TLMV的研究现况

TLMV是一种新型与输血性肝炎相关的人类DNA病毒。由日本学者ShunjiMishiro等在 2 0 0 0年初首次发现 ,目前来自全自世界如日本、法国和巴西的TLMV感染已被证实[1] 。国内有关TLMV的研究刚刚起步。TLMV为负链 ,环状DNA。TLMV全长 2 86 0nt(CBD2 31株 ) ,85 6nt(CBD2 79株 ) ,2 897nt (CBD2 0 3株 ) ,在氯化铯 (CsCl)溶液内的浮密度与TTV相似 ,但比TTV更小 (<30mm)。 3株核酸序列中CBD2 31株和CBD2 79株有 91%同源 ,而这二株与CBD2 0 3间5 8%同源。TLMV有 2～ 3个开放读码框架 (ORF) ,ORF均在主链上 ,未发现互补链…     

通淋汤对尿毒症患者骨形态发生蛋白-2表达的影响研究

目的探讨通淋汤对尿毒症患者骨形态发生蛋白-2(BMP-2)的影响。方法选取2010年3月至2013年11月该院就诊的尿毒症患者共115例,根据临床上的不同治疗方法将患者分为治疗组(57例)和对照组(58例)。其中治疗组接受通淋汤联合血液透析来治疗,对照组仅接受血液透析治疗。比较两组患者的BMP-2、甲状旁腺激素(iPTH)、钙磷乘积及临床疗效的改善程度。结果治疗组显效率为50.9%(29/57),高于对照组的34.5%(20/58),差异有统计学意义(P0.05);两组患者治疗后BMP-2、iPTH和钙磷乘积均较治疗前降低,其中治疗组低于对照组(P0.05)。结论中药复方通淋汤能够降低尿毒症患者体内BMP-2和iPTH水平,提高患者临床显效率,值得临床广泛推广。     

CpG002促进人胚肺成纤维细胞增殖及Ⅰ型胶原表达

目的观察C型CoGODN（002）对人胚肺成纤维细胞增殖及表达Ⅰ型胶原的影响。方法采用人胚肺成纤维细胞（human embryonic lung fibroblast,HELF）作为靶细胞,以细胞计数的方法观察两种C型CoGODN对HELF细胞增殖的影响,以RT-PCR方法检测CpGODN诱导HELFⅠ型胶原mRNA的表达情况。结果两种C型CpGODN（CpG001和cpG002）均能明显刺激HELF增殖,但只有CpG002也同时表现出诱导HELF表达Ⅰ型胶原的作用。结论C型CpGODN002能促进人胚肺成纤维细胞增殖及分泌Ⅰ型胶原。     

HSP65-MUC1／HSP65抗体免疫复合物对人树突状细胞的活化作用

目的：探讨免疫复合物能否诱导树突状细胞的活化与成熟。 方法：用免疫复合物刺激来自人外周血经细胞因子IL-4和GM-CSF诱导的未成熟的树突状细胞, 观察免疫复合物对未成熟树突状细胞的活化与成熟的影响。 结果：HSP65-MUC1/HSP65免疫复合物与HSP65-MUC1抗原或HSP65抗体相比较,能够显著地活化树突状细胞,使其表面的协同刺激分子CD86的表达显著上调,为激活细胞毒性T淋巴细胞提供第二信号,这一结果说明免疫复合物具有交叉递呈的作用;同时,加入免疫复合物的树突状细胞培养上清中IL-6和TNFα分泌量明显增加。结论： 免疫复合物能够诱导树突状细胞的活化与成熟,免疫复合物具有交叉递呈的作用。     

共表达红光荧光蛋白及发夹RNA载体的构建及鉴定

目的：构建共表达红光荧光蛋白及短发夹状RNA的重组真核载体。 方法：利用亚克隆、T-A克隆和PCR技术构建pcDNA3.0/DsRed-U6-shGFR及pcDNA3.0/DsRed-U6重组载体。 结果：成功构建上述两种真核重组表达载体。 结论：这种共表达载体的构建为进一步利用RNAi技术研究真核细胞基因功能奠定了基础。     

双阳型梅花鹿脾脏细胞cDNA文库的构建和四个EST的发现

目的：开发和利用中国梅花鹿的基因资源,以期拥有一批梅花鹿基因的专利,并在专利保护下生产具有自己知识产权的基因工程药物。方法：用Trizol试剂提取梅花鹿脾脏细胞中的总RNA,分离得到mRNA后,用逆转录方法合成与mRNA互补的cDNA单链,再以此cDNA单链为模板,得到与该cDNA互补的另一条DNA链,将得到的DNA双链分子通过合适的Adapter连入pSPORT1质粒,将此重组质粒通过电转化方法导入E.coli DH5α菌,得到脾脏细胞的cDNA文库。筛选出阳性重组子,测序并分析得到的ESTS序列。结果：成功地构建了双阳型梅花鹿脾脏细胞cDNA文库;并对部分库容cDNA进行了克隆和测序,在这一过程中发现4个与已知基因同源的表达序列标签(ESTS),其中2个EST分别是梅花鹿视网膜母细胞瘤的同源基因和梅花鹿维生素K依赖性蛋白前体cDNA的部分序列。结论：通过构建cDNA文库的方法成功地得到了一批有价值的梅花鹿的基因片段。     

疾病的T_H1/T_H2模式

疾病的ＴＨ１／ＴＨ２ 模式是指疾病所引起的机体优势免疫应答的类型（ＴＨ１ 型／ＴＨ２ 型）。这种模式可应用于多种疾病，如感染性疾病、过敏性疾病、自身免疫性疾病、流产、移植免疫及恶性肿瘤等，使人们更好地理解疾病的发生发展过程，并有助于发展新型免疫疗法。     

卡介苗热休克蛋白70对肿瘤细胞裂解物免疫原性的影响

的：观察卡介苗热休克蛋白70（BCGHSP70）对肿瘤细胞裂解物（TCL）免疫原性的影响,为TCL相关肿瘤疫苗的制备提供依据。方法：应用冻融法制备B16黑色素瘤细胞裂解物B16TCL,将BCGHSP70与B16TCL在体外混合制备BCGHSP70-B16TCL。将C57BL/6小鼠随机分为BCGHSP70-B16TCL组、PBS组、BCGHSP70组和B16TCL组,分别于第1和14天皮下免疫BCGHSP70-B16TCL、PBS、BCGHSP70和B16TCL。于末次免疫后第7天处死小鼠,MTT法观察不同免疫组小鼠脾淋巴细胞在B16TCL体外刺激后的增殖情况,计算刺激指数（SI）。结果：应用冻融法能够使B16细胞完全裂解,所制备的B16TCL中含有丰富的蛋白成分。与PBS组、BCGHSP70组和B16TCL组比较,BCGHSP70-B16TCL组免疫小鼠脾脏明显增大;BCGHSP70-B16TCL免疫组SI高于PBS免疫组（P=0.00）、 B16TCL免疫组（P=0.01）和BCGHSP70免疫组（P=0.00）。结论：BCGHSP70　能够增强B16TCL的免疫原性,提示BCGHSP70可能作为有效的免疫佐剂用于TCL相关肿瘤疫苗的研究。     

一种双抗体夹心ELISA检测热休克融合蛋白方法的建立

MUC1蛋白在乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌等多种肿瘤细胞都呈现高水平表达。MUC1蛋白的表位肽VNTR，是诱生MUC1特异性免疫应答的靶点；采用MUC1 VNTR多肽研制出的生物制剂能刺激小鼠抑制表达MUC1肿瘤细胞的生长。     

ULBP3胞外段基因的克隆与表达

目的 为了研究ULBP3刺激NK细胞增殖分化的功能，首先需构建、表达ULBP3胞外段重组蛋白。方法 用RT-PCR方法从人结肠癌组织中钓取ULBP3胞外段基因，构建pET32a原核表达载体，转化大肠杆菌BL21，以IPTG诱导表达，Western blot鉴定。结果 经测序证实，所获得的cDNA克隆为ULBP3胞外段基因，其序列与genebank中已经发表的序列完全一致，pET32a原核表达载体转化大肠杆菌BL21后，经筛选获得的阳性重组菌稳定表达ULBP3胞外段重组蛋白。结论 成功表达了ULBP3胞外段重组蛋白，可用于进一步研究ULBP3刺激NK细胞增殖分化的功能。