.25 mmol/L、1.00 mmol/L、4.00 mmol/L）下ADSCs的增殖情况。以Real time-PCR（RT-PCR）方法检测ADSCs在不同浓度SNP下,表达转化生长因子-β1（TGF-β1）以及成软骨分化特异基因——信号传导蛋白Smad3、 Ⅱ胶原蛋白（Col-Ⅱα1）基因的变化。结果 培养的细胞经成骨和成脂诱导后茜素红染色和油红O染色呈阳性;ADSCs成软骨分化过程中,培养上清液中NO浓度始终比对照组高（P<0.05）;与对照组相比,低浓度SNP（0.25 mmol/L、1.00 mmol/L）对ADSCs的增殖无明显影响（P>0.05）,高浓度SNP（4.00 mmol/L）抑制ADSCs增殖,差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测发现SNP能抑制ADSCs自身TGF-β1 mRNA的表达,同时抑制Smad3 mRNA和Col-Ⅱα1 mRNA的表达。结论 在ADSCs成软骨分化过程中,外源性NO可以通过抑制ADSCs自身产生TGF-β1,并且抑制TGF-β下游信号通路,从而抑制成软骨分化。     

螺内酯对醛固酮诱导的大鼠肾小球系膜细胞氧化应激及NF-κB、MCP-1表达的影响

目的观察螺内酯(SPI)对醛固酮(ALD)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(MCs)氧化应激和核因子-κB(NF-κB)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响,探讨其肾脏保护机制。方法体外培养的MCs随机分为正常对照组(NG组)、ALD组(10-7mol/L)、SPI 1组(ALD+SPI 10-7mol/L)、SPI2组(ALD+SPI 10-8mol/L)和SPI 3组(ALD+SPI 10-9mol/L)。以流式细胞仪法检测MCs内活性氧(ROS)水平。RT-PCR法检测NF-κB、MCP-1、醛固酮合成酶(CYP11B 2)、醛固酮受体(MR)和11β-羟类固醇脱氢酶2(11β-HSD 2)的mRNA表达。结果①MCs表达CYP11B 2、MR和11β-HSD 2 mRNA。②与NG组比较,ALD刺激MCs 48 h后,细胞内ROS水平、NF-κB及MCP-1 mRNA表达明显增加。③SPI干预48 h后,与ALD组相比较,SPI 1组、SPI 2组、SPI 3组细胞内ROS水平、NF-κB及MCP-1 mRNA表达明显减少,且呈一定的剂量依赖性。④相关分析显示MCs内ROS水平与NF-κB mRNA表达量呈显著正相关(P<0.01),NF-κBmRNA和MCP-1 mRNA表达量也呈显著正相关(P<0.01)。结论 SPI可在一定程度上抑制ALD诱导的MCs氧化应激,减少NF-κB和MCP-1的表达,该作用可能与其肾脏保护作用部分有关。     

雌激素受体及胆汁酸代谢相关基因在胆汁淤积孕鼠胎鼠肝脏中的表达

目的探讨雌激素受体(estrogen receptor,ERα)与胆汁酸代谢相关基因胆固醇7α羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)、胆固醇27α羟化酶(cholesterol 27-hydroxylase,CYP27A1)、胆固醇12α羟化酶(cholesterol 12α-hydroxylase,CYP8B1)mRNA在妊娠期肝内胆汁淤积孕鼠胎鼠肝脏中的表达及其意义。方法将60只清洁级SD孕鼠自孕第13天均分为2组:对照组孕鼠皮下注射精制植物油2.0 mL.kg-1.d-1;研究组孕鼠皮下注射17-α-乙炔雌二醇1.25 mg.kg-1.d-1。2组孕鼠分别于妊娠第13、17、21天断尾采母鼠血2 mL检测血清生物化学指标,于妊娠第21天处死。抽取母鼠、胎鼠血并提取母鼠、胎鼠肝脏组织。应用酶联免疫吸附试验检测2组孕鼠以及胎鼠血清中胆酸浓度;应用实时定量PCR技术检测各组胎鼠肝脏ERα、CYP7A1、CYP27A1、CYP8B1的mRNA表达量。结果①胆酸指标比较:在妊娠第17天时对照组、研究组母鼠胆汁酸浓度分别为(24.6±1.3)μmol/L、(58.7±3.2)μmol/L,研究组母鼠胆汁酸浓度明显高于对照组(t=2.462,P<0.05);在妊娠第21天时对照组、研究组母鼠胆汁酸浓度分别为(26.5±3.1)μmol/L、(66.4±2.7)μmol/L,研究组母鼠胆汁酸浓度与妊娠第17天时研究组以及对照组相比(F=5.43,P<0.05),差异有统计学意义。②胎鼠肝脏CYP7A1 mRNA、CYP27A1 mRNA、CYP8B1 mRNA表达:研究组中CYP7A1 mRNA(1.25±0.01)、CYP27A1 mRNA(2.05±0.03)、CYP8B1 mRNA明显高于对照组(0.35±0.02、0.75±0.03、0.85±0.02),P值均<0.05,差异有统计学意义。③胎鼠肝脏雌激素受体的表达:研究组中ERαmRNA(0.75±0.02)明显高于对照组ERαmRNA(0.45±0.01)。结论妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)孕鼠胎鼠肝细胞ER、CYP7A1、CYP27A1、CYP8B1的表达升高,胆汁酸的合成与代谢调节机制存在障碍,可能是导致ICP胎儿围生期死亡发生的原因之一。     

基于Wnt/β-链蛋白信号通路观察高糖环境对大鼠下颌骨骨髓基质细胞增殖的影响

目的 观察高糖环境对大鼠下颌骨骨髓基质细胞增殖的影响,并结合Wnt/β-链蛋白信号通路初步探讨高糖对骨髓基质细胞增殖的影响。方法 从Wistar大鼠下颌骨中分离培养骨髓基质细胞,分别给予不同糖浓度(5.5和16.5 mmol/L)干预,采用噻唑蓝法观察骨髓基质细胞1、3、5、7 d时的增殖情况,采用流式细胞仪对高糖干预5 d细胞进行细胞周期检测,Western免疫印迹检测5 d时β-链蛋白和细胞周期蛋白D1的表达,实时定量多聚酶链反应检测淋巴增强因子-1和细胞周期蛋白D1的mRNA表达。结果 噻唑蓝法检测结果显示,1 d骨髓基质细胞在两种糖浓度中的光密度值差异无统计学意义(P=0.700),3、5、7 d时16.5 mmol/L组的细胞光密度值显著低于5.5 mmol/L组(P=0.006,P=0.002,P=0.003)。5 d的细胞周期结果显示,与5.5 mmol/L组细胞相比,16.5 mmol/L组细胞可以抑制细胞从G1期向S期转化,16.5 mmol/L组细胞的增殖指数显著低于5.5 mmol/L组(P=0.014)。与5.5 mmol/L组相比,16.5 mmol/L组细胞明显抑制β-链蛋白的表达,同时Wnt/β-链蛋白通路中淋巴增强因子-1 mRNA及下游细胞周期蛋白D1 mRNA和蛋白的表达也受到明显抑制。结论 高糖环境可以通过抑制Wnt/β-链蛋白信号通路中关键因子β-链蛋白、淋巴增强因子-1及下游与细胞增殖相关靶基因细胞周期蛋白D1的表达,进而抑制骨髓基质细胞的增殖。     

促酰化蛋白受体C5L2在前脂肪细胞分化过程和脂肪酸负荷下的表达研究

目的 观察3T3-L1前脂细胞分化和游离脂肪酸（FFA）对3T3-L1（前）脂肪细胞C5L2基因和蛋白表达的影响。方法采用逆转录（RT）-PCR和流式细胞仪检测不同分化时段和FFA处理后（前）脂肪细胞C5L2mRNA和蛋白表达。结果 3T3-L1脂肪细胞C512mRNA表达呈分化依赖性增加,而C5L2蛋白表达水平在分化早期显著增强,诱导分化6hC5L2蛋白表达增加了21％（61％±18％VS51％±15％,P〈0．05）;分化12h达高峰,增加了38％（70％±12％VS51％±15％,P〈0．01）;分化3d基本恢复至0d水平。在3T3-L1成熟脂肪细胞,0．5mmol／L和1．0mmol／L油酸分别抑制46％（0．58±0．21 vs 1．08±0．46,P〈0．05）和84％（0．18±0．04VS1．08±0．46,P〈0．05）C5L2 mRNA表达,而0．125mmol／L油酸即能显著下调36％（35％±8％vs54％±7％,P〈0．01）C5L2蛋白表达。低浓度棕榈酸均能明显抑制C5L2mRNA和蛋白的表达,1．0mmol／L时c512mRNA和蛋白表达分别减少了41％（0．57±0．28vs0．97±0．41,P〈0．05）和55％（24％±13％VS54％±7％,P〈0．01）。油酸和棕榈酸对前脂肪细胞C512表达差异无统计学意义。结论促酰化蛋白／C5L2途径参与了脂肪细胞分化的调控过程。C512mRNA和蛋白表达的下调可能参与了油酸和棕榈酸诱导的成熟脂肪细胞胰岛素抵抗的发生。     

硫氧环蛋白相互作用蛋白与糖尿病关系的研究

目的 研究高糖环境下INS-1细胞中硫氧环蛋白相互作用蛋白(thioredoxin interacting protein,TXNIP)的表达对胰岛素分泌的影响以及N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)、艾塞那肽(Exenatide,Ex-4)的保护作用.方法 以含11.1 mmol/L葡萄糖的RPMI 1640培养液培养INS-1细胞,当细胞生长至80%融合时,分别转入含有4.0 mmol/L葡萄糖(NG组)、16.7 mmol/L葡萄糖(HG组)及16.7 mmol/L葡萄糖+10 mmol/L NAC(HG+N组)、16.7 mmol/L葡萄糖+100 nmol/L Ex-4(HG+E组)的RPMI 1640培养液中继续培养48 h;采用real-time PCR法检测TXNIP、胰岛素基因及胰岛素转录因子MafA的mRNA水平.结果 HG组与NG组比较,TXNIP mRNA的表达明显上升,胰岛素mRNA、MafA mRNA的表达均明显下降,差异均有统计学意义(均P<0.01).HG+N组、HG+E组与HG组比较,TXNIP mRNA的表达均明显下降,胰岛素mRNA、MafA mRNA的表达均明显提高,差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 高浓度葡萄糖可通过介导TXNIP的过度表达而导致胰岛素基因及MafA表达下降;特异性地抑制高糖下TXNIP的过度表达可以恢复胰岛素基因及MafA的表达.     

赖氨藤黄酸对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制

目的: 研究赖氨藤黄酸(GAL)对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响并探讨其作用机制,为GAL 抗乳腺癌的临床研究和应用提供理论依据。方法: 选取处于对数生长期的MCF-7细胞,并随机分为空白对照组、不同剂量 (0.25、0.50、1.00、2.00、4.00和8.00 μmol·L^-1)GAL组和不同剂量(0.25、0.50、1.00、2.00、4.00和8.00μmol·L^-1)藤黄酸组,采用MTT法检测各组MCF-7细胞48 h增殖活性。选取对数生长期的MCF-7细胞,2 μmol·L^-1 GAL作用MCF-7细胞不同时间(0、6、12、24、36、48和60 h),采用MTT法检测作用不同时间后各组MCF-7细胞增殖活性。流式细胞术和Hoechst 33258染色检测各组MCF-7细胞24 h时凋亡情况,采用Western blotting 法检测各组MCF-7细胞24 h时凋亡相关蛋白的表达水平。结果: 细胞培养24 h 后,不同剂量GAL组MCF-7细胞存活率低于空白对照组(P<0.05),随剂量增加和作用时间延长细胞存活率下降(P<0.05)。流式细胞术和Hoechst 33258染色,与空白对照组比较,不同剂量GAL组MCF-7细胞凋亡率明显升高(P<0.05),且呈剂量依赖性。Western blotting检测,与空白对照组比较,不同剂量GAL组细胞沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白表达水平明显降低 (P<0.05),而caspase-3切割片段蛋白的表达水平明显高于对照组 (P<0.05)。结论: GAL 通过抑制SIRT1蛋白表达水平和上调caspase-3切割片段蛋白的表达水平诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡。