Smad4在TGF-β诱导人胆管癌细胞上皮-间质转化中的作用

目的 探讨Smad4在TGF-β诱导人胆管癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用.方法 用转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)处理RBE人胆管癌细胞系24h后,观察其形态变化,采用Western Blotting检测TGF-β1处理0h、12h、24h、48h后RBE细胞N-钙黏蛋白(N-cadherin)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达.通过RNA干扰技术建立稳定干扰Smad4表达的细胞系,在无TGF-β1处理或TGF-β1处理24h后,观察Smad4干扰组与野生型组和空载体组细胞的形态差异,Western Blotting检测各组N-cadherin和E-cadherin的表达水平.结果 TGF-β1诱导RBE细胞的形态由上皮样向间质样转变,促进 N-cadherin表达增加和E-cadherin表达降低.在无TGF-β1处理时,Smad4干扰组细胞比野生型组和空载体组细胞的形态更趋于上皮样,E-cadherin表达水平也显著高于野生型组和空载体组(P＜0.05).在TGF-β1处理24h后,Smad4干扰组细胞形态的间质样变化程度、N-cadherin表达量明显低于野生型组和空载体组(P＜0.05);野生型组和空载体组细胞E-cadherin的表达缺失,而Smad4干扰组细胞仍表达较高水平的E-cadherin,两者间差异显著(P＜0.05).结论 TGF-β依赖Smad4介导人胆管癌细胞发生上皮-间质转化.     

乙肝病毒X蛋白对E—cadherin和T—cadherin表达的调节作用

目的 体外研究乙肝病毒X蛋白(HBx)对E-钙黏蛋白(E-cadherin)和T-钙黏蛋白(T-cadherin)表达的调节作用.方法 建立稳定表达HBx基因的HepG2细胞系(HepG2-HBx),稳定转染空质粒pcDNA3.1的HepG2细胞系作为对照(HepG2-pcDNA3.1),分别用荧光实时定量(Real-time)PCR和Western-blot技术检测转染前后E-cadherin和T-cadherin在mRNA及蛋白水平表达变化.结果 以HepG2-pcDNA3.1细胞为参照,转染HBx基因后的HepG2-HBx细胞E-cadherin mRNA和蛋白水平分别为其(42.28±8.73)%和(35.28±4.33)%,而T-cadherin则分别为其(4.47±0.78)和(5.11±0.83)倍,差异有统计学意义(P<0.05).结论 HBx下调E-cadherin的表达,上调T-cadherin的表达,其机制可能为HBx促进E-cadherin向T-cadherin转换.     

加热对肝癌HepG2细胞肺耐药蛋白表达及耐药性的影响

目的:研究多次加热对肝癌HepG2细胞肺耐药蛋白(1ung resistanceprotein,LRP)表达的影晌以及加热后HepG2细胞对阿霉素敏感性的变化.方法:肝癌HepG2细胞在42℃恒温水浴箱中加热,60min/次,1次/d,共10d,获取稳定生长的加热HepG2细胞.以未加热HepG2细胞为对照,应用荧光定量PCR和Western Blot检测两种细胞LRP的mRNA和蛋白水平;通过体外细胞毒实验(MTT法)观察阿霉素对两种细胞生长抑制的影响,分析加热后HepG2细胞对阿霉索敏感性的变化;应用流式细胞技术检测两种细胞内阿霉素的平均荧光强度,分析加热对细胞内药物浓度的影响.结果:加热HepG2细胞的LRP mRNA和蛋白水平较未加热HepG2细胞分别增)30(4.01±0.23)和(4.67±0.36)倍,差异有统计学意义(P<0.05);未加热HepG2细胞半数抑制浓度/加热HepG2细胞半数抑制浓度=3.18;应用阿霉素1 h、2 h后,加热HepG2细胞内平均荧光强度分别比未加热HepG2细胞高46.1%和33.9%.结论:加热虽然使LRP表达上调,但不足以引起耐药性增加;加热能够显著提高肝癌HepG2细胞对阿霉素的敏感性,其机制可能与细胞膜通透性增加,细胞内药物浓度增高有关.     

护生自主学习现状及影响因素分析

目的了解护理专业大学生自主学习现况并分析其影响因素,进一步寻求提高护生自主学习能力的对策,为培养护生自主学习能力和提高护理教学质量提供参考。方法以某所中医药大学护理学院的384名本科护生为研究对象,调查一般资料和自主学习情况等,并对其影响因素进行分析。结果护生的学习自主性处于较高水平,影响自主学习能力的相关因素主要为在高中时期接受课外辅导、学习成绩和专业喜爱程度。结论护生的自主学习水平较高,自主学习能力较强,高中时课外辅导经历、学习成绩及专业喜爱程度可影响护生自主学习能力,护理教育者应注重学习策略的培养、学习技能的锻炼以及学习时间的监控、调节和引导,加强护生的专业认同感和专业自信心,努力提升护生的自主学习能力。     

罕见部位妊娠误诊4例分析

对罕见部位妊娠误诊4例分析如下。1病历摘要例1:32岁,孕3产1。因胎动停止引产失败来院,在当地医院行利凡诺羊膜腔内注射引产术2次,米非司酮、米索前列醇序贯引产1次,催产素引产4 d均告失败,妇科检查:宫体:位于脐下3指,并扪不清,压痛可疑,附件未见异常;复查B超:提示:子宫像图未见异常;腹腔妊娠:死胎;诊为腹腔妊娠行剖腹取胎术,见宫后胎囊及胎盘并被大网包裹,予以清除,粘连于肠管少量的组织保留。术后1周出院并随诊正常。例2:22岁,孕3产1。以孕3个月药流失败来我院,左下腹压痛(±)妇科检查:宫颈:举痛(-),宫体:前位,孕11周大小,质软,活动,压痛…     

肝癌组织中livin基因表达及与乙型肝炎病毒X蛋白的关系研究

目的 探讨livin基因在肝癌组织中的表达及乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus Xprotein,HBx)对其表达的影响.方法 采用免疫组化染色法检测10例正常肝组织和30例肝癌组织中livin基因的表达.建立稳定转染HBx基因的L02(L02-X)细胞系,采用Real-time PCR和Western blot检测L02-X)细胞系转染HBx基因前后livin基因表达的变化.结果 Livin基因在肝癌组织的表达明显高于正常肝组织,且livin基因的表达与肝癌的大小、病理分级无明显相关性(t=1.688,P=0.103;γ=-0.137,P=0.471;P＞0.05),与门静脉癌栓有关(t=2.24,P=0.033;P＜0.05).转染HBx基因后livin基因mRNA表达水平上调(t=6.73,P＜0.05).结论 livin基因高表达引起的凋亡抑制可能在肝癌的发生、发展中起重要作用,HBx基因可以在转录水平上调其表达.     

乙型肝炎病毒X蛋白对血管内皮生长因子的调节通路研究

目的 研究NF-kB信号转导通路在乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)调节血管内皮生长因子(VEGF)表达中的作用.方法 建立稳定转染HBx基因的L02细胞系(L02-HBx),用不同浓度的NF-kB信号转导通路阻断剂吡咯二硫氢基甲醋酯(PDTC)阻断NF-kB信号转导通路,荧光双标激光扫描共聚焦显微镜观察转染前后及PDTC加入前后NF-kB信号转导通路的激活及失活情况,同时用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测转染前后及PDTC加入前后VEGF在mRNA及蛋白水平的表达变化.结果 以L02细胞为参照,转染HBx基因后的L02-HBx细胞NF-kB信号转导通路被激活,VEGF mRNA和蛋白水平分别增加(4.07±0.31)和(4.34±0.64)倍,差异有统计学意义(P<0.05);加入25.0和50.0μmol/L的PDTC作用24 h后,L02-HBx细胞NF-kB信号转导通路被阻断,VEGF mRNA表达水平分别增加(2.33±0.22)和(1.86±0.18)倍;VEGF蛋白表达水平分别增加(2.52±0.29)和(2.17±0.34)倍,与未加入PDTC的L02-HBx细胞的差异有统计学意义(P<0.05).12.5μmol/L PDTC作用24 h后,VEGF mRNA和蛋白水平的变化无统计学意义(P>0.05).结论 NF-kB信号转导通路是HBx上调VEGF表达、促进肝癌血管生成的途径之一.     

人可溶性TNF受体Ⅱ克隆、原核表达与活性鉴定

目的构建人可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ（sTNFRⅡ）原核基因表达载体，并在大肠埃希菌中高效表达之。方法采用RTPCR技术．从人外周血的单核细胞中扩增出肿瘤坏死因子受体Ⅱ（TNFRⅡ）基因的胞外区，将其克隆入pET28a（＋）高效表达载体进行诱导表达．并对表达产物进行纯化及鉴定。结果在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导下．转入外源基因的大肠埃希菌BL21（DE3）可高效表达sTNFRⅡ蛋白．SDS-PAGE显示在32kD处有一特异表达条带．其表达量占菌体蛋白总量的30％左右。纯化的sTNFRⅡ经Western blot鉴定具有生物学活性；生物活性实验（MTT法）显示它可有效地封闭分泌性肿瘤坏死因子α（sTNF-α）对L929细胞的胞毒效应；直接免疫荧光显示它町以特肄性抑制GFP-sTNF-α与靶细胞肿瘤坏死因子受体的结合。结论通过基因工程技术获得了人sTNFRⅡ的重组蛋白。     

广东高明市一种新病原引起的肝炎爆发流行调查

1997-04,广东省高明市某电子厂发生一起肝炎爆发流行,经甲-戊型肝炎病毒、CMV、EBV病毒标志物及lq?VDNA一PCR检测,证实为TFV（TmsfusionTransmitted Vims,TTV,输血传播病毒）感染爆发流行,兹将调查情况报告如下。