C3在迟发型超敏反应中的作用

目的 探讨补体成分3(C3)在迟发型超敏反应(DTH)中的作用。方法 用卵白蛋白(OVA)诱导C3基因敲除(C3^-/-)和野生型(C3^+/+)小鼠足垫部位的DTH,测量足垫厚度的变化,并对反应部位组织进行HE和免疫组化染色检测。分离小鼠脾脏T淋巴细胞,用巨噬细胞作为抗原提呈细胞,在体外分别用丝裂原和特异性抗原刺激,用³H-TdR掺入法评价T淋巴细胞的增殖活性。结果 OVA诱导足垫DTH后,C3^-/-小鼠足垫厚度和局部浸润单个核细胞的数量都显著低于C3^+/+小鼠的,其中浸润的单个核细胞主要为CD4⁺ T淋巴细胞。2种小鼠的T淋巴细胞对丝裂原刺激的反应相似,而已致敏C3^-/-小鼠脾脏T细胞对特异性抗原再次刺激后的增殖反应显著低于C3^+/+小鼠。结论 C3缺陷明显影响DTH应答,提示C3在DTH中起了重要作用。     

CD8+T细胞依赖的急性移植物抗宿主病小鼠模型的建立

目的建CD8^＋T细胞依赖的急性移植物抗宿主病（GVHD）小鼠模型。方法分别以主要组织相容性抗原（MHC）相同，而次要组织相容性抗原（miHAs）不同的8～12周龄C3H.SW（H-2D^b，CD45．2^＋）和B6／SJL（H-2D^b，CD45．1^＋）雌性小鼠为供受体，从供体骨髓分离去除T细胞的骨髓细胞（T—BM），与其脾脏和淋巴结来源的CD8^＋T细胞混合，经尾静脉输注给受致死剂量^137γ照射的受体鼠。观察移植后受体的体重、毛色、皮肤和生存率的变化，并用流式细胞术（FACS）和组织病理学进一步分析受鼠靶器官细胞浸润和损伤状况。结果移植后受体鼠出现体重明显减轻、毛发脱落、皮肤溃疡等表现，并在28d后出现死亡；FACS证实浸润受鼠骨髓、脾脏和肝脏的细胞主要为CD45．2^＋的供鼠细胞，实验组中还有大量CD45．2^＋CD8^＋T细胞浸润；组织病理学发现肝脏中大量淋巴细胞浸润，皮肤结构破坏，组织坏死。结论成功建立了miHAs不匹配的异基因骨髓移植诱导的CD8^＋T细胞依赖的GVHD动物模型，该模型模拟了目前临床病人采用的同种异基因骨髓移植配型方式，可为异基因骨髓移植GVHD发病机理及该病的防治研究提供良好的实验平台和工具。     

实验性自身免疫性心肌炎小鼠的免疫功能变化

目的 观察肌凝蛋白诱导Balb／c小鼠发生自身免疫性心肌炎后小鼠免疫功能的变化。方法 以猪心肌中提取并纯化的肌凝蛋白免疫Balb／c小鼠,建立自身免疫性心肌炎模型。流式细胞仪检测小鼠外周血和脾淋巴细胞CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋、Th1、Th2及TCRVβ8．1＆8．2和TCRVβ10的变化,酶联吸附试验观察外周血TGF-β1和抗肌凝蛋白抗体的变化。^3H—TdR检测小鼠脾脏单个核细胞对肌凝蛋白刺激的增殖反应。结果 940（15／16）小鼠在免疫后第18天出现不同程度的心肌炎病理改变,主要表现为心肌间质单个核细胞浸润;免疫鼠血浆肌钙蛋白Ⅰ水平升高,TGF-β1水平显著下降,并出现较高滴度的抗肌凝蛋白自身抗体。免疫小鼠外周血CD3^＋CD4^＋细胞较正常对照小鼠显著增高。外周血和脾脏Th1、Th1／Th2及TCRVβ8．1＆．8．2阳性T淋巴细胞显著增加;小鼠脾脏单个核细胞对肌凝蛋白的增殖反应较对照组明显增加。结论猪心肌肌凝蛋白可以诱导Balb／c小鼠出现典型的自身免疫性心肌炎,是一种以Th1细胞介导为主的自身免疫反应。     

转移性体内迟发型超敏反应监测法的建立及临床应用

目的建立体内转移性迟发型超敏反应（Trans-vivo DTH）检测方法,用于评价临床移植受者的免疫状态。方法通过Ficoll密度梯度离心法获取供者和受者（各13例）外周血单个核细胞（PBMC）,用超声粉碎供者PBMC,制备供者亚细胞抗原。将受者的PBMC、回忆性抗原EBV抗原和供者抗原按以下各组分别注射入CB-17SCID小鼠的足垫：①阴性对照组：7～9×106个受者PBMC;②供者抗原反应组：7～9×106个受者PBMC＋10μg供者抗原;③阳性对照组：7～9×106个受者PBMC＋10μgEBV抗原;④连锁免疫抑制组：7～9×106个受者PBMC＋10μgEBV抗原＋10μg供者抗原。分别于注射前及注射24h后双盲测量小鼠的足垫厚度,计算两次测量厚度的差值。实验的有效性依据为阳性对照组足垫净厚度改变≥63.5×10-3mm。结果 13例亲属活体肾移植受者接受Trans-vivoDTH检测显示,致敏型8例（62%）,调节型3例（23%）,非调节型2例（15%）。结论 Trans-vivo DTH检测法可用于监测移植后受者对供者抗原的反应性。     

小细胞肺癌抗独特型疫苗功能的试验研究（摘要）

目的 探讨小细胞肺癌（SLCL）抗独特型抗体3F6和其单链抗体（3F6 SeFv）诱导体液和细胞免疫应答的能力，以证明其作为抗SCLC疫苗的可行性。方法 3F6和3F6 SeFv（Ab2）免疫BALB／c小鼠获得抗血清，以ELISA和Western blot方法分别检测抗血清中Ab3结合SCLC细胞膜表面特异抗原（NCI—H128抗原）的能力，用竞争Western blot检测Ab3与2F7竞争结合NCI—H128抗原的能力。以迟发型超敏反应（DTH反应）和小鼠脾脏淋巴细胞增殖实验检测3F6及3F6 SeFv诱发细胞免疫应答的潜能。结果 ELISA和Western blot方法均证明，3F6和3F6 SeFv免疫同系小鼠所产生的Ab3能特异的与NCI—H128抗原相结合，与对照血清相比，差异有统计学意义（P〈0．001），且有很强的与2F7（Abl）竞争结合靶抗原的能力。在DTH反应中，3F6和3F6 SeFv所致小鼠足垫肿胀的程度均明显高于对照组（P〈0．001）。小鼠脾脏淋巴细胞增殖反应试验证明，用3F6和3F6 SeFv免疫的小鼠脾脏淋巴细胞对靶细胞的再次刺激有明显的增殖反应，与阴性肿瘤细胞对照组和阴性抗体对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 抗独特型抗体3F6和3F6 ScFv均有模拟SCLC细胞膜表面特异抗原的能力，成功诱导了相应的体液和细胞免疫应答，可作为抗SCLC疫苗进行深入研究。     

同种抗原特异性T淋巴细胞克隆方法的建立

目的 建立抗原特异性T淋巴细胞克隆的方法。方法 以供体脾细胞作同种抗原,刺激受体外周血单个核细胞,用有限稀释法进行T淋巴细胞克隆。结果 获得3个T淋巴细胞株。经免疫组化分析,有2个细胞株为CD3^ CD4^-CD8^ 。另一个细胞株为CD3^ CD4^-CD8^-。后者经流式细胞仪分析纯度为97％。抗原特异性检测表明：用供体细胞刺激,克隆T细胞发生增殖作用;用无关个体细胞刺激,无增殖作用。结论 成功地建立了抗原特异性T淋巴细胞克隆方法。     

多巴胺D1样受体在介导调节CD4^＋T淋巴细胞功能中的作用

目的：从分子水平揭示CD4^＋ T淋巴细胞表达D1受体和D5受体mRNA的现象,探讨这些受体在调节CD4^＋ T淋巴细胞功能中的作用.方法：采用免疫磁珠分离和纯化小鼠淋巴结CD4^＋ T淋巴细胞.用抗CD3/CD28抗体刺激活化CD4^＋ T淋巴细胞,并用D1样受体激动剂SKF38393、拮抗剂SCH23390分别作用于CD4^＋ T淋巴细胞,然后采用real-time PCR法检测CD4^＋ T淋巴细胞上D1受体和D5受体mRNA的表达,Th1细胞特异性转录因子（T-box expressed in T cells,T-bet）和细胞因子干扰素γ（interferon-γ,IFN-γ）的表达,Th2细胞特异性转录因子GATA binding protein 3（GATA 3）和细胞因子白细胞介素-4（interleukin-4,IL-4）的表达,Th17细胞特异性转录因子（retinoid acid-related orphan receptor gammat,RoR γt）和细胞因子IL-17、IL-22的表达.结果：D1样受体激动剂SKF38393（10^-8和10^-7 mol/L）作用于CD4^＋ T淋巴细胞后,CD4^＋ T淋巴细胞表达D1样受体mRNA增高,IFN-γ的表达降低,GATA 3、IL-4的表达增高,但T-bet、RoR γt、IL-17和IL-22的表达没有变化,SCH23390（10^-7 mol/L）能阻断SKF38393的这些作用.结论：CD4^＋ T淋巴细胞能表达多巴胺D1样受体,CD4^＋ T淋巴细胞上D1样受体的激活可促进CD4^＋ T淋巴细胞向Th2细胞分化、抑制Th1细胞功能及增强Th2细胞功能.     

脾脏CD4^＋T、CDl9^＋B淋巴细胞凋亡在狼疮性BXSB小鼠发病机制中的意义

目的对♀、♂狼疮性BXSB小鼠外周血T、B淋巴细胞分布及脾脏T、B淋巴细胞凋亡进行比较探讨脾脏CD4^＋T、CDl9^＋B淋巴细胞凋亡在狼疮性BXSB小鼠发病机制中的意义。方法运用流式细胞术、免疫双荧光染色法检测外周血CD4^＋T、CD8^＋T、CDl9^＋B细胞分布及脾脏CD4^＋T、CDl9^＋B细胞凋亡;直接免疫荧光法观察♀、♂狼疮性BXSB小鼠肾脏免疫组化。结果与早BXSB小鼠比较,6BXSB小鼠外周血CD4^＋T、CD8^＋T细胞分布明显降低（P〈0．01）,外周血CDl9^＋B细胞分布及脾脏CD4^＋T、CDl9^＋B凋亡率明显升高（P〈0．01）;6BXSB小鼠绝大多数肾小球毛细血管襻上可见大量IgG呈片状沉积,而早BXSB小鼠肾脏几乎无IgG沉积。结论6BXSB小鼠发病较早BXSB小鼠重,细胞凋亡在BXSB小鼠发病机制中具有重要意义。     

前房相关免疫偏离中调节性T细胞的变化

目的：探索前房相关免疫偏离（ACAID）机制中调节性T细胞的变化,为进一步研究其具体机制创造条件。方法：将C57BL／6小鼠分为ACAID实验组、阳性对照组和正常组。实验组将2μL卵白蛋白（OVA,50mg／mL）前房注射,阳性对照组和正常组以2μL PBS行前房注射,7d后实验组和阳性对照组足底皮下免疫OVA100μL（2．5mg／mLOVA与CFA等体积充分乳化）,正常对照组不予处理。14d后检测耳廓迟发型超敏反应（DTH）,流式分析脾细胞中CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞以及CD8^＋Foxp3CF细胞的数量和比例。结果：DTH结果显示,实验组的耳廓肿胀值较阳性对照组明显减小。CD4＋CD25＋Foxp3CF细胞和CD8^＋Foxp3q^＋细胞比例较阳性对照组和正常组均升高。结论：CD4^＋CD25＋Foxp3^＋T细胞和CD8^＋＋Foxp3^＋＋T细胞在ACAID机制中发挥重要作用。     

硒增强细胞免疫的研究——Ⅲ.硒通过增强抗原递呈促进迟发超敏反应

硒处理小鼠能提高小鼠对致敏剂三硝基氯苯(TNCB)诱发的迟发超敏反应(DTH)的敏感性。体外实验证明,经硒处理的小鼠脾脏粘附细胞向TNCB致敏的T淋巴细胞递呈半抗原三硝基苯基进而刺激T细胞增殖反应的能力,即抗原递呈功能比未处理的对照强。正常小鼠的脾脏粘附细胞在体外经硒处理后,其递呈抗原的能力更强。提示硒通过加强抗原递呈细胞的功能实现促进DTH反应。     

苯并(a)芘对金属硫蛋白基因敲除小鼠免疫功能的抑制

目的:观察苯并(a)芘[benzo(a)pyrene, B(a)P] 对金属硫蛋白(metallothionei n, MT)基因敲除的转基因小鼠[MT(-/-)]免疫功能的影响 .方法:选用MT(-/-)小鼠和野生型小鼠[MT(+/+)]进行对照,50 mg·kg -1体重的B(a)P 一次腹腔注射染毒后,检测动物对绵羊红细胞(sheep red blood ce lls, SRBC)的体液和细胞免疫功能变化.体液免疫指标为抗体形成细胞(plaque formation cells, PFC)数量.细胞免疫功能指标为迟发型变态反应(delayed-type hypersensitivi ty, DTH)的动物足跖厚度变化 .结果:MT(-/-)小鼠的脾脏重量在S RBC刺激后有明显增加,但在B(a)P染毒后被抑制.B(a)P染毒使MT(-/-)小鼠脾脏的的PFC 数明显减少,PFC抑制率达40.4%;而MT(+/+)小鼠没有观察到上述改变.B(a)P染毒对MT (-/-) 小鼠和MT(+/+)小鼠的细胞免疫反应的DTH未见明显影响.MT(-/-)小鼠和MT(+/+)小鼠的胸腺重量在B(a)P 染毒后都有减轻.结论:MT(-/-)小鼠的体液免疫功能更易被B(a)P抑制.提示MT具有保护小鼠不受B(a)P体液免疫损伤的功能.     

电针足三里对迟发型过敏反应小鼠炎症反应的影响

目的观察电针干预对卵白蛋白(OVA)诱导的迟发型超敏反应(DTH)模型小鼠的作用及炎症反应的影响。方法将32只小鼠随机分为对照组(Contro1)、模型组(OVA-DTH)、电针治疗组(DTH+EA)、假电针治疗组(DTH+Sham),每组8只。电针治疗组予电针"足三里"穴,假电针组在"足三里"穴下0.5cm处的非穴位施行电针。测量小鼠足垫厚度;HE染色检测炎性细胞浸润;ELISA法检测血清IgG、IgE及足垫组织匀浆上清炎性因子(IFN-γ、TNF-α、IL-4和IL-5)水平。结果电针"足三里"缓解DTH病理进程,减轻足垫肿胀,减少炎症细胞浸润,抑制IgG和IgE分泌,降低组织匀浆液IFN-γ、TNF-α含量。结论电针"足三里"减轻了迟发型过敏反应的炎症反应,可作为治疗过敏性炎症的有效疗法。     

小鼠BTLA基因重组慢病毒载体的构建及鉴定

目的 :构建小鼠B、T淋巴细胞衰减子(BTLA)基因重组慢病毒载体,探讨BTLA基因过表达对小鼠脾T淋巴细胞增殖及活化的影响。方法:以小鼠脾脏组织总RNA为模板,逆转录为c DNA,通过PCR技术扩增BTLA基因,构建p WPTS-m BTLA慢病毒载体,磷酸钙法感染人胚肾上皮细胞株293T细胞。RT-PCR及Western blot法检测BTLA m RNA和BTLA蛋白表达,50%组织培养感梁剂量(TCID50)法检测重组慢病毒滴度。通过感染p WPTS-m BTLA及p WPTS-GFP慢病毒载体的293T细胞与小鼠脾脏T淋巴细胞混合培养,初步研究BTLA基因过表达对小鼠脾T淋巴细胞活化与增殖的影响。结果:成功构建小鼠p WPTS-m BTLA慢病毒载体,并制备高滴度病毒颗粒(1.3×108pfu/ml)。通过对比实验组与对照组小鼠脾T淋巴细胞的增殖结果 ,发现4 d及8 d T细胞的增殖效应均明显受抑制,差异具有统计学意义(P<0.05),且这种抑制作用在0~8 d内具有时间依赖性。结论:过表达BTLA基因的293T细胞与小鼠脾T淋巴细胞混合培养后对其增殖及活化有抑制作用,提示成功构建具有生物学效应的小鼠BTLA基因重组慢病毒载体。     

Urocanic acid in systemic immune suppression

ＵｒｏｃａｎｉｃａｃｉｄｉｎｓｙｓｔｅｍｉｃｉｍｍｕｎｅｓｕｐｐｒｅｓｉｏｎＢｉＺｈｉｇａｎｇ毕志刚，ＷａｎｇＴａｏ王韬，ＣｈｅｎＨｕａｑｕｎ陈华群，ＮｉＬｉ倪黎ａｎｄＤｉｎｇＸｉａｏｊｉａｎ丁小健ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｈｏｗｕ...     

氧化锌纳米材料对小鼠混合培养的脾淋巴细胞的影响

目的评价氧化锌（ZnO）纳米材料对不同品系小鼠脾淋巴细胞混合培养的影响。方法提取BALB／O和057BL／6小鼠脾细胞进行混合淋巴细胞培养，通过对细胞增殖率、IL-2水平的检测及电镜观察来研究氧化锌纳米材料对混合淋巴细胞培养的影响。结果氧化锌纳米材料的加入提高了淋巴细胞增殖率及上清液IL－2水平，电镜下可见纳米材料吸附于淋巴细胞表面并促进淋巴细胞间的接触。结论氧化锌纳米材料促进混合淋巴细胞培养中淋巴细胞的增殖，增强了免疫应答的强度。     

pcDNAL1 genetic immunization can induce specific cell-mediated immune respon ses in C57BL/6 mice

Objective To investigate the specific cell-mediated immune efficacy of the an HPV16 prophylactic vaccine. Methods C57BL/6 mice were randomly divided into 3 groups: experimental groupⅠ (treated with pcDNA L1), control group Ⅱ (treated with pcDNA3.1) and control group Ⅲ (treated with PBS buffer). The mice were immunized three times during a three-week interval. Ten to fourteen days after the third inoculation, a footpad swelling test was used to detect delayed-type hypersensitivity (DTH) responses. Antigen-specific splenocyte proliferation assay and quantitation of IFN-γ cells in splenocytes were performed by FACS assay. Results In the experimental group, splenocytes actively proliferated after stimulation with HPV16 VLP, and had developed a markedly larger amount of CD8(＋) IFN-γ(＋) cells, which is an index for special CTL. Also, the footpad was significantly thickened upon inoculation with HPV16 VLP.Conclusion Naked DNA vaccine of HPV16 L1 can induce specific cell-mediated immune responses in mice, which should be considered for evaluation of HPV16 DNA vaccine feasibility.     

沙眼衣原体T细胞表位融合蛋白对沙眼衣原体感染小鼠的保护机制

目的：探讨沙眼衣原体（Ct）感染的T细胞表位融合蛋白疫苗（H-ctm1）对小鼠生殖道感染保护作用的机制,为研制和开发Ct T细胞表位融合蛋白疫苗奠定理论和实验基础。方法：建立阴道感染沙眼衣原体的动物模型。迟发型超敏反应（DTH）实验中,将14只小鼠随机分2个实验组： H-ctm1免疫组和未免疫组（每组7只）。测量每只小鼠双侧后脚掌厚度,左后脚掌足底皮下注射蔗糖-磷酸盐运送液（SPG）,右后脚掌皮下注射热灭活EB（HK-EBs）,每组分别比较左右后脚掌足底厚度和足底注射前后的厚度;在流式细胞术分析实验中,将21只雌性小鼠随机分为3组（每组7只）,分别为H-ctm1免疫组、HK-EBs免疫组（阳性对照）和磷酸盐缓冲液（PBS）免疫组（阴性对照）。免疫后在各组小鼠阴道内接种Ct。在阴道感染Ct后第6天取外周血对CD4+ 和 CD8+ T细胞进行流式细胞术分析。结果：DTH实验中,未免疫组小鼠左或右后脚掌注射前后足底厚度比较差异无显著性（P>0.05）,注射前或注射后左右后脚掌足底厚度比较差异无显著性（P>0.05）。免疫组小鼠注射前左右后脚掌足底厚度比较差异无显著性（P>0.05）,注射后左后脚掌足底厚度高于右后脚掌（P<0.05）。左后脚掌注射前后足底厚度比较差异无显著性（P>0.05）,右后脚掌注射后足底厚度高于注射前（P<0.05）。流式细胞术记数法测3组活化的CD4+和 CD8+ T细胞,H-ctm1组CD4+和CD8+ T细胞阳性率均高于HK-EBs组(P<0.05或P<0.01);H-ctm1组 和HK-EBs 组CD4+和CD8+ T细胞阳性率均高于PBS组(P<0.01)。结论：DTH参与了H-ctm1免疫小鼠的免疫应答;在H-ctm1中,HSP65的存在刺激DC细胞上调MHC（Ⅰ类途径和Ⅱ类途径）分子的表达水平,提高沙眼衣原体主要外膜蛋白表位的免疫原性。     

抗PD-1抗体的抗肿瘤效应及机制

目的 探讨抗PD-1抗体阻断PD-L1/PD-1途径抗肿瘤效应以及抗肿瘤免疫力的影响.方法建立TC-1肿瘤细胞C57BL/6小鼠模型,分为3组(n=3):阴性对照组(予PBS处理)、阳性对照组(予顺铂处理)、抗PD-1抗体组(予抗PD-1抗体处理),绘制肿瘤生长曲线,观察抗PD-1抗体的抗肿瘤效应;小鼠自然死亡或小鼠肿瘤直径达2 cm时,处死小鼠,取出鼠脾和肿瘤组织,流式细胞仪检测鼠脾单核淋巴细胞中CD4+CD25+T调节细胞(Treg细胞)数量;免疫组化方法检测肿瘤组织中CD8+T细胞的表达.结果(1)与阴性对照组比较,抗PD-1抗体组有显著肿瘤抑制作用(P<0.05),与阳性对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);(2)小鼠脾脏内单核淋巴细胞中Treg细胞数量比例分别为:阴性对照组(87.00±6.06)%、阳性对照组(71.50±4.04)%、抗PD-1抗体组(69.75±3.77)%,与阴性对照组相比,抗PD-1抗体组Treg细胞数量减少,差异有统计学意义(P<0.05),与阳性对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);(3)小鼠肿瘤组织中CD8+T细胞数量分别为:阴性对照组(2.25×1011±3.34×1010),阳性对照组(1.99×1011±3.12×1010),抗PD-1抗体组(3.27×1011±3.67×1010),其中阳性对照组CD8+T细胞数量最低;与阴性对照组和阳性对照组相比,抗PD-1抗体组CD8+T细胞数量显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05).结论抗PD-1抗体可有效抑制小鼠肿瘤的生长,其机制可能是通过阻断PD-L1/PD-1途径减少免疫抑制细胞,增加CD8+效应细胞数量而发挥作用.