重组pEGFP-N1-H2Bl质粒载体诱导心脏移植免疫耐受

目的 探讨H2-Bl基因诱导小鼠心脏移植免疫耐受的机制和效果.方法 建立小鼠颈部心脏异位移植模型,供体心脏经主动脉根部灌注H2-Bl质粒真核表达载体后进行心脏移植.实验分4组:对照组、环孢素A(CsA)组、H2-Bl质粒转染组、H2-Bl质粒转染+CsA组.各组于术后1、3和7天各动态枪测供心病理改变,免疫组织化学方法测供心CD40表达情况,流式细胞仪检测供心血清中Th1/Th2细胞因子变化,记录移植心脏存活时间.结果 对照组移植后排斥反应最重,其余组与之比较均有所减轻,以H2-Bl质粒转染+CsA组排斥反应最轻.免疫组化显示术后7天时H2-Bl质粒转染组CD40与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05),CsA组、H2-Bl+CsA组CD40与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01).H2-Bl+CsA组Th2细胞因子表达较其余组增加而Th1细胞因子则减少,到术后7天时各组Th细胞因子与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,其余各组小鼠供心存活天数均延长(P＜0.05).结论 H2-Bl基因干预可一定程度诱导移植心脏免疫耐受,延长同种异体小鼠颈部移植心脏存活时间.     

供心体外转染腺病毒介导的CD40Ig融合基因延长小鼠移植心脏存活时间

目的探讨体外转染CD40Ig融合基因对小鼠移植心脏存活时间的影响。方法构建携带小鼠CD40胞外段和人IgGFc融合基因的重组腺病毒载体(AdCD40Ig),以BALB/c小鼠为供者,C57BL/6小鼠为受者,建立小鼠腹部异位心脏移植模型,实验组供心移植前在体外以AdCD40Ig灌注,转染CD40Ig基因,另设空载体转染对照组、非转染对照组和近交系对照组(供、受者均为近交系C57BL/6小鼠)。术后观察移植心的存活及移植物中炎症细胞浸润情况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测受者体内CD40Ig融合蛋白表达情况,流式细胞仪检测受者体内产生γ干扰素(IFN-γ)的脾细胞。结果实验组移植心的存活时间达(15.8±0.7)d,明显长于空载体转染对照组和非转染对照组(P<0.01)。术后第2d,实验组受者体内CD40Ig融合蛋白表达最高,1周后明显降低。术后第7d,实验组移植心组织中浸润的炎症细胞明显比未处理对照组和空载体对照组少。实验组产生IFN-γ的CD4+和CD8+T淋巴细胞分别为(2.18±0.16)%和(10.82±0.74)%,与近交系对照组接近,明显低于未处理对照组和空载体对照组(P<0.01)。结论供心体外转染CD40Ig融合基因可有效抑制移植后受者体内同种T淋巴细胞的增殖,并延长移植心的存活时间。     

粉防己碱和环孢素A在大鼠心脏移植中的协同作用

目的 研究粉防己碱(Tetrandrine,Tet)和低剂量环孢素A(CsA)联合使用对同种异基因大鼠移植心脏存活时间的影响.方法 分别以近交系雄性Lewis(RT11)大鼠和BN(RT1n)大鼠为供、受者,将接受心脏移植后的BN大鼠随机分为5组,术后开始连续每天腹腔注射给药.A组:给予生理盐水1 ml/d;B组:给予CsA 3.2 mg·kg-1·d-1;C组:给予Tet 40 mg·kg-1·d-1;D组:给予Tet 40 mg·kg-1·d-1和CsA 3.2 mg·kg-1·d-1;E组:给予CsA 6 mg·kg-1·d-1.观察移植心存活时间并进行病理检查,测定受者外周血CD3+CD25+ T淋巴细胞数量、体外单向混合淋巴细胞反应以及受者血清白细胞介素2(IL-2)浓度等.结果 A、B、C、D、E组大鼠的移植心平均存活分别为(7.2±0.45)d、(10.8±1.48)d、(9±1.0)d、(15.6±3.05)d和(15.2±2.28)d,D、E组移植心存活时间比A组显著延长(P＜0.05),术后6 d D组外周血CD3+CD25+ T淋巴细胞数量、单向混合淋巴细胞反应刺激指数、血清 IL-2浓度较A组显著降低(P＜0.05),D组移植心排斥反应程度最轻.结论 Tet和低剂量CsA联合应用能显著延长同种异基因大鼠移植心的存活时间,其机理可能与抑制反应性T淋巴细胞活化以及抑制外周血清IL-2产生等有关.     

地西他滨诱导体内Foxp3基因表达上调延长心脏移植小鼠的存活时间

目的 探讨甲基转移酶抑制剂地西他滨诱导体内叉状头螺旋转录因子(Foxp3)基因表达延长同种心脏移植小鼠存活时间的作用及其机制.方法 以经丝裂霉素处理的Balb/c小鼠和C57BL/6小鼠脾细胞作为刺激细胞,未经丝裂霉素处理的C57BL/6小鼠脾细胞作为反应细胞,进行体外单向混合淋巴细胞培养,观察地西他滨对培养体系中CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(Treg细胞)比例的影响.分别以Balb/c小鼠和C57BL/6小鼠作为供、受者,建立同种小鼠腹部异位心脏移植模型.实验组受鼠术后1～3 d经尾静脉注射地西他滨(1.5 mg/kg),同种对照组受鼠术后1～3 d经尾静脉注射等体积生理盐水.监测两组移植心存活时间,检测受鼠外周血CD4+ CD25+ Treg细胞比例及Foxp3 mRNA的表达,观察移植心组织病理学变化.结果 地西他滨能够上调体外同种混合淋巴细胞反应体系中CD4+ CD25+Treg细胞的水平.同种对照组和实验组移植心脏中位存活时间分别为7和11d,实验组较对照组明显延长(P＜0.01).与同种对照组相比,实验组CD4+ CD25+ Treg细胞比例和Foxp3 mRNA的表达均明显升高(P＜0.01);移植心肌炎症细胞浸润的程度明显减轻.结论 地西他滨能够诱导同种心脏移植小鼠体内Foxp3基因的表达,从而明显减轻急性排斥反应,延长移植心存活时间,其机制可能与Foxp3表达能够诱导CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞的增殖和分化密切相关.     

槐耳清膏在小鼠心脏移植排斥反应中作用的初步探讨

目的 探讨槐耳清膏在小鼠心脏移植急性排斥反应中的作用.方法 实验分为3组:A组:同种异基因移植后槐耳清膏处理组(槐耳清膏组);B组:同种异基因移植财照组(移植排斥组)及C组:同系移植对照组(同系移植组).观察各组移植心脏的存活时间、术后第5天供心的组织病理改变.用免疫荧光检测移植心脏中CD8+T淋巴细胞的浸润和颗粒酶B的表达水平.结果 A组移植心脏的平均存活时间为(6.38±0.69)d,与B组(8.31±0.59)d相比明显缩短(P<0.01);心肌组织呈3级急性排斥反应病理改变,CD8+T淋巴细胞弥漫性浸润及颗粒酶B表达与两个对照组相比明显增强(P<0.05).结论 在术后早期单用槐耳清音会促进小鼠心脏移植物的急性排斥反应,可能机制足促进CD8+T淋巴细胞的组织浸润并增强颗粒酶B的表达.     

输注鼠基因工程Treg细胞抑制小鼠异基因骨髓移植后移植物抗宿主病

目的 探讨输注慢病毒载体介导的鼠基因工程调节性T淋巴细胞(Treg细胞)对小鼠异基因骨髓移植后移植物抗宿主病(GVHD)的影响.方法 利用慢病毒载体介导,将鼠又状头螺旋转录因子(Foxp3)基因转导入Balb/c小鼠的CD4~+ CD25~-T淋巴细胞,即为基因工程Treg细胞.以Balb/c小鼠为供者,C57BL/6小鼠为受者,进行异基因骨髓移植,实验分4组进行:(1)工程Treg组经受鼠尾静脉输注供鼠骨髓细胞5×10~6个+脾细胞5×10~6个+基因工程Treg细胞5×10~6个;(2)移植对照组经受鼠尾静脉输注供鼠骨髓细胞5×10~6个+脾细胞5x10~6;(3)单纯照射组经受鼠尾静脉输注RPMI 1640培养液0.2ml;(4)空载体对照组经受鼠尾静脉输注供鼠骨髓细胞5×10~6个+脾细胞5×10~6个十空载体转导的CD4~+ CD25~-T 淋巴细胞5×10~6个.每天观察受鼠存活情况;记录GVHD的发生情况;各组均于小鼠濒死前取其肝脏、小肠、皮肤等组织,进行病理学观察;取长期存活(超过60d)的受鼠骨髓细胞,检测嵌合情况.结果 单纯照射组、移植对照组、工程Treg组和空载体对照组小鼠存活时间分别为(8.8±0.6)d、(36.7±2.5)d、(51.6±4.0)d和(34.1±2.3)d,工程Treg组小鼠存活时间明显长于其他各组,差异有统计学意义(P<0.05).移植对照组及空载体对照组小鼠肝脏、皮肤和小肠病理切片均存在GVHD病理改变,工程Treg组长期存活小鼠的肝脏、皮肤和小肠常规病理切片结构基本正常,未见GVHD病理表现,该组GVHD评分明显低于移植对照组及空载体对照组.结论 小鼠异基因骨髓移植时联合输注基因工程Treg细胞可有效减少GVHD的发生,减轻其严重程度.     

ICOS-Ig 融合蛋白联合亚剂量环孢素A诱导小鼠移植心脏长期存活

目的 探讨可诱导共刺激分子-Ig融合蛋白(ICOS-Ig)联合亚剂量环孢素A(CsA)对小鼠移植心脏存活时间的影响及其机制.方法 自行构建ICOS-Ig.以Balb/c小鼠为供者,C57BL/6小鼠为受者,套管法制备小鼠颈部心脏移植模型,然后将模型分为5组:(1)未处理组,不做任何处理;(2)对照IgG组,移植当天以及术后第2、4、6天腹腔注射IgG 250 μg;(3)IcoS-Ig组,移植当天以及术后第2、4、6天腹腔注ICOSIg250 μg;(4)CsA组,移植当天以及术后第1～7天腹腔注射CsA 10mg/kg;(5)ICOS-Ig+CsA组,同时给予ICOS-Ig和CsA,使用时间和剂量同前.术后观察移植心脏存活时间,观察移植后第7天移植心脏的病理变化,并进行供、受者混合淋巴细胞反应(MLR),测定受者血清中供者特异性的同种抗体水平.结果 各组小鼠移植心脏存活时间分别为:未处理组(8.5±1.5)d,对照IgG(8.00.8)d,ICOSIg(29.57.7)d.CsA处理组(21.0±5.0)d,ICOS-Ig+CsA组移植心脏存活时间均超过50d,6只(6/9)移植心脏存活时间>100d,ICOS-Ig+CsA组与其他4组比较,差异均有统计学意义(P<0.01).移植后7d,未处理组及对照IgG组心肌明显变性,纤维断裂,间质水肿,肌束间及血管周围有大量炎症细胞浸润,而ICOS-Ig组和CsA组心肌无明显变性,间质略水肿,血管周围有少量淋巴细胞浸润,ICOS-Ig+CsA组的病理改变明显I(X)S-Ig组和CsA组.移植后7d,ICOS-Ig组和CsA组的脾脏淋巴细胞对同种抗原刺激反应比未处理组和对照IgG组明显降低(P<0.05),而ICOS-Ig+CsA组的抑制作用明显强于ICOS-Ig组和CsA组(P<0.05).移植后7d,ICOS-Ig组和CsA组受者血清中针对特异性供者的抗体水平明显低于未处理组和对照IgG组(P<0.05),ICOS-Ig+CsA组的抗体水平明显低于ICOS-Ig组和CsA组(P<0.05).结论 ICOS-Ig可以降低受者对供免疫反应性,延长移植心脏的存活时间,联合亚剂量CsA可使异体移植心脏长期存活.     

短期运用环孢素A对供者骨髓移植所诱导的混合嵌合体和免疫耐受的抑制作用

目的探讨临床常用免疫抑制剂对供者骨髓移植和T淋巴细胞协同刺激信号阻滞联合诱导的混合嵌合体和免疫耐受的影响。方法将BALB/c小鼠的皮肤移植于C57BL/6小鼠背部,术后经尾静脉注射BALB/c小鼠骨髓细胞5×10~7个和AdCTLA4-FasL 5×10~9 PFU(标准方案组),部分小鼠在此基础上还接受环孢素A(CsA组)、霉酚酸酯(MMF组)和环孢素A、霉酚酸酯联合(CsA+ MMF组)皮下或腹腔注射,共用药28 d,同时设移植后不给任何处理的对照组。观察移植皮肤存活情况,流式细胞仪测定受者外周血Vβ11~+T淋巴细胞的水平和供者来源细胞的嵌合水平,行单向混合淋巴细胞反应(MLR)了解受者对供者抗原的反应。结果除对照组外,其它几个组在短期内(21 d)均诱导了高水平的混合嵌合体(＞30%),但在停药后的140 d,仅标准方案组和MMF组仍保持稳定的嵌合水平。对照组移植皮片的存活时间为(9．8±1．2)d,CsA组和CsA+MMF组皮片存活时间均不超过50 d,标准方案组和MMF组皮片存活时间均超过150 d,明显长于CsA组和CsA+MMF组(P＜0．05)。术后150 d,标准方案组和MMF组的MLR受到显著抑制,刺激指数均＜1,而CsA组和CsA+MMF组的MLR未受抑制(刺激指数均＞1)。术后21d时,各组小鼠外周血中Vβ11~+T淋巴细胞的水平均低于对照组,但标准方案组和MMF组的Vβ11~+ T淋巴细胞较CsA组和CsA+ MMF组更低(P＜0．05),至术后140 d时,标准方案组和MMF组的Vβ11~+ T淋巴细胞比例降至更低水平。结论CsA或含CsA的免疫抑制方案对供者骨髓移植和输注CTLA4-FasL联合诱导的混合嵌合体和免疫耐受具有抑制作用,其机理可能与早期外周供者反应性T淋巴细胞删除减少有关。     

体外光化学疗法对皮肤移植小鼠产生调节性T细胞的影响

目的探讨输注体外光化学法处理的脾淋巴细胞对皮肤移植受体小鼠产生调节性T细胞(Treg)及移植物存活时间的影响。方法以C57BL/6小鼠为供体,BALB/c小鼠为受体,建立小鼠皮肤移植模型。分离C57BL/6和BALB/c小鼠脾淋巴细胞(CSP、BSP),制备经8-甲氧基补骨脂素联合长波紫外线(PUVA)处理的小鼠脾淋巴细胞(PUVA-SP)。根据受者静脉输注的成分将实验动物随机分为5组(每组12只):PUVA-BSP组、PUVA-CSP组、BSP组、CSP组及磷酸盐缓冲液(PBS)对照组,每组受体分别于术前7 d、手术当日和术后7 d按组别从尾静脉注入PUVA-BSP、PUVA-CSP、BSP、CSP或PBS。观察受体移植物的存活时间,检测受体外周血中CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg表达情况。结果皮肤移植术后,PUVA-BSP组和PUVA-CSP组的受体小鼠外周细胞CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg的比例明显高于输注BSP组、CSP组和PBS对照组;PUVA-CSP组高于PUVA-BSP,BSP组和CSP组低于PBS对照组。PUVA-BSP组和PUVA-CSP组的受者小鼠移植皮片存活时间明显长于BSP组、CSP组和PBS对照组(均为P0.05)。结论输注足够数量的PUVA-SP可诱导受体体内产生较多的CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg,可以显著延长移植物的存活时间。     

CTLA4Ig基因和CD40Ig基因转染供肾对异种大鼠移植肾存活的影响

目的 探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4融合蛋白(CTLA4Ig)基因和CD40Ig基因转染供肾对异种大鼠移植肾存活的影响.方法 以PcDNA3.1质粒为载体,通过脂质体2000将CTLA4Ig基因和CD40Ig基因转染豚鼠肾脏,再移植(异位肾移植)给SD大鼠.实验分4组进行:第1组供肾以PcDNA3.1空载体脂质体复合物转染(空载体组);第2组供肾转染CD40Ig基因(CD40Ig转染组);第3组供肾转染CTLA4Ig基因(CTLA4Ig转染组);第4组供肾同时转染CTLA4Ig基因和CD40Ig基因(双基因转染组).术后观察各组血清肌酐、移植肾组织病理改变以及移植肾存活时间.结果 空载体组、CD40Ig转染组、CTLA4Ig转染组和双基因转染组受者的存活时间分别为(6.8±1.9)d、(40.7±10.9)d、(49.3±9.5)d和(75.7±8.0)d,3个转染组明显长于空载体组(P＜0.01),其中双基因转染组移植肾存活时间最长,与其他3组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).各组术后血清肌酐水平呈上升趋势,但升高幅度以双基因转染组为最低(P＜0.01).术后第30天,CD40Ig转染组和CTLA4Ig转染组存活大鼠的移植肾组织中可见大量淋巴细胞浸润,而双基因转染组的移植肾组织中仅见少量淋巴细胞浸润.结论 供肾局部同时转染CTLA4Ig基因和CD40Ig基因可明显延长其异种移植后的存活时间.     

牛血红蛋白用于兔离体心脏延时保存的研究

目的 研究牛血红蛋白对兔离体心脏保存时限的作用。方法 在Ｓｔ Ｔｈｏｍａｓ Ⅱ液中加入无机质游离牛血红蛋白（ＳＦＢＨＢ）,用该液常温灌注离体兔心６ｈ作为实验组,用单纯Ｓｔ ＴｈｏｍａｓⅠ液低温保存离体兔心作为对照组,每组大白兔均为１２只。结果 左室发展压（ＬＶＤＰ）,冠状动脉流量恢复率（ＣＲＦ）,实验组均显著高于对照组,Ｐ〈０．００;１兔心保存４ｈ后,心肌组织ＡＴＰ含量两组差异显著;心脏复跳３０ｍ     

不同浓度左旋卡尼汀对离体兔缺血/再灌注心脏功能的保护作用

目的 观察不同浓度左旋卡尼汀(L-carnitine,L-CN)预处理对高钾停跳离体兔缺血/再灌注心脏功能的保护作用.方法 采用离体兔心Langendorff灌注实验模型,离体兔心24只随机等分成缺血/再灌注组、L-CN 2.5 mmol/L、L-CN 5.0 mmol/L、L-CN 10mmol/L 4组(n=6).缺血/再灌注损伤组:灌注K-H液25 min,(兔心)4℃标准St.Thomas停搏液(K~+16 mmol/L)至心脏停跳,45 min后恢复K-H液灌注20 min;不同浓度L-CN组:灌注K-H液10 min,再予不同浓度的L-CN续灌15 min,余步骤同缺血/再權注组.观察灌注过程中各组的血流动力学指标.心肌TTC染色测定缺血面积和梗死面积百分比.结果 再灌注后浓度5.0mmol/L和10.0 mmol/L的L-CN预处理的离体兔心心功能的恢复率均明显高于对照组(P＜0.05);其心肌存活面积百分比高于对照组(P＜0.05).结论 L-CN预处理对高钾停跳离体兔缺血/再灌注心脏具有较好的心功能保护作用.     

Possible role of hydrogen sulfide on the preservation of donor rat hearts

OBJECTIVE: The aim of this study was to observe the preservative effect of hydrogen sulfide (H2S) on donor rat hearts. MATERIALS AND METHODS: The hearts of 24 Sprague-Dawley rats were perfused on a Langendorff perfusion column for 30 minutes. We calculated and recorded the left ventricular-developed pressure (LVDP), and positive and negative derivatives of left ventricular systolic pressure (LVSP; +dP/dt and -dP/dt). Hearts were then arrested and stored for 6 hours at 4 degrees C: group 1, Krebs-Henseleit (KH) solution; group 2, KH solution with 1 micromol/L NaHS; group 3, KH solution with 1 micromol/L NaHS and 10 micromol/L glibenclamide; group 4, St. Thomas II solution. Hearts were transferred back to the Langendorff column. After stabilizing for 30 minutes, LV performance was assessed as before. The donor hearts were kept for pathological study including myocardial water ratio, ATP content, and myocyte apoptosis index. RESULTS: The recovery rates of +dp/dtmax, -dp/dtmax, and LVDP of groups 2 and 4 were much better than those of groups 1 and 3. The hearts contracted immediately after reperfusion in group 4. Ventricular fibrillation was seen before contraction in the other 3 groups, with the longest duration in group. No significant difference in myocardial water ratio was found. The ATP content was the highest in group 2. Apoptosis was observed in the 4 groups with the lowest apoptosis index in group 2. CONCLUSIONS: H2S has a protective effect on rat donor hearts at the concentration of 1 micromol/L. The protective effect is better than that of St. Thomas II solution. The protective effect of H2S can be blocked by glibenclamide.     

药物预处理与诱导超极化对离体心脏的保护研究

目的：探讨AT敏感性钾通道开放剂（KCOs)吡那地尔对Langendorff灌注兔心脏模型药物预处理与药物诱导超极化停跳的保护作用。方法：离体兔心40个,随机等分5组。对比研究2种浓度吡那地尔在4℃或37℃全心缺血40min,复灌20min的心肌组织腺苷酸含量,脂质过氧化物的变化,以及再灌注后10、20min心功能恢复的情况。结果（1）心脏诱导停跳以4℃超极化与药物预处理组迅速,37℃超极化组较为缓慢;再灌注后仅对照组心脏复跳较慢。（2）与对照组同期比较,比吡那地尔预处理以及超极化的心脏再灌注后心肌收缩力与左心室内压恢复较快,其中心肌收缩力的恢复更为显著;（3）再灌注后,对照组心肌ATP、总腺苷量、细胞能荷水平低于预处理与超极化组（P＜0．05或0．01）其中以37℃预处理ATP含量较高,而经吡那地尔处理的4组,丙二醛则不同程度的低于对照组,结论：吡那地尔诱导心脏超极化停跳以及药物预处理,有助于降低心肌ATP的消耗,减少脂质过氧化物的形成,明显改善离体兔心脏缺血／再灌注后期心功能。     

含磷酸肌酸心脏停搏液对鼠供心的心肌保护作用

目的探讨含磷酸肌酸的心脏停搏液对离体心脏的保存效果，以延长供体心脏缺血的保存时间，提高心脏移植的效果。方法将20只Wistar大鼠随机分成两组，对照组（n=10）：使用冷晶体St．ThomasⅡ心脏停搏液灌注保护供心；实验组（n-10）：灌注含磷酸肌酸钠（2．5g／L）的冷晶体St．ThomasⅡ心脏停搏液保护供心。鼠心于低温保存4h后取心肌组织，测定心肌组织中三磷酸腺苷（ATP）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性。在光学显微镜和电子显微镜下观察心肌组织结构变化及线粒体水肿情况。结果供心冷藏保存4h后，实验组心肌组织中ATP含量明显高于对照组（2．75±0．99μmol／mg vs．1．77±0．86μmol／mg，P〈0．05）；SOD活性明显高于对照组（49．6±2．52U／mg vs．45．27±2．21U／mg，P〈0．05）。电子显微镜下观察：对照组心肌细胞核固缩，核膜内染色质凝聚、溶解，线粒体嵴间隙消失，间质血管内皮坏死；实验组心肌细胞核位于中心区，肌节各带结构清晰，肌质网扩张，闰盘各带连接结构清晰。结论含磷酸肌酸的心脏停搏液能明显增强供心的心肌保护作用。     

Donor-specific tolerance in fully major histocompatibility major histocompatibility complex-mismatched limb allograft transplants under an anti-alphabeta T-cell receptor monoclonal antibody and cyclosporine A protocol

BACKGROUND: Recent studies have demonstrated that treatment with alphabeta-T-cell receptor (TCR) monoclonal antibody and cyclosporine A (CsA) can extend survival in composite tissue allografts (CTA). The purpose of this study was to induce tolerance in fully major histocompatibility complex (MHC)-mismatched rat limb allografts under 7 days of a combined alphabeta-TCR-CsA protocol. METHODS: The authors performed 30 hind-limb allotransplantations across the MHC barrier between Brown Norway donors (BN; RT1n) and Lewis recipients (LEW; RT1l). Isograft and allograft controls received no treatment. The experimental groups received monotherapy of alphabeta-TCR and CsA or a combination of alphabeta-TCR and CsA for 7 days only. Donor-specific tolerance and immunocompetence were determined by standard skin grafting in vivo and mixed lymphocyte reaction (MLR) in vitro. The efficacy of immunosuppressive therapy and the level of donor-specific chimerism were determined by flow cytometry. RESULTS: Long-term survival (>350 days) was achieved in allograft recipients (n=6) under the 7-day protocol of combined alphabeta-TCR-CsA. Donor-specific tolerance and immunocompetence of long-term chimeras were confirmed by acceptance of skin grafts from the donors and rejection of the third-party alloantigens (AxC Irish). At day 120, MLR demonstrated unresponsiveness to the host and donor antigens but strong reactivity against third-party alloantigens. Flow cytometry confirmed the high efficacy of immunosuppressive treatment and the development of donor-specific chimerism (7.6% of CD4+-RT1n+ cells, 1.3% of CD8+-RT1n+ cells, and 16.5% of CD45RA+-RT1n+ cells) in the periphery of tolerated recipients. CONCLUSIONS: Combined therapy of alphabeta-TCR-CsA for 7 days resulted in tolerance induction in fully MHC-mismatched rat hind-limb allografts. Tolerance was directly associated with stable, donor-specific chimerism.     

吡那地尔超极化停搏对大鼠离体心脏缺血再灌注时p38MAPK表达的影响

目的 评价吡那地尔超极化停搏对大鼠离体心脏缺血再灌注时p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)表达的影响.方法 成年雄性SD大鼠48只,体重250～300 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为6组(n=8):自然停搏组(A组)、St.Thomas组(B组)、吡那地尔超极化停搏组(C组)、5-羟葵酸(5-HD)组(D组)、HMR-1098组(E组)和5-HD+HMR-1098组(F组).采用Langendorff离体心脏灌注模型,K-H液平衡灌注15 min后,A组阻断主动脉,不予停搏液灌注,使其自然停搏;B组灌注St.Thomas停搏液;C组灌注吡那地尔超极化停搏液;D组、E组和F组K-H液平衡灌注10 min后,分别灌注含5-HD、HMR-1098、5-HD+ HMR-1098的K-H液5min,再灌注吡那地尔超级化停搏液.心脏停跳缺血60 min后,K-H液再灌注30 min.于平衡灌注15 min和再灌注20 min时记录冠脉流量(CF)、心率(HR)、左室发展压(LVDP)、左室收缩压(LVSP)和左室压力瞬时最大变化率(dp/dtmax);于再灌注30 min时取心肌组织,采用Western blot法测定心肌磷酸化p38MAPK和非磷酸化p38MAPK的表达.结果 与C组相比,A组、B组、D组、E组和F组再灌注20min时CF、HR、LVSP、LVDP及dp/dt/dymax降低,再灌注30 min时磷酸化p38MAPK表达下调,非磷酸化p38MAPK表达上调(P＜0.05);与E组相比,D组和F组再灌注20 min时CF、HR、LVSP、LVDP及dp/dtmax降低,再灌注30 min时磷酸化p38MAPK表达下调,非磷酸化p38MAPK表达上调(P＜0.05).结论 吡那地尔超极化停搏可改善大鼠离体缺血再灌注心脏功能,其机制与上调磷酸化p38MAPK表达,下调非磷酸化p38MAPK表达有关,而这种调控作用与线粒体ATP敏感性钾通道关系更密切.     

Comparison of myocardial protective effects between GIK solution and St. Thomas solution by use of canine isolated heart-lung preparations

The myocardial protection afforded by GIK solution, widely used as cardioplegic solution in this country, was compared with that provided by St. Thomas solution or oxygenated St. Thomas solution. Eighteen isolated heart-lung preparations of dogs were made and their hearts were subjected to 3 hours cold (4 degrees C) cardioplegic arrest. GIK group hearts (n = 6) received 20 ml/kg of GIK solution at the time of aortic cross-clamp perfused through the aortic root and were subsequently given 10 ml/kg of GIK solution every 30 minutes. St. Thomas group hearts (n = 6) and oxygenated St. Thomas group hearts (n = 6) were treated identically except that cardioplegic solution were St. Thomas solution or fully oxygenated one. Four hearts of GIK group showed ventricular fibrillation immediately after reperfusion that required DC countershock. Temporary A-V block was recognized in two hearts. In the other two groups, however, neither ventricular fibrillation nor A-V block was found. Heart rate, coronary flow, aortic flow and LVSW were measured before arrest and after 60 minutes of reperfusion (mean aortic pressure 70 mmHg, left atrial pressure 4 mmHg). Post reperfusion % recovery rates (post-reperfusion/before arrest) of heart rate, coronary flow, aortic flow and LVSW (mean value +/- standard deviation) were 93.4 +/- 10.32%, 104.6 +/- 24.91%, 18.8 +/- 8.54%, 32.6 +/- 6.12% respectively for GIK group, 81.4 +/- 6.50%, 125.9 +/- 15.23%, 35.4 +/- 9.91%, 56.3 +/- 12.90% for St. Thomas group and 83.1 +/- 8.40%, 121.6 +/- 16.92%, 47.0 +/- 7.89%, 69.1 +/- 9.71% for oxygenated St. Thomas group. St. Thomas and oxygenated St. Thomas groups revealed significantly (p less than 0.05, p less than 0.01 respectively) more excellent functional preservation than GIK group. Intramyocardial pH was also measured by use of glass needle pH electrode punctured into the anterior interventricular septum. Preischemic intramyocardial pH (at 37 degrees C) was 7.49 +/- 0.106 in GIK group, 7.48 +/- 0.113 in St. Thomas group and 7.43 +/- 0.114 in oxygenated St. Thomas group. During 3 hours of cardioplegic arrest, intramyocardial pH (at 4 degrees C) decreased to 6.84 +/- 0.101 in GIK group, 7.03 +/- 0.088 in St. Thomas group and 7.23 +/- 0.239 in oxygenated St. Thomas group, which was significantly higher than GIK group (p less than 0.01). Therefore oxygenated St. Thomas solution was found to maintain more favorable energy supply to ischemic myocardium. These results clearly evidenced that St. Thomas and oxygenated St. Thomas solutions would provide more effective myocardial protection during ischemic arrest than GIK solution.     

含不同浓度乳化异氟醚的停跳液对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨含不同浓度乳化异氟醚的停跳液对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响.方法 清洁级雄性成年SD大鼠,体重180～250 g,建立Langendorff离体心脏灌注模型,取模型制备成功的56个心脏随机分为7组(n=8):St.Thomas停跳液组(C组)和含不同浓度乳化异氟醚的停跳液组(E1组～E6组).K-H液平衡灌注20 min后,C组用4℃ St.Thomas停跳液20 ml使心脏停搏45 min,K-H 液再灌注60 min,E1组～E6组分别用含乳化异氟醚0.28、0.56、1.12、1.68、2.24和2.80 mmol/L的4℃St.Thomas停跳液20 ml使心脏停搏45 min,K-H液再灌注60 min.于平衡灌注末、再灌注20、40、60 min 时记录HR、左心室发展压(LVDP)、左心室舒张末压(LVEDP)和左心室压力最大上升速率(+dp/dtmax),并收集冠脉流出液1.5 ml,测定乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性和肌钙蛋白I(cTnI)浓度.于再灌注60 min时取心肌组织,计算心肌梗死面积.结果 与C组比较,E4组HR、LVDP、+dp/dtmax和SOD活性升高,LVEDP、LDH的活性和cTnI浓度降低,心肌梗死面积减小,E5组和E6组HR、LVDP、+dp/dtmax和SOD活性降低,LVEDP、LDH活性和cTnI浓度升高,心肌梗死面积增加(P<0.05),E1组～E3组上述指标差异无统计学意义(P>0.05).与E4组比较,其余含不同浓度乳化异氟醚的停跳液组HR、LVDP、+dpldt～和SOD活性降低,LVEDP、LDH活性和cTnI浓度升高,心肌梗死面积增加(P<0.05).结论 含1.68 mmol/L乳化异氟醚的停跳液可减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤.