芦荟大黄素对阿尔茨海默病大鼠PI3K/AKT/mTOR通路介导自噬的影响

目的 研究芦荟大黄素对阿尔茨海默病（Alzheimers disease,AD）大鼠的神经保护作用以及可能的调控机制。方法 选择健康雄性SD大鼠30只,采用随机分组的方式将大鼠分为空白组、模型组和芦荟大黄素组,每组10只。采用腹腔注射D-半乳糖和双侧颅内海马注射Aβ25-35的方式联合进行AD大鼠模型的复制。芦荟大黄素组大鼠按10 mL/kg给予芦荟大黄素混悬液,空白组和模型组给予等容积纯水,共28 d。Morris水迷宫试验检测大鼠学习记忆能力,苏木精-伊红染色观察海马CA1区神经细胞损伤情况,Western blot法和qRT-PCR法分别检测大鼠海马磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol-3-kinases,PI3K)/蛋白激酶B（protein kinase B, AKT）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（the mammalian target of rapamycin,mTOR）通路蛋白、自噬相关蛋白及其mRNA的表达水平。结果 AD大鼠学习记忆能力明显下降（P＜0.05）,海马CA1区神经细胞出现明显损伤,而芦荟大黄素可显著改善 AD大鼠学习记忆能力（P＜0.05）,减轻海马CA1区神经细胞损伤;AD大鼠海马p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、P62蛋白表达水平明显增加（P＜0.05）,Beclin-1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,而芦荟大黄素可以显著减少AD大鼠海马p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、P62的蛋白表达水平（P＜0.05）,显著增加Beclin-1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平（P＜0.05）;AD大鼠海马PI3K、AKT、mTOR、P62 mRNA表达水平显著增加（P＜0.05）,Beclin-1和LC3 mRNA表达水平显著降低（P＜0.05）,而芦荟大黄素可以显著减少大鼠海马PI3K、AKT、mTOR、P62 mRNA表达水平（P＜0.05）,显著增加Beclin-1和LC3 mRNA表达水平（P＜0.05）。结论 芦荟大黄素能够显著改善AD大鼠的学习记忆能力,其作用机制可能是通过调控PI3K/AKT/mTOR通路介导的自噬来实现的。     

五参顺脉胶囊通过自噬改善心肌缺血再灌注损伤

目的探讨自噬在五参顺脉胶囊改善大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用。方法建立心肌缺血再灌注损伤模型,随机法,将其分为假手术组、模型组、五参顺脉胶囊组、自噬抑制剂组(五参顺脉胶囊+LY294002)每组15只。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)浓度2 ,3 ,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测定心肌梗死体积,原位末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡,电镜下计数大鼠心肌细胞自噬体数量,Western blot检测总PI3K、Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及其磷酸化蛋白表达,自噬标记物微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠血清cTnI、CK-MB浓度、心肌梗死区比例、凋亡指数、自噬体数量、心肌组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、caspase3、Bax增加(P0.05),心肌组织p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、Bcl2水平降低(P0.05);与模型组比较,五参顺脉胶囊组大鼠血清cTnI、CK-MB浓度、心肌梗死区比例、凋亡指数、自噬体数量、心肌组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、caspase3、Bax降低(P0.05),心肌组织p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、Bcl2水平增加(P0.05);与五参顺脉胶囊组比较,自噬抑制剂组大鼠血清cTnI、CK-MB浓度、心肌梗死区比例、凋亡指数、自噬体数量、心肌组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、caspase3、Bax增加(P0.05),心肌组织p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、Bcl2水平降低(P0.05)。结论五参顺脉胶囊抑制心肌细胞过度自噬对心肌缺血再灌注损伤大鼠发挥保护作用。     

阿伐他汀通过PI3K/Akt/mTOR途径调节白血病细胞自噬的作用及机制

目的:研究阿伐他汀对白血病细胞K562自噬的影响及相关信号机制。方法:取对数生长期的K562细胞,分为阴性对照组、阿伐他汀组、阿伐他汀+PI3K抑制剂(LY294002)组、阿伐他汀+mTOR抑制剂(雷帕霉素)组。共培养24h后,采用吖啶橙染色观察细胞自噬体的变化,Western Blot检测Ⅱ型自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3-Ⅱ)和自噬血管基因Beclin-1的表达,RT-PCR和Western Blot检测磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化mTOR(p-mTOR)的表达。结果:与阴性对照组相比,阿伐他汀抑制白血病细胞K562自噬体的形成(P<0.05),下调LC3-Ⅱ和Beclin-1的表达(P<0.05)。与阿伐他汀组相比,阿伐他汀+PI3K抑制剂(LY294002)组LC3-Ⅱ和Beclin-1的表达增加(P<0.05);阿伐他汀+mTOR抑制剂(雷帕霉素)组LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达增加(P<0.05)。与阿伐他汀组相比,阿伐他汀+PI3K抑制剂(LY294002)组p-Akt和p-mTOR基因的mRNA和蛋白表达水平均下降(P<0.05);阿伐他汀+mTOR抑制剂(雷帕霉素)组p-Akt和p-mTOR基因的mRNA和蛋白表达水平均下降(P<0.05)。结论:阿伐他汀可以抑制白血病细胞K562自噬,推测其机制可能与激活PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

基于PI3K/AKT信号通路探讨针刺对脑缺血再灌注损伤大鼠线粒体自噬作用的机制研究

目的 观察针刺疗法对脑缺血再灌注损伤(Cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI)大鼠脑组织线粒体自噬的影响,并探究其对脑组织保护作用的机制。方法 将SD大鼠随机分为假手术组、CIRI组、非穴位针刺组、针刺穴位组,每组10只。采用改良线栓法构建脑缺血再灌注大鼠模型,针刺穴位组针刺“大椎”、“人中”、“百会”三穴,非穴位针刺组针刺穴位左侧旁开0.3cm处,假手术组和CIRI组不行针刺。在脑缺血再灌注后24h用Zea Longa评分法对大鼠进行神经功能评分,取大鼠脑组织TTC染色法检测梗死体积,JC-1法检测大鼠脑组织线粒体膜电位变化。通过Western blot检测自噬相关蛋白及PI3K-AKT信号通路相关蛋白表达。结果 相较于假手术组,CIRI组大鼠神经功能评分显著升高,脑组织线粒体自噬相关蛋白LC3II、BNIP3水平显著升高,p62水平降低,自噬水平增强,线粒体膜电位降低,同时PI3K-AKT信号通路相关蛋白磷酸化水平显著降低;相较于非穴位针刺组,针刺穴位对脑缺血再灌注大鼠脑组织起保护作用,表现为大鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积以及脑半球肿胀显著降低(P＜0.05),线粒体膜电位升高,自噬水平降低,同时PI3K-AKT信号通路相关蛋白p-PI3K、p-AKT和p-mTOR水平显著升高。结论 针刺疗法可能通过激活PI3K/AKT信号通路抑制线粒体自噬,从而实现对脑缺血再灌注损伤大鼠的脑保护作用。     

七氟烷预处理对大鼠肺缺血再灌注损伤肺组织细胞自噬水平的影响

目的 探讨七氟烷预处理对大鼠肺缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI)肺组织中细胞自噬的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠75只,采用开胸夹闭左肺门建立IRI模型,将75只大鼠编号后按随机数字表法分为5组:假手术组(Sham),缺血再灌注组(I/R),七氟烷预处理组(SEVO),LY294002组(LY)及七氟烷预处理+LY294002组(PI3K抑制剂)(SEVO+LY),各15只.缺血1h,再灌注120 min后处死各组大鼠,取出肺组织,检测大鼠肺组织湿/干重比(W/D),Western blot法测定肺组织Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、P62及p-PI3K表达.结果 与Sham组比较,I/R组肺组织发生严重水肿(P＜0.05),且肺组织细胞自噬水平增加,自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、P62蛋白表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,SEVO组肺水肿明显减轻(P＜0.05),Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、P62蛋白表达下调,而p-PI3K表达增加(P＜0.05),LY组与I/R组比较差异没有统计学意义(P＞0.05);与SEVO组比较,SEVO+ LY组中肺水肿明显加重,Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、P62蛋白表达上调而p-PI3K表达下调(P＜0.05).结论 七氟烷预处理通过激活PI3K信号转导通路,恢复LIRI期间细胞自噬流,减少自噬性细胞死亡从而对肺缺血再灌注损伤起保护作用.     

基于PI3K/AKT通路介导自噬探讨电针颞区治疗血管性痴呆研究

目的 观察电针颞区对血管性痴呆大鼠学习记忆能力、海马CA1区组织形态结构、海马CA1区神经元超微结构及海马组织中PI3K/AKT通路蛋白(PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT)和自噬相关蛋白(p62、Beclin-1、LC3I、LC3Ⅱ)表达水平的影响，探讨电针颞区通过上调PI3K/AKT信号通路活性抑制神经元过度自噬治疗大鼠血管性痴呆的机制。方法 将SD大鼠分为假手术组、模型组、针刺组和奥拉西坦组，每组各12只。假手术组大鼠进行麻醉后分离颈总动脉，但不结扎。模型组、针刺组和奥拉西坦组采用双侧颈总动脉永久性结扎方法(BCCAO)制备血管性痴呆模型。针刺组选取头针颞区进行电针治疗。假手术组和模型组只做抓取、固定而不治疗。奥拉西坦组给予奥拉西坦溶液灌胃。治疗结束后采用Morris水迷宫实验评估各组大鼠空间学习记忆能力；HE染色观察血管性痴呆大鼠海马CA1区组织形态结构；透射电镜观察血管性痴呆大鼠海马CA1区神经元超微结构；Western Blot检测大鼠海马组织中蛋白(PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、p62、Beclin-1、LC3I、LC3Ⅱ)的表达水平。结果 电针和奥...     

姜黄素诱导人髓母细胞瘤Daoy细胞自噬的实验研究

目的：观察姜黄素（Curcumin）诱导人髓母细胞瘤Daoy细胞自噬的作用,并探讨其可能的作用机制。方法：体外培养人髓母细胞瘤Daoy细胞,不同浓度姜黄素作用24、48、72 h,MTT 法检测细胞增殖;荧光染色、RT-PCR和Western blot检测自噬相关蛋白Beclin1和LC3的表达;RT-PCR和Western blot检测PI3K/Akt/mTOR信号通路中PI3K、p-Akt和p-mTOR的表达。PI3K激动剂insulin处理细胞后,Western blot检测PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达变化。结果：姜黄素明显抑制Daoy细胞的生长,呈时间-剂量依赖性。免疫荧光显示Beclin1和LC3在姜黄素处理组中的表达明显增强。姜黄素作用不同时间,Daoy细胞中Beclin1和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的mRNA和蛋白水平均增高（mRNA：F=1 360.962、42.366,P=0.000、0.000;蛋白：F=32.723、11.847,P=0.001、0.008）,而PI3K、p-Akt和p-mTOR的表达受到明显抑制（F=329.662、80.638、183.536,P=0.000、0.000、0.000）。PI3K激动剂insulin不能有效阻断姜黄素引起的PI3K、p-Akt和p-mTOR的降低。结论：姜黄素诱导自噬抑制髓母细胞瘤Daoy细胞生长,其机制可能与上调自噬相关基因表达,抑制自噬负调控PI3k/Akt/mTOR信号通路有关。     

PI3K/AKT/mTOR信号通路异常激活导致强直性脊柱炎患者的间充质干细胞自噬减弱

目的 比较强直性脊柱炎患者间充质干细胞（ASMSCs）与健康人间充质干细胞（HDMSCs）自噬水平的差异及其机制。 方法 将ASMSCs和HDMSCs种于6孔板,细胞贴壁后,实验组加入25 ng/mL α-肿瘤坏死因子（TNF-α）及培养液,对照组单纯加入培养液,诱导6 h后进行后续实验。用GFP-LC3B免疫荧光染色检测自噬情况,并通过检测LC3 II/LC3 I及P62的蛋白表达进一步确认。通过qRT-PCR检测基因表达水平,通过Western blot检测蛋白表达水平。使用TG100713特异性阻断PI3K的磷酸化以明确PI3K/AKT/mTOR通路与ASMSCs自噬减弱的关系。 结果 ASMSCs的LC3 II/LC3 I表达水平和GFP-LC3B免疫荧光斑点明显弱于HDMSCs（P<0.05）,而P62表达水平明显高于HDMSCs（P<0.05）。在自噬过程中,ASMSCs中p-PI3K/PI3K、pAKT/AKT和p-mTOR/mTOR的表达明显高于HDMSCs（P<0.05）。阻断PI3K磷酸化后,p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR的表达及ASMSCs的自噬可恢复至HDMSCs的水平。结论 TNF-α诱导下,PI3K/AKT/mTOR信号通路异常是导致ASMSCs自噬减弱的关键,可能参与AS慢性炎症的发生。     

益肺散结方对肺纤维化大鼠模型自噬及PI3K-AKT-mTOR通路的影响

【摘要】 目的 探讨益肺散结方对肺纤维化（PF）大鼠肺组织中磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）/雷帕霉素靶分子（mTOR）信号通路及自噬的影响。 方法 选取SD大鼠50只,随机选10只行气管插管术并注入生理盐水0.3 mL作为对照组,其余40只大鼠行气管插管并注入博莱霉素（BLM）5 mg/kg,0.3 mL,制备PF模型,造模成功后,随机分为模型组（PF组）、益肺散结方低（7.5 g/kg）、中（15 g/kg）、高（30 g/kg）剂量组,每组各10只。对照组、PF组经灌胃给予生理盐水,益肺散结方各剂量组灌胃给予相应剂量药物1次/d,共给药21 d。末次给药12 h 后,处死大鼠取肺组织;用苏木精-伊红染色（HE）观察肺组织病理形态;马松（Masson）染色法评估胶原增殖程度;羟脯氨酸试剂盒测定胶原蛋白含量;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肺组织通路蛋白p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR及自噬相关蛋白beclin-1、泛素和LC3结合蛋白p62（p62）、ɑ-平滑肌动蛋白（ɑ-SMA）、微管相关蛋白轻链3（LC3-Ⅱ）/LC3-Ⅰ表达水平。 结果 与对照组相比,PF组大鼠肺组织炎性细胞浸润及炎性程度评分、胶原增殖程度及评分、胶原蛋白含量、通路蛋白p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR相对表达水平、自噬相关蛋白ɑ-SMA和p62均升高（均P＜0.05）,自噬相关蛋白beclin-1和LC3-Ⅱ/ LC3-Ⅰ均降低（均P＜0.05）。与PF组相比,益肺散结方高、中、低剂量组大鼠肺组织炎性细胞浸润及炎性程度评分、胶原增殖程度及评分、胶原蛋白含量、通路蛋白p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR相对表达水平、自噬相关蛋白ɑ-SMA和p62均降低（均P＜0.05）,自噬相关蛋白beclin-1和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ均升高（均P＜0.05）。 结论 益肺散结方可通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路表达,提高肺组织细胞自噬活性,缓解肺纤维化进程。     

H2S 在缺血再灌注损伤中神经细胞自噬发生机制中的作用研究

目的：利用siRNA 干扰技术干扰H2S 生成的关键酶胱硫醚β- 合成酶（cystathionine β-synthase,CBS）基因并构建细胞氧糖剥夺再灌注（oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R）模型,探讨OGD/R 和CBS 基因干扰后SH-SY5Y 细胞自噬和凋亡情况及相关信号通路变化。方法：构建OGD/R 模型,体外模拟缺血再灌注过程,根据氧糖剥夺和再灌注时间不同共设9 组,利用透射电镜观察各组细胞OGD/R 后细胞内自噬小体形成情况,根据透射电镜结果选取氧糖剥夺
4 h/ 再灌注24 h 作为后续实验的OGD/R 模型;脂质体转染法将针对CBS 基因的siRNA 转入SH-SY5Y 细胞内,同时构建OGD/R 模型,将细胞分为3 个组,分别为CBS 干扰组,OGD /R 组和CBS 干扰+OGD/R 组,各组均设相应对照。Real time PCR 和蛋白印迹法鉴定CBS 基因干扰效率,并检测各组自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1 和信号通路中Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR的蛋白表达水平,以及凋亡信号通路中NF-κBp65、COX-2 蛋白表达水平;流式细胞术检测各组细胞凋亡水平。结果：透射电镜观察细胞内自噬小体：除正常对照组和氧糖剥夺4 h/ 再灌注12 h 组未观察到自噬小体外,其余各组均在胞质内观察到了较多自噬小体。CBS 基因干扰效率达80%。CBS 干扰组自噬相关蛋白及相关信号通路蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,Beclin-1,p-Akt/Akt,p-mTOR/mTOR 蛋白表达水平与阴性对照组比较均无统计学差异;OGD/R 组与正常对照组比较,OGD/R 组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ 明显高于正常对照组, p-Akt/Akt 和p-mTOR/mTOR 均明显降低,NF-κBp65、COX-2 蛋白表达水平均高于正常对照组;CBS干扰+OGD/R 组与对照组比较,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,Beclin-1,p-Akt/Akt,p-mTOR/mTOR 均无显著差异。CBS 干扰组细胞凋亡率与阴性对照组比较无统计学差异;与正常对照组比较OGD/R 组细胞凋亡率明显高于正常对照组;CBS 干扰+OGD/R 组与阴性对照组比较,细胞凋亡率无显著差异。结论：OGD/R 能够明显诱导SH-SY5Y细胞发生自噬和凋亡,且可能与Akt/mTOR 及 NF-κBp65/COX-2 信号通路相关;CBS 基因干扰后对细胞自噬和凋亡均无明显影响。     

Met/HGF通路抑制缺血再灌注心肌细胞自噬作用的研究

目的 探究Met/HGF蛋白通路抑制细胞自噬在减轻心肌缺血再灌注损伤中的作用和机制.方法 鼠离体心肌细胞分为对照组、缺血再灌注(IR)组、Met转染组、Met siRNA转染组、Met转染+肝细胞生长因子(HGF)激活剂组共5组,通过转染的方法使Met过表达或不表达,进行缺血再灌注处理后提取细胞蛋白,Western blot法检测Met、HGF,下游通路蛋白AMPK、PI3K,自噬相关蛋白LC3B、Beclin-1及凋亡蛋白Bcl-2的表达水平.结果 Western blot结果显示,与对照组相比,在Met转染组及HGF激活剂组中,过表达的Met及HGF的激活能显著增加下游信号转导通路蛋白PI3K、AMPK的表达量(P＜0.05),同时自噬相关蛋白LC3B、Beclin-1的表达量均明显下降(P＜0.05);而在IR组及Met siRNA转染组中则呈相反趋势(P＜0.05).结论 Met/HGF通路的激活能够抑制细胞自噬并减轻心肌细胞缺血再灌注损伤.     

丹参酮ⅡA通过PI3K/Akt/mTOR信号通路调控自噬抗内皮细胞氧化应激损伤研究

目的基于PI3K/Akt/mTOR自噬信号通路探讨丹参酮ⅡA对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导内皮细胞氧化应激损伤的保护作用及机制。方法体外培养EA.hy926细胞,随机分为正常组、模型组、丹参酮ⅡA组、LY294002组、ox-LDL加丹参酮ⅡA组、oxLDL加丹参酮ⅡA加LY294002组。用比色法检测细胞氧化应激损伤丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力,利用倒置荧光显微镜及Naolive 3D cell explorer实时无标记3D显微成像系统检测自噬发生,同时应用免疫印迹(Western Blotting)检测自噬相关蛋白以及PI3K/Akt/mTOR通路蛋白的表达情况。结果与正常组相比,模型组MDA含量增高,SOD活力降低,微管相关蛋白1轻链3(LC3)I/II蛋白含量增多(P0.01);丹参酮ⅡA干预后细胞中MDA含量降低,SOD活力增高,LC3-I/LC3-II蛋白含量增多(P0.01)。与正常组相比,模型组PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达水平明显减少(P0.05或P0.01);与模型组相比,丹参酮ⅡA干预后细胞中PI3K、p-Akt、pmTOR蛋白表达水平明显减少(P0.05或P0.01);与ox-LDL加丹参酮ⅡA组相比,加入PI3K的抑制剂LY294002后细胞中的LC3-I/LC3-II蛋白含量减少,自噬水平减少(P0.01)。结论丹参酮ⅡA可能通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路促进自噬,对ox-LDL诱导的EA.Hy926细胞氧化应激损伤起到保护作用,进而防治动脉粥样硬化。     

程氏蠲痹汤通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号轴促进类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的自噬

目的 研究程氏蠲痹汤（JBT）通过PI3K/Akt/mTOR信号轴调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞（RA-FLS）自噬的影响及相关机制。方法 实验分为4组：FLS组、FLS+JBT组、FLS+RAPA组、FLS+RAPA+JBT组。CCK8检测程氏蠲痹汤抑制RA-FLS的最佳浓度和时间,透射电镜观察细胞自噬小体的变化,自噬双标腺病毒实验观察细胞内自噬体、自噬溶酶体数量,RT-qPCR和Western blot检测相关指标表达水平。结果 CCK8实验筛选结果表明JBT冻干粉浓度在0.5 mg/mL,培养12 h效果最佳。电镜结果与自噬双标腺病毒实验结果趋势相同,FLS组中自噬体少量存在,JBT加入能显著增加自噬体,自噬溶酶体较少。RT-qPCR结果显示,FLS+RAPA+JBT组较FLS组、FLS+JBT组、FLS+RAPA组相比,PI3K、Akt和mTOR的mRNA水平降低更明显（P<0.01）。WB分析显示,FLS+RAPA+JBT组较FLS组、FLS+JBT组、FLS+RAPA组相比,PI3K、Akt、mTOR蛋白的水平无明显差异（P>0.05）,p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、P62受到了明显抑制（P<0.05）。FLS+RAPA+JBT组较FLS组、FLS+JBT组、FLS+RAPA组相比,Beclin-1、LC3B蛋白表达量明显上升（P<0.05）。结论 程氏蠲痹汤可抑制RA-FLS的存活率,并可提高细胞自噬水平,其机制可能与下调PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

小鼠骨髓间充质干细胞自噬与衰老的关系

目的 探讨小鼠骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）自噬与衰老的关系。方法 通过体外分离培 养年轻组小鼠（8 周龄）和老年组小鼠（18 个月龄）BM-MSCs,流式细胞术检测细胞表型,TUNEL 染色检 测细胞凋亡,ELISA 试剂盒检测BM-MSCs 分泌蛋白VEGF、bFGF、IGF-1、HGF 的表达,Western blot 检 测自噬相关蛋白LC3- Ⅰ、LC3- Ⅱ、Beclin 1、ATG12-5、p62 及信号通路蛋白p-Akt、Akt、p-mTOR、 mTOR 的表达。结果 与年轻组比较,老年组BM-MSCs 凋亡增加（P <0.05）,分泌功能下降（P <0.05）,自 噬相关蛋白LC3- Ⅰ、LC3- Ⅱ、Beclin 1、ATG12-5 表达水平下降（P <0.05）,相反p62 蛋白表达水平升高 （P <0.05）,自噬信号通路相关蛋白p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR 表达升高。结论 老年小鼠BM-MSCs 凋亡增加,自噬活性及旁分泌功能下降。     

姜黄素对脑缺血再灌注损伤大鼠PI3K／AKT／mTOR的影响

目的：探讨姜黄素对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用及机制。方法通过线栓法构建大鼠脑缺血再灌注损伤模型。评估姜黄素对大鼠脑梗死范围、脑含水量、神经症状、脑组织病理形态,以及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶 B（AKT）、磷酸化蛋白激酶 B（p-AKT）、雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）、超氧化物歧化酶（SOD）、B 细胞淋巴因子2（Bcl-2）、Bcl-2相关 X 蛋白（Bax）、半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase-3）、活化性半胱胺酸天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleavage-Caspase-3）的表达影响。结果姜黄素对脑缺血再灌注损伤有保护作用,其可以减轻大鼠神经症状和脑组织病理形态的改变,以及脑梗死面积和脑含水量。此外,姜黄素还可以减轻 MDA、Bax、Cleavage-Caspase-3、促炎症细胞因子 IL-6、MCP-1和 TNF-α的表达,增加 PI3K、p-AKT、mTOR、Bcl-2、Caspase-3、CAT、GPX 与 SOD 表达。结论姜黄素预处理对脑缺血再灌注有明显保护作用,该作用可能与激活 PI3K／AKT／mTOR 信号通路激活而抑制炎症,凋亡和氧化应激相关。     

下调SIK2可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤：基于mTOR-ULK1信号通路的下调与细胞自噬的减少

目的 探究盐诱导激酶2（SIK2）对大鼠心脏缺血再灌注损伤的影响及机制。方法 建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,随机分为假手术组、缺血再灌注组、SIK2抑制剂组,5只/组（造模前24 h左股静脉注射博舒替尼10 mg/kg）。超声检测大鼠心功能,HE染色观察大鼠心肌组织病理变化,透射电镜观察心肌细胞自噬情况,蛋白免疫印迹法检测各组大鼠心肌组织中SIK2和LC3B、Beclin-1、p62等自噬相关蛋白以及p-mTOR、mTOR、p-ULK1、ULK1相关通路蛋白含量。结果 与假手术组比较,缺血再灌注组心肌组织病理损伤严重,自噬小体数量增加（P<0.05）,同时SIK2蛋白表达增多（P<0.01）;与缺血再灌注组相比,SIK2抑制剂组SIK2蛋白表达减少（P<0.01）,心肌组织病理损伤较轻,自噬小体数量减少（P<0.05）。与假手术组相比,缺血再灌注组LVEF、FS值降低（79.33±3.40 vs 38.67±2.49,59.33±5.25 vs 19.33±1.25,P<0.001）;与缺血再灌注组相比,SIK2抑制剂组LVEF、FS值升高（38.67±2.49 vs 59.33±3.40,19.33±1.25 vs 30.67±3.40,P<0.05）,3组IVSDd、LVPWDd无明显差别（P>0.05）。与假手术组相比,缺血再灌注组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1蛋白表达增多,p62蛋白表达减少（P<0.01）;与缺血再灌注组相比,SIK2抑制剂组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1蛋白表达减少,p62蛋白表达增多（P<0.05）。与假手术组相比,缺血再灌注组p-ULK1（Ser757）蛋白表达增多（P<0.01）,p-mTOR蛋白表达减少（P<0.0001）;与缺血再灌注组相比,SIK2抑制剂组p-ULK1（Ser757）蛋白表达减少（P< 0.01）,p-mTOR蛋白表达增多（P<0.05）;各组mTOR、ULK1无明显差异（P>0.05）。结论 SIK2可能通过mTOR/ULK1信号通路促进细胞自噬,对SIK2进行抑制,可以减少异常自噬,缓解心肌缺血再灌注损伤。     

过表达TLR4基因对胃癌细胞自噬的抑制作用及其机制

目的 采用慢病毒过表达胃癌细胞中Toll样受体4（TLR4）基因,探讨其对胃癌细胞自噬的作用,并阐明其作用机制。 方法 处于对数生长期的胃癌BGC-823细胞和SGC-7901细胞分为未感染组、阴性对照病毒组和基因过表达组,分别给予无慢病毒感染、空载体慢病毒和过表达TLR4慢病毒稳定感染。采用Western blotting法检测正常胃黏膜上皮GES-1细胞及胃癌BGC-823细胞、SGC-7901细胞、HGC-27细胞和MGC-803细胞中TLR4蛋白表达水平。采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法分别检测各组细胞中TLR4、Beclin1和微管相关蛋白轻链3（LC3）mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中磷脂酰肌醇-3激酶／蛋白激酶B（PI3K／Akt）、磷酸化PI3K／磷酸化Akt（p-PI3K／p-Akt）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和磷酸化mTOR（p-mTOR）信号通路相关蛋白及细胞自噬相关蛋白（LC3、Beclin1和p62）蛋白表达水平。 结果 BGC-823细胞、HGC-27细胞和MGC-803细胞中TLR4蛋白表达水平高于胃黏膜上皮GES-1细胞。与未感染组和阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞中TLR4蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。与未感染组和阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞增殖活性明显升高（P<0.05或P<0.01）。与阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞中TLR4 mRNA表达水平明显升高（P<0.01）,BGC-823细胞中Beclin1 mRNA表达水平降低（P<0.05）,SGC-7901细胞中LC3和Beclin1 mRNA表达水平降低（P<0.05）。与未感染组和阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞中LC3和Beclin1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,p62、p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。 结论 过表达TLR4基因可以通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路明显抑制胃癌细胞的自噬活性。     

黄芪甲苷对大鼠心肌局部缺血再灌注损伤的改善作用及其对PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的：观察黄芪甲苷（AS-Ⅳ）对大鼠心肌局部缺血再灌注（I/R）损伤的改善作用及其对PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响,阐明AS-Ⅳ对心肌I/R损伤的保护作用及可能机制。方法：选择60只雄性Sprague-Dawley大鼠,采用阻断左冠状动脉前降支血流30 min再灌注120 min的方法制备局部I/R模型,随机分为模型组（等体积生理盐水）、AS-Ⅳ组（于再灌注前5 min静脉注射10  mg/kg AS-Ⅳ）、PI3K抑制剂Wortmannin（WOR）组（于再灌注前10 min静脉注射0.6 mg/kg WOR）和AS-Ⅳ+WOR组（于再灌注前5、10min依次静脉注射10 mg/kg AS-Ⅳ和0.6 mg/kg WOR）。同时选取15只同周龄大鼠作为正常对照（对照组）。分析各组大鼠I/R后的心脏质量、心肌缺血程度和梗死程度及心功能情况［左室收缩期平均压（LVSP）、舒张末期压力（LVEDP）、短轴缩短率（FS）和射血分数（EF）］;采用Western blotting法检测心肌梗死区Akt及mTOR磷酸化(p-Akt和p-mTOR)水平,特异性荧光探针DHE染色分析心肌活性氧自由基水平。结果：与对照组比较,模型组大鼠心肌缺血程度、梗死程度、LVEDP、心肌p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR及活性氧自由基水平均升高（P<0.05）,LVSP、FS和EF均降低（P<0.05）。与模型组比较,AS-Ⅳ组大鼠心肌缺血程度、梗死程度、LVEDP及活性氧自由基水平均降低（P<0.05）,心肌p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR 及LVSP、FS和EF均升高（P<0.05）;与AS-Ⅳ组比较,WOR组和AS-Ⅳ+WOR组大鼠心肌缺血程度、梗死程度、LVEDP及活性氧自由基水平均升高（P<0.05）,心肌p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR及LVSP、FS和EF均降低（P<0.05）。结论：AS-Ⅳ对心肌I/R损伤有改善作用,可降低心肌梗死及氧化应激程度并提高心功能,其机制可能通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路发挥作用。