SDS-PAGE分析嗜人按蚊中肠膜蛋白

目的:初步分析嗜人按蚊中肠膜蛋白组分.方法:采用SDS-PAGE以及银氨染色法检测嗜人按蚊中肠膜蛋白分子量,并对分子量标准(Mr116000～14400)进行直线回归分析.结果:嗜人按蚊中肠粗蛋白(C带)上有8条主带,而膜蛋白(B带)上有4条主带.Marker标准直线回归系数为-0.9814.通过电泳迁移率计算,得出膜蛋白分子量在66.2～35.48kD范围.结论:膜蛋白提取后,嗜人按蚊中肠蛋白组分进一步得到纯化.     

人类精子蛋白质组分析的双向蛋白电泳技术研究

目的：利用人类精子蛋白质组分析的双向蛋白电泳技术（2-DE）建立正常精子的蛋白质图谱。方法：比较不同蛋白质提取方法和上样量、不同的第一向等点聚焦方法所得图谱的差别,并初步建立人类正常精子的蛋白质图谱。结果：用蛋白质提取方法一制得的样本电泳后有670-703个蛋白质斑点;方法二所得样本电泳后仅有194-210个蛋白质斑点。蛋白质提取方法一所制样本进行载体两性电解质pH梯度-SDS电泳技术（ISO-DALT）得到约280-300个蛋白质斑点,用固相pH梯度-SDS电泳技术（IPG-DALT）得到多达700个蛋白质斑点。结论：采用蛋白质提取方法一制备精子蛋白质进行IPG-DALT电泳的方法租用于建立精子全细胞蛋白质谱。     

琼脂糖凝胶电泳法测定血清中各种脂蛋白胆固醇

目的：对琼脂糖凝胶电脉法同时测定血清极密度脂蛋白（VLDL）,低密度脂蛋白（LDL）,高密度脂蛋白（HDL）和脂蛋白（a)Lp(a）的胆固 即VLDL－C,LDL－C,HDL－C和Lp(a)-C含量的方法进行评价。方法：采用Helena REP全自动快速电泳系统分离血清VLDL,LDL,HDL和Lp(a),然后结合胆固醇染色法同时测定VLDL－C,LDL－C,HDL－C和Lp(a)-C的含量,分别了该法的精密度,准确度和干扰因素,并将该法与传统方法如测定HDL－C的磷钨酸－镁沉淀法（PTA－Mg2 )法,测定LDL－C的聚乙烯硫酸沉淀法（PVS法）及测定Lp(a)的免疫秀射比浊法（ITA法）进行比较,结果：电泳法测定VLDL－C,LDL－C和HLD－C批内CV分别为5．16％－7．46％,1.26％－3．28%,3．78－5．86％;批间CV分别为8．35％－11．25％,2．78％－4．08％,4．23％－6．36％。检测线性范围总胆固醇为94．3％和89．6。电泳法与传统法测定LDL－C,HDL－C的相关系数（r)分别为0．9609,0．9557,电泳法测定Lp(a)-C与ITA法测定Lq(a)的r为9235,以该法检测北京地区98例健康人,HDL－C,VLDL－C,LDL－C,Lp(a)－C参考范围分别为0．95－2．10mmol/L,0.07-0.46mmol/L,1.77-2.87mmol/L,0-0.22mmol/L。结论：电泳法测定值与传统法一致,电泳法操作简便,快速经济,可同时测定4种脂蛋白胆固醇,适合于临床常规及研究使用。     

金钱白花蛇可溶性蛋白凝胶电泳图谱的研究

对金钱白花蛇进行几种凝胶电泳研究,根据聚丙烯酰胺胶电泳（ＰＡＧＥ）谱带的位置和数目进行品种鉴别;用改进的十二烷酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）测定其主要蛋白质成分分子量;用等电聚焦电泳（ＩＦＥ）测定其主要蛋白质成分的等电点（ＰＩ）。清晰的电泳谱带及相应数据为商品蛇真伪鉴别提供了科学依据。     

激素敏感型单纯性肾病病毒基因反式激活调控中IκBa的异常表达

目的：研宛激素敏感型单纯性肾病（SRSNS）病毒基因反式激活过程中IκBa基因表达及其对NF-κB活性的调控作用。方法：采用实时定量RT—PCR、Western blot和电泳迁移率改变实验、RT—PCR和ELISA分别检测SRSNS活动期、缓解期患儿和正常儿童外周血单个棱细胞（PBMCs）中IκBamRNA、IκBa蛋白质、NF-κB活性、呼吸道病毒基因表达和血浆病毒抗体。结果；SRSNS活动期NF-κB活性高于SRSNS缓解期和正常儿童，与呼吸道病毒检出率呈正相关趋势;SRSNS活动期IκBa蛋白质低于SRSNS缓解期患儿和正常儿童，与NF-κB活性呈直线负相关（r=-0．884，P＜0．05）。而SRSNS活动期IκBamRNA水平高于正常儿童，但仍低于SRSNS缓解期。结论：SRSNS病毒基因反式激活过程中存在IκBa异常表达，IκBa蛋白质调控NF-κB活性。     

计算机结合数字成像技术分析测定凝胶电泳蛋白分子量的应用研究

本文介绍了数字相机配合计算机组合成一套设备“计算机数字图像分析系统（ＣＤＡＳ）”，分析测定分子生物学研究中ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳所分离的目标蛋白分子量。ＣＤＡＳ可精确测量出蛋白参照标准不同分子量的迁移率，测量的方式为象素分辨点阵（Ｐｉｘｌｓ），因而保证了较高的测量精密度和准确性。根据测量得到的迁移率关系似合计算出参照蛋白分子量迁移曲线及线性方程，而后而用方程拟合确定目标蛋白的分子量，与理论值比较     

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析小分子多肽

目的 研究ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＵＳ－ＰＡＧＥ）显示小分子多肽的方法。方法 观察不同方法处理的样品，上样量对电流晰影响及对分子量标准（Ｍ，２５１２＝１６９４９）进行直线回归分析，结果 样品和不同处理条件未见有差异；在该实验系统条件下上样样品为每孔５～１０μｇ较佳；分子量标准直线回归系数ｒ＝－０．９６２。结论 样品处理方便，上样量少，在１６０ｇ．Ｌ＾－１Ｔ，６０ｇ．ｋｇ＾－１Ｃ较低的丙烯酰胺     

加味茯苓甘草汤防治慢性常压缺氧性肺动脉高压的实验研究

目的：探讨中药复方制剂加味茯苓甘草汤（茯苓、甘草、桂枝、桃仁、苇茎等组成）对慢性肺动脉高压（HPH）的防治作用。方法：常压缺氧法建立HPH大鼠模型，以生理盐水为对照药，设对照组、缺氧组和中药治疗组，灌胃3周，检测平均肺动脉压力（mPAP)，观察右心室与左心室加室间隔重量之比[mR/(mL mS]、血浆及肺匀浆中磷脂酶A2（PLA2）、血栓素B2（TXB2）、6－酮－前列腺素（6－keto-PGF1α）、超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）的变化。结果：①缺氧组大鼠mPAP、mR/(mL mS)、 PLA2、TXB2、MDA含量增加，6－keto-PGF1α、SOD含量下降，与对照组相比有显著性差异（P＜0．01）；②加味茯苓甘草汤能降低mPAP、mR/(mL mS)，与缺氧组相比，前者有显著性差异（P＜0．01）；③加味茯苓甘草汤能使肺组织中PLA2、6－keto-PGF1α、TXB2、MDA含量降至正常水平，与缺氧组相比差异有显著性（P＜0．01或P＜0．05）；④加味茯苓甘草汤能使血浆中PLA2、6－keto-PGF1α、SOD含量下降，与缺氧组相比差异有显著性（P＜0．05或P＜0．01），TXB2、MDA含量无明显变化。结论：长期使用加味茯苓甘草汤可有效防治慢性缺氧性肺动脉高压，其机理与抑制PLA2及相关炎性介质，降低自由基的毒性有关。     

氧化型低密度脂蛋白自身抗体及其免疫复合物与冠心病的相关性

目的：探讨氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)自身抗体及其免疫复合与冠心病之间的关系。方法：采用酶联免疫法对61例确诊的冠心病患者、116例高血压患者和123例健康对照组进行血清ox-LDL自身抗体及其循环免疫复合物的检测，并同步测定ox-LDL和血脂水平。结果：冠心病患者自身抗体IgG[21.48(17.58-29.01)]U/L和IgM[(4.71(3.88-7.06)]U/L以及ox-LDL[0．87（0．4－1．08）]mg/L均显著高于高血压组[15．93（11．12－22．26）U／L、2．54（1．17－5．05）U／L、0．32（0．16－0．61）mg/L]和健康对照组[11．12（4．70－16．57）UL、1．61（0．60－3．03）U／L、0．23（0．2－0．36)mg/L]，P均＜0．001，而循环免疫复合物[2．63（1．69－5．90）U／L]显著低于高血压组[15．71（6．25－28．74）U／L]健康对照组[12．54（8．28－23．90）U／L]，P均＜0．001。ox-LDL与其自身抗体之间的关系在各组之间存在不一致性，结论：ox-LDL自身抗体与循环免疫复合物在冠心病患者中的变化可能与ox-LDL及其自身抗体在冠状动脉硬化进程中发挥作用有关。     

用RT-PCR对mRNA进行定量分析

编码蛋白质的mRNA通过反转录酶的作用，将mR－NA反转录成cDNA，再通过PCR扩增，DNA产物得到指数形式的增加．在一定循环数内，PCR产物的量与其模板cD－NA，也就是相应mRNA的浓度有关．PCR产物电泳后掺入溴化乙锭，可通过扫描荧光强度来确定PCR产物的量．通过优化实验条件，可计算出所检测的mRNA的相对含量．     

兔骨折愈合过程蛋白质变化的初步研究

目的：观察骨痂中蛋白质含量、种类与正常骨质相比的变化,寻找表达差异的蛋白质条带,为后续研究奠定基础。方法：建立兔桡骨骨折模型,以对侧相应部位健康骨组织为对照,分别于骨折后4周、6周、8周、12周提取骨痂及对侧骨组织的蛋白,检测各组蛋白浓度,并进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳,寻找差异蛋白条带并粗略估计分子量。结果：每一实验组蛋白浓度均较相应对照组增高,实验4周组蛋白浓度比其他实验组高（P〈0．05）,而其他组间相比差异无统计学意义（P〉0．05）。SDS-PAGE电泳图谱分子量为29．0～66．4ku区间范围内实验组蛋白条带比相应对照组多,分子量约为30ku附近有一明显条带在对照组中缺失。结论：骨折愈合过程中,骨痂的蛋白质含量、种类均比正常骨质增加,以骨折早期含量增加最为明显,分子量约为30ku附近的明显差异条带可选择作为后续研究中鉴定的对象。     

基于蛋白质组学技术的PCOS伴HA患者血清差异蛋白质检测及意义

目的：运用蛋白质组学技术检测多囊卵巢综合征（PCOS）伴高雄激素血症（HA）患者血清差异蛋白质，探讨PCOS及HA的可能发病机制，为筛选PCOS特异性血清差异蛋白质提供实验室依据。方法采用表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术和弱阳离子交换蛋白质芯片分别对70例PCOS患者[其中伴HA患者35例（ PCOS－HA组）、无HA患者35例（ PCOS－NHA组）]（ PCOS组）及50例正常育龄妇女（正常对照组）血清中的蛋白质图谱进行检测，使用PBSII－C型蛋白质芯片阅读机读取数据，采用Ciphergen Protein Chip 5．0分析软件采集数据，读取蛋白质峰高值，进行统计学处理。结果在质荷比（m／z）1500～20000 Da 范围内，PCOS 组与正常对照组相比有14个差异蛋白质峰，在差异蛋白质中筛选标记分子建立决策树模型，两组间经交叉盲法验证准确率为92．5％（111／120），灵敏度为94．3％（66／70），特异度为90．0％（45／50），阳性预测值为92．9％（66／71），阴性预测值为91．8％（45／49）。 PCOS－HA组与正常对照组相比有9个差异蛋白质峰。 PCOS－NHA组与正常对照组相比有10个差异蛋白质峰。 PCOS－HA与PCOS－NHA组间相比有7个差异蛋白质峰。结论 PCOS患者与正常对照者比较血清蛋白质表达存在差异，HA与NHA状态比较亦存在差异蛋白，这些差异蛋白可能与PCOS及HA的发生与发展有关。蛋白质芯片技术对于发现和筛选PCOS血清特异性差异蛋白是一种有效、快速的工具。     

云南产螺旋藻多糖的分离纯化与分析

云南程海湖工业化养殖的螺旋藻（干品）经热水提醇沉，ｓｅｖａｇ法脱蛋白，透析，再经ＤＥＡＥ－ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ａ２５与ｓｅｐｈａｄｅｘＧ－２００柱层析纯化，得螺旋藻多糖（ＰＳＰ）。用纸层析，柱层析及电泳检查纯度，表明ＰＳＰ为单一组分。ＰＳＰ经ＵＶ－３００扫描，无核酸（２６０ｎｍ）及蛋白质（２８０ｎｍ）特征吸收峰。ＩＲ－４００扫描，出现典型多糖吸收峰。经纸层析及气相色谱分析表明ＰＳＰ组成单糖为Ｌ－岩藻糖、Ｄ－甘露糖、Ｄ－半乳糖、Ｄ－葡萄糖和葡萄糖醛酸。ＰＳＰ平均分子量约为１６６００。     

核因子кB介导病毒基因反式激活途径在激素敏感型单纯性肾病发病中的作用

目的研究核因子kB（NF-kB）介导的病毒基因反式激活途径在激素敏感型单纯性肾病（SRSNS）发病中的作用，探讨呼吸道病毒触发该病的机制。方法采用电泳迁移率改变分析、RT-PCR和ELISA法分别对SRSNS、肾炎性肾病、继发性肾小球疾病、毛细支气管炎和正常儿童外周血单个核细胞（PBMC）NF—kB转录活性、呼吸道病毒基因和抗体表达、血清IL-8水平进行检测。结果①SRSNS活动期NF—kB转录活性增高．与SRSNS恢复期、缓解期和其它组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；②SRSNS活动期血清IL-8水平增高，与NF-kB转录活性呈直线正相关关系（r=0．88，P〈0．001），NF-kB活性与呼吸道病毒检出阳性率亦呈正相关趋势。结论NF—kB介导的病毒基因反式激活途径能使IL-8等基因表达增高而致病．这可能是呼吸道病毒触发SRSNS的主要机制之一。     

人类CD252基因片段在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫原性分析

目的优化表达含人类CD252胞外段的融合蛋白,纯化目的蛋白,为单克隆抗体的制备打下良好的基础。方法将测序正确的pET32a（＋）－CD252胞外段重组质粒转入表达菌株BL21感受态细菌中,用SDS－PAGE电泳鉴定重组菌的诱导表达情况,通过改变pET32a（＋）－CD252阳性菌株的诱导时间、温度,以优化出最佳表达条件。采用包涵体纯化法纯化目的蛋白。用纯化的重组蛋白免疫BalB／C小鼠,采用ELISA法测定血清中抗体效价。结果成功获得表达pET32a（＋）－CD252的阳性菌株。转化有pET32a（＋）－CD252胞外段重组质粒的表达菌经IPTG诱导后,在蛋白分子量标准的31．0～42．7kD之间出现了新的蛋白条带,新的蛋白主要存在于包涵体中。优化表达条件分析表明,在诱导4h、温度37℃、IPTG浓度为1．0mmol／L时,融合蛋白的表达量最高。包涵体洗涤纯化后,经SDS-PAGE电泳证明可得到较纯的目的蛋白。免疫小鼠后测得的平均抗体效价为1：3200。结论pET32a（＋）-CD252胞外段原核表达载体能够表达CD252蛋白,并获取了目的蛋白的优化表达条件,表达蛋白具有良好的免疫原性。     

缺血性脑血管病患者血浆纤维蛋白原及其亚组份测定的意义

目的：了解纤维蛋白原（Fg)水平及其亚组份在缺血性脑血管病患者中的变化情况和临床意义。方法：采用凝块分离一双缩脲比色法和十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶（SAS－PAGE）电泳法检测46例缺血性脑血管病患者和44例健康者血浆纤维蛋白原（Fg)总量及其亚组份浓度。结果：缺血性脑血管病患者Fg显著高于对照组（P＜0．01）;其中脑缺血性梗塞以高分子量（HWM）Fg增著,暂短性脑缺血 发作以低分子量（LMW）和低分子量,（LMW’）Fg增高为主（P＜0．01）.结论：血浆Fg升高与缺血性脑血管病呈正相关,Fg亚组份的测定对鉴别脑缺血性梗塞和暂短性脑缺血性发作有意义。     

针刺对小白鼠脑染色质非组蛋白质影响的实验研究

本研究以快速老化痴呆模型小白鼠（ＳＡＭ－Ｐ／１０）为材料,分离纯化了其脑染色质非组蛋白质（ＮＨＣＰ）,采用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）,观察了釜刺地ＳＡＭ－Ｐ／１０脑染南非组蛋白质增龄性变化的影响,结果表明,针刺人中、内关穴可以拮抗ＳＡＭ－Ｐ／１０脑染色质非线蛋白中部分功能蛋白脑迁移率非组蛋白质随增龄再现的快速减少,而６月龄蛋白电泳谱带受调节能力,明显优于１２月龄。     

食管癌及贲门癌碱性磷酸酶同工酶表达形式的研究

利用阶段梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳对１１例食管癌和６例贲门癌织织中碱性磷酸酶（ＡＬＰ）同功酶进行了研究。结果显示，肿瘤组织中存在一条肿瘤特异性的快带──ＡＬｐ－１．该同功酶与胎盘型ＡＬＰ同功酶具有相同的电泳迁移率。提示ＡＬＰ－１为一种癌胚酶蛋白。     

SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定白血病小鼠(L615)脾细胞匀浆蛋白质分子量

本文应用SDS—不连续性聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定了L615可移植性淋巴细胞型白血病小鼠脾细胞匀浆的蛋白质分子量。确定其组份为11条电泳区带。分子量为12,590～89,130并在半对数座标图上呈直线。正常纯系615小鼠脾细胞匀浆蛋白质分子量为11,220～72,440。抗白血病实验小鼠蛋白质与615小鼠相同,     

0—3型PZT／P[VCF（77）—TrFE（23）]铁电复合物的非线性介电系数

用自建的非线性介电测试装置测得了０－３型ＰＺＴ／Ｐ「ＶＤＦ（７７）－ＴｒＦＥ（２３）」铁电复合物厚片在不同场强和温度下的线性和非线性介电系数。对于ＰＺＴ体积含量Φ〉０．３的复合物，介电系数ε１随测试场强的升高显著增大。在Φ〈０．１时，可用Ｍａｘｗｅｌｌ－Ｇａｒｎｅｔｔ方程拟合实验结果。