芪杉方联合顺铂对肺癌A549细胞PI3K/AKt信号通路的影响

目的观察芪杉方联合顺铂对肺癌A549细胞PI3K/AKt信号通路的影响。方法 Wisatr雄性大鼠随机分成芪杉方含药血清组、顺铂组、芪杉方含药血清联合顺铂组和空白对照组,每组10只,各组连续灌胃3 d后取血。分别运用MTT法、Annexin V-PE/7-AAD双染法、蛋白质印迹(Western blot)法、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测芪杉方含药血清联合顺铂对A549细胞增殖、细胞凋亡及其相关蛋白和基因表达的影响。结果芪杉方含药血清组、顺铂组、芪杉方含药血清联合顺铂组分别作用于A549细胞时,均表现为抑制细胞增殖作用,其抑制率分别为27.20%(P0.01),28.52%(P0.01)和51.25%(P0.01)。芪杉方含药血清组、顺铂组、芪杉方含药血清联合顺铂组Caspase-3、Caspase-9、m TOR及PI3K蛋白和基因表达量与空白对照组相比,表达量降低(P0.01),且芪杉方含药血清联合顺铂组对A549细胞凋亡相关蛋白表达的影响最显著(P0.01)。结论芪杉方含药血清组、顺铂组、芪杉方含药血清联合顺铂组均能够抑制A549细胞增殖,激活Caspase-3、Caspase-9、AKT、m TOR相关凋亡途径,从而诱导A549细胞凋亡。     

白英提取物诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其对凋亡相关蛋白表达的影响

目的:探讨白英提取物(Solanum lyratum Thunb extract,STE)对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及凋亡相关蛋白Survivin和caspase-3表达的影响.方法:体外培养SGC-7901细胞,以2.5、5、10mg/L STE处理SGC-7901细胞48小时,并以2.5mg/L顺铂(DDP)作为阳性对照.用MTT法检测细胞抑制率,TUNEL法检测凋亡率,二步法免疫组化检测Survivin和caspase-3表达.结果:与正常对照组相比,STE各浓度组细胞抑制率显著上升(P<0.001),细胞凋亡率明显升高(P<0.01),Caspase-3蛋白表达显著上升(P<0.05或P<0.01),Survivin蛋白表达明显下降(P<0.05或P<0.01).结论:STE具有诱导SGC-7901细胞凋亡的作用,其分子机制可能与上调Caspase-3及下调Survivin蛋白表达有关.     

黄芪注射液联合顺铂对HeLa细胞生长的影响

目的研究不同浓度黄芪注射液单独或联合顺铂对HeLa细胞生长的影响。方法单独或联合应用不同浓度的黄芪注射液、顺铂作用于人宫颈癌HeLa细胞系,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测其对细胞生长的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白p53、Bax、Bcl-2的表达。结果 MTT法检测结果显示黄芪注射液对HeLa细胞生长影响的最佳作用浓度为1 000 g.L-1,最佳作用时间为48 h。黄芪注射液组、顺铂组、黄芪注射液联合顺铂组HeLa细胞凋亡率均高于对照组,且黄芪注射液联合顺铂组HeLa细胞的凋亡率显著高于黄芪注射液组和顺铂组,各组之间的差异均有统计学意义(P<0.05)。各组间比较,黄芪注射液联合顺铂组Bax、p53蛋白的表达量最高,Bcl-2蛋白的表达量最低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论高浓度的黄芪注射液对HeLa细胞有促凋亡作用,可协同顺铂增强对HeLa细胞的促凋亡作用,其作用机制与增强p53、Bax蛋白的表达、减弱Bcl-2蛋白的表达有关。     

益气养阴除结方联合顺铂对肺腺癌A549细胞生长及凋亡的影响

目的探讨益气养阴除结方联合顺铂对肺腺癌细胞(A549细胞)凋亡的影响及其机制。方法选用A549细胞培养,实验分为4组,分别为空白对照组、益气养阴除结方组(简称中药组)、顺铂组、联合组。空白对照组不加药物处理;中药组浓度梯度设定分别为1 000、500、200、100、50、20 mg/L;顺铂组浓度梯度设定分别为4 mg/L和8 mg/L;联合组浓度梯度分别为以上2组之间的组合。应用MTT法检测药物对其增殖的抑制作用;TUNNEL法检测细胞凋亡情况;免疫细胞化学法检测肿瘤细胞Bcl-2及Caspase-3蛋白的表达。结果与空白对照组比较,中药组、顺铂组及联合组的细胞抑制率均有明显增加(P0.05~P0.001),其中联合组(中药200 mg/L+顺铂4mg/L)抑制率最高;各用药组凋亡细胞数量均有明显增加(P0.01,P0.001),其中联合组(中药200 mg/L+顺铂4 mg/L)凋亡细胞数量最多;各用药组bcl-2的表达均降低,其中顺铂组(4 mg/L)、联合组(中药200 mg/L+顺铂4 mg/L)Bcl-2的表达明显降低(P0.01);各用药组Caspase-3表达的表达均升高,其中中药组(200 mg/L)、联合组(中药200 mg/L+顺铂4 mg/L)有显著性差异(P0.05,P0.01)。结论该中药复方能促进A549细胞凋亡抑制肿瘤细胞生长,联合一定浓度顺铂后其效果更明显,其机制可能与抑制Bcl-2和增加Caspase-3的表达有关。     

异常黑胆质成熟剂与顺铂能下调宫颈癌细胞Bcl-2和Survivin的表达

目的:研究异常黑胆质成熟剂总酚与顺铂联合对体外培养的人宫颈癌细胞SiHa增殖的影响,并探讨对凋亡抑制基因Bcl-2和Survivin的表达的影响。方法:异常黑胆质成熟剂总酚分别与顺铂联合作用于SiHa细胞后,荧光倒置显微镜下观察细胞生长情况,流式细胞术检测Siha细胞各组早期凋亡率的变化及Bcl-2的表达,实时荧光定量PCR法检测Survivin的表达。结果:①倒置显微镜下观察单药和联合用药组细胞体积变小变圆,细胞核固缩,核质比减小,胞质浑浊,可见空泡状细胞,部分细胞核膜消失,可见较多脱落圆形死亡细胞。②异常黑胆质成熟剂总酚和顺铂对Siha细胞作用48 h后,流式细胞术检测Siha细胞各组早期凋亡率分别为(14.2±4.06)%和(16.2±1.66)%,明显高于对照组(5.43±0.31)%,差异有统计学意义(P<0.001)都有很好地促进凋亡的作用,异常黑胆质成熟剂总酚与顺铂联合有交互作用,其促进凋亡的作用比单药更显著(P<0.01)。③异常黑胆质成熟剂总酚和顺铂单药及总酚与顺铂联合均能降低Bcl-2的表达,并且单药与对照组、联合用药组与单药组之间均有统计学差异(P<0.001)。④实时荧光定量PCR法检测Survivin的表达定量在异常黑胆质成熟剂总酚组和顺铂组分别为(0.334±0.038)及(0.562±0.035),明显低于对照组Survivin的表达(3.470±0.091),差异有统计学意义(P<0.001),药物联合组有很好的交互作用,差异有统计学意义(P<0.001)。结论:异常黑胆质成熟剂总酚与顺铂联合能显著增加SiHa细胞的早期凋亡率,其机制与降低Bcl-2和Survivin表达有关。     

RNA干扰Livin联合顺铂对食管癌细胞Eca-109增殖和凋亡的影响

目的 探讨RNA干扰Livin联合顺铂对食管癌细胞Eca-109增殖和凋亡的影响及相关作用机制.方法 利用慢病毒载体构建shRNA-Livin系统并转染至食管癌细胞Eca-109,将Eca-109细胞分为5组:正常对照组、阴性对照组、干扰组、顺铂组、联合组(干扰+顺铂).采用分光光度法、二甲氧唑黄比色法(XTT)、流式细胞术(FCM)、原位末端转移酶标记技术(TUNEL)、透射电镜(TEM) 分别检测食管癌细胞的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Caspase-9表达,细胞增殖、细胞周期、凋亡及形态学改变情况.结果 转染后,Eca-109 细胞Caspase-3、Caspase-9表达明显增强(P<0.01),细胞存活率明显降低(P<0.01);经RNA干扰后,细胞周期主要被阻滞于S期,细胞凋亡率明显增加;TEM下可见典型的凋亡细胞.与顺铂组比较,联合组细胞的上述表现尤为明显.结论 Livin靶向RNA干扰联合顺铂通过上调Caspase-3、Caspase-9的表达从而抑制 Eca-109 细胞的增殖和促进其凋亡.     

槲皮素对宫颈癌细胞C33A增殖和凋亡的影响

目的 观察槲皮素对人宫颈癌细胞C33A增殖和凋亡的影响,初步探讨其相关作用机制.方法 用不同浓度槲皮素(空白对照、20、40、80 μmol/L),顺铂(空白对照、5、10、15、20 μg/mL)以及两者联合(槲皮素40 μmol/L+顺铂10 μg/mL)分别作用于C33A细胞24 h和48 h后,噻唑蓝(MTT法)检测细胞活力的变化;流式细胞术检测槲皮素对C33A细胞周期的影响;Western blot检测槲皮素对C33A细胞Cyclin D1、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达的影响.结果 MTT结果显示,经过槲皮素处理24 h后,各组细胞活力分别为86.92 ±3.953)%(20 μmol/L组)、(66.54 ±3.932)%(40 μmol/L组)和(52.21 ±2.970)%(80 μmol/L组),均低于空白对照组的(98.35 ±1.230)%;经过槲皮素处理48 h后,各组细胞活力分别为(65.19 ±7.071)%(20 μmol/L组)、(47.04 ±8.881)%(40 μmol/L组)和(29.71 ±6.505)%(80 μmol/L组),均低于空白对照组的(96.97 ±1.788)%.;此外,槲皮素40 μmol/L+顺铂10 μg/mL联合作用于C33A细胞24h后,细胞活力下降为(31.12 ±2.835)%;48 h后,细胞活力下降为(17.86 ± 3.182)%,同空白对照组相比均出现了明显的下降,(31.12 ±2.835)%;48 h后,细胞活力下降为(17.86 ±3.182)%(P<0.05).细胞周期检测结果显示,槲皮素可增加C33A细胞G0/G1期数量,减少S期数量.Western blot 结果显示,槲皮素可下调C33A细胞Cyclin D1蛋白的表达,还可上调Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达.结论 槲皮素通过下调Cyclin D1蛋白的表达可以抑制C33A细胞的活力和增殖,槲皮素通过上调Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达,可以诱导C33A细胞的凋亡.     

Mechanism of trichostatin A combined with all-trans retinoic acid on HeLa cells

目的 探讨曲古菌素A(TSA)联合全反式维甲酸(ATRA)对宫颈癌HeLa细胞株的杀伤作用及其作用机制.方法 TSA联合 ATRA 或单独处理HeLa细胞,CellTiter 96 Aqueous 法检测细胞增殖抑制情况;7-AAD荧光染色法观察细胞凋亡改变;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot 法检测p21、p53、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达变化.结果 TSA联合ATRA对HeLa细胞具有明显的生长抑制作用,诱导细胞凋亡,出现核碎裂等典型凋亡改变,细胞凋亡率明显升高,与对照组和单独用药组比较,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,TSA联合ATRA组中p21、p53、活化性Caspase-3蛋白的表达显著升高(P<0.01),而Bcl-2蛋白表达显著下降(P<0.05).结论 TSA联合ATRA在体外对HeLa细胞有明显的杀伤作用,推测其机制可能是上调p21、p53、活化性Caspase-3蛋白表达水平,下调Bcl-2蛋白表达水平有关.     

白藜芦醇对裸鼠胃癌移植瘤中PDCD5蛋白表达及细胞凋亡的影响

目的探讨白藜芦醇(Res)对裸鼠胃癌移植瘤细胞凋亡相关基因PDCD5蛋白表达及细胞凋亡的影响。方法将BGC-823细胞复苏后,通过右前肢腋部皮下移植构建裸鼠胃癌移植瘤模型。建模成功后的荷瘤裸鼠随机分为空白对照组、Res组、顺铂组和联合用药组(白藜芦醇+顺铂),各组分别在成瘤部位皮下注射0.2ml相应的药物,每日1次,治疗1周。停药后将裸鼠处死,剥离肿瘤组织。采用免疫组织化学方法检测移植瘤组织中PDCD5蛋白表达,采用原位末端标记法(TUNEL)检测移植瘤组织中细胞凋亡情况。结果 Res组中PDCD5蛋白表达水平明显高于空白对照组,但低于顺铂组和联合用药组,上述各组两两相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。TUNEL法检测到胃癌移植瘤中凋亡细胞核呈棕褐色,染色深浅不一,染色质分布不均,空白对照组中仅见到少数凋亡细胞,Res组、顺铂组和联合用药组凋亡细胞数依次增加,上述各组两两相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论白藜芦醇可上调裸鼠胃癌移植瘤细胞中PDCD5的蛋白表达,表明其可能通过上调PDCD5的表达进而诱导细胞凋亡。     

紫草素对人肝癌细胞化疗增敏作用及机制研究

目的研究紫草素对人肝癌HepG_2细胞顺铂增敏作用并初探其可能的作用机制。方法取对数生长期人肝癌HepG_2细胞并分别给予紫草素组(紫草素0.5μg/ml)、顺铂组(顺铂40μg/ml)和联合干预组(紫草素0.5μg/ml+顺铂40μg/ml)干预治疗48 h,同步设空白对照组,每组设10个复孔(n=10)。检测细胞增值抑制率、细胞周期和细胞凋亡状况并计算细胞凋亡率及Bax mRNA、bcl-2 mRNA、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达情况。结果与顺铂组比较,联合干预组人肝癌HepG_2细胞增殖抑制率显著升高(P0.05),细胞周期G_0/G_1期显著延长(P0.05)、G_2/M期显著缩短(P0.01),凋亡细胞数量明显增多、细胞凋亡率显著升高(P0.01),Bax mRNA表达上调、bcl-2 mRNA表达下调(P0.05),且Bax/bcl-2比值显著升高(P0.01),Caspase-3蛋白表达上调(P0.05)。与空白对照组比较,紫草素组人肝癌HepG_2细胞周期G_0/G_1期延长、G_2/M期缩短,bcl-2 mRNA表达下调(P0.05)、Bax/bcl-2比值升高(P0.05),Caspase-3蛋白表达上调(P0.01)。结论紫草素具有提高人肝癌HepG_2细胞顺铂敏感性的作用,其机制可能与紫草素阻滞细胞周期及调节凋亡相关基因和蛋白表达有关。     

汉黄芩素对胶质瘤U251细胞增殖、凋亡、Survivin及Caspase-3表达的影响

目的探讨汉黄芩素在人胶质瘤患者中对U251细胞的增殖与凋亡及对存活素（Survivin）及半胱天冬酶-3（Caspase-3）表达的影响。方法不同浓度汉黄芩素作用于人胶质瘤96株U251细胞,并与使用替莫唑胺（TMZ）的阳性对照组（48株）及未给予任何药物的空白对照组（48株）对比细胞增殖抑制率、细胞凋亡率及Survivin和Caspase-3蛋白的表达强度。结果各浓度汉黄芩素对细胞增殖抑制率均显著高于空白对照组,且随药物浓度及作用时间的增加呈现出显著增高趋势（P〈0．05）,汉黄芩素组细胞凋亡率显著高于TMZ组（P〈0．01）,TMZ组显著高于空白对照组（P〈0．01）,在汉黄芩素组内,细胞凋亡率随着药物浓度增加显著增加（P〈0．05）;汉黄芩素组Survivin表达强度佩著低于TMZ及空白对照组（P〈0．01）;两药物组Caspase-3表达强度显著高于空白对照组（P〈0．01）。结论汉黄芩素可通过调节Survivin、Caspase-3蛋白的表达对胶质瘤U251细胞起到诱导凋产的作用。     

丙型肝炎病毒NS4B调控肝细胞凋亡的相关机制研究

目的：研究HCV—NS4B对肝细胞Caspase-3及Survivin表达的影响,探讨HCV—NS4B对肝细胞凋亡的影响及相关机制。方法：通过转染丙型肝炎病毒非结构蛋白4B（HCV—NS4B）至L02肝细胞中,设置三组细胞（空白对照组、空白载体PCXN2组、PCXN2-NS4B组）,利用流式细胞仪检测各组Caspase-3的表达情况,免疫组化方法观察三组中Survivin的表达情况。结果：PcxN2-Ns4B转染入LO2细胞并有稳定表达,流式细胞术检测各组Caspase-3的表达情况：空白对照组、转染PCXN2组及PCXN2-NS4B组均有Caspase-3表达,分别为：（23．45±1．57）％、（23．17±1．79）％及（4．34±0．59）％,空白对照组、转染PCXN2两组差异无统计学意义（P〉0．05）,而空白对照组、转染PCXN2组与PCXN2-NS4B组间比较差异有统计学意义（P〈0．01）。免疫组化方法检测Survivin的表达情况：空白对照组阳性表达率为25％,PCXN2组表达率为16．67％,PCXN2-NS4B组表达率为75％,空白对照组、转染PCXN2两组差异无统计学意义（P〉0．05）,而空白对照组、转染PCXN2组与PCXN2-NS4B组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：①NS4B转染入肝细胞后有稳定表达;②NS4B可抑制Caspase-3表达、促进Survjvin的表达;③HCV～NS4B可能抑制Caspase-3表达、促进Survivin的表达而抑制肝细胞凋亡。     

Survivin shRNA促进HL-60细胞凋亡及其对阿糖胞苷敏感性的研究

目的研究RNA干扰Survivin基因表达对HL-60细胞凋亡及其对阿糖胞苷敏感性的影响。方法采用PCR扩增以及定向克隆技术重组构建shRNA的表达载体pshRNA-Survivin,使用脂质体介导转染至HL-60细胞,分为6组：①空白实验组;②阿糖胞苷（Ara-C）组;③阳性质粒组;④阴性质粒组;⑤阳性质粒＋Ara-C组;⑥阴性质粒＋Ara-C组。采用RT-PCR技术检测HL-60细胞内Survivin及其mRNA表达,运用流式细胞仪进行细胞凋亡率改变的检测。结果与空白实验组比较,阳性质粒组的mRNA表达抑制率为57.7%,表达下降,差异有统计学意义（P〈0.05）;阳性质粒组细胞凋亡率为5.87%,阳性质粒＋Ara-C组细胞对Ara-C敏感性明显提高,细胞凋亡率为12.4%,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 Survivin siRNA能够高效特异的抑制HL-60细胞内Survivin基因的表达,诱导细胞凋亡,并提高了HL-60细胞对Ara-C的敏感性,这有助于白血病基因治疗的进一步发展。     

中效原理在胃癌联合化疗中的应用及药物抗癌机制的初步探索

目的 运用中效原理分析姜黄素联合顺铂或塞来昔布对胃癌SGC-7901细胞的化疗效应,并初步探索上述三种药物对胃癌的抗癌机制.方法 将实验组分为姜黄素组、顺铂组、塞来昔布组、姜黄素联合顺铂组、姜黄素联合塞来昔布组,用相应药物作用于胃癌SGC-7901细胞,阴性对照组为不含药物组.然后采用MTT法测定药物对SGC-7901细胞的增殖抑制率,并运用中效原理分析药物联用的效果;同时采用流式细胞术检测细胞凋亡率;实时荧光定量RT-PCR法检测COX-2 mRNA的表达;分光光度法检测Caspase-3的活性.结果 姜黄素、顺铂和塞来昔布组均能抑制SGC-7901细胞的增殖,且呈浓度依赖性;姜黄素与顺铂或塞来昔布联用时可增强这种抑制,表现为协同作用.上述三种药物均能诱导胃癌SGC-7901发生凋亡,两药联用组的细胞凋亡率较单药作用组均显著升高（均P＜0.01）.单药作用组细胞中COX-2 mRNA的表达较阴性对照组均显著下降（均P＜0.01）.单药作用组细胞中Caspase-3的活性较阴性对照组均显著升高（均P＜0.01）.结论 在一定药物浓度范围内,姜黄素、顺铂和塞来昔布均能抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖、诱导其凋亡.姜黄素与顺铂或塞来昔布联用时均呈现协同作用,这可能与三药均能抑制COX-2 mRNA的表达、提高Caspase-3的活性有关.     

青蒿琥酯对胃癌细胞系 HGC27 细胞增殖、凋亡的影响及其机 制简

目的 探讨青蒿琥酯对大胃癌细胞系HGC27细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法 体外培养HGC27细胞,采用不同浓度青蒿琥酯处理24、48、72 h,MTT法测定其对HGC27细胞增殖的影响;倒置显微镜下观察细胞的形态学变化;青蒿琥酯（浓度分别为20、40、80 mg/L）处理HGC27细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡、分光光度计检测Casepase-3、Caspase-9相对活性、Western blot法检RUNX-3蛋白表达情况.结果 青蒿琥酯（浓度10～100 mg/L）能抑制HGC27细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态.青蒿琥酯（浓度分别为20、40、80 mg/L）作用HGC27细胞48 h后,细胞凋亡率分别为11.5％、21.4％、36.6％,而对照组凋亡率仅为2.2％;处理后Casepase-3相对活性分别为（0.19±0.02）、（0.25±0.04）和（0.31±0.03）,对照组为（0.11±0.02）,Casepase-9相对活性分别为（0.18±0.02）、（0.23±0.03）和（0.30±0.04）,对照组为（0.10±0.02）,与对照组比较,青蒿琥酯处理组Casepase-3、Caspase-9相对活性显著增加,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;RUNX-3蛋白表达上调,呈剂量依赖性.结论 青蒿琥酯能抑制HGC27细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与增加细胞Casepase-3、Caspase-9活性、上调RUNX-3蛋白的表达有关.青蒿琥酯是一种前景广阔的抗肿瘤药物.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对人宫颈癌细胞系HeLa细胞凋亡及bcl-2/bax表达的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对宫颈癌细胞系HeLa细胞凋亡及bcl-2/bax表达的影响。方法 体外培养HeLa细胞,分为对照组和实验组,实验组用不同浓度的EGCG处理24、48、72 h,对照组加入等体积的培养基。采用MTT法测定EGCG对HeLa细胞增殖的影响;倒置显微镜下观察细胞的形态学变化;EGCG(浓度分别为20、40、80μg/mL)处理HeLa细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡和周期、分光光度计检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Casepase-3)相对活性、Western blot法检测bcl-2/bax蛋白表达情况。结果 EGCG(浓度10~100μg/mL)能抑制HeLa细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态;浓度为20、40、80μg/mL的EGCG作用HeLa细胞48 h后,细胞凋亡率逐渐上升,分别为12.4%、23.4%、35.4%,明显高于对照组(3.3%);细胞周期结果显示EGCG能抑制细胞的G1期行进和G1/S转换,降低S期细胞比例;实验组HeLa细胞Caspase-3相对活性分别为(1.36±0.07)、(1.85±0.06)、(2.45±0.07),均高于对照组(0.93±0.06),差异均有统计学意义(P<0.05);bax蛋白表达量升高,而bcl-2蛋白表达量降低,呈剂量依赖性。结论EGCG能抑制HeLa细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与增加细胞Casepase-3活性、下调bcl-2基因的表达及上调bax基因有关。EGCG是一种前景广阔的抗肿瘤药物。     

活性氧在大黄素联合顺铂诱导食管癌EC-9706细胞凋亡中的作用

目的探讨大黄素联合顺铂诱导人食管癌EC-9706细胞凋亡过程中的作用及可能机制。方法不同浓度大黄素、顺铂与二药联合分别作用于EC-9706细胞,应用吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）双荧光染色法测细胞凋亡（形态学变化）;MTT法检测细胞抑制率;用Annexin V-FITC/碘化丙啶（PI）双染法及流式细胞术检测细胞凋亡情况（计算凋亡细胞百分率）;流式细胞术检测细胞内活性氧变化情况。结果大黄素、顺铂均可明显抑制EC-9706细胞增殖,并且呈一定的时间依赖性;大黄素、顺铂分别及联合作用24 h,细胞早期凋亡率分别为（15.39±3.40）%、（12.80±2.41）%和（23.09±3.97）%,较对照组〔（1.42±0.14）%〕明显增加（P均〈0.05）;两药分别及联合作用2 h,细胞内活性氧的含量分别为（35.57±3.16）%、（29.44±2.43）%和（43.23±3.68）%,较对照组〔（4.73±2.12）%〕明显升高（P〈0.05）。结论大黄素能抑制EC-9706细胞增殖,通过诱导细胞内活性氧的产生促进凋亡,与顺铂联用存在协同作用,其机制可能与通过诱导细胞内活性氧的产生促进细胞凋亡有关。     

应用siRNA技术下调survivin基因表达以增强SGC7901胃癌细胞对顺铂的敏感性

目的利用小干扰RNA（siRNA）技术特异性下调survivin基因的表达,检测SGC7901胃癌细胞转染前后对顺铂敏感性的变化。方法实验分为空白对照组（control组）、单用顺铂组（CDDP组）、脂质体组（Lip组）、单用survivin siRNA组（siRNA组）、转染survivin siRNA（转染组）及转染survivin siRNA联合顺铂作用组（联合作用组）。人工合成survivin siRNA,通过Lip包裹将siRNA转染胃癌细胞SGC7901,荧光显微镜下观察转染情况。MTT法检测各组细胞的增殖抑制率,Western blot及免疫细胞化学法检测survivin蛋白的表达,Hoechst染色观察细胞凋亡的形态改变。结果Hoechst染色荧光显微镜下control组、Lip组及siRNA组细胞核呈正常的蓝色,而CDDP组、转染组及联合作用组细胞核染色增强、核质浓缩、核碎裂,呈凋亡改变;联合作用组细胞增殖抑制率（63.93±4.22）%明显高于其余各组（P〈0.05）;转染组及联合作用组survivin蛋白表达明显低于其他各组（P〈0.05）。结论应用siRNA技术下调SGC7901胃癌细胞中survivin基因的表达,能够增加其对顺铂的药物敏感性。     

苦参碱体外促进肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的探讨苦参碱体外促进肿瘤细胞凋亡及其作用机制。方法将浓度为0.2 mg/ml、0.4 mg/ml、0.6 mg/ml的苦参碱作用于卵巢癌细胞株A21-2和骨肉瘤细胞株MG63,利用倒置相差显微镜观察不同浓度苦参碱作用后细胞的形态变化;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡周期、Caspase-3蛋白的表达。结果倒置相差显微镜观察表明,苦参碱能抑制MG63细胞和A21-2细胞的增殖;FCM分析发现,苦参碱与细胞作用72h后,C_0/G_1期前出现凋亡峰,与对照组比较,观察组不同浓度下凋亡率升高(P<0.01),且随浓度升高,凋亡率亦增高,差异有统计学意义(P<0.05),FCM分析显示,与对照组比较,观察组不同浓度下Caspase-3蛋白表达升高(P<0.01),且随浓度升高,Caspase-3蛋白表达亦升高,差异有统计学意义(P<005)。结论苦参碱能明显抑制A21-2细胞和MG63细胞的增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与促进Caspase-3蛋白的表达有关。     

ALK-3、Pax-8基因抑制后大鼠心肌细胞中Smad1/5/8的表达

目的：抑制大鼠胚胎心肌细胞株中ALK-3、Pax-8基因的表达后,探索Smad1/5/8在其中所起的作用。方法：将H9C2（2-1）大鼠胚胎心肌细胞分为4组：针对Pax-8基因的小干扰RNA（Pax-8siRNA）组、ALK-3基因的小干扰RNA（ALK-3siRNA）组、阴性对照（NCsiRNA）组和空白对照组。前3组分别给予相应siRNA（5.0μL）和Lipofectamine2000（5.0μL）配制成的siRNA-脂质体复合物溶液,空白对照组给予等量的细胞培养基。采用qRT-PCR测定Pax-8和ALK-3的mRNA表达,Westernblot法检测磷酸化Smad1/5/8（p-Smad1/5/8）和半胱天冬酶（Caspase）-3表达。结果：与NCsiRNA组和空白对照组比较,Pax-8siRNA组的Pax-8mRNA表达分别下调50%（P＜0.05）和54%（P＜0.05）,ALK-3siRNA组的ALK-3mRNA表达分别下调49%（P＜0.05）和53%（P＜0.05）,而NCsiRNA组与空白对照组间差异无统计意义（P＞0.05）。与NCsiRNA组和空白对照组比较,ALK-3siRNA组p-Smad1/5/8的蛋白表达量分别下调58%（P＜0.05）和55%（P＜0.05）,Pax-8siRNA组p-Smad1/5/8的蛋白表达量差异无统计意义（P＞0.05）。NCsiRNA组与空白对照组间差异无统计意义（P＞0.05）。与NCsiRNA组和空白对照组比较,Pax-8siRNA组Caspase-3蛋白表达量分别上调76%（P＜0.05）和81%（P＜0.05）,ALK-3siRNA组Caspase-3的蛋白表达量分别上调135%（P＜0.05）和140%（P＜0.05）,而NCsiRNA组与空白对照组间差异无统计意义（P＞0.05）。结论：在大鼠胚胎心肌细胞株中对基因ALK-3、Pax-8干扰后能引起细胞凋亡蛋白Caspase-3明显增多,并且在ALK-3siRNA组发现Smad1/5/8蛋白磷酸化减少,而Pax-8siRNA组中未发现Smad1/5/8磷酸化减少,提示Smad1/5/8在基因ALK-3被干扰后引起细胞凋亡蛋白Caspase-3增多中起重要作用。