乳腺癌c-erbB-2、nm23基因扩增及产物表达

目的：探讨乳腺癌癌基因和抑癌基因表达与预后的关系。方法：应用组织原位杂交及免疫组化技术对２５例新鲜乳腺癌标本的ｃ－ｅｒｂＢ－２、ｎｍ２３基因扩增及产物表达进行了检测。结果：ｃ－ｅｒｂＢ－２、ｍＲＮＡ杂交信号主要位于癌细胞胞浆中，杂交颗粒的多少不均，阳性细胞呈异质性分布，ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白在该组表达率为４０％（１０／２５），ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白阳性颗粒分布于癌细胞膜上，随着肿瘤恶性程度的增加，ｃ－ｅｒｂＢ－２基因扩增及蛋白表达都增加（Ｐ＜０．０５）。ｎｍ２３基因扩增及产物表达却随肿瘤恶性程度的增加而减少（Ｐ＜０．０５），ｎｍ２３ｍＲＮＡ杂交颗粒位于胞浆中，蛋白的表达可见于胞浆中，少数见核中阳性，该组ｎｍ２３蛋白表达率为４４％（１１／２５）。结论：ｃ－ｅｒｂＢ－２、ｎｍ２３基因扩增及产物表达呈负相关关系（Ｐ＜０．０５），且与乳腺癌临床病理特征密切相关     

小鼠IL-35基因的克隆及原核表达

目的 克隆小鼠mIL-35两亚基mEBI3,mIL-12p35 cDNA,并构建mIL-35基因的原核表达载体并进行诱导表达.方法 RT-PCR方法从RAW246.7细胞中扩增mEBI3基因及脂多糖体外刺激BALB/c小鼠的脾细胞中扩增mIL-12p35基因,通过重叠PCR方法扩增出mEBI3-Linker-mIL-12p35基因,并构建原核表达载体pET-30a-mIL-35,转化感受态E.coli BL21(DE3),并用IPTG进行诱导表达.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法检测目的蛋白的表达.结果 成功克隆了mEBI3、mIL-12p35 cDNA,通过重叠PCR方法扩增出mEBI3-Linker-mIL-12p35片段,并构建出原核表达载体pET-30a-mIL-35;在IPTG诱导下在E.coli BL21(DE3)中高效表达相对分子质量(Mr)为50 000的重组mIL-35蛋白,目的蛋白主要以包涵体的形式存在于沉淀中.结论 利用构建的原核表达载体pET-30a-mIL-35成功表达出mIL-35蛋白,为进一步探讨mIL-35的生物学功能奠定了基础.     

乳糖化聚赖氨酸共价结合物的制备和分析

目的：化学合成乳糖化聚赖氨酸共价结合物，分析其组成，方法：以氰基硼氢化钠为还原剂通过还原氨化将乳糖（Lac)与聚赖氨酸（PLL）共价连接，用SephadexG10纯化后用分光光度法分析其组成，红外光谱确定结构。结果：红外光谱分析显示糖与聚氨酸形成了共价结合物，组成分析确定乳糖与聚PLL的摩尔比为16：1，结论：分析结果表明，成功制备出了结构，组成确定的共价结合物。     

C-erbB-2癌基因蛋白与类固酵激素受体联合检测在乳腺癌预后中的意义

探讨Ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因蛋白与类固醉激素受体联合检测在乳腺癌预后判断中的价值及两者的关系。方法用免疫组化技术对５７例乳腺良恶性肿瘤进行了Ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因蛋白、类固醇激素受体（ＥＲ、ＰＲ、ＡＲ）６５检测。结果５０例乳腺癌中２１例（４２％）Ｃ－ｅｒｂＢ－２过度表达，均为浸润性导管癌。７例良性病变均为阴性，ＥＲ，ＰＲ，ＡＲ阳性率分别为７２％，６２％，６６％。良性病变中２例ＥＲ，１例ＰＲ为弱阳性，余者为阴性，结论Ｃ－ｅｒｂＢ－２的表达与ＥＲ，ＰＲ，ＡＲ呈负相关关系〔Ｐ＜０．０５），在肿瘤细胞核级中，Ｃ－ｅｒｂＢ－２的表达与ＥＲ，ＰＲ崳粒乙渤矢合喙毓叵担ǎ颍剑埃梗常福常埃梗福担叮埃梗梗福担校迹埃埃担茫澹颍猓拢补缺泶镎吡馨徒嶙坡矢撸ǎ校迹眨眨保     

SEA对小鼠淋巴细胞的作用观察

ＳＥＡ对小鼠淋巴细胞的作用观察王艳华苗乃法马红雨隋清全冯永堂吴国庆李在连葡萄球菌肠毒素Ａ（ＳＥＡ）是一种超抗原。与Ｔ细胞ＴＣＲ结合后，在体内、外以及初次和再次反应中引起Ｔ细胞较为复杂的反应。本研究采用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测淋巴细胞转化状况；常规Ｇｉｅ...     

补肾活血方药对慢性再生障碍性贫血患者骨髓细胞体外影响的实验研究

目的　研究补肾活血方药对慢性再生障碍性贫血 (CAA)患者骨髓细胞体外增殖的影响 ,探讨其治疗CAA的机制。方法　采用细胞培养 ,光镜下观察补肾活血中药作用于CAA患者骨髓细胞后的形态学 ;3 H TdR掺入和液体闪烁技术方法 ,检测补肾活血中药对CAA患者骨髓细胞的增殖变化。结果　加入补肾活血中药组 ,CAA患者骨髓细胞培养第 4 8小时见细胞丛明显增多 ,72h见大量集落形成 ;3 H TdR掺入法显示 ,补肾活血中药组骨髓细胞的增殖 ,以每孔 75g L最有效。在 5 0～ 10 0g L范围内 ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 1) ;2 5g L和 12 5g L组与对照组比较差异无显著性 (P <0 .0 5 )。结论　补肾活血方药在体外有促进CAA患者骨髓细胞增殖的作用 ,为补肾活血中药治疗CAA提供了实验与理论依据     

卡介苗穿梭质粒pMSIFN-α2a的构建与鉴定

目的 构建分泌性表达IFN-α2a的卡介苗重组质粒。方法 分别以卡介苗（BCG）和IFN-α2a cDNA为模板，通过PCR扩增得到约117bp的BCG-Ag85B信号肽序列和495bp的IFN-α2a基因序列。将BCG-Ag85B信号肽序列与大肠杆菌．卡介苗穿梭表达载体pMV261重组，得到重组质粒pMS。再将IFN-α2a基因序列克隆至pMS中，得到重组质粒pMSIFN-α2a。结果 质粒pMSIFN-α2a用双酶切和PCR扩增及测序鉴定证实，克隆基因BCG-Ag85B和IFN-α2a正确插入载体pMV261。结论 重组质粒pMSIFN-α2a可望在BCG中分泌性表达细胞因子IFN-α2a，从而促进IFN-γ的释放，该质粒的构建成功为改造卡介苗、发展新型抗膀胱肿瘤疫苗奠定了基础。     

IL-12基因转染B细胞的抗原提呈功能研究

目的 以IL-12双亚基共表达载体pL35P40SN转染B细胞,并检测其对Th细胞发育分化和CTL功能的影响。方法 尼龙毛法分离T,B细胞,以pL35P40SN转染B细胞,并以ELISA检测其IL-12的分泌,以IFN-γ的合成分泌检测其对Th1细胞发育分化的影响,以^3H-TdR法检测其对CTL特异杀伤HepG2细胞功能的影响。结果 以pL35P40SN转染B细胞后,pL35P40SN基因转染的B细胞IL-12分泌量、Th应答细胞上清IFN-γ分泌量和CTL的杀伤功能显著高于pLXPXSN和未转染的细胞。结论 pL35P40SN转染B细胞后,可刺激Th1细胞发育分化和CTL的特异性杀伤功能。     

分离活体小鼠肝细胞的改良灌流法

Berry等首先建立了生理条件下用胶原酶灌流肝脏分散肝细胞，获得了成功，后来经过Seglen等发展，使这种胶原酶灌流技术更加完善。虽然Seglen灌流法细胞产量大、存活率高．但需特殊灌流装置、胶原酶耗费多、操作难度大，不易掌握。为建立一种便于各实验室开展简便、廉价的分离肝细胞方法，我们设计了分离小鼠肝细胞改良灌流法。经初步应用，获得了良好效果。